Yöntem makalesi

Chromobacterium violaceum'da violacein miktarının belirlenmesi ve biyoaktif bileşikler tarafından inhibisyonu

DOI:

10.3791/68507

⸱

8 Ağustos 2025

 ,  ,  , 
1Food Research Center, Department of Food and Experimental Nutrition, Faculty of Pharmaceutical Sciences, University of São Paulo (USP)

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolün amacı, biyoaktif bileşikler tarafından çekirdek algılama inhibisyonunu değerlendirmek için bir vekil olarak Chromobacterium violaceum ATCC 12472 tarafından violacein üretimini ölçmektir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bakteriler, hücre yoğunluğundaki değişikliklere yanıt olarak davranışlarını koordine etmelerini sağlayan çekirdek algılama (QS) olarak bilinen bir sistem aracılığıyla iletişim kurar. Bu işlem, genellikle otoindükleyiciler (AI) olarak adlandırılan küçük hücre dışı sinyal moleküllerinin üretimini, salgılanmasını ve tespit edilmesini içerir. QS, diğerlerinin yanı sıra biyofilm oluşumu ve dağılımı, sürü motilitesi, virülans faktörlerinin üretimi, antibiyotik direnci ve biyolüminesans dahil olmak üzere çok çeşitli gen ve işlevleri düzenler. QS inhibisyonu, geleneksel antibiyotiklere kıyasla daha düşük bir seçici baskı uyguladığı için antibiyotiğe dirençli bakterilere karşı umut verici bir antivirülans stratejisi haline gelmiştir. Chromobacterium violaceum ATCC 12472 bakterisinde, Aliivibrio fisheri'nin LuxI/LuxR tipi QS proteinlerine homolog olan QS proteinleri CviI/CviR, mor pigment violaceinin üretilmesinden sorumlu olanlar da dahil olmak üzere birçok geni kontrol eder. C. violaceum , QS inhibisyon çalışmalarında, özellikle violacein üretiminin inhibisyonunda bir biyosensör suşu olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Birçok bileşik, LuxI veya LuxR homologları gibi QS proteinlerine bağlanarak QS devrelerini bozarak QS'yi inhibe etme potansiyeline sahiptir. Bu protokol, C. violaceum ATCC 12472 tarafından üretilen violacein miktarını belirleme yöntemini ve bakteri üremesini etkilemeyen konsantrasyonlarda biyoaktif bileşikler tarafından inhibisyonunu açıklar. Burada tarif edilen tahlil, test edilen bileşikler tarafından violacein üretiminde önemli bir azalma olduğunu göstermektedir. Bu çalışma, QS inhibisyonu araştırmasında gelecek vaat eden adayları taramak için bu protokolü kullanma potansiyelini vurgulamaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bakteriler, hücre yoğunluğundaki değişikliklere yanıt olarak davranışlarının koordineli modülasyonunu sağlayan QS olarak bilinen bir sistem aracılığıyla iletişim kurabilir. Bu süreç, hem farklı türler arasında hem de aynı tür içinde iletişime izin veren, otoindükleyiciler olarak da adlandırılan küçük hücre dışı sinyal moleküllerinin üretimini, salgılanmasını ve tespit edilmesini içerir 1,2.

Bu iletişim, biyofilm oluşumu ve dispersiyonu, motilite ve adezyon, hücre proliferasyonu, ekzoenzimlerin ve sideroforların sentezi, sporülasyon, asit direnci, yatay gen transferi, antibiyotik direnci, biyolüminesans, ekzopolisakkaritlerin üretimi gibi genleri ve işlevleri düzenleme yeteneğine sahiptir 3,4,5. QS tarafından düzenlenen fenotiplerin önemi göz önüne alındığında, bu hücresel iletişime müdahale edebilecek sistemler geliştirmeye büyük ilgi vardır. QS sinyalinin inhibisyonu aynı zamanda çekirdek söndürme (QQ)6 olarak da adlandırılır. QQ, otoindükleyicilerin sentezinin inhibitörleri, bu sinyallerin enzimatik inaktivasyonu ve bu moleküller üzerinde antagonistik etkiye sahip moleküller dahil olmak üzere çeşitli şekillerde ortaya çıkabilir 4,7.

Artan antibiyotik direnci tehdidi, patojenleri doğrudan öldürmeden bakteriyel iletişimi bozan çekirdek algılama inhibitörleri (QSI'ler) dahil olmak üzere alternatif tedavilere yönelik araştırmalara yol açmıştır. Bu bileşikler, antibiyotiklerle birleştirildiğinde sinerjik etkiler gösterebilir, bakteriyel duyarlılığı artırabilir ve direnç gelişimini yavaşlatmak için önemli bir strateji olan antibiyotik dozlarının azalmasına izin verebilir. Örneğin, resveratrol ve kanamisin birlikte Aeromonas hydrophila büyümesini 8 geciktirirken, N-asetilsistein tobramisin ile sinerji oluşturarak Pseudomonas aeruginosa biyofilmlerini5 bozar.

Aşırı antibiyotik kullanımı ve durgun ilaç geliştirme ile, QS inhibisyonu gibi antivirülans yaklaşımları bir paradigma kayması sunmaktadır9. Canlılığı hedeflemek yerine, bakterileri daha az zararlı ve konakçı bağışıklığına veya antibiyotiklere karşı daha savunmasız hale getiren virülans faktörlerini hedef alırlar5. Bu strateji, geleneksel antibiyotiklere kıyasla daha zayıf seçici baskı uygulayarak direnci en aza indirir ve faydalı mikrobiyotayı korur10,11. Umut verici laboratuvar sonuçlarına rağmen, klinik deneyler yoluyla gerçek dünya doğrulaması yeterince araştırılmamıştır12. QS inhibisyonu, antibiyotikler için umut verici bir tamamlayıcıdır, ancak pratiğe çevrilmesi, karmaşık biyolojik ortamlarda etkinlik ve güvenlik konusunda daha fazla kanıt gerektirir.

C. violaceum, pürüzsüz ve parlak bir yüzeye sahip menekşe kolonileri oluşturan bir beta proteobakteridir. Fakültatif anaerobik basillerdir ve spor oluşturmazlar13. C. violaceum'daki QS mekanizması, CviI (LuxI'ye homolog) ve CviR (LuxR'ye homolog; Şekil 1). Violacein, mantarlar, bakteriler, nematodlar ve virüsler dahil olmak üzere çeşitli organizmalara karşı, özellikle popülasyon yoğunluğunun son derece yüksek olduğu ve besin maddelerinin neredeyse tükendiği mikrobiyal durağan büyüme aşamasında biyosidal aktivite sergiler. Sonuç olarak, violacein üretimi, mikrobiyal koloninin hayatta kalma süresini uzatmak için rekabetçi bir strateji olarak kabul edilebilir14.

Bitkiler, elverişsiz ortamlara uyum sağlama yeteneklerini arttırmada çok önemli bir rol oynayan ikincil metabolizmadan kaynaklanan bileşikler üretir. Alkaloidler, fenoller, flavonoidler, kinonlar, tanenler, terpenler ve lektinler gibi bu metabolitler, otoburlara ve mikroorganizmalara karşı savunma mekanizmaları olarak yaygın olarak kabul edilmektedir15. Bitki türevli bileşiklerin QSI olarak potansiyeli, bitkiler ve mikroorganizmalar arasındaki dinamik etkileşimler nedeniyle özel ilgi çekmiştir. Rizosferdeki bitki-patojen etkileşimleri üzerine yapılan çalışmalar, bitkilerin patojenlere karşı inhibitör görevi görebilen biyoaktif bileşikler salgılayarak bakteriyel otoindükleyicilere yanıt verebileceğini göstermiştir16.

Bu çalışmada, biyoaktif bileşikler tarafından inhibisyonuna odaklanarak, C. violaceum tarafından violacein üretimini ölçmeyi amaçlayan pratik bir yöntem tanımlanmıştır. Bu yöntem, potansiyel QSI aktivitelerine sahip bileşiklerin seçilmesi için bir başlangıç tarama aracı olarak hizmet eder. Gram-negatif patojenik bakterilere karşı gelecekteki terapötik gelişim için hızlı ve pratik bir yaklaşım sağlar. Bu standartlaştırılmış protokol, daha önceki çalışmalarda yapılmamış ayrıntılı bir açıklama sağladığı ve gelecekte farklı çalışmalar arasında karşılaştırma yapmayı kolaylaştıracağı için yararlı olacaktır 17,18,19.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Kültür hazırlama (Şekil 2)

  1. Bir test tüpünde 5 mL'lik bir C. violaceum ATCC 12472 kültürünü Luria Bertani suyunda (LB: tripton 10 g / L, maya özütü 5 g / L, 5 g / L NaCl) 30 ° C'de 30 ° C'de çalkalayarak bir inkübatörde (220 rpm) 24 saat boyunca.
  2. Kültürü, yaklaşık 1 x 108 CFU / mL'ye karşılık gelen LB suyunda 0.1'lik bir OD595'e ayarlayın.

2. Bileşik hazırlama

  1. Düz tabanlı 96 oyuklu bir plakada, aşağıdaki açıklamayı izleyerek seri seyreltme hesaplamasına göre LB suyu ve biyoaktif bileşiği ekleyin. Çözünürlüklerine bağlı olarak, biyoaktif bileşikler tipik olarak saf DMSO veya bir DMSO: su (1: 1) çözeltisi içinde seyreltilir.
    NOT: QSI'yi değerlendiren metodolojilerde, kullanılan konsantrasyonların minimum inhibitör konsantrasyonun (sub-MIC) altında olduğundan, yani bakteri üremesini etkilemediğinden emin olmak çok önemlidir. Bu nedenle, bileşiğin mikrobiyal canlılıktan ziyade hücreden hücreye iletişimi spesifik olarak inhibe ettiğini doğrulamak için farklı konsantrasyonlarda büyüme eğrisi deneylerinin yapılması önerilir. Bu protokolde kullanılan test edilmiş biyoaktif bileşiklerin büyüme eğrisi testleri için lütfen Ek Şekil 1'e bakınız.
  2. Kuyudaki biyoaktif bileşik konsantrasyonunu hesaplamak için, kuyuda 20 mg/mL'lik bir farnesol ve linalool stok çözeltisi ve kuyuda 200 μg/mL'lik bir hedef konsantrasyon ve ayrıca stok çözeltisinde 2.5 mg/mL'de resveratrol ve kuyuda 25 μg/mL'lik resveratrol göz önüne alındığında, hesaplamayı aşağıdaki gibi yapın:
    C1V1 = C2V2
    20.000 μg/mL x V1 = 200 μg/mL x 200 μL
    V1 = 40.000/20.000 μL
    V1 = 2 μL
    buradaC1 = Stok çözelti konsantrasyonu (20.000 μg/mL'ye eşdeğer olan 20 mg/mL); V1 = eklenecek stok çözeltisinin hacmi; C2 = istenen nihai konsantrasyon (200 μg/mL); V2 = kuyudaki son hacim (200 μL).

3. Seri seyreltme20 ve plaka hazırlama (Şekil 3)

NOT: Seri seyreltme, test edilen bir bileşiğin bir dizi konsantrasyonunu hızlı bir şekilde değerlendirmek için kullanılır. Bu işlemde, bileşik sabit bir oranda, bu durumda 1:2 oranında art arda seyreltilir. Her seyreltme, bileşiğin konsantrasyonunu önceki konsantrasyona kıyasla yarı yarıya azaltır, bu da bir dizi azalan konsantrasyon20 ile sonuçlanır.

  1. Seri seyreltmenin ilk sütununa 196 μL LB suyu ekleyin (örneğimizde sütun 3, 5 ve 7). Seri seyreltmenin aşağıdaki kuyucuklarına 100 μL LB suyu ekleyin (bizim durumumuzda, sütun 4, 6 ve 8).
  2. Ardından, seri seyreltme gerçekleştirmek için önceki adımda (2.2) hesaplanan biyoaktif bileşik miktarının 2 katını ekleyin. Hesaplama, ilk kuyucuktaki nihai konsantrasyonu elde etmek için test edilen her bileşiğin 2 μL'si ile sonuçlandı, bu nedenle 4 μL bileşik ekleyin (sütun 3, 5 ve 7).
  3. Kuyu toplam hacminin yarısını (100 μL) bir sonraki sütuna (bizim durumumuzda, sütun 4, 6 ve 8) aktarın ve seri bir seyreltme yapıyorsanız, istenen son konsantrasyona kadar devam edin. Aktarımdan önce içeriği iyice karıştırmayı unutmayın.
    NOT: Bu deney düzeneğinde, basitlik için sadece iki konsantrasyon kullandık ve tüm bileşikler sadece bir plakaya sığar.
  4. Deneyi, her bir bileşiğin konsantrasyonu başına en az üç kopya halinde gerçekleştirin. Üç biyolojik kopya da önerilir. Ucu değiştirin ve istenen son konsantrasyona kadar işlemi tekrarlayın. Son sütunda (bizim durumumuzda, 4, 6 ve 8), ondan 100 μL alın ve atın.
  5. Tüm kuyucuklara 80 μL LB suyu ekleyin, toplam 180 μL (B ila D sıraları). Daha sonra, adım 1.2'de standardize edilmiş 20 μL C. violaceum kültürü ekleyin ve oyuk başına 200 μL'lik bir nihai hacim sağlayın (B ila D sıraları). Kuyular arasında daha yüksek konsantrasyonların taşınmasını veya kirlenmeyi önlemek için kuyuları değiştirirken her seferinde pipet uçlarını değiştirdiğinizden emin olun.
  6. Bileşik herhangi bir çözücü içinde çözülürse, kontrolü bu çözücü ile hazırladığınızdan emin olun. DMSO'yu kullandık. Bu durumda, işlenmemiş kontrol olacak bir çözücü kontrolü hazırlayın - UC (biyoaktif bileşik olmadan; sütun 9). Kontrol kuyusu başına 2 μL DMSO ekleyin. Bu, testte maksimum% 1 DMSO konsantrasyonu verir.
    NOT:% 1 oranında DMSO bakteri üremesini etkilemez 21,22.
  7. Boşluğu hazırlayın veya pigmentli bileşikler kullanıyorsanız bakteri olmadan renk kontrolü yapın. Tüm oyuklara toplam 180 μL (daha önce tarif edildiği gibi B'den D'ye kadar olan sıralar) 80 μL LB suyu ekledikten sonra, karşılık gelen boş kuyucuklara toplam 200 μL (E ila G sıraları) 20 μL LB suyu ekleyin. Bu, bu protokolün 5. adımında açıklanacağı gibi, OD okumalarından çıkarılması gereken kristal viyoleden bir miktar arka plan lekelenmesi olduğu için yapılır.
  8. Herhangi bir sütun boş kalırsa, 200 μL LB suyu veya steril damıtılmış su ile doldurun (sütun 1, 2, 10, 11 ve 12). Bu adım, inkübatördeki ortamın aşırı kurumasını önlemek için önemlidir.

4. Viyolasinin inkübasyonu ve ekstraksiyonu

  1. Kullanılan spektrofotometreye bağlı olarak buharlaşmayı önlemek için plakayı bir kapak veya sızdırmazlık filmi ( Malzeme Tablosunda belirtildiği gibi) ile örtün.
  2. Plakayı 30 ° C'de 130 rpm'de 24 saat boyunca çalkalayarak inkübe edin, ardından plakayı inkübatörden çıkarın, 60 ° C'de bir kurutma inkübatöre yerleştirin, kapağı çıkarın ve plakanın tamamen kurumasını bekleyin (yaklaşık 8 saat).
  3. Plaka kuruduktan sonra, inkübatörden çıkarın ve her bir oyuğa 200 μL saf DMSO ekleyin, ardından üzerini kapatın. Virosein pigmentini çözmek için plakayı 25 ° C'de bir inkübatöre yerleştirin ve 130 rpm'de 30 dakika çalkalayın.
  4. Bu sürenin sonunda, plakayı inkübatörden çıkarın ve 100 μL'yi başka bir mikroplakaya aktarın, uç ile kuyu duvarları arasındaki teması önleyin.

5. Viyolain üretiminin miktarının belirlenmesi

  1. Uygun bir plaka spektrofotometresi (Malzeme Tablosu) kullanarak 595 nm'de absorbansı ölçerek violacein üretim miktarını ölçün. Viyolain pigmentinin inhibisyonu, daha düşük absorbans okumaları ile orantılıdır.
  2. % 100 violacein üretimi için referans olarak negatif bir kontrol (işlenmemiş kontrol) kullanarak violacein üretimini ölçün (Tablo 1). İlk olarak, yalnızca violacein pigmentine karşılık gelen emiciliği elde etmek için (et suyu veya bileşik renkten kaynaklanan girişim hariç) her bir işlem tekrarından boşluğun absorbans değerini çıkarın. Ardından, aşağıdaki denklemi kullanarak her tedavi için violacein üretim yüzdesini hesaplayın.
    %violacein üretimi = (biyoaktif bileşiğin OD'si / işlenmemiş kontrolün OD'si) x 100
  3. İstatistiksel analizleri üç tekrarda hesaplayın. Sonuçlar ANOVA'ya gönderilebilir ve ardından Tukey'in GraphPad Prism 8.0 yazılımı kullanılarak test edilmesi sağlanabilir. p <0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada gösterilen sonuçlar için, daha önce araştırma grubumuz8 tarafından incelenen üç biyoaktif bileşik, resveratrol, farnesol ve linalool kullanılmıştır. Her bileşik, QS sistemi tarafından vioABCDE operon 23 üzerinde düzenlenen bir fenotip olan C. violaceum ATCC12472'de violacein üretimini inhibe etme kabiliyeti açısından test edildi.

Sonuçlar, protokolümüzün violacein üretimini ve bunun C. violaceum ATCC 12472'deki b...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C. violaceum'dan violacein ekstrakte etmek ve karakterize etmek için ilk yöntem 1990'larda ortaya çıktı ve pigment sentezi için uygun karbon kaynaklarını belirlemeye odaklandı. Bu işlemde, violacein - hücreler ve kültür ortamı ile birlikte - kurutuldu, etanol içinde yeniden süspanse edildi ve daha sonra süpernatan ekstraksiyonu ile ayrıldı. Şimdi etanol içinde çözünen viyolasin, daha sonra tekrar kurutuldu ve pigmentin saf, kuru bir formu27 elde edildi. 1...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden herhangi bir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

#403661/2023-4 ve #444794/2024-7 hibeleri ve #306685/2022-1 bursu aracılığıyla Ulusal Bilimsel Kalkınma Konseil'ine (CNPQ) ve #2024/05158-6 ve 2023/17090-4 hibeleri için Sao Paulo Araştırma Vakfı'na (FAPESP) ve Gıda Araştırma Merkezi'ne (FoRC) #2013/07914-8 mali destek için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
DMSO Synth
FarnesolSigma-AldrichF203 Serisi95%
LinaloolSigma-AldrichL2602 Serisi97%
Luria-Bertani OrtaDifco244620
Optik Yapışkan FilmTermo Balıkçı4311971Mikro Amplifikatör
ResveratrolSigma-AldrichR5010 Serisi≥ %99 (HPLC)
Synergy HTX çok modlu okuyucuBiyotek
Doku Kültürü Plakaları 96 kuyucukluKaşviK12-096 Serisi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mukherjee, S., Bassler, B. L. Bacterial quorum sensing in complex and dynamically changing environments. Nat Rev Microbiol. 17 (6), 371(2019).
  2. Lima, E. M. F., Winans, S. C., Pinto, U. M. Quorum sensing interference by phenolic compounds - A matter of bacterial misunderstanding. Heliyon. 9 (7), (2023).
  3. Papenfort, K., Bassler, B. L. Quorum sensing signal-response systems in Gram-negative bacteria. Nat Rev Microbiol. 14 (9), 576-588 (2016).
  4. Grandclément, C., Tannières, M., Moréra, S., Dessaux, Y., Faure, D. Quorum quenching: role in nature and applied developments. FEMS Microbiol Rev. 40 (1), 86-116 (2016).
  5. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Sircili, M. P., Bueris, V., Pinto, U. M. N-acetylcysteine (NAC) attenuates quorum sensing regulated phenotypes in Pseudomonas aeruginosa PAO1. Heliyon. 9 (3), (2023).
  6. Allen, R. C., Popat, R., Diggle, S. P., Brown, S. P. Targeting virulence: can we make evolution-proof drugs. Nat Rev Microbiol. 12 (4), 300-308 (2014).
  7. Kalia, V. C., Patel, S. K. S., Kang, Y. C., Lee, J. K. Quorum sensing inhibitors as antipathogens: biotechnological applications. Biotechnol Adv. 37 (1), 68-90 (2019).
  8. Santos, C. A., Lima, E. M. F., Franco, B. D. G. deM., Pinto, U. M. Exploring phenolic compounds as quorum sensing inhibitors in foodborne bacteria. Front Microbiol. 12, 735931(2021).
  9. Ahmed, S. A. K. S., et al. Natural quorum sensing inhibitors effectively downregulate gene expression of Pseudomonas aeruginosa virulence factors. Appl Microbiol Biotechnol. 103 (8), 3521-3535 (2019).
  10. Yang, Q., Defoirdt, T. Weak selection for resistance to quorum sensing inhibition during multiple host infection cycles. ISME J. 18 (1), 251(2024).
  11. Defoirdt, T. Specific antivirulence activity, A new concept for reliable screening of virulence inhibitors. Trends Biotechnol. 34 (7), (2016).
  12. Defoirdt, T. Quorum-sensing systems as targets for antivirulence therapy. Trends Microbiol. 26 (4), 313-328 (2018).
  13. Mahendrarajan, V., Easwaran, N. Quorum quenching effects of linoleic and stearic acids on outer membrane vesicle-mediated virulence in Chromobacterium violaceum. Biofouling. , 1-11 (2024).
  14. Durán, N., et al. Advances in Chromobacterium violaceum and properties of violacein-Its main secondary metabolite: A review. Biotechnol Adv. 34 (5), 1030-1045 (2016).
  15. Nazir, N., et al. Characterization of phenolic compounds in two novel lines of Pisum sativum L. along with their in vitro antioxidant potential. Env Sci Pollut Res Int. 27 (7), 7639(2020).
  16. Majdura, J., Jankiewicz, U., Gałązka, A., Orzechowski, S. The role of quorum sensing molecules in bacterial-plant interactions. Metabolites. 13 (1), (2023).
  17. Çevikbaş, H., Ulusoy, S., Kaya Kinaytürk,, N, Exploring rose absolute and phenylethyl alcohol as novel quorum sensing inhibitors in Pseudomonas aeruginosa and Chromobacterium violaceum. Sci Rep. 14 (1), 15666(2024).
  18. Choi, S. Y., Lim, S., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. Biotechnological activities and applications of bacterial pigments violacein and prodigiosin. J Biol Eng. 15 (1), (2021).
  19. Moradi, F., Hadi, N., Bazargani, A. Evaluation of quorum-sensing inhibitory effects of extracts of three traditional medicine plants with known antibacterial properties. New Microb New Infect. 38 (100769), 100769(2020).
  20. Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances. Nat Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).
  21. Scardino, A., et al. Cinnamaldehyde effectively disrupts Desulfovibrio vulgaris biofilms: potential implication to mitigate microbiologically influenced corrosion. Appl Env Microbiol. 91 (5), (2025).
  22. Summer, K., Browne, J., Hollanders, M., Benkendorff, K. Out of control: The need for standardised solvent approaches and data reporting in antibiofilm assays incorporating dimethyl-sulfoxide (DMSO). Biofilm. 4, 100081(2022).
  23. Ravichandran, V., et al. Virtual screening and biomolecular interactions of CviR-based quorum sensing inhibitors against Chromobacterium violaceum. Front Cell Infect Microbiol. 8, (2018).
  24. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Pinto, U. M. Exploring the antivirulence potential of phenolic compounds to inhibit quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa. World J Microbiol Biotechnol. 41 (2), (2025).
  25. Blosser, R. S., Gray, K. M. Extraction of violacein from Chromobacterium violaceum provides a new quantitative bioassay for N-acyl homoserine lactone autoinducers. J Microbiol Methods. 40 (1), 47-55 (2000).
  26. Zhu, H., He, C. C., Chu, Q. H. Inhibition of quorum sensing in Chromobacterium violaceum by pigments extracted from Auricularia auricular. Lett Appl Microbiol. 52 (3), 269-274 (2011).
  27. Durán, N., Antonio, R. V., Haun, M., Pilli, R. A. Biosynthesis of a trypanocide by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 10 (6), 686(1994).
  28. Rettori, D., Production Durán, N. extraction and purification of violacein: an antibiotic pigment produced by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 14 (5), 685(1998).
  29. Cheng, K. -C., Hsiao, H. -C., Hou, Y. -C., Hsieh, C. -W., Hsu, H. -Y., Chen, H. -Y., Lin, S. -P. Improvement in violacein production by utilizing formic acid to induce quorum sensing in Chromobacterium violaceum. Antiox. 11 (5), 849(2022).
  30. Defoirdt, T., Brackman, G., Coenye, T. Quorum sensing inhibitors: how strong is the evidence. Trends Microbiol. 21 (12), 619-624 (2013).
  31. Alyousef, A. A., et al. Myrtus communis and its bioactive phytoconstituent, linalool, interferes with Quorum sensing regulated virulence functions and biofilm of uropathogenic bacteria: In vitro and in silico insights. J King Saud Univ Sci. 33 (7), 101588(2021).
  32. Kanekar, S., Devasya, R. P. Growth-phase specific regulation of cviI/R based quorum sensing associated virulence factors in Chromobacterium violaceum by linalool, a monoterpenoid. World J Microbiol Biotechnol. 38 (2), (2022).
  33. Dias, J. P., Domingues, F. C., Ferreira, S. Linalool reduces virulence and tolerance to adverse conditions of listeria monocytogenes. Antibiotics. 13 (6), 474(2024).
  34. Rodrigues, C. F., Černáková, L. Farnesol and tyrosol: Secondary metabolites with a crucial quorum-sensing role in Candida biofilm development. Genes. 11 (4), (2020).
  35. Hacioglu, M., Yilmaz, F. N., Yetke, H. I., Haciosmanoglu-Aldogan, E. Synergistic effects of quorum-sensing molecules and antimicrobials against Candida albicans and Pseudomonas aeruginosa biofilms: in vitro and in vivo studies. J Antimicrob Chemother. 79 (11), 2828(2024).
  36. Bhattacharyya, S., Agrawal, A., Knabe, C. Sol-gel silica controlled release thin films for the inhibition of methicillin resistant Staphylococcus aureus. Biomater. 35, 509-517 (2014).
  37. Qu, Y., Zou, Y., Wang, G., Zhang, Y., Yu, Q. Disruption of communication: Recent advances in antibiofilm materials with anti-quorum sensing properties. ACS Appl Mater Interfaces. 16 (11), 13353-13383 (2024).
  38. Li, B., et al. Effects of Rhapontigenin as a Novel Quorum-Sensing Inhibitor on Exoenzymes and Biofilm Formation of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum and Its Application in Vegetables. Molecules. 27 (24), (2022).
  39. Mattio, L. M., Catinella, G., Pinto, A., Dallavalle, S. Natural and nature-inspired stilbenoids as antiviral agents. Eur J Med Chem. 202 (112541), 112541(2020).
  40. Duarte, A., Alves, A. C., Ferreira, S., Silva, F., Domingues, F. C. Resveratrol inclusion complexes: Antibacterial and anti-biofilm activity against Campylobacter spp. and Arcobacter butzleri. Food Res Int. 77, 244-250 (2015).
  41. Martinelli, D., Grossmann, G., Séquin, U., Brandl, H., Bachofen, R. Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violaceum. BMC Microbiol. 4 (1), (2004).
  42. Tan, L. Y., Yin, W. F., Piper Chan, K. G. nigrum, Piper betle and Gnetum gnemon-natural food sources with anti-quorum sensing properties. Sensors. 13 (3), 3975-3985 (2013).
  43. Tan, L. Y., Yin, W. F., Chan, K. G. Silencing quorum sensing through extracts of Melicope lunu-ankenda. Sensors. 12 (4), 4339-4351 (2012).
  44. Oliveira, B. D., et al. Antioxidant, antimicrobial and anti-quorum sensing activities of Rubus rosaefolius phenolic extract. Ind Crops Prod. 84, 59-66 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Korum Alg lamaViolasein KantifikasyonuKorum Alg lama nhibisyonuSeri Dil syonMikroplaka AnaliziOptik Yo unlukAntibiyotik DirenciVir lans Fakt rleri

İlgili makaleler