Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kan Kirliliği Olmadan Murine Nazal Lavaj Sıvısı Toplama

3.7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68451

⸱

11 Temmuz 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology, Kindai University Faculty of Medicine, 2Department of Arts and Sciences, Kindai University Faculty of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Mevcut protokol, murin nazal lavaj sıvısında (NLF) kan kontaminasyonunu önlemek için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, kan kontaminasyonu olmadan NLF toplanmasını sağladığından, immünolojik bileşenlerin ve çeşitli solunum yolu patojenlerinin daha doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar.

Özet

Nazal lavaj sıvısı (NLF) ve burun sürüntüleri dahil olmak üzere üst solunum yolu örnekleri, solunum yolu hastalıklarına neden olabilecek virüsler ve bakteriler dahil olmak üzere patojenlerin tespit edilmesinde faydalıdır. NLF, solunum sistemindeki hücresel ve humoral bileşenleri incelemek için, örneğin mukozal aşılamaları takiben immünoglobulin (Ig) A'nın indüksiyonunun değerlendirilmesinde kullanılmıştır. Deneysel kemirgenlerde, NLF örnekleri trans-faringeal veya trans-trakeal yolla toplanabilir. Trans-faringeal yolun NLF örneklerinin toplanmasında trans-trakeal yoldan daha verimli olduğu bildirilmiş olsa da, trans-faringeal yolla toplanan NLF örnekleri genellikle kanla kontamine olmuştur ve bu da orijinal NLF örneklerindeki hücresel ve humoral içerik seviyelerini etkilemiştir. Bu nedenle, bu çalışma, kan kontaminasyonunu en aza indirmek için deney farelerinde yeni bir NLF toplama yöntemi oluşturmayı amaçlamıştır. Kısaca farenin alt çenesi ayrılmadan önce kanı emmek için ağza pamuk topları yerleştirildi. Kanama durduğunda, NLF örnekleri koana içine bir mikropipet yerleştirilerek ve iki kez 200 μL fosfat tamponlu salin ile yıkanarak toplandı (son hacim: 400 μL / fare). Kan kontaminasyonunu tespit etmek için, hemoglobini tespit eden basit ve hassas bir adli luminol testi kullanıldı. Luminol testi, geleneksel yöntemle (pamuk topları olmadan) hasat edilen NLF örneklerinde kan kontaminasyonunun tespit edilebildiğini, ancak yeni yöntemle (pamuk topları ile) hasat edilenlerde tespit edilemediğini gösterdi. Kanın kontaminasyonu nedeniyle, NLF örneklerindeki toplam IgA ve IgG konsantrasyonları geleneksel yöntemde yeni yönteme göre daha yüksekti; kanın NLF'den çok daha yüksek seviyelerde IgA ve IgG içerdiği bilinmektedir. Bu nedenle, bu benzersiz yöntem, kan kontaminasyonunu önlemek için deneysel farelerden NLF örnekleri toplamak için basit ve hassas bir yöntem olarak kullanılabilir.

Giriş

Hem klinik hem de temel araştırmalarda, sonuçların değerlendirilmesi için uygun örnek toplama yöntemleri çok önemlidir. Nazal lavaj, solunum yollarındaki hücresel ve humoral bileşenleri analiz etmek için kullanılan bir irrigasyon tekniğidir 1,2,3. Klinik olarak, nazal lavaj sıvısı (NLF), sinüzit, kistik fibroz ve genel solunum bozuklukları dahil olmak üzere çeşitli solunum yolu hastalıklarında kullanımını destekleyen çeşitli çalışmalarla birlikte, biyobelirteç keşfi için etkili bir noninvaziv örnek olarak kullanılmıştır 4,5,6,7. Deney hayvanlarında NLF, grip, koronavirüs hastalığı-2019 (COVID-19) ve alerjik hastalık 3,8,9 dahil olmak üzere solunum yolu hastalığı modellerini incelemek için de kullanılmıştır. Bu yöntem, genellikle alerjenlere, astıma ve solunum yolu enfeksiyonlarına verilen yanıtların göstergeleri olarak incelenen polimorfonükleer hücreler ve sitokinler gibi temel inflamatuar biyobelirteçleri belirlemek için yaygın olarak kullanılmaktadır 10,11,12. Daha yakın zamanlarda, potansiyel intranazal aşı adaylarının etkinliğini ve güvenliğini araştırmak için, NLF örnekleri genellikle deney hayvanlarından toplanmış ve NLF örneklerindeki patojen ve immünoglobulin (Ig) seviyeleri gösterge13 olarak ölçülmüştür.

Deneysel farelerde, NLF trans-faringeal veya trans-trakeal yöntem kullanılarak toplanabilir. Trans-faringeal yöntemde, palatofaringeal bölgeyi de içeren murin başı gırtlaktan ayrıldı ve daha sonra fosfat tamponlu salin (PBS) enjekte etmek ve burun deliğinden NLF'yi toplamak için faringeal açıklıktan koana bir kateter yerleştirildi14. Trans-trakeal yöntemde başı kesmeden soluk borusundan solunum yoluna erişim sağlandı ve NLF burun deliğinden toplanarak kan kontaminasyonu riski en aza indirildi. Bu iki ana yöntem, deneysel farelerde NLF toplanması için kullanılmış olsa da, her iki geleneksel yöntemin de kendi sınırlamaları vardır. Trans-trakeal yöntemin, trans-trakeal lavaj sıvısının ağız boşluğuna sızması nedeniyle trans-faringeal yönteme göre daha düşük miktarlarda NLF verdiği gösterilmiştir. Önceki çalışma, PBS enjeksiyonunu takiben, NLF'de geri kazanılan sıvı hacimlerinin trans-trakeal ve trans-faringeal yöntemlerde sırasıyla% 70 -% 80 ve% 90 -% 100 olduğunu göstermiştir14. Trans-faringeal yöntem, trans-trakeal yönteme göre daha büyük miktarlarda NLF ile daha iyi kabul edilebilse de, işlem sırasında kan kontaminasyonu bir dereceye kadar kaçınılmazdı14,15. Benzer şekilde, birkaç çalışma, NLF örneklerinin sıklıkla yüksek düzeyde kan serumu proteinleri ile kontamine olduğunu bildirmiştir 16,17,18. Bu, solunum yolu hastalıkları için NLF'ye özgü biyobelirteçlerin saptanmasını ve niceliğini engelleyebilir19. Bu aynı zamanda NLF örneklerinde Ig, özellikle IgA ve IgG konsantrasyonlarını da etkileyebilir, çünkü kan NLF'den daha fazla miktarda IgA ve IgG içerir.

Bu zorlukların üstesinden gelmek için bu çalışma, deneysel farelerden NLF örnekleri toplamak, örnek verimini en üst düzeye çıkarmak ve kan kontaminasyonunu en aza indirmek için benzersiz, basit ve güvenilir bir trans-faringeal yöntem oluşturmayı amaçladı. Deneysel işlemler sırasında, kan kontaminasyonunu önlemek için farenin ağzına pamuk topları yerleştirildi ve daha sonra burun deliğinden NLF örneklerini toplamak için PBS enjekte edildi. NLF'deki kan kontaminasyonu seviyeleri, NLF örneklerinde hemoglobin (Hb) seviyelerinin yarı niceliklendirilmesini sağlayan bir adli tıp tekniği olan luminol bazlı kemilüminesans kullanılarak belirlendi; yeni yöntemle toplanan NLF'deki luminol reaksiyonu negatifti. Bu nedenle, mevcut yeni yöntem, antikor enzimine bağlı immünosorbent testleri (ELISA'lar), sitokin profilleri, immünolojik ve tıbbi biyobelirteç belirlemeleri ve murin solunum yolu hastalığı modelleri gibi çeşitli biyolojik deneyler için NLF numune kalitesini iyileştirebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler Kindai Üniversitesi Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) tarafından belirtilen kriterlere göre gerçekleştirildi20. Bu çalışmada 4 aylık erkek C57BL/6 fareler kullanıldı. Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlarla ilgili bilgiler Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. NLF koleksiyonu

  1. Kurumsal olarak onaylanmış protokolleri takip ederek% 5 izofluran21 içeren bir fareye ötenazi yapın.
  2. Fareyi cerrahi bir plakaya sırt üstü yerleştirin ve dört uzvunu da sabitleyerek sabitleyin.
  3. 1 mL'lik bir şırınga kullanarak kalpten kan alın.
  4. İç organları ve diyaframı ortaya çıkarmak için makas kullanarak karın boşluğunu açın.
  5. Sağ atriyumu görünür hale getirmek için diyaframı ve kaburgaları makas kullanarak kesin.
  6. Kanı daha fazla çıkarmak için makas kullanarak sağ atriyumu delin.
  7. Dilini çekerken hayvanın ağzına üç pamuk top yerleştirin.
  8. NLF'de kan kontaminasyonunu önlemek için başınızı kaldırırken (burun yukarı pozisyonda) alt çeneyi makas kullanarak ayırın.
  9. Kan kontaminasyonunu önlemek için pamuk toplarını yenileriyle değiştirin.
  10. Kanama durduktan sonra, koanaya 200 μL steril PBS enjekte edin ve burun deliklerinden çıkarılan NLF'yi 1.5 mL'lik bir tüpe toplayın.
  11. Adım 1.10'u bir kez daha tekrarlayın.

2. Luminol kemilüminesans ile kan kontaminasyonunun tespiti

  1. Stok çözeltisini yapmak için 1.5 mL'lik bir tüp kullanarak 1 mg luminol ve 5 mg sodyum peroksit (Na2O2) 1 mL steril su ile çözün.
    NOT: Nihai konsantrasyon 1 mg / mL luminol ve 5 mg / mL Na2O2'dir.
  2. Tüpü alüminyum folyo ile örtün ve kullanana kadar 4 °C'de saklayın.
  3. Çalışan bir çözelti elde etmek için stok çözeltisini 10 kat deiyonize su ile seyreltin.
    NOT: Nihai konsantrasyon 0.1 mg / mL luminol ve 0.5 mg / mL Na2O2'dir.
  4. NLF numunelerinin 2 μL'sini 96 oyuklu bir plakanın kuyucuklarına pipetleyin.
  5. Her oyuğa 100 μL seyreltilmiş luminol çözeltisi ekleyin.
  6. Numuneleri luminol çözeltisi ile karıştırmak için 96 oyuklu plakayı kısaca sallayın.
  7. Karanlıkta luminol kemilüminesansını doğrudan gözlemleyin.
  8. Gerekirse bir luminometre kullanarak Hb konsantrasyonunu yarı ölçün.

3. IgA ve IgG'nin ELISA'lar ile miktar tayini

  1. 96 oyuklu plakaların kuyularını 100 μL/oyuklu toplam anti-fare IgA (20 ng/oyuk; 200 ng/mL) veya IgG (10 ng/oyuk; 100 ng/mL) antikoru ile kaplayın (bkz.
  2. Plakaları kapatın ve gece boyunca 4 °C'de inkübe edin.
  3. Plakaları her seferinde PBS'de %0,05 Tween 20 içeren bir yıkama tamponu ile 300 μL/kuyu ile üç kez yıkayın ve ardından plakaları kağıt havlu üzerine kurulayın.
  4. Her bir oyuğa %10 fetal sığır serumu (FBS) ve PBS'de %0.2 Tween 20 içeren 200 μL tahlil seyreltici ekleyin.
  5. Plakaları oda sıcaklığında (RT) 60 dakika inkübe edin.
  6. Tahlil seyrelticisini aspire edin ve ardından plakaları kağıt havluların üzerine kurulayın.
  7. Test seyreltici ile 100 ng / mL fare IgA veya IgG standardı hazırlayın ve iki kat seri seyreltme yapın: 50 ng / mL, 25 ng / mL, 12.5 ng / mL, 6.25 ng / mL, 3.13 ng / mL, 1.56 ng / mL ve 0.78 ng / mL.
    NOT: Her standardın gerekli hacmi kuyu başına 100 μL'dir.
  8. Numuneleri uygun seyreltmelerde test seyreltici ile seyreltin: serum (104 ila 106), NLF (10, 50, 200 ve 500) ve BALF (101 ila 104).
    NOT: Her numunenin gerekli hacmi kuyu başına 100 μL'dir.
  9. Uygun kuyucuklara 100 μL IgA veya IgG standartları ve numuneleri ekleyin.
  10. Plakaları RT'de 75 dakika inkübe edin.
  11. Plakaları her seferinde 300 μL / kuyu yıkama tamponu ile üç kez yıkayın ve ardından plakaları kağıt havlu üzerine kurulayın.
  12. Peroksidaz konjuge bir anti-fare F(ab')2 antikorunu (Malzeme Tablosuna bakınız) uygun seyreltmede tahlil seyrelticisi ile seyreltin: 104 kat seyreltme.
    NOT: Gerekli hacim kuyu başına 100 μL'dir.
  13. Her oyuğa 100 μL seyreltilmiş peroksidaz konjuge anti-fare F(ab')2 antikoru ekleyin.
  14. Plakaları RT'de 75 dakika inkübe edin.
  15. Plakaları her seferinde 300 μL / kuyu yıkama tamponu ile beş kez yıkayın ve ardından plakaları kağıt kuleleri üzerinde kurulayın.
  16. Her oyuğa tetrametilbenzidin (TMB) ve hidrojen peroksit içeren 100 μL bir substrat çözeltisi ekleyin.
  17. Plakaları RT'de 5 dakika inkübe edin.
  18. Her kuyucuğa 50 μL'lik bir durdurma çözeltisi, 2 N sülfürik asit (2N H2S04) ekleyin.
  19. Bir mikroplaka okuyucu kullanarak absorbansı 450 nm'de ölçün.
  20. Standart eğrileri kullanarak her numunedeki IgA ve IgG konsantrasyonlarını belirleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Konvansiyonel veya yeni yöntem kullanılarak, NLF örnekleri C57BL / 6 farelerinden trans-faringeal yol yoluyla toplandı. Şekil 1'de gösterildiği gibi, geleneksel yöntemle toplanan NLF örnekleri hafif pembe renktedir (Şekil 1A); yeni yöntemle toplanan NLF örnekleri açıktı (Şekil 1B). Fark, konvansiyonel yöntemle NLF numunelerindeki kan kontaminasyonundan kaynaklanıyor gibi göründüğü için, NLF numunelerindeki kan kontaminasyonu bir lum...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Nazal lavaj, grip ve COVID-19 gibi solunum yolu hastalıklarında biyokimyasal, sitolojik ve biyolojik bilgi edinmek için değerli bir tekniktir23. Çeşitli sızan hücrelerin tanımlanmasının yanı sıra, solunum yolunun hücresel olmayan bileşimi, ELISA'lar, immünoblot ve kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu 1,19,24 gibi çeşitli yöntemler kullanılarak NLF örneklerinden incelene...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Seiichi Omura, Ph.D., Cong Thanh Nguyen, MD, Ph.D., Kota Moriguchi, MD, Ph.D., Reona Shiro, MD ve Sandesh Rimal, MS, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Kindai Üniversitesi Tıp Fakültesi ve Hirotaka Ebina, Ph.D., Shinya Okamura, Ph.D. ve Yasuo Yoshioka, Ph.D., Virüs Aşı Grubu, BIKEN Yenilikçi Aşı Araştırma Birliği Laboratuvarları, Mikrobiyal Hastalıklar Araştırma Enstitüsü, Yararlı tartışmalar için Osaka Üniversitesi. Ayrıca, mükemmel teknik yardımları için Kindai Üniversitesi Yaşam Bilimleri Araştırma Enstitüsü üyelerine de şükranlarımızı sunarız. Bu çalışma, Japonya Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı tarafından Monbukagakusho (MEXT, 2021-2025) Bursu (IA), Japonya Bilimi Teşvik Derneği'nden (JSPS) Bilimsel Araştırma için Yardım Hibesi KAKENHI JP23K06493 (FS), JP21K07287/JP24K10500 (AMP) ve JP22K18378/JP24K10163 (IT) ve Kindai Üniversitesi Araştırma Geliştirme Hibesi KD2406 (FS) ve KD2506 (IT) aracılığıyla desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Hayvan sabitleme iğnesiNatsume Seisakusho Co., Ltd., Tokyo, JaponyaKN-358-A Hayvansabitleme iğneleri olan bir fareyi düzelttik. Paslanmaz çelik; toplam uzunluk, 23 mm; ve iğne ucu, 15 mm.
BD OptEIATM  TMB Substrat Reaktif SetiBD Biosciences, San Diego, CA, ABD555214100 &mu ekledik; Kuyucuk başına L TMB substrat çözeltisi.
Bell JarNANA: Anestezi için bir çan kavanozu kullandık.
Şeffaf Düz Tabanlı İmmüno Nonsteril 96 Kuyulu Plakalar ThermoFisher Scientific, Rochester, NY, ABD442404Enzime bağlı immünosorbent testleri için MaxiSorp yüzey işlemeli Clear Flat-Bottom Immuno Nonsteril 96-Well Plate'ler kullandık.
Pamuk topuSansho Co., Ltd., Tokyo, Japonya94-1951Kan kontaminasyonunu önlemek için pamuk topları kullandık. Pamuk toplarının çapı 7 mm idi.
Fetal sığır serumuSigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, ABD172012-500 MLTest seyrelticisine fetal sığır serumunun% 10'unu ekledik.
Forseps (Araştırma deneyleri için mikro cımbız, kavisli uç)Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japonya91-1506Diseksiyon için forseps kullandık. Model, HSC 551-10; ve overll tüm uzunluk, 105 mm.
Forseps (Hassas cımbız)Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japonya91-2772Diseksiyon için forseps kullandık. Modeli, HSC 607-12; overll tüm uzunluk, 120 mm; ve uç çapı, 0,3 mm.
Keçi Anti-Fare IgA-UNLBSouthernBiotech, Birmingham, AL, ABD1040-01Şeffaf Düz Tabanlı İmmüno Nonsteril 96 Kuyulu Plakaları 100 & mu ile kapladık; L/kuyu (20 ng/kuyu) toplam immünoglobulin A.
İzofluran Viatris Inc., Canonsburg, PA, ABDNA Anesteziiçin izofluran kullandık.
Luminol Rection Reaktif SetiFUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Osaka, Japonya124-06511NLF örneklerinde hemoglobini tespit etmek için bir luminol reaksiyon reaktif seti kullandık.
MicrotubeWatson Co., Ltd., Tokyo, Japonya131-7155CNLF ve BALF'ı toplamak için mikrotüpler kullandık  (kilitleme kapaklı, yuvarlak tabanlı, yumuşak dokunmatik kapaklı 1,5 mL mikrotüp).
Milli-Q suMerck KGaA, Darmstadt, AlmanyaMilli-Q Direct 8Bir luminol rektiyon çözeltisi yapmak için MilliQ suyu kullandık.
Mini-Shaker PSU-2TBiosan Ltd., Riga, LetonyaPSU-2TMini-Shaler PSU-2T kullanarak 96 kuyulu plakaları salladık.
Fare suşuCLEA Japan, Inc., Tokyo, JapanNA4 aylık C57BL / 6 erkek fareler kullandık.
Nunc MicroWell 96 kuyulu, Nunclon delta ile işlenmiş, düz tabanlı mikroplakatermo fisher bilimsel nunc A/S . Kamstrupvej, Roskilde, Danimarka136101Luminol testi için NuncTM MicroWellTM 96-Well, Nunclon Delta İşlemli, Düz Tabanlı Mikroplaka kullandık.
Peroksidaz konjuge AffiniPure F(ab')2 Fragman Keçi Anti-Fare IgG, F(ab')2 Fragmana Özgü (İnsan, Sığır ve At Serum Proteinlerine minimum çapraz reaksiyon)Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, ABD115-036-072100 &mu ekledik; L peroksidaz konjuge AffiniPure F (ab ') 2 fragmanı keçi anti-fare IgG, F (ab') 2< / sub> fragmanı spesifik, her bir oyuğa tespit antikoru (10.000 kat seyreltme) olarak.
Fosfat tamponlu salinSigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, ABDD8537-500MLNLF ve BALF toplama için Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salinini (kalsiyum klorür ve magnezyum klorür olmadan modifiye edilmiş, sıvı, steril filtreli, hücre kültürüne uygun) kullandık.
Pipet ve nbsp;Watson Co., Ltd., Tokyo, JaponyaNA200-&mu kullandık; Nazal lavaj için L pipeti.
Pipet ucuWatson Co., Ltd., Tokyo, JaponyaNA200-&mu kullandık; Nazal lavaj için L multifit pipet ucu.
Polioksietilen(20) Sorbitan Monolaurate (Tween 20)FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Osaka, Japonya167-11515Yıkama tamponuna Tween 20'nin %0,05'ini ve tahlil seyrelticisine Tween 20'nin %0,2'sini ekledik.
Saflaştırılmış Keçi anti-fare IgG (minimal x-reaktivite) AntikorBioLegend, San Diego, CA, ABD405301Şeffaf Düz Tabanlı İmmüno Nonsteril 96 Kuyulu Plakaları 100 & ile kapladık; L/kuyu (10 ng/kuyu) toplam immünoglobulin G.
Küçük makas, çift uçluSansho Co., Ltd., Tokyo, Japonya91-7005Diseksiyon için makas kullandık. Modeli, S-4A; ve overll tüm uzunluk, 115 mm.
Sülfürik asitWako Saf Kimya Endüstrileri, Ltd, Tokyo, Japonya192-0475550 &mu ekledik; Reaksiyonu durdurmak için her kuyucuğa L 2 N sülfürik asit.
Surflo intravenöz kateter Terumo Corporation, Tokyo, Japonya SR-FS2032Surflo intravenöz kateter kullandık ve bronkoalveoler lavaj için trakeaya PBS enjekte ettik. kateter, 20G; kateter uzunluğu, 32 mm; kateter iç çapı, 0.80 mm; kateter dış çapı, 1.1 mm; ve iç iğne, 22G.
Cerrahi düz makasSansho Co., Ltd., Tokyo, Japonya91-7004Diseksiyon için makas kullandık. Modeli, S-3B; ve tüm uzunlukta, 120 mm.
Cerrahi plakaNatsume Seisakusho Co., Ltd., Tokyo, JaponyaKN-321-BDiseksiyon için bir mantar levha kullandık. Derinlik, 20 cm; genişlik, 15 cm; ve yükseklik 3 cm.
Synergy H1 Hibrit Çok Modlu Mikroplaka Okuyucu Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, ABDNASynergy H1 Hibrit Çok Modlu Mikroplaka Okuyucu kullanarak numunelerin absorbansını 450 nm'de ölçtük.
ŞırıngaTerumo Corporation, Tokyo, Japonya SS-01TKalpten kan almak için 1 mL'lik bir şırınga kullandık.
Konu  Niccho Kogyo Co., Ltd. Tokyo JaponyaNAİşlem sırasında uygun konumlandırmayı sağlamak için iplikle bir kateter bağladık.

Kaynaklar

  1. Cortegano, I., et al. Age-dependent nasal immune responses in non-hospitalized bronchiolitis children. Front Immunol. 13, 1011607(2022).
  2. Yao, S., et al. Control of pathogenic effector T-cell activities in situ by PD-L1 expression on respiratory inflammatory dendritic cells during respiratory syncytial virus infection. Mucosal Immunol. 8 (4), 746-759 (2015).
  3. Gould, V. M. W., et al. Nasal IgA provides protection against human influenza challenge in volunteers with low serum influenza antibody titre. Front Microbiol. 8, 900(2017).
  4. Casado, B., Pannell, L. K., Viglio, S., Iadarola, P., Baraniuk, J. N. Analysis of the sinusitis nasal lavage fluid proteome using capillary liquid chromatography interfaced to electrospray ionization-quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry. Electrophoresis. 25 (8), 1386-1393 (2004).
  5. Hull, J., Skinner, W., Robertson, C., Phelan, P. Elemental content of airway surface liquid from infants with cystic fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 157 (1), 10-14 (1998).
  6. Roponen, M., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage, induced sputum and serum of employees with rheumatic and respiratory disorders. Eur Respir J. 18 (3), 542-548 (2001).
  7. Santos Galvão, C. E., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil. São Paulo Med J. 122 (5), 204(2004).
  8. Winkler, E. S., et al. SARS-CoV-2 causes lung infection without severe disease in human ACE2 knock-in mice. J Virol. 96 (1), e01511-e01521 (2022).
  9. Kieran, T. J., et al. Exploring associations between viral titer measurements and disease outcomes in ferrets inoculated with 125 contemporary influenza A viruses. J Virol. 98 (2), e01661-e01723 (2024).
  10. Peden, D. B. The use of nasal lavage for objective measurement of irritant-induced nasal inflammation. Regul Toxicol Pharmacol. 24 (1 II), 68-75 (1996).
  11. Rusznak, C., et al. Mechanisms of pollution-induced allergy and asthma. Rev Fr Allergol Immunol Clin. 38 (7 Suppl. 1), 397-402 (1998).
  12. Laumbach, R. J., et al. Nasal effects of a mixture of volatile organic compounds and their ozone oxidation products. J Occup Environ Med. 47 (11), 1182-1189 (2005).
  13. Kawai, A., et al. The potential of neuraminidase as an antigen for nasal vaccines to increase cross-protection against influenza viruses. J Virol. 95 (20), 1180-1201 (2021).
  14. Cho, S. H., et al. Spontaneous eosinophilic nasal inflammation in a genetically-mutant mouse: Comparative study with an allergic inflammation model. PLoS One. 7 (4), e35114(2012).
  15. Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of inflammatory responses during intranasal colonization with Streptococcus pneumoniae. J Vis Exp. (83), e50490(2014).
  16. Ghafouri, B., et al. Comparative proteomics of nasal fluid in seasonal allergic rhinitis. J Proteome Res. 5 (2), 330-338 (2006).
  17. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Svartz, J., Tagesson, C. Protein patterns of human nasal and bronchoalveolar lavage fluids analyzed with two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis. 19 (18), 3222-3229 (1998).
  18. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight. Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).
  19. Schoenebeck, B., et al. Improved preparation of nasal lavage fluid (NLF) as a noninvasive sample for proteomic biomarker discovery. Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1854 (7), 741-745 (2015).
  20. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).
  21. Roustan, A., et al. Evaluating methods of mouse euthanasia on the oocyte quality: Cervical dislocation versus isoflurane inhalation. Lab Anim. 46 (2), 167-169 (2012).
  22. Park, A. M., Tsunoda, I. Forensic luminol reaction for detecting fecal occult blood in experimental mice. Biotechniques. 65 (4), 227-230 (2018).
  23. Gao, K. M., et al. Human nasal wash RNA-Seq reveals distinct cell-specific innate immune responses in influenza versus SARS-CoV-2. JCI Insight. 6 (22), e152288(2021).
  24. Kirkeby, L., et al. Immunoglobulins in nasal secretions of healthy humans: Structural integrity of secretory immunoglobulin A1 (IgA1) and occurrence of neutralizing antibodies to IgA1 proteases of nasal bacteria. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (1), 31-39 (2000).
  25. Webb, J. L., Creamer, J. I., Quickenden, T. I. A comparison of the presumptive luminol test for blood with four non-chemiluminescent forensic techniques. Luminescence. 21 (4), 214-220 (2006).
  26. Ahmad, I., et al. Exploring the role of platelets in virus-induced inflammatory demyelinating disease and myocarditis. Int J Mol Sci. 25 (6), 3460(2024).
  27. Olsson, T., Bergström, K., Thore, A. A sensitive method for determination of serum hemoglobin based on iso-luminol chemiluminescence. Clin Chim Acta. 122 (2), 125-133 (1982).
  28. Van der Meer, W., Dinnissen, J. M. B., de Keijzer, M. H. Evaluation of the Sysmex XT-2000i, a new automated haematology analyser. Sysmex. (2002), Available at: https://www.sysmex.co.jp/en/products_solutions/library/journal/vol12_no2/summary03.html (2002).
  29. Oshiro, I., Takenaka, T., Maeda, J. New method for hemoglobin determination by using sodium lauryl sulfate (SLS). Clin Biochem. 15 (2), 83-88 (1982).
  30. Hamaguchi, Y., Oshiro, I., Maeda, J. A study on reaction mechanism of sodium lauryl sulfate-hemoglobin (SLS-Hb), Part 1. Rinsho Byori. 40 (6), 649-654 (1992).
  31. McGee, D. W., McMurray, D. N. The effect of protein malnutrition on the IgA immune response in mice. Immunology. 63 (1), 25(1988).
  32. Castigli, E., et al. Impaired IgA class switching in APRIL-deficient mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (11), 3903-3908 (2004).
  33. Matsuo, K., et al. CCL28-deficient mice have reduced IgA antibody-secreting cells and an altered microbiota in the colon. J Immunol. 200 (2), 800-809 (2018).
  34. McDonald, K. G., et al. Aging impacts isolated lymphoid follicle development and function. Immun Ageing. 8 (1), 1-12 (2011).
  35. Abolins, S., et al. The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus. Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Fare Örnek ToplamaFarengeal YolTrakeal Yolİmmünoglobulin Aİmmünoglobulin GLüminol ReaksiyonuKemilüminesans TespitiMikrobiyom Analizi
Kan Kirliliği Olmadan Murine Nazal Lavaj Sıvısı Toplama
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.