Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Miyokard yaralanmasının doğru ve güvenilir analizi için mikroskobik 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür testi

845 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68596

⸱

28 Kasım 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Molecular Cardiology, Medical Faculty and University Hospital Düsseldorf, Heinrich Heine University of Düsseldorf, 2Department of Anesthesiology and Perioperative Medicine, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 3Shanghai Key Laboratory of Anesthesiology and Brain Functional Modulation, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 4Clinical Research Center for Anesthesiology and Perioperative Medicine, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 5Translational Research Institute of Brain and Brain-Like Intelligence, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Mevcut 2,3,5-Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC) testi, mikroskobik çözünürlükte miyokard hasarının analizini mümkün kılan ve hücresel düzeyde infarkt boyutu ile kardiyomiyositlerin canlı yapılabilirliğinin doğru ve güvenilir değerlendirilmesini sağlayan yüksek kaliteli görüntüler elde eden ince bir TTC boyama protokolü sunmaktadır.

Özet

Bu protokolde, hücresel çözünürlükte miyokard enfarktüsünün (MI) doğru ve güvenilir analizi için geliştirilmiş 2,3,5-Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC) tabanlı bir yöntem sunuyoruz. Bu protokol, 24 saat mida enfarktlı kalplerde uygulanan iki aşamalı TTC boyama prosedürünü içerir: %1 TTC çözeltisi aort kanülü aracılığıyla koroner damarlardan retrograd perfüze edildiği perfüzyon ve kalbin gece boyunca 4 °C sıcaklıkta TTC çözeltisinde inkübe edildiği daldırma. Boyandıktan sonra kalp OCT bileşiğine gömülür ve 100 μm aralıklarla 50 μm kalınlığında kesimlere enine kriyobölüm yapılır. Zamboni fiksasyonuyla 24 saatlik fiksasyon sürecinin ardından, canlı miyokardiyum (derin kırmızı) ile nekrotik doku (sarı) arasında keskin ve belirgin bir sınır mikroskobik incelemede fark edilir. Özellikle, bu mikroskobik TTC testi sadece akut fazda (MI sonrası 24 saat) değil, aynı zamanda 7 günün üzerindeki uzun bir zaman aralığında da MI algılamasını sağlar. Mikroskobik TTC testi çok katmanlı görüntüler (kalp başına 80 dilim) ürettiği için, büyük görüntü veri setlerinin hızlı ve verimli analizini mümkün kılan ve küresel enfarkt boyutunu dakikalar içinde niceleyen sağlam, renk tabanlı yarı otomatik bir algoritma geliştirdik. Bu geliştirmelerle, mevcut yaklaşım TTC boyama sürecini önemli ölçüde geliştirmiş ve kardiyak iskemik yaralanmayı araştıran laboratuvarlar için geniş kapsamlı ve değerli bir araç sunmaktadır.

Giriş

Son yirmi yılda, kardiyoprotektif şiddetli kalp darbelerinden sonra kardiyomiyositlerin korunmasında temel bir strateji olarak uygulanmaya devametmiştir 1. Hem deneysel hem de klinik ortamlarda, miyokardiyal yaralanmanın nihai boyutu, kardiyoprotektif müdahalelerin verimliliğini değerlendirmek için kritik birölçüttür. Bu nedenle, enfarkt boyutunun güvenilir ve doğru bir değerlendirmesi son derece arzu edilir ve temel olarak önemlidir.

Kemirgen modellerinde, ölüm sonrası enfarkt boyutunun değerlendirilmesi için standart protokol öncelikle mitokondriyal dehidrojenazın etkinliğine dayanıyordu; bu bileşik renksiz bileşik 2,3,5-tripheniltetrazolyum kloridi (TTC) canlı hücrelerde kırmızı bir çökelmeye dönüştürürken, nekrotik dokuda açık gri kalır. TTC tabanlı boyama basit ve maliyet etkin olsa da, çeşitli metodolojik zorluklar ve içsel sınırlamalar da beraberinde getirir. Bunlar arasında, dokuyu ciddi şekilde bozan ve planimetri için dilimlerin düz durmasını engelleyen kalp dilimlerinin TTC çözeltisinde kontraktür geçirmesi; örnek işleme sırasında düzensiz dilim kalınlığı; ve infarkt sınırının doğru şekilde çizilmesini engelleyen kötü görüntü kalitesi. Son yıllarda, örnek hazırlama sürecine akrilik kalpmatrisleri 4 kullanımı veya kalbi yarı dondurarakdilimleme 3 gibi birçok teknik değişiklik getirilmiştir. Bu değişiklikler doku dilimlemesinin pratikliğini önemli ölçüde artırsa da, geleneksel yaklaşım kalın kalp kesitlerinin kaba görüntülemesine dayanmaya devam etmektedir; bu da genellikle değişken ve optimal olmayan görüntükalitesi 5 üretir; yetersiz renk kontrastı ise infarkt ölçümüne önemli bir öznellikgetirebilir. Ayrıca, geleneksel yöntem tüm kalp dokusunun kullanılmasını gerektirir; bu da aynı doku örneklerinde çok amaçlı analizler, örneğin düzenleyici proteinlerin bağışıklık birlikte boyaması gibi işlemlerin yapılmasını engeller; böylece kalp hayatta kalmasında rol alan anahtar sinyal zincirlerini tespit eder. Sonuç olarak, çeşitli araştırma sorularını yeterince ele almak için önemli sayıda hayvan genellikle gereklidir.

Busınırlamaları aşmak için 5, TTC boyamanın mikroskobik görüntülemesi için uygun bir protokol geliştirdik. Bu yöntem, "perfüzyon + daldırma" boyama adımlarını ve kalp dokusunun ince dilimlere kriyobölümlenmesini birleştirir; bu dilimler ışık mikroskobu ile görüntülenmek üzere optimize edilir. Bu yöntem yakın zamandabildirilmiş olsa da, detaylı deneysel prosedürlerin sunulmasının pratikliğini ve erişilebilirliğini artırdığına inanıyoruz. Ayrıca, mikroskobik TTC yöntemi, birden fazla kalp kesiti katmanından oluşan yüksek çözünürlüklü görüntüler ürettiği için, büyük görüntü veri setlerinin analiz edilmesinin zaman alıcı doğasını ele almak için sağlam, renk tabanlı yarı otomatik bir algoritma geliştirdik. Mevcut yöntem, enfarkt bölgelerinin hızlı tespitini ve küresel enfarkt boyutunun dakikalar içinde nicelendirilmesini sağlar.

Genel olarak, burada sunulan protokol değerli bir araç olarak hizmet vererek araştırmacıların bu yöntemi kolayca ve doğrulukla verimli bir şekilde uygulamasını sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneyler Almanya'nın Nordrhein-Westfalen kentindeki LANUV tarafından onaylanmış ve ARRIVE yönergeleri ile NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ne uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm gerekli ekipman ve kimyasallar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Langendorff retro-perfüzyon sistemi kurmak

NOT: Sistem, 20 kalibre körelmiş iğneden ve biri yıkama çözeltisi (fosfatla tamponlu tuzlu (PBS) portu) ve TTC infüzyonu (TTC portu) için yapılan iki infuzyon portundan oluşan iki kanüle bağlı iki kanülden oluşur. Üç stopcock'un yönü değiştirilerek, perfüzyon kalbe birbirinin yerine iletilebilir.

  1. Cihazı sonraki adımlarda istenmeyen hareketi önlemek için bir parça yapışkan bant kullanarak 150 mm'lik bir Petri kapına yatay olarak sabitleyin.
  2. Kanülün ucunu tabanın 1 mm üzerinde ayarlayın, kalp düz konumlandığında aort kökü seviyesiyle hizalayın.
  3. Sistemi 10 mL'lik bir şırınga kullanarak PBS portundan buz gibi soğuk PBS ile önceden doldurun.
  4. Taze boyama çözeltisi hazırlayın (%1 TTC PBS'de çözünmüş); her kalp için minimum 6 mL hacim gereklidir.
    DIKKAT: Doğum yemeği genellikle tehlikeli kabul edilir ve hafif cilt tahrişine, ciddi göz tahrişine yol açabilir ve solulursa zararlı olabilir. Atık ve kalıntıları yerel yönetim gerekliliklerine uygun olarak bertaraf etmelidir.
  5. TTC portunu boyama çözeltisiyle önceden doldurmak için 3 mL bir şırınga kullanın.
  6. Sistemde istemeden hava kabarcıkları olmadığından emin olun, çünkü bunlar sonraki lekelenmeye engel olabilecek potansiyel hava embolislerine neden olabilir. Çoğu durumda, sistemde hava kabarcıkları görünürdür; Varsa, PBS'yi çekip doldurarak ve dik kanül pozisyonunda üç stopline hafifçe dokunarak çıkarın.
  7. 6-0 ipek dikiş kullanarak gevşek yarım kare bir düğüm oluşturun ve aort kökünün daha sonra sabitlenmesi için kanülün distal ucuna yerleştirilin.

2. Kalp örneği hazırlama

NOT: Bu çalışmada C57BL/6J fareleri (20-25 g) kullanılmıştır. Deneysel miyokard enfarktüsü (MI), aşağıda açıklandığı gibi sol ön iniş arteri (LAD) cerrahi olarak 30-60 dakika boyunca bağlanarak indüklenmiştir. MI indüksiyon metodolojisi dahaönce 8 kez bildirilmiştir ve bu makalede detaylandırılmamıştır. Aksi belirtilmedikçe, kalp örnekleri MI'den 24 saat sonra alındı.

  1. MI faresini kafesten çıkarıp derin izofluran anestezi altında servikal dislokasyon ile ötenazi yapın (%3 v/v).
    NOT: Tüm ötenazi prosedürleri, ötenazi nedeni ve kullanılan yöntem dahil olmak üzere, yerel düzenlemelere uygun şekilde belgelenmeli ve rapor edilmelidir.
  2. Ötenazi yapılan hayvanı ameliyat masasına taşıyın ve dört uzuvu da yapışkan bantla sabitleyin.
  3. Orta karın bölgesinden ön pati ortasına kadar mikro diseksiyon forseps ve makas kullanarak tüyleri çıkarın.
  4. Diyaframın hemen altında, karın kas duvarına 2 cm çapraz bir kesi yapılarak daha sonra torakotomi yapılabilsin.
  5. Diyaframı ince makasla açarak kalbi açığa çıkarın, ardından deri, kas ve kaburgalardan çift taraflı kesiler açarak torakal boşluğu açın.
  6. Diyaframı iki taraflı olarak geriye kesin ve göğsü kaldırarak kalbi tamamen açığa çıkarın.
  7. Kalp atışını durdurmak için hemen 20 mL buz gibi soğuk PBS kalp yüzeyine dökülür.
  8. Kalbi ve çevresindeki dokuları (akciğerler ve yemek borusu) çıkarır ve doku kütlesini yaklaşık 1 dakika boyunca buz gibi soğuk PBS içeren 50 mL'lik bir beaker'e aktararak kalp atışının durmasını sağlar.
  9. Kalbi 150 mm'lik bir Petri kabına aktarın ve aort kökünü ince forseps ve makasla bir dürbün mikroskopu altında bağ dokusundan arındırın.
  10. Timusu nazikçe çıkarın ve yükselen aortu açığa çıkarın.
  11. Aort kökünü bağlayıcı dokuyu disseksiye ederek kesin.
  12. Aort kütüğünü ince cımbızla alın ve önceden PBS ile TTC boyama çözeltisi ile doldurulmuş perfüzyon cihazına bağlı olan kanülün üzerine monte edin. Yerleştirme sırasında aort kök duvarını stabilize etmek için ince cımbızlar kullanın.
  13. Aorta, kanüldeki önceden oluşturulmuş gevşek düğümle sabitleyin. PBS ile retro-perfüze edilirken kanülü ve kalbi dikkatlice inceleyin. Kalbin dolması, kalbe giren PBS hacmi arttıkça ventrikülün şişmesiyle görsel olarak doğrulanabilir.
  14. Kalbi doğal ve uygun bir konumda desteklemek için kalp dışı dokuları (akciğerler ve yemek borusu) yerinde bırakın.

3. TTC boyama

  1. Kanülasyon sağlandıktan sonra kalbi nemli mendil kağıdıyla kaplayın.
  2. Kalbi, önceden bağlanmış 10 mL bir enşiringe ile buz gibi soğuk PBS ile doldurulan ve 2-3 mL/dakika hızında, kalp eluatı temizlenene kadar 3 dakika boyunca durulamaya başlayın. Bu sayede kalp ve koronerlerde yalnızca çok az miktarda kan kalmasını sağlar. Bu aşamada, perfüzyon sırasında aşırı basınçtan kaçının, çünkü bu infarktlı ventrikülün yırtılmasına yol açabilir.
  3. Kalbi dürbün mikroskopu altında inceleyin; aort kökünde hiç sızıntı olmadığından ve perfüzyon basıncı altında doğru şekilde şiştiğinden emin olun.
  4. Üç stop musunu TTC çözeltisine doğru çevirin ve 30 saniye boyunca TTC portundan yavaşça 1 mL boyama çözeltisi infüze edin.
  5. 5 dakika sonra 1 mL TTC çözeltisi tekrar infüze edin ve bu adımı 5 dakika daha sonra (ilk TTC infüzyonundan 10 dakika sonra) bir kez daha tekrarlayın. 15 dakika boyunca 3 kez infüzyon için toplam 3 mL TTC çözeltisi gereklidir.
  6. Kalp yüzeyini dürbün mikroskopu altında inceleyin. Bu noktada, canlı miyokard (derin kırmızı) ile nekrotik doku (açık gri) arasında net bir ayrım zaten görülebilir olmalıdır.
  7. Tüm kalp dışı dokuları ince makasla çıkarın ve lekeli kalbi 3 mL TTC çözeltisi içeren 15 mL'lik konik bir tüpe aktarın.
  8. Konik tüpü gece boyunca 4 °C'ye yerleştirin; ikinci kez daldırma ile boyama yapıldı.

4. Doku bloğu hazırlığı

  1. Konik tüpten kalbi çıkarın ve dikkatlice kağıtla kurutulun. Bu noktada, canlı miyokardda lekelenme daha belirgin hale gelir ve perfüzyon olmayan miyokard (epikardiyal ve potansiyel olarak endokardiyal bölgeler) de hafif kırmızı boya gösterir.
  2. Kör, kavisli 20 kalibre kanülü, 1 mL bir şırınga kullanarak optimal kesme sıcaklığı (OCT) bileşiğiyle doldurun.
  3. Triküspid valfi ince makasla çıkarın ve kanülü sağ ventriküle yerleştirin.
  4. Boşluğu OCT bileşiği (yaklaşık 50-80 μL) ile doldurun ve geri akış gözlemlendiğinde infüzyon durdurulur.
  5. Mitral kapak açığa çıkın ve kanülü sol atrium ile mitral kapaktan sol ventriküle soku.
  6. Boşluğa nazikçe OCT bileşiği (yaklaşık 80 μL) enfuzasyon yapın ve aorttan dışarı çıkınca infüzyon durdurulur.
  7. Alüminyum folyodan yapılmış küçük bir silindirik kapsül (çapı 1 cm) hazırlayın ve 300 μL OCT bileşiğiyle doldurun.
  8. Kalbi dikkatlice kapsüle apeks-down pozisyonunda yerleştirin ve dikey bir konuma ayarlayın. Yukarıdan aşağıya bakıldığında, tepe her iki tarafa da fazla çıkıntı yapmamalıdır.
  9. Kapsülü önceden soğutmuş 2-metilbütan çözeltisine batırın, bu çözelge -30 °C ile -40 °C arasında önceden soğutulur.
  10. Numunenin çözeltide 5-10 dakika boyunca kalmasına izin verin, ardından doku bloğu oluşun.
  11. Doku bloğunu etiketleyin ve daha fazla histolojik analiz için -80 °C'de saklayın.

5. Kryoseksiyon ve fiksasyon

  1. Doku bloğunu OCT bileşiği kullanarak kriyostat çukuruna monte edin.
  2. Çakmayı kriostata yerleştirin ve sıcaklığı yaklaşık -24 °C'ye ayarlayın.
  3. Doku bloğunu apeks görünene kadar kesin.
  4. Kesit kalınlığını 50 μm olarak ayarlayın ve her ikinci dilimi toplayın, böylece dilimler arasında 100 μm aralıklar oluşur.
    NOT: Kriyobölüm sırasında doku katlanmasından kaçının. Bu büyük ölçüde boş ventriküler boşlukların OCT bileşiği ile doldurulmasıyla en aza indirilir (bkz. 4.4-4.6. adımlar).
  5. Dilimleri cam mikroskop slaytlarında sıralı hizala, her slayt başına sekiz parça yerleştirin. Toplamda, kalp başına 80 bölüm, yani 10 slayt beklenmektedir.
  6. Sürgüleri en düşük ayarda saç kurutma makinesiyle oda sıcaklığında hava akışı kullanarak (ısıtmaya gerek yok) yaklaşık 10 dakika kurutun.
  7. Slaytları, Zamboni çözeltisiyle doldurulmuş bir boyama odasına batırın (bir fiksatif %2 paraformaldehit ve %0,4 pikrik asit içerir, w/v).
    DIKKAT: Zamboni'nin fiksantörü alerjik cilt reaksiyonuna neden olabilir ve genetik kusurlar ile kanserogeneze yol açtığı şüphesi var. Atık ve kalıntıları yerel yönetim düzenlemelerine uygun olarak bertaraf etmelidir.
  8. Kalp dokusunu gece boyunca 4 °C'ye sabitleyin. Bu uzun vadeli fiksasyon, kalp dokusu yüzeyinin fiksasyon sürecinde oluşan hava kabarcıklarından arınmasını sağlar.
  9. Fiksasyondan sonra, slaytları fiksatordan çıkarıp PBS ile üç kez durulayın.
  10. Kaydırakları montaj ortamı ile monte edin ve bölümleri kaplama slipleriyle örtün. Bu adımdan sonra kalp slaytları görüntü alınmaya hazırdır.
  11. Örnekleri oda sıcaklığında bir slayt kutusunda sakla.
    NOT: Formazan çökeltileri suda çözünmediği için, boyalanma yıllarca yoğunluk kaybı olmadan korunabilir.

6. Görüntüleme ve işleme

  1. 1.25x bir objektif kullanarak bir ışık mikroskobu kur ve görüntüleme için CellSens yazılımı çalıştır.
  2. Kalp bölümünü görüş alanının ortasına yerleştirin.
  3. Kameranın pozlama süresini, odakını ve beyaz dengesini gerektiğinde ayarlayın.
  4. Her bölümün fotoğraflarını yakalayın ve aynı kalpten tüm görüntüleri özel bir klasöre kaydedin.
  5. R bebesini (Ek Dosya 1) RStudio platformuna kopyalayın ve MI'yi değerlendirmek için R tabanlı otomatik algoritma çalıştırın. Algoritma, her dilim için planimetrik infarkt boyutlarını hesaplar ve tüm kalp için toplam infarkt hacmini hesaplar.
  6. Veri setini bir Excel dosyasına aktarın ve gerektiğinde verileri analiz edin.
  7. Her kalbin tüm görüntülerini sonraki 3D yeniden yapılandırma için ImageJ platformuna aktarın.
  8. Tüm görüntüleri ImageJ platformunun açılır menüsünü kullanarak tutarlı, ardışık bir sırayla üst üste yığın.
  9. Yüzey grafik fonksiyonunu kullanarak 3D bir yapı oluşturun.
  10. Volume Viewer penceresini açın ve 3D projeksiyon için tüm parametreleri ayarlayın.
    NOT: İmmünohistokimya9 metodolojisi ve geleneksel TTCboyama 4,5 için videolar daha önce rapor edilmiş olup bu makaleye dahil edilmemiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Mikroskobik TTC boyama yapmanın temel adımları Şekil 1'de gösterilmiştir. İki tur TTC boyamasından sonra, kalp yüzeyinde belirgin bir delik desen belirgin hale geldi. Tüm kalbin 100 μm aralıklarla seri dilimlenmesi yaklaşık 80 doku kesiti elde etti ve ligasyon bölgesi 60. dilim civarında yer aldı. Her bölümde, canlı kardiyomiyositlerin (viaCM) derin kırmızı boyaması, pikrik asit ile işaretlenen sarı nekrotik dokuda...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Uzun süreli miyokard iskemisi sonucu ortaya çıkan miyokard enfarktüsü (MI), iskemik yaralanmaların genellikle etkili kan dolaşımı için gereken kalbin kasılma fonksiyonunu sıklıkla bozması nedeniyle, küresel düzeyde önemli bir sağlık sorunu olarak kalır. Son birkaç on yılda, işemik strese karşı kardiyak direnci artıran müdahaleler veya bileşikler belirlemeye önemli çalışmalar yapılmıştır. Alternatif vekilat, örneğin enzimsalınımı 11, post-is...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden finansal çıkarları olmadığını belirtirler.

Teşekkürler

Bu çalışma, FoKo 23/2013 ve Kardiyovasküler Araştırma Enstitüsü Düsseldorf (CARID) tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.25x hedefOlympusPlanApo 1.25X/0.04Görüntüleme
10 mL ŞırıngalarB.Braum4617100VRetro-perfüzyon
2,3,5-triphenyltetrazolium klorürMilipore1.08380.0100Kimyasallar
20 G kanülBD305895Retro-perfüzyon
3  mL ŞıringerlerB.Braum4617022VRetro-perfüzyon
3 yönlü durdurmaB.Braum16494CRetro-perfüzyon
Aquamount BDH362262HSırozsiyon
DengeOhausYokKimyasalları tartma
Dürbün mikkroskopuLeicaMZ6Kanülasyon
C57BL/6JJanvierYokHayvanlar
KameraOlympusUC30Görüntüleme
Kapak slipleriEprediaBB02400500A113MN20Sırozsiyon
KriyostatLeicaM850Sırozsiyon
Çift Damıtılmış SuMiliporeYokÇözünen kimyasallar
İnce diseksiyon makasıAESCULAPBC702RCerrahi Aletler
İnce mikro-diseksiyon pensleri AESCULAPFM001RCerrahi Aletler
Cam mikroskop slaytlarıEngelbrecht11102Sırozsiyon
ImageJNIH1.54gGörüntüleme işleme
İzofluranPiramal14150097146754Kimyasallar
İzopropanolRoth  0733.1Kimyasallar
Işık mikroskobuOlympusBX61Görüntüleme
Mikro-disseksiya forsepsleri F.S.T11152-10Cerrahi Aletler
OCT bileşiğiSakura4583Kimyasallar
Petri kabıTherno Scientific172931Retro-perfüzyon
Fosfat tamponlu tuzlu suRoth9143.1Kimyasallar
RstudioPosit Yazılımı2024.09.0Görüntüleme işleme
İpek dikişF.S.T18020-60Retro-perfüzyon
YazılımOlympusCellSens V3.2Görüntüleme
Paslanmamış diseksiya makasıAESCULAPBC257RCerrahi Aletler
Zamboni çözümüMorphisto12773.0050Kimyasallar

Kaynaklar

  1. Bolli, R., Becker, L., Gross, G., Mentzer, R., Balshaw, D., et al. Myocardial protection at a crossroads: the need for translation into clinical therapy. Circ Res. 95 (2), 125-134 (2004).
  2. Murphy, E., Steenbergen, C. Mechanisms underlying acute protection from cardiac ischemia-reperfusion injury. Physiol Rev. 88 (2), 581-609 (2008).
  3. Bohl, S., Medway, D. J., Schulz-Menger, J., Schneider, J. E., Neubauer, S., et al. Refined approach for quantification of in vivo ischemia-reperfusion injury in the mouse heart. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (6), H2054-H2058 (2009).
  4. Liepinsh, E., Kuka, J., Zvejniece, L., Vilskersts, R., Dambrova, M. Rodent heart and brain tissue preparation for digital macro photography after ischemia-reperfusion. J Vis Exp. (180), e62942(2022).
  5. Kim, S. -C., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Knüfermann, P., et al. A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion. J Vis Exp. (65), e3896(2012).
  6. Lindsey, M. L., et al. Guidelines for experimental models of myocardial ischemia and infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 314 (4), H812-H838 (2018).
  7. Ding, Z., et al. A refined TTC assay precisely detects cardiac injury and cellular viability in the infarcted mouse heart. Sci Rep. 14 (1), 25214(2024).
  8. Zhu, H., et al. IL-6 coaxes cellular dedifferentiation as a pro-regenerative intermediate that contributes to pericardial ADSC-induced cardiac repair. Stem Cell Res Ther. 13 (1), 44(2022).
  9. Zhu, H., et al. Sfrp1 as a pivotal paracrine factor in the trained pericardial stem cells that foster reparative activity. Stem Cells Transl Med. 13 (2), 137-150 (2023).
  10. Yellon, D. M., Hausenloy, D. J. Myocardial reperfusion injury. N Engl J Med. 357, 1121-1135 (2007).
  11. Li, C., Chen, M., Zhang, D., Xu, T., Wang, Z. Cardiac injury induced by obstructive jaundice: a comprehensive review. Perioper Precis Med. 28 (1), 28-38 (2025).
  12. Chang, X., et al. ß-tubulin contributes to Tongyang Huoxue decoction-induced protection against hypoxia/reoxygenation-induced injury of sinoatrial node cells through SIRT1-mediated regulation of mitochondrial quality surveillance. Phytomedicine. 108, 154502(2023).
  13. Li, Z., Hu, B., Zou, X. Research advances in understanding the role and mechanism of pyroptosis in myocardial ischemia-reperfusion injury. Perioper Precis Med. 2 (2), 52-63 (2024).
  14. Ouyang, W., et al. An immunostaining-based approach for assessing myocardial viability in the infarcted mouse hearts. Front Cardiovasc Med. 12, 1598314(2025).
  15. Benedek, A., et al. Use of TTC staining for the evaluation of tissue injury in the early phases of reperfusion after focal cerebral ischemia in rats. Brain Res. 1116 (1), 159-165 (2006).
  16. Lindsey, M. L., et al. Guidelines for in vivo mouse models of myocardial infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 321 (6), H1056-H1073 (2021).
  17. Lujan, H. L., Janbaih, H., Feng, H. -Z., Jin, J. -P., DiCarlo, S. E. Myocardial ischemia, reperfusion, and infarction in chronically instrumented, intact, conscious, and unrestrained mice. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 302 (12), R1384-R1400 (2012).
  18. Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17 (4), 268-272 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

TTC BoyamasMiyokard Enfarkt sKriyoseksiyonMikroskobik G r nt lemeKardiyak skemiEnfarkt Boyutu KantifikasyonuKoroner Perf zyon3B Rekonstr ksiyonKardiyak Doku Analizi
Miyokard yaralanmasının doğru ve güvenilir analizi için mikroskobik 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür testi
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.