Burada, standart kemirgen modellerinde teknik olarak zorlayıcı olan Daurian yer sincabında (DGS) uzun süreli bir karaciğer soğuk hava deposu ve nakli modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Burada, standart kemirgen modellerinde teknik olarak zorlayıcı olan Daurian yer sincabında (DGS) uzun süreli bir karaciğer soğuk hava deposu ve nakli modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.
Karaciğer transplantasyonunda, uzun süreli soğuk hava deposunu takiben donör greftlerin fonksiyonel olarak geri kazanılması büyük bir zorluktur. Aynı engel, iyi bilinen cerrahi protokollerine rağmen karaciğer nakli için standart kemirgen modelleri (örneğin fareler ve sıçanlar) için de geçerlidir, bu nedenle nakil sonrası fonksiyonel iyileşme ve konak-greft immüno-uyumluluğu gibi temel konulardaki araştırmaları kısıtlar. Burada, zorunlu bir kış uykusu olan Daurian yer sincabı (DGS; Spermophilus dauricus), ultra derin hipotermi yeniden ısınma ve iskemi-reperfüzyon geçişlerine içsel adaptasyon gösterir. Elimizde, 24 saatlik soğuk hava deposunu takiben karaciğer greftlerinin nakli, DGS alıcılarının 7 günlük gözlem süresi içinde %100 sağkalımı ile sonuçlanırken, Sprague-Dawley (SD) sıçanlarında aynı prosedür, ameliyattan 24 saat sonra %0 sağkalım sağladı. Bu nedenle, DGS ve diğer soğuğa uyarlanabilir memeli modelleri, organ soğuğuna adaptasyon ve transplantasyon toleransının altında yatan mekanizmaları araştırmak için benzersiz ve sağlam bir platform sağlar ve bu da transplantasyon tıbbı alanında yeni tedavi veya cerrahi stratejilerin geliştirilmesini destekleyebilir.
Soğuk yeniden ısıtma ve iskemi-reperfüzyon, karaciğer greft hasarına önemli katkıda bulunur ve erken allogreft disfonksiyonu riskini artırır. Fareler ve sıçanlar gibi standart kemirgen organizmalarda karaciğer nakli başarılı bir şekilde kurulmuş olmasına rağmen 1,2, soğuğa toleranssız bu türler üzerinde yapılan çalışmalar, soğuğa adaptasyon mekanizmaları hakkında sınırlı bilgiler sağladığından, organ koruma ve transplantasyon tıbbındaki ilerlemeler engellenmiştir.
Soğuğa adapte olmuş uygun türlerde transplantasyon araştırma modellerinin geliştirilmesi böyle bir boşluğu doldurabilir. Örneğin, memeli kış uykusuna yarayanlar, uzun süreli düşük ortam sıcaklığı ve/veya gıda kıtlığıdönemlerinde hayatta kalmak için evrimleşmiştir 3,4. Hazırda bekletme sırasında, fizyolojileri, düşük çekirdek vücut sıcaklığını korumaya ve hızlı yeniden ısınmaya ve kan reperfüzyonuna dayanmaya iyi adapte olmaları için torpid ve interbout uyarılma durumlarında geçiş yapar. Dikkat çekici bir şekilde, kış uykusuna yatabilen yer sincapları, aktif, ötermik durumlarında bile iskemi-reperfüzyon yaralanmalarına karşı sıçanlardan daha fazla direnç gösterir 5,6. Son yıllarda, kış uykusundan ilham alan çalışmalar, soğuk hava deposunun neden olduğu yaralanmaları önemli ölçüde hafifletmek ve kış uykusuna yatmayan türlerden izole doku ve organların fonksiyonel iyileşmesini iyileştirmek için modüle edilebilen bazı soğuğa uyum sağlayan mekanizmaları ve ilaçlanabilir hedefleri ortaya çıkarmıştır 7,8,9,10,11.
Sıçanlarda karaciğer nakli için geliştirilen protokollerdenuyarlanan 12,13,14, burada Daurian yer sincabında karaciğer alımı, statik soğuk hava deposu ve transplantasyon için bir protokol sunuyoruz (DGS; Spermophilus dauricus), Kuzey Çin'de yaşayan kış uykusuna yatan bir kemirgen türü. Ellerimizde, DGS greft alıcıları, Wisconsin Üniversitesi (UW) solüsyonunda 4 ° C'de 24 saat boyunca saklanan ötermik (aktif) veya hipotermik (torpid) donörlerden alınan greftlerle transplantasyon sonrası %100 sağkalım elde etti. Tam tersine, aynı iş akışına maruz kalan Sprague-Dawley (SD) sıçanlarında hayatta kalma oranı %0 idi ve bu da DGS karaciğer nakli modelinin avantajını açıkça gösteriyordu. DGS'de veya 13 çizgili yer sincabı (Ictidomys tridecemlineatus) ve Suriye hamsterı (Mesocricetus auratus) gibi laboratuvarda yetiştirilen diğer soğuğa adapte türlerde uzun süreli soğuk depolama ve transplantasyonun da başarılabileceğini umuyoruz, böylece araştırmacılara uzun vadeli greft fonksiyonel geri kazanımı ve konakçı-greft uyumluluğunu incelemek ve yeni ilaçları test etmek için benzersiz fırsatlar sunuyor.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm hayvan deneyleri, Pekin Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Kurumsal Komitesi (LSC-WangSQ-2) tarafından onaylandı. Çalışma için kullanılan uygun araçlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir ve Şekil 1'de gösterilmiştir.
NOT: 13 çizgili yer sincabı gibi doğada yakalanan kış uykusuna yatan kemirgen türlerinin laboratuvar ortamında ele alınması ve üremesi tarif edilmiştir15,16. Bu çalışmada kullanılan DGS'ler, Zhangjiakou şehrinin otlaklarında yakalanan kadın gebe DGS'ler tarafından laboratuvarda üretilmiştir. Deney sırasında yaklaşık 1-2 yaşındaydılar. Orijinal hamile kadın DGS'lere gelince, hayvanlar laboratuvara gelmeden önce parazitler dışarı atılmıştı. Hayvanların gelişinde yaygın virüsler için karantina ve inceleme yapıldı ve negatif test sonuçları olanlar tesiste yetiştirildi.
1. Ameliyat öncesi hazırlık
2. Donör operasyonu
3. Ex vivo greft hazırlığı
NOT: Açık bir buz kabı hazırlayın. Tüm arka masa hazırlığı buz üzerinde yapıldı.
4. Alıcı işlemi
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Cerrahi işlemlerin ortalama süreleri şöyleydi: donör cerrahisi ortalama 24.8 ± 2.3 dk, arka masa operasyonu 15.4 ± 1.3 dk, alıcı cerrahisi 52.7 ± 5.1 dk ve anhepatik faz 14.2 ± 1.5 dk.
24 saat boyunca soğuk UW solüsyonunda korunan karaciğer greftlerinin alıcıları, transplantasyondan önce hazırda bekletme durumunda olup olmadıklarına bakılmaksızın transplantasyondan 7 gün sonra% 100 sağkalım oran...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Kamada'nın çift manşet tekniği2 üzerine inşa ederek, DGS'de ilk ortotopik karaciğer nakli modelini başarıyla kurduk. DGS ve geleneksel sıçan modelleri arasındaki anatomik farklılıklar nedeniyle, materyal hazırlama, cerrahi prosedürler ve postoperatif yönetimde özel hususlar esastır.
Hazırda bekletme ve yağ rezervleri gibi faktörler, yetişkin DGS'de 150 g ila 400 g arasında değişen ve erkekler ve kadınlar arasında belirgin farklılıklar o...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma, Bulaşıcı Olmayan Kronik Hastalıklar-Ulusal Bilim ve Teknoloji Büyük Projesi (2023ZD0507600) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82371794 ve 82170671) tarafından desteklenmiştir. Çalışma ayrıca Zhejiang Üniversitesi Eğitim Vakfı, Akademisyen Shusen Lanjuan Yetenek Vakfı tarafından da desteklendi. Ayrıca, Wisconsin Üniversitesi, Oshkosh'tan Profesör Dana K. Merriman'a, 13 çizgili yer sincaplarını yetiştirme konusundaki çalışmaları ve laboratuvarda kış uykusuna yatan kemirgen modellerini yetiştirme konusundaki yararlı içgörüleri ve deneyimleri cömertçe paylaştığı için teşekkür ederiz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 3-0 iğneli dikişler | Jinhuan Tıbbi Ürünler A., Ltd | R315 | Deri kapanması için |
| 7-0 ipek dikiş | Braintree, bilim, inc | SUT-S103 | |
| 7F Tanıtıcı Kılıf | Pekin Demax Tıbbi Teknoloji Şirketi, Ltd. | DQ07083818S | IHIVC için kelepçe |
| 8-0 İğneli dikişler | Jinhuan Tıbbi Ürünler Şirketi, Ltd. | H821 | SHIVC anastomisi için |
| 8F Tanıtıcı Kılıf | Pekin Demax Tıbbi Teknoloji Şirketi, Ltd. | DQ08083818S | IHIVC için kelepçe |
| Anestezi Makinesi | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | R500 | |
| Kan Temizlemeyi Durdurur | Ningbo Shunye Tıp Şirketi, Ltd. | BDD-YE-DT-1 | |
| Bulldog kelepçesi (hafifçe kavisli) | Jinzhong Tıbbi Ürünler A.Ş., Ltd. | XEC120 | SHIVC |
| Buprenorfin | Tianjin İlaç Araştırma Enstitüsü İlaç A.Ş., Ltd | H12020275 | Ağrı kesici |
| Cefuroxim sodyum | Esseti FarmaceuticiS.r.l | H20160013 | Antibiyotik |
| Pamuk çubukları | Fuqing Sağlık & Integral Medical | 20230R | |
| Eğimli mikro forseps | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | F11031-11 | Cerrahi alet |
| Kavisli mikro makas | 66 Vision Tech Co., Ltd. | 54108B | Cerrahi alet |
| Gazlı bez sürüntüleri | Yubei Tıbbi Malzemeler Şirketi, Ltd. | 21080274 | |
| Heparin sodyum enjeksiyonu | Kuzey Çin İlaç Şirketi, Ltd | 2101131-2 | |
| İnfüzyon Pompası | Howkmed Co., Ltd. | HK-400 | |
| İzofluran | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | 21070201 | |
| Mikro iğne tutucu | Dünya Hassas Aletler Şirketi, Ltd. | 555408NT | Cerrahi alet |
| Mikro kap klipsi | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | R31005-06 | PV ve IHIVC |
| Mikro Kap klipsi aplikatörü | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | R34001-14 | Cerrahi alet |
| İğne tutacağı | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | F31025-13 | Karın kapanması |
| Salin | Zhejiang Tianrui İlaç A., Ltd | 716092103 | |
| Düz mikro forseps | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | F11029-11 | Cerrahi alet |
| Cerrahi mikroskop | Leica | M650 | |
| Cerrahi platform | Yok | Yok | Kişisel, manyetik |
| Doku forsepsi | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | F12002-12 | Cerrahi alet |
| Doku makası | RWD yaşam Bilimleri Şirketi. | S12003-09 | Cerrahi alet |
| UW çözümü | Organ Kurtarma Sistemleri | SPS-1 | Organ perfüzyonu ve depolaması |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.