$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Bu protokol, Demodex'in IVCM ile göz kapağı kenarında gözlemlenmesi için kullanılan SOP'ye odaklanmaktadır (Şekil 1). Bu çalışma, Wenzhou Tıp Üniversitesi Göz Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) tarafından onaylanmıştır (IRB onay No. H2023-022-K-20) ve bu retrospektif analiz için bireysel rıza gerekliliğinden feragat edilmiştir. Burada açıklanan prosedürler, daha önce bildirilen açıklamalara atıfta bulunur 11,13,14,15,16.

Resim 1: Tomografi cihazı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
1. Cihazı ve programı hazırlayın
- Bilgisayarı aç.
- Masaüstü göründükten sonra, cihazın arkasındaki basmalı anahtarı O'dan I'ye getirin. Herhangi bir incelemeye başlamadan önce basmalı anahtarın açık olduğunu gösteren yeşil yanmasını arayın.
NOT: Bilgisayarı başlatmadan önce aygıtın açılması bağlantı hatasına neden olabilir.
- Sınavdan önce yazılımı başlatın ve program ayarlarını yapın. Ayarlar menüsünde Seçenekler'i seçin (Ek Dosya 1: Ek Şekil S1); Ardından, her görüntünün görüntü numarasını görüntülemek için Görüntü numaralarını göster kutusunu işaretleyin. Ek olarak, yazılımın yanlışlıkla kapatılmasını önlemek için Çıkışta bilgileri göster kutusunu işaretleyin.
NOT: Görüntü küçük resimlerinin büyük simgeler olarak görüntülenmesi, sonuçların doğrudan gözlemlenmesini kolaylaştırır. Ayarları sık sık değiştirmeyin.
- Sınav öncesi hazırlıklar
- Lensi lens temizleme mendilleriyle temizleyin. Kirli cihaz parçaları tarafından bulaşan patojenik mikroplardan kaynaklanan enfeksiyonları önlemek için koltuk başlığını ve çene desteğini alkole batırılmış pamuk toplarla dezenfekte edin.
- Çene dayanağını ayarlayın. Çene dayanağının yatay konumunun doğru olduğundan emin olun: Çene dayanağını yakalayana kadar ileri çekmek için iki siyah kolu birbirine bastırın.
- Kamerayı geriye doğru hareket ettirin. Muayeneden önce hastadan uzaklaştığından emin olmak için ayar vidasını çevirin.
- Cihazın mikroskop merceğinin ön yüzeyine temas jeli olarak bir damla (yaklaşık 0.02 mL) Karbomer bazlı oftalmik jel uygulayın.
NOT: Temas jelinin hava kabarcıkları içermediğinden ve yalnızca küçük bir miktar kullanıldığından emin olun. Cihazın mikroskop merceğinin ön yüzeyine uygulanan çok fazla temas jeli, objektife akabilir ve mekanik bileşenlere yapışarak cihaza zarar verebilir.
- Steril, tek kullanımlık bir polimetilmetakrilat (PMMA) kapağını koruyucu kapağından çıkarın ve kapağın ön yüzeyine dokunmadan kapağın yanlarını cihazın mikroskop merceğine sıkıca bastırın (Şekil 2).
NOT: PMMA kapağını doğru şekilde takmak için, temas jelinin herhangi bir hava kabarcığı olmadan kapağın arka yüzeyi ile temas halinde olduğundan emin olun. Steril paketin zarar görmesini önlemek için kapaklar özel kapta saklanır. Muayene sırasında enfeksiyon riski taşıyabilecek hasarlı ambalajlı kapakları kullanmayınız.
- Kapak ile göz kapağı arasında bir jel köprüsü olarak kapağın ön yüzeyine tek bir damla jel gözyaşı ikamesi uygulayın (Şekil 2).
NOT: Jeller arasındaki karışıklığı önlemek için, her iki uygulama için de aynı Karbomer bazlı oftalmik jeli kullanıyoruz: jel yırtılma ikamesi ve mikroskop lensi ile kapak arasında ajan olarak kullanılan jel.
- Yeni bir Hasta Dosyası oluşturun veya mevcut bir hasta dosyasını seçin.

Şekil 2: PMMA başlığının ve jel uygulamasının doğru şekilde takılması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Hastayı hazırlayın
NOT: Kornea bütünlüğü şüpheli ise bu muayeneyi yapmayın.
- Hastanın işbirliğini sağlamak ve olası riskleri en aza indirmek için hastaya aşağıdakileri açıklayın:
- Hastayı, göz kapağına temas etmesine rağmen cihazla yapılan muayenenin güvenli olduğundan emin olun. Hastaya, göz kapağı kenarında bir damla topikal anestezik ile gözlerinin uyuşturulacağını bildirin.
- Muayeneye başlarken, en iyi görüntü kalitesi için hastadan muayene prosedürü boyunca çenesini çene dayanağına koymasını ve alnını alın dayanağına yaslamasını isteyin.
- Hastaya, PMMA kapağı temas edene kadar cihazın göz kapağına yakın hareket ettirileceğini bildirin. PMMA kapağının temasını hissedecek olsalar da, cihaz göz kapaklarına dokunduğunda herhangi bir ağrı hissetmeyeceklerinden emin olun. Muayene sırasında herhangi bir ağrı hissederlerse klinisyene hemen bildirmelerini isteyin.
- Klinisyen Demodex'in gözlemlenmesi için göz kapağı kenarının görüntülerini alırken hastaya bakışlarını sabit tutmaları gerektiğini bildirin. Hastadan herhangi bir yorgunluk hissedip hissetmediğini klinisyene bildirmesini isteyin; Sınava devam etmeden önce bir süre arkalarına yaslanıp dinlenmelerine izin verilecektir. Sınav bittiğinde bilgilendirileceklerdir.
- İlaç kontrendikasyonlarını önlemek için topikal anestezik ve/veya göz jeli ambalajındaki talimatları izleyin. Hastanın alerjilerinin topikal anestezik ve / veya göz jelinin kontrendikasyonları olmadığını doğrulamak için hastaya herhangi bir alerjisi olup olmadığını sorun.
NOT: Topikal anestezik ve/veya göz jeline karşı alerjik reaksiyonlar, tanımlanamayan alerjilerin bir sonucu olarak ortaya çıkabilir.
- İncelenecek göz kapağının kenarına topikal bir anestezik olan bir damla Proparakain hidroklorür uygulayın.
NOT: Alerjik bir reaksiyon meydana gelirse, hemen tuzlu su ile durulayın.
3. Bir inceleme yapın
- Önce sağ gözü gözlemleyin. Tarama kamerasını operatörün bakış açısından sola hareket ettirin. OD , kameranın sağ-sol tanıma özelliği ile Ayarlar bölümünde otomatik olarak seçilecektir.
- CCD kamerayı sola hareket ettirin. CCD kameranın görüntüsünü (kontrol görüntüsü) tarayıcı lazer kameranın optik eksenine dik olarak ayarlamak için CCD kamera objektif merceğini çevirin.
- Yeni bir sınava başlayın.
- Muayene Verileri iletişim kutusunu inceleyin ve Muayene Verileri sekmesinde, Cihaz açılır listesinden Heidelberg Retina Tomografi-Kornea'yı seçin (Ek Dosya 1: Ek Şekil S2) ve görüntülenen Kornea Modülü Ayarları iletişim kutusuna bakın.
- Field Lens açılır listesinden FOV 400'ü seçin ve onaylamak için Tamam'a tıklayın (Ek Dosya 1: Ek Şekil S3).
- Edinme penceresi açılana kadar bekleyin; Tarama lazer kamera canlı görüntüsü ve kontrol görüntüsü görüntülenir. Kontrol görüntüsü görüntülenmezse, CCD kamera kablosunun CCD kameraya doğru şekilde bağlandığından emin olun ve ardından çekim penceresini yeniden başlatın.
- Edinme penceresindeki faktörleri ayarlayın (Ek Dosya 1: Ek Şekil S4): kontrol görüntüsü boyutunu ayarlamak için CCD Yakınlaştırma Faktörü açılır listesinden 1x'i seçin. Canlı görüntülerin parlaklığını otomatik olarak kontrol etmek ve kontrol etmek için Otomatik Parlaklık kutusunu ve Otomatik kutusunu işaretleyin. Ancak, otomatik parlaklık kontrolü devre dışı bırakılırsa, kontrolün ve canlı görüntülerin parlaklığını kontrol etmek için kaydırıcıyı kullanın. Ayak pedalına her basıldığında tek bir görüntü alınacak ve saklanacak şekilde Bölüm tarama türünün seçildiğini kontrol edin.
- Bir referans görüntü edinin.
- Bir alıma başlamadan önce, otomatik parlaklık kontrolünü kapatın ve görüntü parlaklığını ayarlamak için kaydırıcıyı sola hareket ettirin. Odak düzlemini ayar pimi ile ayarlayın, böylece ilk parlak yansıma karardıktan sonra tarama lazer kamera canlı görüntüsünde görüntülenir ve PMMA kapağının ön yüzeyini gösterir.
NOT: Mikroskop 10 μm odak ayarına izin verir.
- Focus Position [μm] (Netleme Konumu [μm)] bölümünde Reset (Sıfırla) öğesine tıklayın ve Focus Position [μm] (Odak Konumu [μm)] değerinin 0'a dönmesini bekleyin; Geçerli görüntü, referans görüntü olarak gösterilir. Otomatik Sıfırlama'yı kapatın ve Otomatik Parlaklık kutusunu işaretleyin; Canlı görüntünün parlaklığı otomatik olarak kontrol edilecektir.
- Netleme Konumu [μm] bölümündeki değerler yerine kesikli çizgiler görüntüleniyorsa veya netleme düzleminde yapılan ayarlamalara rağmen görüntülenen değerler değişmiyorsa, mikroskop lens kablosunun doğru şekilde bağlandığından emin olun.
NOT: Pakimetri için Odak Konumu [μm], o anda görüntülenen görüntünün odak düzlemi konumunu mikron cinsinden görüntüler. Odak düzlemi daha sonra hareket ettirilirse, gerçek odak düzlemi konumu, referans görüntünün konumuna göre hesaplanır.
- Hasta için muayene masasının yüksekliğini yükseltin veya alçaltın. Hastanın çenesini çene dayanağına ve alnını alın desteğine yerleştirin (Şekil 3A,B). Hastanın üst göz kapakları koltuk başlığı kolonundaki kırmızı işaretlerle aynı hizaya gelecek şekilde cihazın belirlenmiş siyah ayar vidası ile çene desteği yüksekliğini ayarlayın.
- Hastaya işaretçinin sabit ışık kaynağının önüne bakmasını ve bakışlarını sabit tutmasını söyleyin (Şekil 3A,B).
NOT: Görüntü toplama sırasında göz hareketi, görüntü kalitesinin düşmesine ve oküler yüzeyin hasar görmesine neden olabilir.
- Üst göz kapağını çevirmek için pamuklu çubuk kullanın, kirpik kökünü ve palpebral kenarı tamamen ortaya çıkarın. Cihazın ayar vidasını çevirerek lazer ışınının yansımasını hastanın üst göz kapağı seviyesine yerleştirin. Tarama lazer kamerasını, PMMA başlığının merkezine dikey olarak hafifçe dokunana kadar hastanın üst göz kapağı kenarına doğru yavaşça hareket ettirin (Şekil 3C). Hasta rahatsızlık bildirirse, duraklatın ve PMMA kapak hizalamasını kontrol edin.
NOT: Hastanın göz kapağına çok fazla baskı uygulamayın. Yetersiz jel köprüsü, hastanın göz ve baş hareketi ve/veya operatörün çok güçlü bir kamera hareketi nedeniyle PMMA başlığı ile hastanın göz kapağı arasındaki temas oküler yüzeye ve göz kapağına zarar verebilir.
- Kirpiklerin ve foliküllerinin değerlendirilmesine izin vererek, palpebral kenarın küçük yatay hareketleriyle kirpik kökünü temporal taraftan göz kapağı kenarının burun tarafına doğru dikkatlice tarayın. Cihazın mikroskop merceğini saat yönünde veya saat yönünün tersine çevirerek görüntüleri tarayın ve elde edin, tüm folikül ve kirpik kökünü gözlemlemek için odak düzlemini kademeli olarak değiştirin ve tarama lazer kamerası canlı görüntüsünde görüntülenen farklı derinlikleri not edin. Göz başına altı ila on kirpik kıl folikülünü tarayarak ve örnekleme göz kapağı kenarının temporal, orta ve burun bölgelerine dağıtılarak görüntüler elde edin.
NOT: Tarama lazer kamerası canlı görüntüsünde küçük bir refleks görüntüleniyorsa ve odak düzlemi konumu değiştirilirken devam ediyorsa, bu, temas jelinde hava kabarcıklarının varlığını gösterebilir. Bu sorunu çözmek için temas jelini yenileyin.
- Görüntüleri manuel olarak kaydedin ve ayak pedalına basarak Demodex akarlarının tüm şüpheli görüntülerini kaydedin. Başarılı görüntü alımını doğrulamak için pedal sesli geri bildirimini etkinleştirin. Hiçbir göz kapağı yapısı görüntülenmiyorsa ve tarama lazer kamerası canlı görüntüsünde yalnızca yüksek oranda yansıtıcı sınır katmanları görünüyorsa, bu, PMMA başlığı ile hastanın göz kapağı kenarı arasındaki temasın kesintiye uğradığını gösterebilir. Bu sorunu çözmek için, PMMA başlığı hastanın göz kapağı kenarına doğru şekilde dokunana kadar kamerayı yeniden hizalayın.
- Canlı görüntü bulanık, bozuk görünüyorsa veya saç folikülü yapısını göstermiyorsa, bu sorunlar hastanın başını hareket ettirdiğini veya göz kırptığını gösterebilir. Hareketi en aza indirmek için hastaya sabitleme ışığına odaklanmasını hatırlatın. Mümkünse, görüntü kalitesini artırmak için parlaklığı, odak düzlemini ve tarama konumunu ayarlayın.
- Tarama lazer kamerasının ayarlanması gerekiyorsa veya hasta yorgunluk veya herhangi bir ağrı yaşarsa, hastadan arkasına yaslanmasını, tarama lazer kamerasını geriye doğru hareket ettirmesini ve kamerayı yeniden ayarlamasını isteyin. Hasta muayene sırasında rahatsızlık hissetmeye devam ederse ve dinlendikten sonra herhangi bir semptom rahatlama belirtisi göstermezse, hasta güvenliğini sağlamak için prosedürü durdurun ve yeniden planlayın.
- Bir hasta gün boyunca birkaç kez muayene ediliyorsa, tüm görüntüleri görüntü görüntüleme penceresindeki aynı muayene sekmesinde saklayın.
- Sol gözü inceleyin, kamerayı operatörün bakış açısından sağa hareket ettirin ve işletim sisteminin otomatik olarak seçilmesini bekleyin. PMMA kapağını cihazdan çıkarın, cihazın mikroskop merceğine yeni bir PMMA kapağı takın ve önceki adımları tekrarlayın.

Şekil 3: Hasta konumlandırma. (A,B) Hastaya pozisyon verilir. (C) Kapak, göz kapağına değecek şekilde ayarlanıyor. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
4. Muayeneden sonra
- Sınavdan çıkın; Kirpik foliküllerinin görüntülerinin saklandığından ve elde edilen görüntülerin görüntü görüntüleme penceresinde görüntülendiğinden emin olun. Aksi takdirde, görüntü alımı başarısız olmuş olabilir veya veriler kaydedilmemiş olabilir. İlk olarak, yazılım bağlantı sorunları veya pedal arızası gibi olası ekipman arızalarını ortadan kaldırın. Sorun giderme işleminden sonra hastaya durumu açıklayın ve muayeneyi tekrarlayın.
- Hastadan muayeneden sonra lokal anestezinin etkisi azalana kadar gözlerini ovuşturmamasını isteyin.
- PMMA kapağını cihazdan çıkarın.
- Mikroskop merceğini mercek temizleme mendilleriyle temizleyin.
- Seçenekler iletişim kutusunda Edinme zamanına göre sırala (hızlı) seçeneğini belirleyin ve kirpik foliküllerinin alınan görüntülerinin temporal taraftan nazal tarafa doğru sırayla görüntülendiğini gözlemleyin (Ek Dosya 1: Ek Şekil S5) -- kirpik kökünün göz kapağı kenarı boyunca taranma sırası. Tüm görüntüleri gözden geçirin, analiz için yüksek kaliteli görüntüleri seçin (Şekil 4) ve düşük kaliteli görüntüleri silin. Bir gözlemcinin akar varlığı için görüntüleri değerlendirmesini sağlayın ve her göz için toplam Demodex akarları içeren kirpik foliküllerinin sayısını kaydedin.
NOT: Yüksek kaliteli görüntüler net akar morfolojisi gösterir ve akarın görüntülenen kısmı mümkün olduğunca büyük, ideal olarak 100 μm'den büyük olmalıdır. Yüksek kaliteli görüntüler mevcut değilse, ikinci bir gözlemci tarafından bağımsız bir değerlendirme yapılması gerekir. İki gözlemcinin sonuçları tutarsızsa, üçüncü bir gözlemci tutarsızlığı gidermek ve rapora dahil edilmek üzere nihai sonucu belirlemek için karar vermelidir.
- Raporun ışıklı kutusuna, şakak tarafından burun tarafına doğru yüksek kaliteli görüntüyü yerleştirerek raporlar oluşturun. Rapor şablonlarından ve akar sayma formatlarından (Ek Dosya 2'ye bakınız), incelemenin bulgularına dayalı olarak sonuçları açıklamak için uygun bir rapor şablonu seçin.

Şekil 4: Kirpik folikülünün içindeki Demoks. (Resimler: 400 μm x 400 μm). (Bir)Folikül içinde üç Demodex akarı gözlenir (sarı ok) ve tek bir kirpik işaretlenir (beyaz ok). (B) Folikül içinde beş Demodex akarı gözlenir (sarı ok) ve tek bir kirpik işaretlenir (beyaz ok). Akarlar farklı derinliklerde göç edebildiğinden, tek bir odak düzleminde görüntüleme, tek tek akarların parçalanmış kısımlarını yakalayabilir ve böylece eksik morfolojik temsile neden olabilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
5. Her gün işten sonra cihazı kapatın
- Tüm iletişim kutularını ve pencereleri kapattıktan sonra yazılımı kapatın.
- Bilgisayarı kapatın.
- Cihazın arkasındaki basmalı anahtarı I'den O'ya getirerek cihazı kapatın. En iyi sistem performansı ve veri güvenliği için önce yazılımı kapatın ve ardından cihazı kapatın.
NOT: Cihaz, özellikle bir tam günden fazla olmak üzere çok uzun süre sürekli olarak açık tutulmamalıdır.
- Ekipmana bağlı Kesintisiz Güç Kaynağının (UPS) bakımını düzenli olarak yapın ve ani elektrik kesintilerinden kaynaklanan veri kaybını veya cihaz arızasını önlemek için düzgün çalıştığından emin olun.
- Ağa Bağlı Depolama (NAS) depolamasını kullanmak gibi düzenli yedeklemeler gerçekleştirin.