Method Article

Hipokampal p-CREB ve c-fos Ekspresyonunu Değerlendirmek için Sevofluran Anestezisi Kullanan Juvenil Sıçanlarda Öğrenme ve Hafıza Çalışması için Metodoloji

DOI:

10.3791/68591

⸱

September 19th, 2025

 ,  , 
1Department of Anesthesiology and SICU, Xinhua Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, sevofluranın genç sıçanlarda NMDAR/p-CREB/c-fos yolu yoluyla hipokampal nöronlarda hafıza tutmayı nasıl bozduğunu ve p-CREB ve c-fos ekspresyonunu nasıl azalttığını araştırmaktadır. Sonuçlar, sevofluranın kısa süreli hafıza eksikliklerine neden olduğunu ve sinaptik plastisite belirteçlerini aşağı regüle ettiğini, etkilerin doz sıklığından bağımsız olarak 3 gün sonra geri dönüşümlü olduğunu göstermektedir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin gelişimi sırasında bilişsel bozuklukların incelenmesi, nörogelişimin dinamik doğası, metodolojik kısıtlamalar ve bağlamsal engeller nedeniyle zorluklarla karşı karşıyadır. Bu çalışma, genç sıçanlarda NMDAR/p-CREB/c-fos sinyal yolu aracılığıyla hipokampal nöronlarda hafıza ve p-CREB ve c-fos ekspresyonuna dayalı olarak sevofluranın neden olduğu gelişmekte olan beyindeki bilişsel bozuklukları incelemek için entegre bir metodolojik yaklaşımı araştırdı. Altmış dört adet 21 günlük SD erkek sıçan (vücut ağırlığı <80 g) beş gruba ayrıldı: normal (n=8), %60 O2 (n=16), sahte eğitim (n=8), tek doz sevofluran (n=16) ve çoklu doz sevofluran (n=16). İki sevofluran grubu, eğitimden 1 gün sonra (sev1a ve sev1b grupları) ve 30 gün (sev30a ve sev30b grupları) kurban olarak alt gruplandırıldı (n=8/alt grup); Diğer tüm sıçanlar eğitimden 1 saat sonra kurban edildi. Öğrenme ve hafızada tutmayı değerlendirmek için Y-labirent testi kullanıldı. Hipokampus örneklerinde p-CREB- ve c-fos-pozitif nöronların sayısını belirlemek için immünohistokimya kullanıldı. %60O2 grubu ile karşılaştırıldığında (%86.33 ± %17.52 hafıza tutma), sev1a ve sev1b gruplarındaki sıçanların hafızası anlamlı bir düşüş gösterdi (sev1a: %44.29 ± %11.26; sev1b: %62.42 ± %7.27; tümü P<0.05), sev1b ve sev30b grupları ise anlamlı bir fark göstermedi (sev30a: %84.41 ± %14.15; sev30b: %85.21 ± %11.61; tümü P>0.05). %60 O2 grubu (c-fos: 92.83 ± 7.88; p-CREB: 72.22 ± 8.89) ile karşılaştırıldığında, hipokampal nöronlarda p-CREB ve c-fos ekspresyonu sev1a grubunda azaldı (c-fos: 23.13 ± 3.28; p-CREB: 22.88 ± 5.18) ve sev30 grubunda (c-fos: 23.22 ± 3.13; p-CREB: 25.58 ± 2.26) (tümü P<0.05), sev30a ve sev30b grupları anlamlı bir fark göstermedi (tümü P>0.05). Sevofluran, dozlama sıklığına bağlı bir etki olmaksızın genç sıçanların hafıza koruma yeteneği üzerinde kısa süreli olumsuz uyarıcı etkiye sahiptir. Sevofluran, genç sıçanların hipokampal nöronlarında p-CREB ve c-fos ekspresyonunu azaltır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin gelişimi sırasında bilişsel bozuklukların incelenmesi, nörogelişimin dinamik doğası, metodolojik kısıtlamalar ve bağlamsal engeller nedeniyle önemli zorluklarla karşı karşıyadır. Beyin gelişimi, kritik pencereler 1,2 sırasında bozuklukların tanımlanmasını zorlaştıran hızlı, doğrusal olmayan değişiklikleri içerir. Kaynakların düşük olduğu ortamlarda, bakıcı okuryazarlığı, dil çeşitliliği ve özel araçlara (örneğin MRI) sınırlı erişim gibi engeller erken taramayı engellemektedir1. Beyin olgunlaşmasındaki bireysel değişkenlik, patolojik sapmaları tipik gelişimden ayırt etmeyi zorlaştırır 2,3. Down sendromu gibi durumlar değişmiş kortikal gelişim sergiler, ancak küçük örneklem boyutları ve kıt histolojik veriler mekanik içgörüleri sınırlar4. Nörogelişimsel bozukluklar (örneğin, OSB, DEHB) genellikle anksiyete veya depresyonla birlikte ortaya çıkar ve bilişsel değerlendirmeleri karıştırır5. Bazı popülasyonlarda ciddi iletişim eksiklikleri, standart testlerin kullanımını kısıtlamaktadır6. Bu özellikler çeşitli araştırma tasarımı sorunlarına yol açmaktadır. Gerçekten de, çoğu çalışma, zaman içinde bireysel değişimi modellemede başarısız olan kesitsel tasarımlar kullanır. Batılı, eğitimli nüfuslara ("WEIRD" örnekleri) aşırı güven var7. Down sendromu araştırmaları, küçük ölüm sonrası beyin örneklerinden ve yetersiz yaş uyumlu kontrollerden muzdariptir4. Ekolojik anlık değerlendirme araçları, günlük bilişsel performansı etkileyen bağlamsal değişkenleri hesaba katmakta zorlanır5.

Hayvan ve insan beynindeki en önemli işlevler, insan gelişiminin ve genel olarak yaşamın merkezinde yer alan öğrenme ve hafızayı içerir8. Bebeklerin beyni gelişim aşamasındadır ve ilaç ve anestezi gibi dış etkenlere karşı savunmasızdır 9,10. Anesteziklerin bebeklerin hafıza fonksiyonuna verdiği hasar çok önemli bir klinik araştırma konusudur ve anestezi yapılamaması nedeniyle pediatrik hastalar için optimal tedavileri bile geciktirebilir11. Anesteziye bağlı bilişsel işlev bozuklukları (veya postoperatif bilişsel işlev bozukluğu, POCD) bebekler için uzun vadeli sonuçlar doğurabilir12. Sevofluran inhalasyonu bebeklerde hafıza fonksiyonlarını etkileyebilir13,14, ancak geleneksel anesteziyoloji, bebeklerde beyin hasarının esas olarak anestezi sırasında, özellikle genel anestezide beyin hipoksisinden kaynaklandığına inanmaktadır10. Bu nedenle beyinde kısa süreli veya uzun süreli hipoksi olmadığı sürece bebeklerde merkezi sinir sistemi hasarı riski azaltılmalıdır11. Yine de, POCD'nin anlaşılması yetersiz kalmaktadır. Ameliyat gerektiren bebekler anestezi gerektirecektir ve ilgili yolların daha iyi bilinmesi, POCD riskini en aza indirecek anestezi stratejilerinin tasarlanmasına yardımcı olabilir.

Kalp dışı cerrahi geçiren yaşlı erişkin hastaları içeren bir çalışmada, hastaların yaklaşık %25'inin ameliyattan sonraki 1 hafta içinde POKD yaşadığı, 3 ay sonra bu oranın %10'un altına düştüğü, kontrol grubunda ise %3,4 ve %2,8 POKD oranları görüldüğü ortaya konmuştur15. Çalışma ayrıca, çoğu POCD vakasının geri dönüşümlü olduğunu ve sadece az sayıda hastanın uzun süreli veya kalıcı POCDyaşadığını göstermiştir 15. Merkezi sinir sisteminde glutamat en yaygın uyarıcı amino asittir16. N-metil-D-aspartat reseptörü (NMDAR), uzun süreli güçlenme (LTP) ve uzun süreli depresyonun (LTD) indüklenmesi ve sürdürülmesi için çok önemlidir17. Fareler üzerinde yapılan araştırmalar, uyarıcı sinaptik plastisitenin beyin fonksiyon gelişimini18 doğrudan etkilediğini, NMDAR aktivasyonu ve kalsiyum akışının özellikle önemli olduğunu gösterdi19,20. Geliştirilmiş NMDAR aktivitesi, sinaptik büyümeyi ve plastisiteyi indüklemek için önemli etkilere sahiptir 19,20. Bu nedenle, NMDAR antagonistleri (örneğin, sevofluran) tarafından daha yüksek derecede NMDAR blokajı, daha düşük öğrenme ve hafıza yetenekleri ile sonuçlanmalıdır21. Sevofluranın yetişkin beyinlerinde öğrenme ve hafıza üzerindeki etkileri net bir sonuca varamamışolsa da 22,23, sevofluran pediatrik cerrahilerde anestezi için yaygın olarak kullanılmaktadır14. NMDAR'ın rekabetçi olmayan bir antagonisti olarak sevofluran, beynin öğrenme ve hafıza fonksiyonlarını önemli ölçüde etkileyebilir 11,13,14,23,24. Bununla birlikte, NMDAR'ın yanı sıra, öğrenme ve hafızada başka yollar ve proteinler de yer alır ve fosforile edilmiş cAMP yanıt elemanı bağlayıcı protein (p-CREB) ve hemen erken gen c-fos'u içeren hafıza düzenleme mekanizmaları daha net hale gelmektedir 25,26,27, ancak yine de bebeklerde ve çocuklarda optimal anestezi uygulaması için daha iyi bir anlayış gerektirir.

Bu teorik çerçevelere dayanarak, bu çalışma, genç sıçanlarda NMDAR/p-CREB/c-fos sinyal yolu aracılığıyla hipokampal nöronlarda hafıza ve p-CREB ve c-fos ekspresyonuna dayalı olarak sevofluranın neden olduğu gelişmekte olan beyindeki bilişsel bozuklukları incelemek için kullanılabilecek entegre bir metodolojik yaklaşımı araştırdı. Sonuçlar, genel anestezi sonrası POCD ve hafıza bozukluğu hakkındaki anlayışımızı geliştirmemize yardımcı olabilir. Bu çalışmada 21 günlük sıçanlar kullanıldı çünkü sütten yeni kesilmişlerdi ve insanlarda erken ergenliğe karşılık gelen oldukça düzgün bir vücut ağırlığına ve fizyolojik duruma sahiptiler. Bu kritik gelişim döneminde artan nöroplastisiteleri ve savunmasızlıkları nedeniyle, olgunlaşmamış beyinde ameliyat veya anestezinin neden olduğu bilişsel bozuklukları verimli bir şekilde modelleyebilirler28,29. Bu, onları özellikle pediatrik cerrahi ile ilişkili nörobilişsel riskleri incelemek ve potansiyel müdahale stratejilerini keşfetmek için uygun hale getirir. Y-labirenti, öğrenmeyi ve hafızayı değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir30. İmmünohistokimya, nöronları ve çeşitli nöronal proteinleri incelemek için yaygın olarak kullanılır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmadaki tüm protokoller, Şanghay Jiao Tong Üniversitesi Tıp Fakültesi, Xinhua Hastanesi Etik Kurulu tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır (onay No. XHEC-C-2016-023-2).

1. Hayvanlara ve gruplamaya deneysel genel bakış

  1. 64, 21 günlük erkek SD sıçanları (vücut ağırlığı 80 g'ın altında) elde edin.
  2. Sıçanları beş gruba ayırın: Normal grup (n = 8), %60 O2 grubu (n = 16), Sahte eğitim grubu (n = 8), Tek doz sevofluran grubu (n = 16) ve Çoklu doz sevofluran grubu (n = 16) ( Bkz. Tablo 1).
  3. Sıçanları 20-24 °C'de, %50-%60 nem ve doğal ışık alan bir hayvan tesisinde barındırın.
  4. Yeterli yiyecek ve su sağlayın.
  5. Tüm protokollerin Etik Kurul tarafından gözden geçirildiğinden ve onaylandığından emin olun.
  6. İnhalasyon odasını hazırlayın (bkz. Ek Şekil S1, bölüm 2.1'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  7. Normal grup
    1. Sıçanları 2 saat boyunca %60 havaya maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Maruziyetten 1 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  8. %60 O2 grubu
    1. Sıçanları 2 saat boyunca %60 havaya maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Maruziyetten 30 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  9. Sahte eğitim grubu
    1. Sıçanları 2 saat boyunca %60 havaya maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Işık ve elektrik uyaranlarının öğrenme ve hafıza üzerindeki etkilerini kontrol etmek için kullanılan yapılandırılmış eğitim olmadan (ışıklar ve şok bölgesi konumları rastgele değişiyordu) maruziyetten 1 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  10. Tek doz sevofluran grubu (sev1a grubu)
    1. Sıçanları 2 saat boyunca% 60 hava +% 3 sevoflurana maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Maruziyetten 1 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  11. Tek doz sevofluran grubu (sev30a grubu)
    1. Sıçanları 2 saat boyunca% 60 hava +% 3 sevoflurana maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Maruziyetten 30 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  12. Tekrarlanan doz sevofluran grubu (sev1b grubu)
    1. Sıçanları art arda 7 gün boyunca günde 2 saat boyunca %60 hava + %3 sevoflurana maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Maruziyetten 1 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
  13. Tekrarlanan doz sevofluran grubu (sev30b grubu)
    1. Sıçanları art arda 7 gün boyunca günde 2 saat boyunca %60 hava + %3 sevoflurana maruz bırakın (bölüm 2.2'de ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    2. Maruziyetten 30 gün sonra Y-labirent testi gerçekleştirin (bölüm 4'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).
    3. Davranış testinden sonra doku toplayın (bölüm 5'te ayrıntılı olarak açıklanmıştır).

2. Sevofluran inhalasyonu

  1. Odanın hazırlanması (bkz. Ek Şekil S1)
    1. Kutunun solundaki deliği %60 O2/%40 N2'ye bağlayın.
    2. Oksijen kaynağını sevofluran buharlaştırıcıya bağlayın.
    3. Kutunun sağındaki deliği bir anestezi makinesinin gaz analizörüne bağlayın.
    4. Haznenin üstündeki deliği gaz atığına bağlayın.
    5. Haznenin altındaki ağın altına kireç yerleştirin ve pamuk yünü ekleyin.
    6. Kurulumu bir çeker ocak içine yerleştirin.
    7. Haznenin altına bir ısıtma yastığı yerleştirin.
  2. Inhalasyon
    1. Oksijen kaynağını ve sevofluran buharlaştırıcıyı açın.
    2. Oksijen akışını 2 L/dk'ya ayarlayın.
    3. Sevofluran konsantrasyonu %3,0'a ulaştığında, odadaki atmosferi stabilize etmek için akışı 30 dakika koruyun.
    4. Odanın pamuklu tarafına bir fare yerleştirin.
    5. Fareyi gruplandırmaya göre orada tutun (bkz. adım 1.2).
    6. Cilt rengini, solunum hızını, kalp atış hızını ve nabız oksimetresini izleyin.
    7. Fareyi çıkarın.
    8. Farenin doğal olarak uyanmasına izin verin.
    9. Fareyi kafesine geri koyun.

3. Deneysel reaktifler ve aletler

  1. Reaktif hazırlama
    1. Anestezi uygulaması için piyasada bulunan 250 mL sevofluran hazırlayın.
    2. Stok antikorunu 1:350 seyrelterek p-CREB antikor çalışma solüsyonunu hazırlayın.
    3. Stok antikoru 1:200 oranında seyrelterek c-fos antikor çalışma solüsyonunu hazırlayın.
    4. İmmünohistokimyasal boyama için kiti birleştirin.
    5. %4 paraformaldehit hazırlayın.
      1. 40 g çözünür paraformaldehiti (PFA) 500 mL yüksek saflıkta su içeren bir cam kapta çözün, sürekli ısıtın ve sütlü bir süspansiyon oluşturana kadar manyetik olarak 60-65 °C'ye karıştırın.
      2. Çözelti berraklaşana kadar (pH = 7.0) 1.0 mol/L NaOH damlaları ekleyin.
      3. Yaklaşık 500 mL PBS ekleyin ve bir buz banyosunda veya soğuk su banyosunda iyice karıştırın.
      4. pH'ı tekrar kontrol edin, süzün ve 1000 mL'ye kadar hacim oluşturun.
      5. İleride kullanmak üzere 4 °C'de saklayın.
  2. Ekipman kurulumu
    1. Y-labirentini davranışsal test alanına yerleştirin (Bkz . Ek Şekil S2).
    2. Histolojik analiz için mikroskobu entegre bir görüntüleme sistemi ile kalibre edin.
  3. Doku kesitleri için mikrotomu yeni bıçaklarla takın.
  4. Dehidrasyon makinesini standart doku işleme protokolü ile programlayın.
  5. Boyama makinesini, makine üreticisinin talimatlarına göre sıralı boyama banyoları ile hazırlayın.
  6. Perfüzyon aparatını kurun.
    1. İki plastik ambalajlı salin şişesi kullanın, salini alt açıklıktan boşaltın ve PBS ve %4 paraformaldehit fiksatifi ile doldurun.
    2. Şişeleri asın, infüzyon setlerine bağlayın ve infüzyon setinin kalın iğne ucuna üç bir musluk takın.

4. Y-labirenti ve öğrenme/hafıza testi

  1. Y Labirentini Birleştirin
    1. Y-labirentini, üçgen bir bağlantıyla birbirine bağlanan I, II ve III etiketli üç dikdörtgen kolla kurun (Bkz. Ek Şekil S2).
    2. Labirentin altına 1 cm aralıklarla bir elektrik ızgarası yerleştirin.
    3. Tehlikeli alanları simüle etmek ve uyarıcı sinyal ışıkları takmak için labirent duvarlarına 2 cm'lik ince bakır şeritler takın.
  2. Tehlikeli ve güvenli alanları tanımlayın
    1. Tehlikeli alanları belirtmek için I, II ve III bölgelerini 16.000 V/m'de elektriklendirin (elektrik verildiğinde sinyal ışığı yanar).
    2. Güvenli alanları belirtmek için elektrikli olmayan bölgeleri kırmızı ışıkla işaretleyin.
    3. Kollar arasındaki kavşağı, sıçanın elektrik çarpmasına maruz kalabileceği güvenli olmayan bir alan olarak tanımlayın.
  3. Eğitim prosedürü
    1. Deneyin başında, farenin bulunduğu alanı güvenli alan olarak düşünün.
    2. 2-4 dakika sonra, güvenli alana elektrik uygulayın ve fareyi güvenli bölgeye doğru hareket etmeye teşvik edin.
    3. Sıçan güvenli alandan tehlikeli bir alana hareket ederse, elektrik çarpması altında güvenli bölgeye geri dönecek ve pasif bir kaçınma tepkisi gösterecektir.
  4. Aktif kaçınma tepkisinin geliştirilmesi
    1. Birden fazla egzersiz seansından sonra, elektrik şoku uygulamadan güvenli alandaki ışığı açın.
    2. Sıçanın aydınlatılmış güvenli alana doğru hareketini gözlemleyin, aydınlık-karanlık ayrımcılığı koşullu bir refleks (aktif kaçınma tepkisi) oluşturun.
  5. Dış dikkat dağıtıcı unsurları en aza indirmek için Y-labirentini loş ve sessiz bir alana yerleştirin.
  6. Her gün 09:00-11:00 ve 14:00-16:00 saatleri arasında eğitim verin.
  7. Labirent ortamına uyum sağlamalarına yardımcı olmak için deneyden önce farelerin labirent içinde 5 dakika serbestçe hareket etmelerine izin verin.
  8. Uyaran parametrelerini ayarlayın
    1. Sıçanların elektrik çarpması aldıktan sonra 10 saniye içinde kaçmasını sağlamak için test sırasında uyaran voltajını (16.000 V/m) ayarlayın.
    2. Güvenli alan sinyal ışığını 15 saniye açık tutun, ardından kapatın.
    3. 45 sn'lik bir aralıktan sonra bir sonraki şok deneyleri turuna başlayın.
  9. Sinyal ışığı dizisi ve doğru yanıt
    1. Sinyal ışığının açılma sırasını bir döngüde I → II → III → I olarak ayarlayın.
    2. Sıçan, elektrik çarpması aldıktan sonra 10 saniye içinde başlangıç alanından doğrudan aydınlatılmış güvenli bölgeye kaçması olarak doğru bir tepki tanımlayın.
  10. Sıçanın art arda 10 denemeden 8'inde doğru kaçış tepkisini vermesi durumunda öğrenme standardına ulaştığını düşünün.
  11. Işıksız bir kola kaçışı yanlış bir tepki olarak kaydedin.
  12. Çoklu eğitim ve test oturumları
    1. Öğrenmeyi ve hafızayı değerlendirmek için birden fazla eğitim ve test oturumu gerçekleştirin.
    2. Sabit sayıda deneme sırasında doğru ve yanlış yanıtların sayısını kaydedin.
    3. Görev karmaşıklığını artırmak için başlangıç alanını değiştirin.
  13. Sıçanların hafıza tutma kapasitesini değerlendirmek için aralıklarla (örneğin, eğitimden 24 veya 48 saat sonra) hafıza tutmayı değerlendirin.

5. İmmünohistokimya

  1. Sıçanları uyuşturun
    1. Sıçanları uyuşturmak için eğitimden 1 saat sonra intraperitoneal %10 kloral hidrat (0.4 mL / 100 g) enjeksiyonu uygulayın. Kloral hidrat çözeltisini yerel yönetmeliklere göre atın.
    2. Kalbi tamamen ortaya çıkarmak için torakotomi yapın31.
  2. Anestezi uygulanmış sıçanları fizyolojik solüsyonla perfüze edin
    1. PBS içeren bir iğneyi aort yönünde sol ventriküle sokun, iğneyi hemostatik forseps ile sabitleyin ve venöz kanı serbest bırakmak için hemen farenin sağ kulak kepçesini kesin.
    2. Atık su berraklaşana ve karaciğer ve akciğerler beyaz görünene kadar PBS'yi hızla enjekte edin.
    3. Hayvanın vücudu sertleşene ve formalin fiksasyonu sağlanana kadar 500 mL %10 formalin çözeltisinin hızlı ve ardından yavaş infüzyonu ile devam edin.
    4. Formalin solüsyonunu yerel yönetmeliklere göre atın.
  3. Beyni çıkarın
    1. Kafatasını hızla açın32.
    2. Kafatasından hafifçe kaldırarak ve tabandaki kan damarlarını ve omuriliği keserek, hemisferlere zarar vermeden tüm beyni çıkarın ( Ek Şekil S3'te gösterildiği gibi).
  4. Hipokampusları inceleyin
    1. Bilateral hipokampusları inceleyin.
      1. Farenin oksipital forameninde tüm beyni makasla kesin.
      2. Parietal kemiği kesmek için makası çapraz olarak foramen magnuma dikkatlice yerleştirin.
      3. Parietal kemiğin her iki tarafını hemostatik forseps ile ayırın.
      4. Optik siniri bir taraftan kesmek için makas kullanın ve kafatasının tabanına kadar araştırın.
    2. Hipokampusları 12 saat boyunca %10 formalin solüsyonuna yerleştirin.
    3. Numuneyi bir sakaroz gradyanı (%10, %20, %30) içeren formaline batırın.
    4. Numune dokusu dibe çökene kadar gece boyunca 4°C'de tutun.
  5. Numuneyi gömün ve bölümlere ayırın
    1. Numuneyi parafine gömün. Formalin solüsyonunu yerel yönetmeliklere göre atın.
    2. Gömülü numuneyi 4 μm'ye kadar kesitleyin.
  6. Bölümleri deparafinize edin ve yeniden sulandırın
    1. Bölümleri deparafinizasyon için her seferinde 15 dakika boyunca üç kez 50 mL ksilen içinde bekletin.
    2. Her biri 10 dakika boyunca sırayla 50 mL %100, %90, %70 ve %50 etanole daldırın.
    3. Her biri 3 dakika boyunca 50 mL 0.01 mM PBS ile üç kez durulayın.
  7. Antijen alımı
    1. Bölümleri 50 mL sitrat tamponuna (PBS, pH 6.0) yerleştirin.
    2. Bölümleri paslanmaz çelik düdüklü tencerede 120 °C'ye ısıtın. Bölümleri tamamen tampona daldırılmış bir rafa yerleştirin. Tencereyi kapatın, ısıtın ve 3 dakika yüksek basınç altında tutun.
    3. Ocağı ocaktan alın ve kapağı açmadan önce oda sıcaklığında doğal olarak soğumaya bırakın.
    4. Bölümleri PBS'de (pH 7.2) 2 dakika boyunca 3 kez tekrarlayarak durulayın.
    5. Slayt üzerindeki sektiyonu örtmek için yaklaşık 100-200 μL% 3 H2O2 uygulayın ve endojen peroksidaz aktivitesini ortadan kaldırmak için oda sıcaklığında 5-10 dakika inkübe edin.
    6. PBS ile 2 dakika 3 kez durulayın.
  8. Birincil antikor inkübasyonu
    1. Bölümlere 200 μL primer antikor (0.01 mol/L PBS içinde 1:150 seyreltilmiş) ekleyin.
    2. Gece boyunca 4°C'de inkübe edin.
  9. İkincil Antikor İnkübasyonu
    1. PBS'deki bölümleri 3 kez 3 dakika durulayın.
    2. Kesitleri, lam üzerindeki bölümü kaplayacak şekilde yaklaşık 100-200 μL Polimer Yardımcı ile inkübe edin ve 37 °C'de 20 dakika inkübe edin.
    3. Bölümleri 0,1 mol/L PBS'de 2 dakika, 3 kez durulayın.
    4. Yaklaşık 100-200 μL poliperoksidaz-anti-fare/tavşan IgG ekleyin ve 37°C'de 20 dakika inkübe edin.
    5. PBS'deki bölümleri 3 kez 3 dakika durulayın.
  10. Renk gelişimi
    1. Renk gelişimi için yaklaşık 100-200 μL diaminobenzidin (DAB) çözeltisi (slayttaki bölümü kaplayacak kadar) ekleyin.
    2. Yaklaşık 3 dakika reaksiyona girmesine izin verin.
  11. Karşı boyama ve montaj
    1. Her slayttaki bölümü tamamen kaplamak için damla damla yaklaşık 100-200 μL hematoksilen ekleyerek karşı boyama yapın.
  12. Bölümleri kurutun ve monte edin
    1. Bölümleri 50 mL% 50,% 70,% 90 ve% 100 etanol içinde her biri 10 dakika boyunca dehidre edin, ardından 10 dakika boyunca 50 mL ksilen uygulayın.
    2. Standart prosedürleri kullanarak bölümleri temizleyin ve monte edin.
  13. Mikroskobik inceleme
    1. Her grubun hipokampusundaki p-CREB- ve c-fos-pozitif nöronların sayısını sayın33,34.
    2. Kesitleri mikroskop altında 400x büyütmede inceleyin.
    3. Her dilimdeki ortalama pozitif nöron sayısını, hayvan başına üç bölümden gelen sayımlara dayalı olarak örtüşmeden kaydedin.
      NOT: Tüm veriler bir bilgisayar elektronik tablosunda derlenmiştir. Tüm analizler istatistiksel bir yazılım kullanılarak yapıldı. Sonuçlar±, ortalamanın (SEM) standart hatasının (SEM) ortalamaları olarak sunuldu ve SNK-q ve Dunnett T3 post hoc testleri35 ile tek yönlü ANOVA kullanılarak analiz edildi. SNK-q testi, keşif çalışmaları için yaygın olarak kullanılır ve birden fazla örneklem ortalaması arasında ikili karşılaştırmalar için uygundur. Önceden tanımlanmış hipotezlere dayanmaz, bu da onu tüm grup ortalamalarını karşılaştırmak için ideal kılar36. Dunnett T3 testi tipik olarak önceden tanımlanmış hipotezlerle doğrulayıcı çalışmalar için kullanılır. Birden fazla tedavi grubunu bir kontrol grubuyla karşılaştırmak veya belirli mesleki öneme sahip araçları karşılaştırmak için uygundur 35,37. ANOVA testinin P değeri ≤ 0,05 olduğunda, hangi grupların diğerlerinden anlamlı olarak farklı olduğunu belirlemek için ikili post hoc testler yapıldı. İki taraflı P değerleri 0,05 < istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmadan elde edilen verileri açıklayıcı örnekler olarak kullanarak, temsili immün boyama görüntülerinin yanı sıra farklı gruplardan davranışsal ve moleküler veriler de dahil olmak üzere bu metodolojik çerçeveyle üretilebilecek sonuç türlerini sergiledik. Vurgu, biyolojik önemlerinin bir yorumunu sağlamaktan ziyade, bu yaklaşım tarafından üretilen tipik veya beklenen sonuçları sunmaktır.

Her bir sıçan grubunun öğrenme ve hafıza testi sonuçları
Deney grupları `O2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, sevofluranın hafızayı nasıl etkilediğini ve genç sıçanlarda NMDAR/p-CREB/c-fos sinyal yolu aracılığıyla hipokampal nöronlarda p-CREB ve c-fos ekspresyonunu nasıl modüle ettiğini araştırdı. Sonuçlar, sevofluranın, doz sıklığına (tek doz veya 7 gün boyunca yedi doz) bağlı olarak herhangi bir etki olmaksızın, genç sıçanların hafıza koruma yeteneği üzerinde kısa süreli (eğitimden 1 saat sonra, 3 gün sonra değil) olumsuz uyarıcı bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. Sevofluran...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması olmadığını bildirmektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ye Jiang ve Guohui Li çalışmayı tasarladı. Ye Jiang ve Lai Jiang verileri toplayıp analiz ettiler ve taslağın taslağını hazırladılar. Ye Jiang ve Guohui Li el yazmasını revize etti. Tüm yazarlar makalenin son halini incelenmiş ve gönderilmek üzere onaylamıştır. Bu çalışma, Şanghay Pujiang Programından Guohui Li'ye verilen hibelerle desteklenmektedir (hibe no. 23PJD057).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Deney Hayvanları
Sprague-Dawley (SD) SıçanlarıCharles River Laboratuvarları (Pekin, Çin)YOK21 günlük, erkek
Standart Sıçan YemiKeao Xieli Yemi (Pekin, Çin)YOKStandart laboratuvar hayvanı diyeti
Kimyasallar ve Reaktifler
Kloral HidratSinopharm Kimyasal Reaktif (Şanghay, Çin)80113818Terminal perfüzyon için anestezik
Sitrat Tamponu (10x)ZSGB-BIO (Pekin, Çin)ZLI-9064 SerisiAntijen geri alma solüsyonu, pH 6.0
Etanol (%100)Sinopharm Kimyasal Reaktif (Şanghay, Çin)100092683Histoloji için dehidrasyon ajanı
Hematoksilen Leke SolüsyonuBaso Teşhis A.Ş. (ZHUHAI, Çin)BA-4041IHC için Karşı Boyama
Hidrojen Peroksit (H2O2)Sinopharm Kimyasal Reaktif (Şanghay, Çin)10011218Endojen peroksidazı bloke etmek için %3'lük çözelti
Nötr BalsamSolarbio (Pekin, Çin)G8590 SerisiSlaytlar için montaj ortamı
Azot (N2)Şanghay Tıbbi Gaz A.Ş. (Şanghay, Çin)YOKGaz karışımı için yüksek saflık
Oksijen (O2)Şanghay Tıbbi Gaz A.Ş. (Şanghay, Çin)YOKTıbbi sınıf, gaz karışımı için
ParafinLeica Biosystems (Nussloch, Almanya)39601006Doku gömme ortamı
Paraformaldehit (PFA)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ABD)158127Doku perfüzyonu ve fiksasyonu için fiksatif
Fosfat Tamponlu Salin (PBS)Gibco (Waltham, MA, ABD)7001104410x stok çözelti, pH 7,4
SevofluranAbbVie Inc. (Kuzey Chicago, IL, ABD)YOKİnhalasyon anestezik ajanı
Soda KireçW. R. Grace ve Co. (Columbia, MD, ABD)22-01-0010CO2 inhalasyon odası için emici
Sodyum Hidroksit (NaOH)Sinopharm Kimyasal Reaktif (Şanghay, Çin)10019818PFA çözeltisinin pH ayarı için kullanılır
SakarozSangon Biyoteknoloji (Şanghay, Çin)A502693Beyin dokusunun dondurularak korunması için kullanılır
KsilenSinopharm Kimyasal Reaktif (Şanghay, Çin)10023418Histoloji için temizleme maddesi
Antikorlar ve Kitler
c-Fos AntikoruAbcam (Cambridge, Birleşik Krallık)AB190289Tavşan anti-fare, birincil antikor
DAB Kromojen KitiZSGB-BIO (Pekin, Çin)ZLI-9018 SerisiHRP renk geliştirme için alt tabaka
p-CREB (Ser133) AntikoruHücre Sinyalizasyon Teknolojisi (Danvers, MA, ABD)9198Tavşan anti-fare, birincil antikor
Polimer HRP Tespit KitiZSGB-BIO (Pekin, Çin)PV-9000 SerisiIHC için ikincil antikor ve tespit sistemi
Ekipman
Anestezi MakinesiRWD Yaşam Bilimleri (Shenzhen, Çin)R500 SerisiKontrollü gaz karışımı dağıtımı için
Otomatik Doku İşlemcisiLeica Biosystems (Nussloch, Almanya)ASP6025Otomatik dehidrasyon ve temizleme için
Kriyostat/MikrotomLeica Biosystems (Nussloch, Almanya)CM1950 SerisiDondurulmuş/gömülü beyin dokusunun kesilmesi için
Mikroskop SistemiOlympus (Tokyo, Japonya)BX53 SerisiIHC slaytlarının görüntülenmesi için
Perfüzyon PompasıDaha Uzun Hassas Pompa A.Ş. (Baoding, Çin)BT100-2JTranskardiyal perfüzyon için peristaltik pompa
Sevofluran BuharlaştırıcıRWD Yaşam Bilimleri (Shenzhen, Çin)R510PS SerisiHassas sevofluran konsantrasyon kontrolü için
Y-Labirent AparatıMed Associates Inc. (St. Albans, VT, ABD)MED-VFC-S-YAktif kaçınma için elektrik şebekesi ve ışıklar ile
Yazılım
GraphPad PrizmasıGraphPad Yazılımı (San Diego, CA, ABD)Sürüm 9İstatistiksel analiz ve veri görselleştirme
ResimJUlusal Sağlık Enstitüleri (Bethesda, MD, ABD)Sürüm 1.53Hücre sayımı için görüntü analiz yazılımı
Microsoft ExcelMicrosoft Şirketi (Redmond, WA, ABD)Office 365Veri derleme için elektronik tablo yazılımı

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hadders-Algra, M. The developing brain: challenges and opportunities to promote school readiness in young children at risk of neurodevelopmental disorders in low- and middle-income countries. Front Pediatr. 10, 989518(2022).
  2. Pfeifer, J. H., Allen, N. B., Byrne, M. L., Mills, K. L. Modeling developmental change: contemporary approaches to key methodological challenges in developmental neuroimaging. Dev Cogn Neurosci. 33, 1-4 (2018).
  3. Pezzoli, P., et al. Challenges and solutions to the measurement of neurocognitive mechanisms in developmental settings. Biol Psychiatry Cogn Neurosci Neuroimaging. 8 (8), 815-821 (2023).
  4. Risgaard, K. A., Sorci, I. A., Mohan, S., Bhattacharyya, A. Meta-analysis of Down syndrome cortical development reveals underdeveloped state of the science. Front Cell Neurosci. 16, 915272(2022).
  5. Caporusso, E., et al. Current limitations in technology-based cognitive assessment for severe mental illnesses: a focus on feasibility, reliability, and ecological validity. Front Behav Neurosci. 19, 1543005(2025).
  6. Kasari, C., Brady, N., Lord, C., Tager-Flusberg, H. Assessing the minimally verbal school-aged child with autism spectrum disorder. Autism Res. 6 (6), 479-493 (2013).
  7. Hilton, M. T. Methodological challenges faced by researchers studying early neurodevelopmental outcomes in majority settings. Cambridge J Human Behav. 1 (2), 106-114 (2023).
  8. Lisman, J., et al. Viewpoints: how the hippocampus contributes to memory, navigation and cognition. Nat Neurosci. 20 (11), 1434-1447 (2017).
  9. Lee, J. H., Zhang, J., Wei, L., Yu, S. P. Neurodevelopmental implications of the general anesthesia in neonate and infants. Exp Neurol. 272, 50-60 (2015).
  10. Keunen, K., Sperna Weiland, N. H., de Bakker, B. S., de Vries, L. S., Stevens, M. F. Impact of surgery and anesthesia during early brain development: a perfect storm. Paediatr Anaesth. 32 (6), 697-705 (2022).
  11. McCann, M. E., et al. Neurodevelopmental outcome at 5 years of age after general anaesthesia or awake-regional anaesthesia in infancy (GAS): an international, multicentre, randomised, controlled equivalence trial. Lancet. 393 (10172), 664-677 (2019).
  12. Han, F. F., et al. Predictors and occurrence of postoperative cognitive dysfunction in children undergoing noncardiac surgery: a prospective cohort study. iBrain. 9 (2), 148-156 (2023).
  13. Chung, W., et al. Sevoflurane exposure during the neonatal period induces long-term memory impairment but not autism-like behaviors. Paediatr Anaesth. 25 (10), 1033-1045 (2015).
  14. Apai, C., Shah, R., Tran, K., Pandya Shah, S. Anesthesia and the developing brain: a review of sevoflurane-induced neurotoxicity in pediatric populations. Clin Ther. 43 (4), 762-778 (2021).
  15. Arefayne, N. R., Berhe, Y. W., van Zundert, A. A. Incidence and factors related to prolonged postoperative cognitive decline (POCD) in elderly patients following surgery and anaesthesia: a systematic review. J Multidiscip Healthc. 16, 3405-3413 (2023).
  16. Malik, A. R., Willnow, T. E. Excitatory amino acid transporters in physiology and disorders of the central nervous system. Int J Mol Sci. 20 (22), 5671(2019).
  17. Albarracin, S. L., Baldeon, M. E., Sangronis, E., Petruschina, A. C., Reyes, F. G. R. L-glutamate: a key amino acid for sensory and metabolic functions. Arch Latinoam Nutr. 66 (2), 101-112 (2016).
  18. Vyklicky, V., et al. function, and pharmacology of NMDA receptor channels. Physiol Res. 63 (Suppl 1), S191-S203 (2014).
  19. Zorumski, C. F., Izumi, Y. NMDA receptors and metaplasticity: mechanisms and possible roles in neuropsychiatric disorders. Neurosci Biobehav Rev. 36 (3), 989-1000 (2012).
  20. Lau, C. G., et al. Regulation of NMDA receptor Ca2+ signalling and synaptic plasticity. Biochem Soc Trans. 37 (Pt 6), 1369-1374 (2009).
  21. Bye, C. M., McDonald, R. J. A specific role of hippocampal NMDA receptors and Arc protein in rapid encoding of novel environmental representations and a more general long-term consolidation function. Front Behav Neurosci. 13 (8), (2019).
  22. Callaway, J. K., Jones, N. C., Royse, A. G., Royse, C. F. Sevoflurane anesthesia does not impair acquisition learning or memory in the Morris water maze in young adult and aged rats. Anesthesiology. 117 (5), 1091-1101 (2012).
  23. Li, R., et al. Sevoflurane exposure in the developing brain induces hyperactivity, anxiety-free, and enhancement of memory consolidation in mice. Front Aging Neurosci. 14, 934230(2022).
  24. Yuan, I., Xu, T., Kurth, C. D. Using electroencephalography (EEG) to guide propofol and sevoflurane dosing in pediatric anesthesia. Anesthesiol Clin. 38 (3), 709-725 (2020).
  25. Schinelli, S., et al. Stimulation of endothelin B receptors in astrocytes induces cAMP response element-binding protein phosphorylation and c-Fos expression via multiple mitogen-activated protein kinase signaling pathways. J Neurosci. 21 (22), 8842-8853 (2001).
  26. Florian, C., Mons, N., Roullet, P. CREB antisense oligodeoxynucleotide administration into the dorsal hippocampal CA3 region impairs long- but not short-term spatial memory in mice. Learn Mem. 13 (4), 465-472 (2006).
  27. Cabrera, O. H., Useinovic, N., Jevtovic-Todorovic, V. Neonatal anesthesia and dysregulation of the epigenome. Biol Reprod. 105 (3), 720-734 (2021).
  28. Arellano, J. I., Duque, A., Rakic, P. A coming-of-age story: adult neurogenesis or adolescent neurogenesis in rodents. Front Neurosci. 18, 1383728(2024).
  29. Borsini, A., Giacobbe, J., Mandal, G., Boldrini, M. Acute and long-term effects of adolescence stress exposure on rodent adult hippocampal neurogenesis, cognition, and behaviour. Mol Psychiatry. 28 (10), 4124-4137 (2023).
  30. Kraeuter, A. K., Guest, P. C., Sarnyai, Z. The Y-maze for assessment of spatial working and reference memory in mice. Methods Mol Biol. 1916, 105-111 (2019).
  31. Ordodi, V. L., Paunescu, V., Mic, F. A. Optimal access to the rat heart by transverse bilateral thoracotomy with double ligature of the internal thoracic arteries. J Am Assoc Lab Anim Sci. 47 (5), 44-46 (2008).
  32. Aboghazleh, R., et al. Rodent brain extraction and dissection: a comprehensive approach. MethodsX. 12, 102516(2024).
  33. Fedchenko, N., Reifenrath, J. Different approaches for interpretation and reporting of immunohistochemistry analysis results in the bone tissue: a review. Diagn Pathol. 9, 221(2014).
  34. Diem, K., et al. Image analysis for accurately counting CD4+ and CD8+ T cells in human tissue. J Virol Methods. 222, 117-121 (2015).
  35. Lee, S., Lee, D. K. What is the proper way to apply the multiple comparison test. Korean J Anesthesiol. 71 (5), 353-360 (2018).
  36. Shaffer, J. P. Controlling the false discovery rate with constraints: the Newman-Keuls test revisited. Biom J. 49 (1), 136-143 (2007).
  37. Liu, W. Some results on step-up tests for comparing treatments with a control in unbalanced one-way layouts. Biometrics. 53 (4), 1508-1512 (1997).
  38. Steven, A., et al. What turns CREB on? And off? And why does it matter. Cell Mol Life Sci. 77 (20), 4049-4067 (2020).
  39. Naqvi, S., Martin, K. J., Arthur, J. S. CREB phosphorylation at Ser133 regulates transcription via distinct mechanisms downstream of cAMP and MAPK signalling. Biochem J. 458 (3), 469-479 (2014).
  40. Brosnan, R. J., Thiesen, R. Increased NMDA receptor inhibition at an increased sevoflurane MAC. BMC Anesthesiol. 12, 9(2012).
  41. Wang, H., Peng, R. Y. Basic roles of key molecules connected with NMDAR signaling pathway on regulating learning and memory and synaptic plasticity. Mil Med Res. 3 (1), 26(2016).
  42. Chen, B. S., Roche, K. W. Regulation of NMDA receptors by phosphorylation. Neuropharmacology. 53 (3), 362-368 (2007).
  43. Brightwell, J. J., Smith, C. A., Neve, R. L., Colombo, P. J. Transfection of mutant CREB in the striatum, but not the hippocampus, impairs long-term memory for response learning. Neurobiol Learn Mem. 89 (1), 27-35 (2008).
  44. Colombo, P. J., Brightwell, J. J., Countryman, R. A. Cognitive strategy-specific increases in phosphorylated cAMP response element-binding protein and c-Fos in the hippocampus and dorsal striatum. J Neurosci. 23 (8), 3547-3554 (2003).
  45. Kida, S. A functional role for CREB as a positive regulator of memory formation and LTP. Exp Neurobiol. 21 (4), 136-140 (2012).
  46. Liu, Z., et al. Long-term sevoflurane exposure resulted in temporary rather than lasting cognitive impairment in Drosophila. Behav Brain Res. 442, 114327(2023).
  47. Wei, W., et al. Biomechanical effect of proximal multifidus injury on adjacent segments during posterior lumbar interbody fusion: a finite element study. BMC Musculoskelet Disord. 24 (1), 521(2023).
  48. Giza, C. C., Maria, N. S., Hovda, D. A. N-methyl-D-aspartate receptor subunit changes after traumatic injury to the developing brain. J Neurotrauma. 23 (6), 950-961 (2006).
  49. Jia, M., et al. Role of histone acetylation in long-term neurobehavioral effects of neonatal exposure to sevoflurane in rats. Neurobiol Dis. 91, 209-220 (2016).
  50. Tang, X., et al. Resveratrol mitigates sevoflurane-induced neurotoxicity by the SIRT1-dependent regulation of BDNF expression in developing mice. Oxid Med Cell Longev. 2020, 9018624(2020).
  51. Gao, H., et al. Effects of intravenous anesthetics on the phosphorylation of cAMP response element-binding protein in hippocampal slices of adult mice. Mol Med Rep. 18 (1), 627-633 (2018).
  52. Allen, T. A., Fortin, N. J. The evolution of episodic memory. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (Suppl 2), 10379-10386 (2013).
  53. Bucci, D. J., Robinson, S. Toward a conceptualization of retrohippocampal contributions to learning and memory. Neurobiol Learn Mem. 116, 197-207 (2014).
  54. Cherubini, E., Miles, R. The CA3 region of the hippocampus: how is it? what is it for? how does it do it. Front Cell Neurosci. 9, 19(2015).
  55. Lehr, A. B., et al. Ca2+ beyond social memory: evidence for a fundamental role in hippocampal information processing. Neurosci Biobehav Rev. 126, 398-412 (2021).
  56. Bliss, T. V., Lomo, T. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path. J Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).
  57. Benke, T. A., Luthi, A., Isaac, J. T., Collingridge, G. L. Modulation of AMPA receptor unitary conductance by synaptic activity. Nature. 393 (6687), 793-797 (1998).
  58. Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons. Cell. 105 (3), 331-343 (2001).
  59. Benke, T. A., et al. Mathematical modelling of non-stationary fluctuation analysis for studying channel properties of synaptic AMPA receptors. J Physiol. 537 (Pt 2), 407-420 (2001).
  60. Poncer, J. C., Esteban, J. A., Malinow, R. Multiple mechanisms for the potentiation of AMPA receptor-mediated transmission by alpha-Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II. J Neurosci. 22 (11), 4406-4411 (2002).
  61. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. ILAR J. 55 (2), 310-332 (2014).
  62. Macheda, T., Snider, H. C., Watson, J. B., Roberts, K. N., Bachstetter, A. D. An active avoidance behavioral paradigm for use in a mild closed head model of traumatic brain injury in mice. J Neurosci Methods. 343, 108831(2020).
  63. Shang, M., et al. Moderate white light exposure enhanced spatial memory retrieval by activating a central amygdala-involved circuit in mice. Commun Biol. 6 (1), 414(2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Sevoflurane AnesthesiaJuvenile RatsLearning And MemoryHippocampal Neuronsp CREB Expressionc fos ExpressionY Maze TestImmunohistochemistryNMDAR SignalingCognitive Impairment

Related Articles