Yöntem makalesi

İmmüno-transmisyon elektron mikroskobu ile mitokondriyal sitokrom C'nin geçişinin vurgulanması

DOI:

10.3791/68633

⸱

15 Ağustos 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Medical Department, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Critical Care Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 3Sichuan Scientist Biotechnology Co., Ltd, 4Department of Critical Care Medicine, Deyang Hospital Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 6Department of Critical Care Medicine, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol, nöronlardaki mikromorfolojik değişiklikleri ve mitokondriyal sitokrom c'nin immüno-transmisyon elektron mikroskobu ile geçişini incelemek için yöntemleri açıklar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikroyapıdaki protein yeri değişiklikleri genellikle patolojik organeller düzeyinde kesin bir düzenleme mekanizması sunar. Bu organel protein transferinin yerinin doğru bir şekilde nasıl yakalanacağı, hastalıkların tanı ve tedavisi için olumlu bir öneme ve değere sahiptir. Mitokondri, nekrozda ve apoptozun içsel yolunda merkezi bir rol oynar. Normal koşullar altında, sitokrom c (Cyt c) sadece mitokondrinin iç ve dış zarları arasında ve çekirdekte bulunur. Hücreler apoptoza uğradığında, mitokondriyal iç zar geçirgenliği değişir ve Cyt c mitokondriden sitoplazmaya salınır. Bu çalışmada, serebral iskemi-reperfüzyon hasarının bir sıçan modeli oluşturuldu ve apoptoz geçiren nöronların mikromorfolojik değişiklikleri immüno-transmisyon elektron mikroskobu ile gösterildi. Ek olarak, serebral iskemi-reperfüzyon hasarından sonra mitokondriyal matriksten sitoplazmaya immünogold etiketleme Cyt c transferinin vizyonunu daha kesin olarak gösterir. Bu protokolde sunulan immüno-transmisyon elektron mikroskobu tekniği, mikroskobik düzeyde herhangi bir protein pozisyon geçişinin gösterilmesi için uygundur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

2021 küresel hastalık yükü çalışmasına göre inme, engelliliğe göre ayarlanmış yaşam yıllarının 3. önde gelen ölüm nedeni ve 4. önde gelen nedeniydi. 11,9 milyon yeni inme olayı meydana geldi ve bunların %65,3'ünü (7,8 milyon) iskemik inme oluşturdu1. Nöronal ölüm, nekroz ve apoptoz dahil olmak üzere serebral iskemiden sonra meydana gelir. En ciddi şekilde etkilenen beyin dokusu daha sonra nekrotik hücre ölümüne uğrar. İskemik penumbra veya perienfarktüs bölgesindeki nöronlar birkaç saat veya gün sonra apoptoza uğrayabilir2. Biyoenerjetik ve metabolik fonksiyonlara ek olarak, mitokondri ayrıca apoptozun içsel yolunda merkezi bir rol oynar 3,4,5,6.

Cyt C, nükleer genler tarafından kodlanan bir proteindir. Normal koşullar altında, Cyt C sadece mitokondrinin iç ve dış zarları arasında ve çekirdekte bulunur. Serbest bırakılmasının aracılık ettiği apoptotik yol, Bcl-2 aile üyelerinin düzenleyici kontrolü ile ilişkilidir. Apoptoz tarafından uyarıldıktan sonra, Bax / Bak oligomerleri oluşur ve mitokondriyal dış zar gözeneğine yerleştirilir, bu da mitokondriyal ozmotik basınçta değişikliklere ve transmembran potansiyelinin kaybına neden olur. Cyt C, mitokondriden sitoplazmaya salınır, burada apoptotik kompleksi oluşturmak ve pro-kaspaz-9'u aktive etmek için apoptoz 1'in aktivatörüne bağlanır. Buna karşılık, kaspaz-3 ve kaspaz-7 aktive edilir, bu da kaspaz kaskadını başlatır ve hücre apoptozu7'yi indükler.

Transmisyon elektron mikroskobu (TEM), apoptozun farklı aşamalarında hücre yapısındaki değişiklikleri net bir şekilde gözlemleyebilir. Elektron mikroskobu morfolojik gözlemi, apoptozu belirlemek için güvenilir bir yöntemdir8. Bununla birlikte, üst yapıda Cyt C'deki değişiklikleri gözlemleyemez. Üst yapıda spesifik proteinleri tespit etmek için çeşitli teknikler vardır: akış sitometrisi, enzime bağlı immünosorbent testi, enzime bağlı immünosorbent testi, spektrofotometri ve Western blotlama. Bununla birlikte, mikro yapıdaki proteinin konum değişikliklerini doğru bir şekilde yakalayamazlar. Kolloidal altının farklı boyutlarda parçacıkları vardır ve kolloidal altının elektron yoğunluğu yüksektir. İmmünogold teknolojisi, özellikle immüno-elektron mikroskobunun tek veya çok etiketli lokalizasyon çalışmaları için uygundur. Doğal açıktan koyuya kırmızı rengi nedeniyle, kolloidal altın da ışık mikroskobu altında gözlem için uygundur. Spesifik proteinler Immunogold olarak etiketlendiğinde, konum değişiklikleri hücre altı çözünürlükte bir TEM vasıtasıyla görselleştirilebilir9.

Bu protokol, mitokondriyal Cyt C'nin immüno-transmisyon elektron mikroskobu (IEM) ile geçişini vurgulamayı açıklar. Bu yöntemin genel amacı, iskemiye bağlı apoptoz sırasında Cyt C'nin hücre altı translokasyonunu IEM kullanarak görselleştirmektir. IEM'nin mantığı, Cyt C'yi kolloidal altın ile etiketlemek ve TEM9 kullanarak hücre altı çözünürlükte lokalizasyon değişikliklerini görselleştirmektir. IEM, proteinlerin dinamik değişimlerini mekansal düzeyde gözlemleyebilir ve fizyolojik ve patolojik aktiviteleri açıklamak için güçlü bir araç sağlar10.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan programı, SLAS Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır (IACUC Sayı No: SYST-2024-018). Burada, 6 adet patojen içermeyen erkek SD sıçan (200-220 g), laboratuvar ortamı 22-25 °C ve %45-%65 bağıl nemde tutularak bağımsız havalandırma kafeslerinde büyütüldü. Tüm sıçanlara 1 hafta boyunca ücretsiz su ve diyetle adaptif beslenme uygulandı.

1. Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modelinin kurulması

  1. Sıçanları rastgele olarak MCAO grubuna ve sahte operasyon grubuna bölün ve her grupta üç sıçan bulun. Deneysel akış şeması için Şekil 1'e bakın.
  2. Bu protokolde yer alan ekipmanı Şekil 2'deki listeye göre doğrulayın.
  3. Sıçan iskemisi-reperfüzyon hasarının bir MCAO modelini oluşturmak için intraluminal sütür prosedürünü kullanın.
  4. Ameliyattan önce fareleri 12 saat boyunca suya erişilebilir şekilde oruç tutun.
  5. SD sıçanları 0.6 L / dk'da bir hava-oksijen karışımında% 2 izofluran ile anestezik hale getirin ( Malzeme Tablosuna bakınız). Uzuvların derisini forseps ile kırparak uygun anesteziyi onaylayın; Sıçanlarda retraksiyon veya bacak refleksi olmamalıdır. Tamamen bilinçsiz fareleri ameliyat masasına sabitleyin ve bir hayvan sıcaklığı koruyucu kullanarak vücut ısısını 37 ° C'de tutun. Kuruluğu önlemek için ameliyat sırasında gözlerini bantlayın.
  6. Boynun etrafındaki kürkü elektrikli bir tıraş makinesiyle çıkarın ve cildi betadin ile dezenfekte edin. Cerrahi makasla 1,5 cm'lik orta hat boyun kesisi yapın (Malzeme Tablosuna bakınız), kas ve perivasküler fasya üzerinde künt diseksiyon yapın ve sağ ortak karotis arteri (CCA), eksternal karotid arteri (ECA) ve internal karotid arteri (ICA) bulmak için trakeayı açığa çıkarın. Enfeksiyonu önlemek için cerrahi aletler sterilize edilmelidir.
  7. ECA'nın distal ucunu 6-0 cerrahi sütür ile bağlayın ve ECA'nın proksimal ucunun etrafına bifurkasyon noktasına gevşek bir şekilde başka bir cerrahi sütür yerleştirin. Vagal sinire zarar vermemeye özen gösterin.
  8. CCA ve ICA'yı vasküler klipslerle klipsleyin ve ECA'da iki cerrahi sütür arasında küçük bir kesi yapın.
  9. Monofilament sütürü ECA lümenine CCA'ya doğru sokun, intraluminal sütürü sabitlemek ve kanamayı önlemek için cerrahi sütürü ECA güdükünün etrafına sıkın. Hasarı en aza indirmek ve ipsilateral hemisferde %40'lık bir hedef enfarktüs hacmine ulaşmak için monofilament sütürün hayvanın ağırlığına uygun olduğundan emin olun.
  10. Kütüğü serbest bırakmak için ECA'nın kalan kısmını kesin ve ECA kütüğünü kabaca ICA ile aynı hizada olacak şekilde çatallanma noktasının altına yerleştirin.
  11. Mikrovasküler klipsi ICA'dan çıkarın, orta serebral arterin tıkandığını gösteren hafif bir direnç hissedilene kadar dikişi ilerletmeye devam edin; Bu uzunluk tipik olarak 2 cm civarındadır. Sütürü monofilamentin etrafına sıkıca bağlayın. Diğer mikrovasküler klipsi CCA'dan çıkarın.
  12. İnsizyonu cerrahi dikişle kapatın ve fareyi bir kurtarma kafesine koyun, iskemi sonrası 2 saate kadar hayvana bakın.

2. Orta serebral arter kan akışının restorasyonu

  1. Yeniden anesteziden önce, 3. adımda anlatıldığı gibi ameliyatın başarısını değerlendirmek için Longa Skoru Ölçeği ile nöroskoru kontrol edin.
  2. Fareyi yukarıdaki gibi uyuşturun ve insizyonu tekrar açın. CCA'ya bir mikrovasküler klips yerleştirin, dikiş ucu ICA'dan görünene kadar tıkayıcı sütürü ICA'dan kısmen geri çekin.
  3. ICA'ya intraluminal sütürün bulunduğu yerin üzerine başka bir mikro klips yerleştirin, tıkayıcı sütürü tamamen çıkarın ve ECA kütüğünü bağlayın. 24 saat reperfüzyon.
  4. Klipsleri CCA ve ICA'dan çıkarın. Kesiyi cerrahi bir dikiş ile kapatın. Buprenorfini (0.05 mg / kg; malzeme tablosuna bakınız) deri altından uygulayın.
  5. Fareyi kafese geri koyun, su ve püre haline getirin ve bilincini geri kazanana kadar dikkatli olun. Tüm deney prosedürü boyunca sıçanların vücut ısısını 37± 0.5 ° C'de tutun.

3. Nöroskor değerlendirmesi

  1. Longa Skor Ölçeği11 kullanılarak ameliyattan sonra ve reperfüzyondan 24 saat sonra nörolojik defisitleri skorlayın: (0) defisit yok; (1) sol (felçli taraf) ön pençenin tam olarak uzatılmaması; (2) sola doğru daire çizmek (felçli taraf); (3) sola düşme (felçli taraf); (4) spontan yürüme ve bilinç azalması yok; (5) ölü.
    NOT: Üç operatör yukarıdaki standartlara göre değerlendirilmiştir.

4. Beyin dokusu toplanması

  1. Nörolojik defisitler puanlandıktan ve değerlendirildikten sonra reperfüzyondan 24 saat sonra beyin dokularını toplayın.
  2. Fareyi yukarıda tarif edildiği gibi uyuşturun. Baş ve boynu ortaya çıkarmak için cildi kesin ve cerrahi makasla servikal omurgadan servikal kordonu kesin (bkz. Malzeme Tablosu).
  3. Arka boyun kaslarını ayırın ve çıkarın. Kafatasını kavisli forseps ile dikkatlice çıkarın (Malzeme Tablosuna bakınız). Beyin dokularını çizmemek için kafatasını ayırırken duraya dikkat edin. Beyin dokularını tamamen çıkarın.
  4. Beyin dokularını 4 °C'de önceden soğutulmuş TEM ve IEM fiksatifine yerleştirin ve buzdolabında 4 °C'de saklayın.

5. Sahte operasyon

  1. Sahte ameliyatlar için, oklüzyonun yapılmaması dışında yukarıdaki gibi tüm prosedürleri uygulayın.

6. Ultra ince kesit hazırlama ve görüntüleme

  1. TEM ultra ince kesit hazırlığı
    1. Fiksasyon: Çekiş, kontüzyon ve ekstrüzyon gibi mekanik hasarı en aza indirmek için taze dokunun örnekleme bölgesini belirleyin ve doku kalınlığının 2 mm'yi geçmediğinden emin olun. Doku hacminin 1 mm x 1 mm x 1 mm'yi geçmediğinden emin olun.
    2. TEM fiksatif ile 4 °C'de 24 saat sabitleyin. Her biri 0,1 M fosfat tampon PB'de (pH 7,4; Malzeme Tablosuna bakınız) her birini 15 dakika boyunca 3 kez yıkayın.
    3. Fiksasyon sonrası: Oda sıcaklığında (25 ° C) 2 saat boyunca% 1 osmik asit · 0.1 M PB ( Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin.
    4. Dehidrasyon: Dokuyu art arda 10 dakika boyunca %30 etanol, 10 dakika boyunca %50 etanol, 15 dakika boyunca %70 etanol, 15 dakika boyunca %90 etanol, 15 dakika boyunca mutlak etanol ve 15 dakika boyunca %100 aseton içinde kurutun.
    5. Sakız daldırma: Dokuları art arda epoksi reçine çözeltisine daldırın SPI-Pon 812: aseton = 1:3 30 dakika, çözelti SPI-Pon 812: aseton = 1:1 30 dakika ve çözelti SPI-Pon 812: aseton = 3:1 1 saat (bkz.
    6. Polimerizasyon ve gömme: Numuneyi gece boyunca 37 °C'de saf SPI-Pon 812'ye daldırın, 8 saat boyunca taze SPI-Pon 812'ye değiştirin ve 60 °C'de 48 saat polimerize edin (bkz.
    7. Kesit alma: Gömülü bloğu elmas bir bıçakla 0,8 μm kalınlığında yarı ince dilimleyin, 25 °C'de 5 dakika aminotoluen mavisi ile boyayın. Yüksek büyütmeli gözlem için bir ışık mikroskobu ile yoğun şekilde paketlenmiş nöronların bulunduğu alanları bulun ve seçin. 90 nm kalınlığında bir mikrotom ile ultra ince kesitler yapın. Numuneleri 200 gözenekli formvar kaplı bakır ızgaralara koyun (Malzeme Tablosuna bakınız).
    8. Boyama sonrası: Izgaraları uranil asetatta 25 °C'de 15 dakika boyayın, ardından ızgaraları kurşun sitratta 25 °C'de 5 dakika boyayın.
  2. IEM ultra ince kesit hazırlığı
    1. 6.1.1-6.1.4 adımlarını gerçekleştirin.
    2. Sakız daldırma: Dokuları art arda çözeltiye daldırın L. R. Beyaz Reçine: Etanol = 1: 3 2 saat, çözelti L. R. Beyaz Reçine: Etanol = 1: 1 2 saat ve çözelti L. R. Beyaz Reçine: Etanol = 3: 1 2 saat.
    3. Polimerizasyon ve gömme: Numuneyi gece boyunca 4 °C'de saf LR Beyaz Reçineye daldırın, 25 °C'de 4 saat boyunca taze LR Beyaz Reçine ile değiştirin ve 55 °C'de 78 saat polimerize edin.
    4. Kesit alma (adım 6.1.7'de yapıldığı gibi): Gömülü blokları 0,8 μm kalınlığında yarı ince dilimleyin, 25 ° C'de 5 dakika boyunca aminotoluen mavisi ile boyayın. Işık mikroskobu ile yoğun paketlenmiş nöronların bulunduğu alanları bulun ve seçin. 90 nm kalınlığında ultra ince kesitler yapın. Numuneleri bakır ızgaralara koyun.

7. İmmünogold etiketleme

  1. 25 ° C'de her biri 5 dakika boyunca 2x PBS ve 1x glisin tamponu ile durulayın, daha sonra% 2 fosfat tamponu sığır serum albümini (PBS-BSA) ekleyin ve 30 dakika inkübe edin.
  2. Birincil antikor (Sitokrom C'ye karşı tavşan poliklonal antikoru) çözeltisinde 37 ° C'de 2 saat inkübe edin. Birincil antikor, 1:50 oranında PBS-BSA ile seyreltilir.
  3. PBS ile 25 °C'de 5x boyunca her biri 5 dakika durulayın. Kolloidal altın etiketli ikincil antikor (Altın konjuge Keçi tavşan önleyici IgG) çözeltisinde 25 ° C'de 1 saat inkübe edin. İkincil antikor, PBS-BSA ile 1:20 oranında seyreltilir (bkz. Malzeme Tablosu).
  4. PBS ile 25 °C'de 5x boyunca her biri 5 dakika durulayın. Damıtılmış su ile 25 °C'de 5x boyunca her biri 5 dakika durulayın ( Malzeme Tablosuna bakın).
  5. Boyama sonrası: Izgaraları uranil asetat içinde 25 °C'de 10 dakika boyayın, ardından ızgaraları kurşun sitratta 25 °C'de 2 dakika boyayın (bkz. Malzeme Tablosu).
  6. Ultra ince kesiti görüntüleyin ve 80 kV'da transmisyon elektron mikroskobunda fotoğraf çekin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Longa Skor Ölçeği'ne göre, MCAO grubundaki sıçanlar en az sola doğru daire çizerek sunuldu (nöroskor 2). Sahte operasyon grubunun sıçanları belirgin bir nörolojik disfonksiyon göstermedi (neuroscore 0). Ameliyat günü boyunca mortalite gözlenmedi. Hayvanların nöroskoru Tablo 1'de listelenmiştir.

MCAO grubunun IEM analizi, kısmi mitokondriyal yapısal bozulmanın eşlik ettiği küçülmüş çekirdeklere ve yüksek sitoplazmik elektron yoğunluğuna sahip nöronları ortaya çıkardı. Kritik ol...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akut iskemik inmede reperfüzyon tedavisinin primer amacı iskemik bölgeye kan perfüzyonunu geri kazandırmaktır. Şimdi bu hedefe intravenöz tromboliz, endovasküler tedavi ve antitrombotik tedavi ile ulaşabiliriz. Bununla birlikte, kan perfüzyonunun restorasyonu iskemi-reperfüzyon hasarına yol açar, nöronal nekroz ve apoptozu şiddetlendirerek nörolojik bozulmaya yol açar. İskemi-reperfüzyon sırasında, mitokondriyal elektron taşıma zincirinden anormal elektron sızıntısı, mitokondriyal zara z...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Sichuan İl Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi Geleneksel Çin Tıbbı Özel Bilimsel Araştırma Projesi (2021MS414) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 0.9 normal salinSichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.
200 Mesh formvar kaplı bakır ızgaralarZhongjingkeyi Technology Co., Ltd.BZ10262a
220-230g MCAO MonofilamentlerPekin Cinontech Co., Ltd.A4-243250
Mutlak etanolChengdu  Kelong  Kimya   Co., Ltd.
asetonChengdu  Kelong  Kimya   Co., Ltd.
Hayvan anestezi sistemiRayward Life Technology Co., Ltd.R500
Hayvan sıcaklığı koruyucuRayward Life Technology Co., Ltd.69020
Fırın masasıShenzhen Bangqi Chuangyuan Technology Co., Ltd.CT-946
Kemik kesmeGüzel Bilim Araçları16102-11
kapsül gömme kalıplarıZhongjingkeyi Technology Co., Ltd.GP130-B
SantrifüjSCILOGEXD3024R
Konvansiyonel parlak alan optik mikroskopiZeiss (Almanya)Primo Star
Kavisli oftalmik forseps (10 cm)Shanghai Medical Equipment Co., Ltd.
Elmas bıçakDiatom (İsviçre)DU4530
Diseksiyon forsepsRayward Life Technology Co., Ltd.F12018-10
Diseksiyon forsepsRayward Life Technology Co., Ltd.F12010-10
Elektrikli yüksek kurutma fırınıShanghai YiHENG Scientific Instrument Co., Ltd.DHG-9030A
Elektrikli tıraş makinesiYiwu Kemei Elektrikli Ev Aletleri Co., Ltd.KM-PG5002
Fiksasyon sıvısıSichuan Bilim Adamı Biyoteknoloji CO., Ltd.SC0001
cam kaydırakNantong Mevid Yaşam Bilimleri Co., Ltd.
Altın konjuge Keçi anti-tavşan lgGSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
Hemostatik forseps (12,5 cm)Anqisheng Biotechnological Co., Ltd.PL068
Hemostatik forseps (14 cm)Anqisheng Biotechnological Co., Ltd.PL002
İzofluranRayward Yaşam Teknolojisi Co, Ltd
LR Beyaz ReçineTianjin Tainuo Bilim ve Teknoloji Co., Ltd.
Kurşun sitratSPI (ABD)GA10701
İğne tutucu ve nbsp;Jiachi Tıp Teknolojisi Co., Ltd.
Osmiyum tetroksitTED PELLA (ABD)4008-220501
PBSServicebioG4202
Sitokrom c 'ye karşı tavşan poliklonal antikoru;  Affinity Biyobilimler, Ltd.AF0146
SıçanlarPekin Huafukang Biyoteknoloji Co., Ltd.
SPI-Pon 812 gömme reçine kitiSPI (ABD)GS02660
StereomikroskopSunny Optical Technology Co., Ltd.Soptop SZMN
Düz başlı makas (10 cm)Anqisheng Biotechnological Co., Ltd.PL063
Düz oftalmik forseps (10cm)Shanghai Medical Equipment Co., Ltd.
Cerrahi makasRayward Life Technology Co., Ltd.S14001-10
Transmisyon elektron mikroskobuHitachi (Japonya), Ltd.HT7800
ultramikrotomLeica (Almanya)UC7
Uranyum asetatSPI (ABD)GS02624
H2008340020231012012023120501211001220518001D1110942024071201AGR1281A10044036898028110322241102187881211001

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. GBD 2021 Nervous System Disorders Collaborators. Global, regional, and national burden of disorders affecting the nervous system, 1990-2021: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet Neurol. 23 (4), 344-381 (2024).
  2. Taylor, R. C., Cullen, S. P., Martin, S. J. Apoptosis: controlled demolition at the cellular level. Nat Rev Mol Cell Biol. 9 (3), 231-341 (2008).
  3. Li, G. R., et al. Albiflorin: a promising natural monoterpene glycoside with potential therapeutic benefits for multiple physiological systems. Food Med Homol. , (2025).
  4. Ye, X. S., et al. The food and medicine homologous Chinese Medicine from Leguminosae species: A comprehensive review on bioactive constituents with neuroprotective effects on nervous system. Food Med Homol. 2 (2), 9420033(2025).
  5. Mubeen, M., Sakarwala, A. S., Bijarani, A. I., Kamal, M. T. Enhancing heart health: expanding the use of SGLT2 inhibitors in cardiovascular disease. Med Adv. 3 (2), 122-126 (2025).
  6. Zhang, Y. C., et al. Comprehensive analyses of nuclear mitochondria-related genes in the molecular features, immune infiltration, and drug sensitivity of clear cell renal cell carcinoma. Med Adv. 2 (3), 238-253 (2024).
  7. Broughton, B. R., Reutens, D. C., Sobey, C. G. Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia. Stroke. 40 (5), e331-e339 (2009).
  8. Guo, M. J., Lu, B., Gan, J. L., Wang, S. C., Jiang, X. J., Li, H. H. Apoptosis detection: a purpose-dependent approach selection. Cell cycle. 20 (11), 1033-1040 (2021).
  9. Squarzoni, S. Immunoelectron Microscopy Methods. Methods Mol Biol. 2655, 201-210 (2023).
  10. Liu, Y., Ohgaki, R., Okanishi, H., Xu, M., Kanai, Y. Amino acid transporter LAT1 is expressed on cancer cell-derived exosomes with potential as a diagnostic and prognostic biomarker. Sci Rep. 14 (1), 28458(2024).
  11. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  12. Sanderson, T. H., Reynolds, C. A., Kumar, R., Przyklenk, K., Hüttemann, M. Molecular mechanisms of ischemia-reperfusion injury in brain: pivotal role of the mitochondrial membrane potential in reactive oxygen species generation. Mol Neurobiol. 47 (1), 9-23 (2013).
  13. Lesnefsky, E. J., Chen, Q., Tandler, B., Hoppel, C. L. Mitochondrial Dysfunction and Myocardial Ischemia-Reperfusion: Implications for Novel Therapies. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 57, 535-565 (2017).
  14. Hetz, C., et al. channel inhibitors prevent mitochondrion-mediated apoptosis and protect neurons in a model of global brain ischemia. J Biol Chem. 280 (52), 42960-42970 (2005).
  15. Sanderson, T. H., Kumar, R., Sullivan, J. M., Krause, G. S. Insulin blocks cytochrome c release in the reperfused brain through PI3-K signaling and by promoting Bax/Bcl-XL binding. J Neurochem. 106 (3), 1248-1258 (2008).
  16. Goldberg, M. W., Fiserova, J. Immunogold labelling for scanning electron microscopy. Methods Mol Biol. 657, 297-313 (2010).
  17. Sachse, M., de Castro, I. F., Fournier, G., Naffakh, N., Risco, C. Metal-Tagging Transmission Electron Microscopy and Immunogold Labeling on Tokuyasu Cryosections to Image Influenza A Virus Ribonucleoprotein Transport and Packaging. Methods Mol Biol. 1836, 281-301 (2018).
  18. Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P. Immunogold cytochemistry in neuroscience. Nat Neurosci. 16 (7), 798-804 (2013).
  19. Veeramachaneni, R., Gu, X., Herrera, G. A. Atypical amyloidosis: diagnostic challenges and the role of immunoelectron microscopy in diagnosis. Ultrastruct Pathol. 28 (2), 75-82 (2004).
  20. Fossmark, R., et al. Ultrastructure and chromogranin A immunogold labelling of ECL cell carcinoids. APMIS. 113 (7-8), 506-512 (2005).
  21. Page, L. J., et al. Secretion of amyloidogenic gelsolin progressively compromises protein homeostasis leading to the intracellular aggregation of proteins. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (27), 11125-11130 (2009).
  22. Vainer, B., Sørensen, S., Nielsen, O. H., Horn, T. Subcellular localization of intercellular adhesion molecule-1 in colonic mucosa in ulcerative colitis. Ultrastruct Pathol. 26 (2), 113-121 (2002).
  23. Cheng, X. T., et al. Revisiting LAMP1 as a marker for degradative autophagy-lysosomal organelles in the nervous system. Autophagy. 14 (8), 1472-1474 (2018).
  24. Karreman, M. A., van Donselaar, E. G., Gerritsen, H. C., Verrips, C. T., Verkleij, A. J. VIS2FIX: a high-speed fixation method for immuno-electron microscopy. Traffic. 12 (7), 806-814 (2011).
  25. Wang, X. B., et al. Mechanistic Insights into salidroside's mitochondrial protection via AMPK/Sirt1/HIF-1α pathway in hypoxic HT22 Cells. J Vis Exp. (218), e66923(2025).
  26. Hou, Y., et al. Rhodiola crenulata alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury by maintaining BBB integrity and balancing energy metabolism dysfunction. Phytomedicine. 128, 155529(2024).
  27. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Sitokrom C Sal n mProtein LokasyonuSerebral skemiApoptotik Yolakmm nogold EtiketlemeN ronal ApoptozMitokondriyal Ge irgenlikS an Modeli
Video yakında

İlgili makaleler