Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Mycoplasma pneumoniae Nükleik Asit ve İlaç Direnç Geninin Tespiti

816 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68500

⸱

19 Eylül 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical Laboratory Medicine, Heyuan Key Laboratory of Molecular Diagnosis & Disease Prevention and Treatment, Heyuan People's Hospital, Guangdong Provincial People's Hospital Heyuan Hospital, 2Department of Clinical Laboratory Medicine, Heyuan People's Hospital, Guangdong Provincial People's Hospital Heyuan Hospital, 3Department of Clinical Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital, Guangdong Academy of Medical Sciences, Southern Medical University, 4Medical laboratory, Heyuan Key Laboratory of Molecular Diagnosis & Disease Prevention and Treatment, Doctors Station of Guangdong province, Heyuan People's Hospital, Guangdong Provincial People's Hospital Heyuan Hospital

Bu makalede

Özet

Bu protokol, Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonlarını tespit etmek ve antibiyotik direncini belirlemek için hızlı ve güvenilir bir yol sağlar. Uygulayıcıların doğru tedavileri daha hızlı seçmelerine yardımcı olur, zatürree hastalarının bakımını iyileştirir ve antibiyotiklerin daha iyi kullanımını destekler

Özet

Mycoplasma pneumoniae (Mp), pediatrik popülasyonlarda toplum kökenli pnömoniden (TKP) sorumlu en yaygın patojenlerden birini temsil eder. Mycoplasma pneumoniae direnç genlerinin tespiti, MP enfeksiyonlarının kesin klinik tanı ve tedavisi için sağlam teknik destek ve teorik bir temel sağlar. Mp enfeksiyonunda ilaç direncinin doğru tanısı ve değerlendirilmesi klinik tedavi için esastır. Mycoplasma pneumoniae için yaygın tespit yöntemleri arasında kültür, antikor tespiti ve moleküler biyoloji tabanlı testler bulunur. Mp kültürü tanı için altın standarttır ancak belirli bir ortam gerektirir, zaman alıcıdır ve duyarlılığı düşüktür. Mp'nin antikor bazlı tespiti yaygın olarak kullanılmaktadır; Bununla birlikte, enfeksiyonun erken evresinde yanlış negatifler ortaya çıkabilir. Moleküler biyoloji tabanlı tespit, hızlı geri dönüş, düşük kontaminasyon riski, yüksek hassasiyet, yüksek özgüllük sağlar ve numune toplama zamanlaması veya bağışıklık durumu ile sınırlı değildir. Bu nedenle Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonunun teşhisinde yeni bir altın standart olarak kabul edilmiştir. Makrolid ajanlar, çocuklarda Mp enfeksiyonu için ilk tercih edilen tedavidir. Bununla birlikte, çocuklarda solunum yolu enfeksiyonlarında makrolidlerin yaygın kullanımı ile ilaca dirençli Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonu insidansı artmaktadır. Dirençli suşlarla enfekte olan hastalar, hassas suşlarla enfekte olanlara kıyasla uygulamadan sonra önemli ölçüde daha uzun ateş süresi, uzun süreli hastanede kalış süresi ve uzun süreli ateş yaşarlar. Bugüne kadar tanımlanan mutasyon bölgeleri arasında 2063, 2064, 2067 ve 2617 bulunmaktadır. Çin'de, nokta mutasyonları yalnızca 2063 ve 2064 konumlarında belgelenmiştir ve 2063 konumunda A'dan G'ye ikame en yaygın olanıdır. Bu bölgeler için, insan balgam örneklerinde Mycoplasma pneumoniae'nin nükleik asitlerini ve ilaç direnci mutasyonlarını tespit etmek için floresan prob teknolojisi ile birleştirilmiş polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılmıştır. Mycoplasma pneumoniae direnç genlerinin tespiti, Mp enfeksiyonunun doğru teşhisi ve etkili tedavisi için çok önemli teknik destek ve teorik bir temel sunar.

Giriş

Mycoplasma pneumoniae (Mp), bakteri ve virüsler arasında bir ara konumda yer alan, bağımsız olarak hayatta kalabilen en küçük patojenik mikroorganizmadır. Esas olarak solunum damlacıkları veya aerosoller tarafından yayılır ve çocuklarda toplum kökenli pnömoni (TKP) ile ilişkili ikinci en yaygın patojeni oluşturur1 ve TKP vakalarının %20 ila %40'ından sorumludur2. Mp, penisilin ve sefalosporinler gibi β-laktam antibiyotiklere karşı, bu antibiyotiklerin hücre duvarı sentezini engelleyerek hedef aldığı hücre duvarının olmaması nedeniyle doğal direnç gösterir. Mp enfeksiyonları için başlıca terapötik yöntemler, tetrasiklinler ve florokinolonlar 3,4,5 gibi DNA replikasyonunu engelleyen farmasötiklerin yanı sıra makrolidler ve tetrasiklinler dahil olmak üzere protein sentezini engelleyen ajanları içerir. Bu nedenle, Mp'nin hızlı laboratuvar tanımlaması, antibiyotiklerin akılcı bir şekilde uygulanmasını bilgilendirmek için gereklidir. Mp için çağdaş laboratuvar tespit yöntemleri, izolasyon ve kültür, antijen tespiti, antikor tespiti ve genetik tanı tekniklerini kapsar.

Geleneksel bir tespit yöntemi olarak izolasyon ve kültür, Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonunun teşhisinde kesin standart olmaya devam etmektedir. Kashyap ve ark. boğaz sürüntülerinden veya balgam örneklerinden Mp kültürünün güvenilir bir teşhis tekniği olduğunu gözlemlediler6. Bu yaklaşım, Mp'nin katı kültürel ön koşulları, uzun kültür süreleri ve rutin klinik kullanımını kısıtlayan tipik olarak düşük pozitif tespit oranları gibi önemli engellerle karşılaşmaktadır. Mp antijen tespiti, Mp'ye özgü antikorlara bağlıdır. Miyashita ve ark. çift antikorlu bir sandviç ELISA'da kaplama ajanları olarak çeşitli Mp suşlarından monoklonal antikorlar kullandılar ve PCR7 kullanarak etkinliklerini değerlendirdiler. Bulgular, iki metodoloji arasında önemli bir fark olmadığını ortaya koydu. Bununla birlikte, oldukça spesifik ve yüksek titreli monoklonal antikorlara duyulan ihtiyaç, bu yöntemin kapsamlı bir şekilde uygulanmasını kısıtlamaktadır.

Mp enfeksiyonunu takiben, bağışıklık sistemi spesifik IgM ve IgG antikorları üretir. IgM antikorları genellikle enfeksiyonu takip eden 1 hafta içinde tespit edilebilir hale gelir ve 3 ila 4 haftada zirveye ulaşır, bu da onları erken enfeksiyon için değerli tanı göstergeleri haline getirir. Bununla birlikte, azalan antikor seviyeleri nedeniyle ilk aşamalarda yanlış negatif sonuçlar ortaya çıkabilir8. Tersine, IgG antikorları daha sonra ortaya çıkar ve tipik olarak önceki bir enfeksiyonu gösterir 9,10. Mp'nin serolojik tespiti, spesifik olmayan ve spesifik antikor testleri olarak sınıflandırılır. Spesifik olmayan antikor testlerinin uygulanması basit olsa da, riketsiya ve adenovirüs dahil olmak üzere diğer patojenlerden kaynaklanan enfeksiyonlar da soğuk aglütinin düzeylerini artırarak yanlış pozitif sonuçlara yol açabileceğinden, özgüllükleri sınırlıdır. Spesifik antikor testleri, kompleman fiksasyon testini, partikül aglütinasyon testini, dolaylı hemaglutinasyon testini, dolaylı immünofloresan testini ve enzime bağlı immünosorbent testini (ELISA) kapsar. ELISA, yerleşik teknolojisi ve ticari erişilebilirliği sayesinde Çin'de yaygın olarak kullanılmaktadır, yüksek hassasiyet ve operasyonel basitlik sağlamakta ve böylece rutin klinik uygulamada Mp enfeksiyonlarını teşhis etmek için pratik ve güvenilir bir yöntem olarak hizmet vermektedir11.

Gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR, hızlı işlem süresi, yüksek özgüllüğü, sağlam duyarlılığı ve çapraz reaktivitenin olmaması ile ayırt edilir. Bu yöntem balgam, boğaz sürüntüsü veya bronşiyal lavaj sıvısı örneklerinde Mp DNA'yı tanımlar ve reaksiyon başına 1-100 ng DNA gerektirir. Tespit, gerçek zamanlı bir PCR cihazı kullanılarak gerçekleştirildi. DNA şablonu, daha yüksek sıcaklıklarda denatürasyona maruz kalır, ardından primer tavlama ve floresan prob hibridizasyonu gelir. Gen amplifikasyon teknolojisi, nükleik asit fragmanlarının son derece düşük konsantrasyonlarda kısa bir zaman diliminde milyonlarca kopyaya replikasyonunu sağlayarak ≥10 CFU / mL12'lik bir algılama hassasiyetine ulaşır. Geleneksel PCR ile karşılaştırıldığında, gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR, yüksek verimli ve otomatik analiz sağlarken kontaminasyon risklerini azaltır. Bu nedenle, klinik uygulamada doğrudan Mp tespiti için tercih edilen teknik olarak ortaya çıkmıştır13. Artan hassasiyeti nedeniyle, yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuçlara yol açabilecek kontaminasyonu önlemek için sıkı önlemler alınması gerekmektedir.

Klinik tedavide makrolidler, Mycoplasma pneumoniae pnömonisi (MPP) için birincil terapötik müdahaleyi oluşturur. Antibiyotiklerin aşırı kullanımı ve yanlış uygulanması seçici baskı uygulayarak makrolid dirençli Mp'nin ortaya çıkmasına neden olmuştur. Bu direnç, refrakter MPP'ye önemli bir katkıda bulunur. Mycoplasma pneumoniae'deki makrolid direnci Doğu Asya'da, özellikle Çin ve Japonya'da belirgin şekilde yükselirken, Avrupa ve Amerika Birleşik Devletleri nispeten daha düşük direnç oranları sergilemektedir. Pediatrik hastalar genellikle yetişkinlere kıyasla daha yüksek direnç oranları gösterir ve bu da daha fazla inceleme gerektirir14. 2000 yılından bu yana, Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonlarının (MRMPI) insidansı, özellikle Doğu Asya'da olmak üzere küresel ölçekte önemli ölçüde artmıştır. Çin'de, MRMPI suşları vakaların %69 ila %95'ini oluşturur15 ve ciddi hastalığa, tedavi başarısızlığına, komplikasyonlara ve uzun vadeli sekellere önemli ölçüde katkıda bulunur. Araştırmalar, 23S rRNA genindeki mutasyonların, makrolidin hedef bölgelere bağlanmasını engellediğini ve dolayısıyla ilaç etkinliğini azalttığını göstermektedir. Sık mutasyon lokusları 2063, 2064, 2067 ve 2617 konumlarını kapsar. Çin'de, mutasyonlar yalnızca 2063 ve 206416,17 pozisyonlarında tanımlanmıştır. 2016 yılında yapılan bir araştırma, Pekin, Harbin, Şanghay ve Sincan'daki makrolid direnç oranlarının %66,7 ile %86,7 arasında değiştiğini, Nanjing'in ise %20 gibi daha düşük bir oran sergilediğini göstermiştir18. Makrolid dirençli suşlar çeşitli bölgelerde ortaya çıkmış olup, direnç oranları şu şekilde bildirilmiştir: Fransa'da %8,3-%9,8, Almanya'da %3,0-%3,6, Amerika Birleşik Devletleri'nde %8,2, Danimarka'da %0,9-%2,9, Kanada'da %12,1, İtalya'da %20, İsrail'de %22, İspanya'da %8 ve Birleşik Krallık'ta %9,3 19,20,21,22,23,24,25,26, 27. Bu eğilim, makrolid direncinin dünya çapında yaygınlaştığını vurgulamaktadır. 2008 yılında Hindley ve ark. 40 örnek A2063G mutasyonunu, bir örnek A2063C mutasyonunu ve beş örnek A2064G mutasyonunu gösteren28 olmak üzere 46 makrolid dirençli Mycoplasma pneumoniae vakası bildirmiştir. Japonya ve Amerika Birleşik Devletleri'nde karşılaştırılabilir direnç mutasyonları tanımlanmıştır ve birincil mutasyonlar 2063 ve 206429 pozisyonlarında meydana gelmiştir. Araştırmalar, mutasyon bölgeleri ile ilaç direnci fenotipleri arasında bir ilişki olduğunu öne sürüyor: A2063G mutasyonu, 14 üyeli makrolidlere (ML) direnç kazandırır, A2064G mutasyonu hem 14 hem de 16 üyeli ML'ye direnç verir, C2617G, 14 ve 15 üyeli ML'ye direnç kazandırır ve A2067G mutasyonu, 16 üyeli ML30'a direnç kazandırır. Mp direncinin izlenmesi, ilaca dirençli enfeksiyonların erken tanımlanması ve klinik tedavi seçeneklerinin bilgilendirilmesi açısından çok önemlidir. Çalışmalar, in vitro antimikrobiyal duyarlılık testinin klinik ilaç etkinliğini tahmin edebildiğini göstermiştir31. 2011 yılında, Amerikan Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü, makrolid direncini değerlendirmek için minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) belirlemek için mikroseyreltme yöntemini savunan kılavuzlar yayınladı32. Bununla birlikte, MIC'nin belirlenmesi birkaç hafta sürebilir ve bu nedenle gerçek zamanlı antibiyotik tedavisini yönlendirmedeki klinik faydasını kısıtlayabilir.

Sanger dizilimi, Mp'nin 23S rRNA genindeki mutasyonları tanımlamak için doğrudan bir tekniktir. Bu yöntem, DNA dizilerini tespit etmek için floresan etiketli nükleotidleri ve elektroforetik analizi kullanır ve Mp genetik varyasyonlarının tanımlanmasını kolaylaştırır. Sanger dizilimi, aynı anda birden fazla mutasyonu tanımlayabilir ve dirençli ve duyarlı suşların oranlarını ölçebilirken, emek yoğun ve zaman alıcıdır, bu nedenle klinik faydasını kısıtlar33,34. Buna karşılık, pirosekanslama, nükleotid katılımı sırasında pirofosfat salınımını tanımlayarak DNA dizisi varyasyonlarının daha doğru bir değerlendirmesini sağlar. Bu yöntem, MRMPI suşlarını tanımlayabilir ve klinik numunelerdeki dirençli ve duyarlı suşların oranlarını Sanger dizilemesinden daha yüksek doğrulukla ölçebilir. Ek olarak, pirosekanslama, bireysel hastaların uzunlamasına izlenmesini sağlayarak, gelişen direncin gerçek zamanlı olarak değerlendirilmesine ve tedavi değişikliklerinin bilgilendirilmesine olanak tanır33. Ancak klinik uygulaması, özel aparatlara, yetkin personele ve uzun işlem sürelerine duyulan ihtiyaç nedeniyle sınırlıdır.

P1 geninin kısıtlama fragmanı uzunluk polimorfizmi (RFLP) analizine dayanarak, Mp iki tipe ayrılır: tip I (ayrıca beş alt tipe ayrılır: 1a-1e) ve tip II (ayrıca üç alt tipe ayrılır: 2a-2c). Bu test, Mycoplasma pneumoniae35'in 8 gen alt tipini tespit edebilir. Bu yöntem, pediatrik balgam örneklerinde Mycoplasma pneumoniae ve makrolid direnç mutasyonlarının (23S rRNA 2063 (A:G) ve 2064 (A:G) mutasyon bölgeleri) kalitatif olarak tanımlanmasını kolaylaştırarak Mycoplasma enfeksiyonları ve antibiyotik direnci sürveyansı için hızlı ve basit bir tamamlayıcı tanı aracı sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm çalışma protokolleri Heyuan Halk Hastanesi Tıbbi Etik Kurulu tarafından gözden geçirildi ve onaylandı (Onay No. YXYJLL-LW2025001). Tüm hastalar katılımdan önce yazılı bilgilendirilmiş onam verdi.

1. Numune toplama

NOT: Numune toplama sırasında aseptik tekniği sürdürürken dikkatli olun.

  1. Hastanın veya şüpheli hastanın balgam örneklerini toplayın. Hastanın hastalığının başlangıcından itibaren 3 gün içinde numune alın.
  2. Hastaya ağzını suyla çalkalamasını, derin nefes almasını, nefesini 5 saniye tutmasını ve yavaş yavaş nefes vermesini söyleyin.
  3. Hastadan bir kez daha derin nefes vermesini isteyin, balgamı çıkarmaya çalışın, belirlenmiş bir plastik kaba koyun ve kapağı kapatın. Balgam derhal oda sıcaklığında (RT) klinik laboratuvara verilmelidir. Numuneleri buzdolabında 2-8 °C'de saklayın.

2. Amplifikasyon reaktiflerinin hazırlanması

  1. PCR laboratuvarının reaktif hazırlama alanında, tampon, primer probu ve kiti -20 °C dondurucudan aldıktan sonra 4 °C'de çözdürün. Enzimi çıkarın, çalkalayarak hafifçe karıştırın ve ardından 10 saniye boyunca 1.006 x g'da santrifüjleyin.
  2. Steril nükleaz içermeyen bir santrifüj tüpü alın, etiketleyin ve Tablo 1'de belirtildiği gibi her birey için reaksiyon sistemini hazırlayın. PCR reaksiyonlarının toplam sayısı, numunelerin toplamına, bir zayıf pozitif kalite kontrolüne, bir kalite kontrol ürünü W'ye ve bir negatif ekstraksiyon kontrolüne eşit olmalıdır.
  3. Her bir reaktifin miktarını belirleyin, uygun boyutta bir santrifüj tüpüne ekleyin, iyice karıştırın ve düşük hızda kısa bir süre santrifüjleyin. Her PCR reaksiyon tüpüne 20 μL reaktif dağıtın ve numune işleme alanına yerleştirin.

3. Örnek işleme

  1. 1 mL balgam örneğini 2 mL balgam sindirim tamponu ile muamele edin, vorteksle iyice karıştırın ve tam sıvılaşma sağlanana kadar 30 dakika inkübe edin.
  2. Numune miktarına bağlı olarak, nükleik asit ekstraksiyon plakasının 1. ve 7. sütunlarına sırayla 5 μL dahili standart ekleyin, ardından 200 μL sıvılaştırılmış numune, normal salin ve MM zayıf pozitif kalite kontrolü ekleyin.
  3. Otomatik bir nükleik asit ekstraksiyon cihazı kullanarak bir nükleik asit ekstraksiyon plakası alın. Ekstraksiyon plakasının 6. ve 12. sütunlarında aşağı akış tahlillerini gerçekleştirdikten sonra ekstrakte edilen nükleik asitleri ekleyin.
  4. Numune Ekleme: PCR laboratuvarının numune hazırlama alanında, ekstraksiyon plakasının 6. ve 12. kolonlarına ekstrakte edilmiş nükleik asit ekleyin. Daha sonra, hazırlanan numune nükleik asidinin 5.0 μL'sini, PCR reaksiyon karışımını içeren PCR reaksiyon tüpüne aktarın (numune, güçlü ve zayıf pozitif kalite kontrolleri, kalite kontrol W ve ekstraksiyon negatif kontrolü dahil).
  5. PCR reaksiyon tüpü sıvısını sabitleyin ve sıvının uygun şekilde kapatıldığını ve kabarcık içermediğini doğrulamak için derhal santrifüjleme gerçekleştirin.

4. Güçlendirme

  1. Reaksiyon tüpünü floresan PCR dedektörüne yerleştirin ve döngü parametrelerini Tablo 2'de aşağıdaki gibi yapılandırın.
  2. Veri toplama 64 °C'ye ayarlanmış FAM (2063 veya 2064 A:G mutasyonu), VIC (Mycoplasma pneumoniae) ve CY5'te (Dahili standart) floresan sinyalleri alın.

5. Veri analizi

NOT: Bu çalışmada kantitatif gerçek zamanlı PCR (qPCR) kullanılmıştır ve temsili sonuçlar Mycoplasma pneumoniae'nin 2063 veya 2064 pozisyonlarında A:G direnciyle ilişkili mutasyonları göstermektedir. Testi pozitif çıkan hastalar klinik tedavide makrolid antibiyotiklerden kaçınmalıdır.

  1. Reaksiyondan sonra cihaz, sonuçları bağımsız olarak analiz eder ve arşivler. Negatif kontrol için hedef genlerin FAM floresan Ct ≥ 35.33 ve VIC floresan Ct ≥ 35.01 sergilediğini, kalite kontrol için hedef genlerin ise FAM floresan Ct ≥ 35.33 ve VIC floresan Ct ≥ 35.01 gösterdiğini kontrol edin. Zayıf pozitif kalite kontrol ürünlerinde FAM ve VIC floresansı için Ct değerleri 29.00 ile 34.00 arasında değişiyordu.
  2. Genel olarak, dahili standardın Ct değeri ≤ 35.00'dır. Karakteristik bir S amplifikasyon eğrisi gözlenirse ancak hedef genin yüksek konsantrasyonu nedeniyle dahili standart amplifiye edilmezse, bunu doğrudan pozitif bir numune olarak bildirin veya numuneyi 10 kat gradyan seyreltme yoluyla yeniden değerlendirin.
  3. UNDECT sergileyen veya tipik bir S-tipi amplifikasyon eğrisinin bulunmadığı numuneyi negatif olarak sınıflandırın.
  4. FAM floresansı (2063 veya 2064 A:G mutasyonu) Ct ≥ 35.33, VIC floresansı (Mycoplasma pneumoniae) Ct ≥ 35.01 olduğunda veya tipik bir S-tipi amplifikasyon eğrisi olmadığında numuneleri negatif olarak kabul edin. Ct değerleri Tablo 3'ü karşıladığında ve karakteristik bir S-tipi amplifikasyon eğrisi sergilediğinde numunelerin pozitif olduğunu kabul edin.
    NOT: Numune tespitinin sonuçları, numune toplama, işleme, taşıma ve muhafaza kalitesine bağlıdır; Herhangi bir hata yanlış negatif sonuçlara neden olabilir. Numune işleme sırasında çapraz kontaminasyonun kontrol edilememesi yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Balgam örneklerinin sıvılaştırılması, nükleik asit ekstraksiyonu ve floresan PCR amplifikasyonunun ardından, amplifikasyon eğrisinin analizinden sonra taban çizgisinin Başlangıç değeri, Bitiş değeri ve Eşik değeri değiştirildi. Başlangıç değeri 3 ve Bitiş değeri 20 idi.

Bu deneyin temsili sonuçları Mp nükleik asit için pozitifti ve 2063 veya 2064 bölgelerinde bir A: G direnç mutasyonu meydana geldi, bu da Mp enfeksiyonunu ve mak...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

PCR ve türev teknikleri, Mycoplasma pneumoniae'de (MP) ilaç direncinin tanımlanması, tiplendirilmesi ve saptanmasında serolojik yöntemlere kıyasla üstün duyarlılık ve özgüllük gösterir. Ayrıca, PCR tabanlı teknikler, kullanım kolaylığı ve azaltılmış masraflar sağlayarak, onları rutin klinik teşhis için uygun bir alternatif haline getirir36. Mp, CAP ile ilişkili dikkate değer bir patojendir ve önemli bir prevalans gösterir37. Uygun ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Deneysel reaktifler, Guangdong eyaletinin Heyuan Anahtar Moleküler Tanı ve Hastalık Önleme ve Tedavi Laboratuvarı, Doktorlar İstasyonu tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Otomatik nükleik asit ekstraksiyon cihazıGuangzhou Da 'an Gene Co., Ltd.Akıllı 32
Filtre İpuçlarıCoring Yaşam Bilimleri Co., Ltd.298220010-10&mikro; L
Filtre İpuçlarıCoring Yaşam Bilimleri Co., Ltd.030230011-50&mikro; L
Filtre İpuçlarıCoring Yaşam Bilimleri Co., Ltd.056230015-300&mikro; L
MikrotüplerCoring Yaşam Bilimleri Co., Ltd.141249341,5 milyon L
Mycoplasma pneumoniae nükleik asit ve ilaç direnci mutasyon bölgesi tespit kiti (floresan PCR yöntemi)Jiangsu Köstebek Biyoteknoloji Co., Ltd.20241111
Nükleer asit ekstraksiyon reaktifi (manyetik boncuk yöntemi)Shengxiang Biyoteknoloji Co., Ltd.G24004 Serisi
PCR tüpleriDN Biotech(Hong Kong)  Co., Ltd.61210030,2 milyon L
Gerçek zamanlı floresan PCR cihazıBIYO-RADCFX96 Serisi

Kaynaklar

  1. Waites, K. B., Xiao, L., Liu, Y., Balish, M. F., Atkinson, T. P. Mycoplasma pneumoniae from the Respiratory Tract and Beyond. Clin Microbiol Rev. 30 (3), 747-809 (2017).
  2. Leal, S. M., et al. Evaluation of Commercial Molecular Diagnostic Methods for Detection and Determination of Macrolide Resistance in Mycoplasma pneumoniae. J Clin Microbiol. 58 (6), e00242-e00320 (2020).
  3. Lu, A., Wang, L., Zhang, X., Zhang, M. Combined treatment for child refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia with ciprofloxacin and glucocorticoid. Pediatr Pulmonol. 46 (11), 1093-1097 (2011).
  4. Li, Z. W., et al. Mycoplasma pneumoniae infection and drug resistance in children in Meizhou area from 2010 to 2014. Chinese J Zoonoses. 32 (3), 306-311 (2016).
  5. Ishiguro, N., et al. Therapeutic efficacy of azithromycin, clarithromycin, minocycline and tosufloxacin against macrolide-resistant and macrolide-sensitive Mycoplasma pneumoniae pneumonia in pediatric patients. PLoS One. 12 (3), e0173635(2017).
  6. Kashyap, S., Sarkar, M. Mycoplasma pneumonia: Clinical features and management. Lung India. 27 (2), 75-85 (2010).
  7. Miyashita, N., et al. Diagnostic sensitivity of a rapid antigen test for the detection of Mycoplasma pneumoniae: Comparison with real-time PCR. J Infect Chemother. 21 (6), 473-475 (2015).
  8. de Groot, R. C. A., et al. Mycoplasma pneumoniae carriage evades induction of protective mucosal antibodies. Eur Respir J. 59 (4), 2100129(2022).
  9. Rogozinski, L. E., Alverson, B. K., Biondi, E. A. Diagnosis and treatment of Mycoplasma pneumoniae in children. Minerva Pediatr. 69 (2), 156-160 (2017).
  10. Messous, S., et al. Prevalence of Chlamydophila pneumoniae and Mycoplasma pneumoniae IgM and IgG antibodies in Tunisian patients presenting with exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease. Med Mal Infect. 47 (2), 158-163 (2017).
  11. Li, Q. Z., Shi, W. Y., Chen, H. L. Research progress on laboratory detection technology of Mycoplasma pneumoniae. Chinese J Zoonoses. 33 (09), 841-844 (2017).
  12. Li, C., et al. Comparison of PCR and RT-PCR detection of Mycoplasma pneumoniae in throat swab specimens. Chinese J Zoonoses. 28 (2), 127-130 (2012).
  13. Taylor, S. C., et al. The Ultimate qPCR Experiment: Producing Publication Quality, Reproducible Data the First Time. Trends Biotechnol. 37 (7), 761-774 (2019).
  14. Waites, K. B., Talkington, D. F. Mycoplasma pneumoniae and its role as a human pathogen. Clin Microbiol Rev. 17 (4), 697-728 (2004).
  15. Cao, B., Qu, J. X., Yin, Y. D., Eldere, J. V. Overview of antimicrobial options for Mycoplasma pneumoniae: focus on macrolide resistance. Clin Respir J. 11 (4), 419-429 (2017).
  16. Liu, X., et al. Drug resistance mechanisms of Mycoplasma pneumoniae to macrolide antibiotics. Biomed Res Int. 2014, 320801(2014).
  17. Ye, Y., Li, S., Li, Y., Ren, T., Liu, K. Mycoplasma pneumoniae 23S rRNA Gene Mutations and Mechanisms of Macrolide Resistance. Lab Med. 44 (1), 63-68 (2013).
  18. Xue, G., et al. Comparison of the molecular characteristics of Mycoplasma pneumoniae from children across different regions of China. PLoS One. 13 (8), e0198557(2018).
  19. Pereyre, S., et al. The increased incidence of Mycoplasma pneumoniae in France in 2011 was polyclonal, mainly involving M. pneumoniae type 1 strains. Clin Microbiol Infect. 19 (4), E212-E217 (2013).
  20. Dumke, R., von Baum, H., Lück, P. C., Jacobs, E. Occurrence of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae strains in Germany. Clin Microbiol Infect. 16 (6), 613-616 (2010).
  21. Yamada, M., Buller, R., Bledsoe, S., Storch, G. A. Rising rates of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae in the central United States. Pediatr Infect Dis J. 31 (4), 409-500 (2012).
  22. Uldum, S. A., et al. Epidemic of Mycoplasma pneumoniae infection in in Denmark, 2010 and 2011. Euro Surveill. 17 (5), 20073(2010).
  23. Eshaghi, A., et al. Macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae in humans, Ontario, Canada, 2010-2011. Emerg Infect Dis. 19 (9), 1525-1527 (2013).
  24. Loconsole, D., et al. First Description of Macrolide-Resistant Mycoplasma pneumoniae in Adults with Community-Acquired Pneumonia in Italy. Biomed Res Int. 2019, 7168949(2019).
  25. Pereyre, S., et al. The spread of Mycoplasma pneumoniae is polyclonal in both an endemic setting in France and in an epidemic setting in Israel. PLoS One. 7 (6), e38585(2012).
  26. Rivaya, B., et al. Macrolide resistance and molecular typing of Mycoplasma pneumoniae infections during a 4 year period in Spain. J Antimicrob Chemother. 75 (10), 2752-2759 (2020).
  27. Brown, R. J., Macfarlane-Smith, L., Phillips, S., Chalker, V. J. Detection of macrolide resistant Mycoplasma pneumoniae in England, September 2014 to September 2015. Euro Surveill. 20 (48), 30078(2015).
  28. Suzuki, Y., et al. Gene Mutations Associated with Macrolide-resistance and p1 Gene Typing of Mycoplasma pneumoniae Isolated in Yamagata, Japan, between 2004 and 2013. Kansenshogaku Zasshi. 89 (1), 16-22 (2015).
  29. Kawai, Y., et al. Nationwide surveillance of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae infection in pediatric patients. Antimicrob Agents Chemother. 57 (8), 4046-4049 (2013).
  30. Yun, Y. E., et al. Analysis on Mycoplasma pneumonia 23SrRNA gene mutation site and drug resistance phenotype. Lab Med. 28 (1), 11-16 (2013).
  31. Morozumi, M., Takahashi, T., Ubukata, K. Macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae: characteristics of isolates and clinical aspects of community-acquired pneumonia. J Infect Chemother. 16 (2), 78-86 (2010).
  32. Waites, K. B., et al. Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing for Human Mycoplasmas; Approved Guideline. , Wayne (PA): Clinical and Laboratory Standards Institute. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK544375/ (2011).
  33. Waites, K. B., Xiao, L., Liu, Y., Balish, M. F., Atkinson, T. P. Mycoplasma pneumoniae from the Respiratory Tract and Beyond. Clin Microbiol Rev. 30 (3), 747-809 (2017).
  34. Diaz, M. H., Winchell, J. M. The Evolution of Advanced Molecular Diagnostics for the Detection and Characterization of Mycoplasma pneumoniae. Front Microbiol. 7, 232(2016).
  35. Dorigo-Zetsma, J. W., Dankert, J., Zaat, S. A. Genotyping of Mycoplasma pneumoniae clinical isolates reveals eight P1 subtypes within two genomic groups. J Clin Microbiol. 38 (3), 965-970 (2000).
  36. Guo, Y., et al. Research progress on drug resistance mechanism of Mycoplasma pneumoniae. Chinese J Nosocomial Infect. 26 (20), 4782-4784 (2016).
  37. Zhang, W., Wang, Y., Cai, L. J. Mutation analysis and clinical significance of multidrug resistance gene loci in children with Mycoplasma pneumoniae. Chinese J Cont Pediat. 26 (11), 1176-1181 (2024).
  38. Pereyre, S., Goret, J., Bébéar, C. Mycoplasma pneumoniae: Current Knowledge on Macrolide Resistance and Treatment. Front Microbiol. 7, 974(2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

İlaç Direnç GenleriNükleik Asit TespitiMoleküler Biyoloji AnalizleriMakrolid DirenciPolimeraz Zincir ReaksiyonuFloresan ProbToplumda Edinilmiş PnömoniAntikor TespitiMutasyon Bölgeleri
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.