Bu protokoldeki milletvekillerinin laboratuvar analizi, milletvekillerini insan tüketimine yönelik sularda ölçmek için bir metodoloji oluşturarak Avrupa Parlamentosu ve Konseyi'nin (AB) 2020/2184 sayılı Direktifini tamamlayan 11 Mart 2024 tarih ve (AB) 2024/1441 sayılı Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441) ve Avrupa Denizlerinde Deniz Çöpünün İzlenmesine İlişkin Kılavuz31'i takip etmektedir Deniz Stratejisi Çerçeve Direktifi'nin (MSFD) uygulanması için geliştirilmiştir. Bu protokolün tamamlanmasının ardından, kendi kimliğine sahip her MP parçacığı veya fiberi bir görüntü, spektrum ve edinilen tüm özelliklerle belgelenir. Her MP parçacığı şekli, boyutu, rengi, şeffaflığı ve kimyasal bileşimi (polimer tipi) açısından tanımlanır.
(AB) 2024/1441 sayılı Komisyon Yetki Devri Kararı Ekine göre, milletvekilleri iki tür şekle ayrılır: parçacıklar ve lifler. Parçacıklar ayrıca parçalar, filmler, köpükler, topaklar ve granüller olarak sınıflandırılabilir. Bu sınıflandırma, MSFD için milletvekillerinin izlenmesinde kullanılır. Farklı MP şekilleri arasındaki ayrım, MSFD kılavuzlarında31 ve deniz yüzeyinde MP örneklemesi için video protokolünde32 açıklanmıştır. Her bir parçacığın boyutu, maksimum Feret çapı31 veya alan eşdeğeri çapı olarak ölçülür (Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441 Eki), liflerin boyutları ise uzunlukları ve genişlikleri31 cinsinden kaydedilir. Renk ve şeffaflık, 2024/1441 sayılı Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) Eki uyarınca elde edilen verilere dahil edilmese de, MSFD için toplanan milletvekili mülkleri listesine dahil edilmiştir. Sınıflandırmalar, sırasıyla MSFD yönergelerinin31 Tablo 7.3 ve 7.4'ünde özetlenmiştir.
Spektrum kütüphanesindeki spektrum araştırmasının sonucuna göre MP partikülleri, Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441 Bölüm 1, nokta (14) ve (15)'te listelenen öncelikli polimer gruplarından birine kategorize edilir veya Bölüm 1, nokta (15) kapsamında diğer malzemeler olarak sınıflandırılır. Liflerin kimyasal bileşimi, yalnızca boyutları ve cihaz yetenekleri polimer tipinin pozitif olarak tanımlanmasına izin veriyorsa analiz edilmelidir; aksi takdirde tanımlanamayan lifler olarak belirtileceklerdir.
Yeraltı suyundaki MP'lerin izlenmesi, nihai sonuçları etkileyebilecek farklı metodolojilere sahip az sayıda araştırma çalışmasıyla sınırlıdır14. Anahtar faktörler şunları içerir: 1) numune almadan önce yıkama, 2) pompa tipi, 3) filtreleme sistemi, 4) filtre malzemesi ve gözenek boyutu, 5) numune alma hacmi, 6) numune işleme, 7) MP tespiti ve miktar tayini ve 8) kalite kontrol. Bu faktörler ve özellikleri aşağıda daha ayrıntılı olarak tartışılmaktadır.
Mevcut çalışmaların çoğunda, örneklemeden önce ön pompalamadan (yıkama) bahsedilmemektedir. Ancak bununla ilgili bilgilerin de sağlanması gerekiyor33, çünkü tasfiyenin milletvekillerinin konsantrasyonu üzerinde önemli bir etkisi var28. Protokolümüz ön pompalamayı içerir, çünkü bu işlem sondaj kuyusunda biriken durgun su yerine akiferden tatlı yeraltı suyu numunesi almak için çok önemlidir. Sondaj deliğini etkili bir şekilde temizlemek için, sondaj deliğinin hacminin 2-3 katını dışarı pompalamak veya suyun fizikokimyasal parametreleri stabilize olana kadar devam etmek gerekir14. Tortu alımını önlemek ve homojen numuneyi sağlamak için su numunesi filtre süzgecinin üst kısmından yaklaşık 1 m yukarıda toplanmalıdır.
Sondaj kuyularından yeraltı suyu örneklerinin toplanması bir pompa kullanımını gerektirir. Akış hızı, numune alma derinliğinden, kullanılan pompa tipinden ve sondaj deliğinin durumundan güçlü bir şekilde etkilenir ve bu da konuma özgü su özellikleriyle (tortu içeriği gibi) ve ayrıca numune alma sırasında hakim ve son hava koşullarıyla yakından bağlantılıdır.
Tipik olarak çoğu pompa, numuneleri potansiyel olarak kirletebilecek plastik parçalar içerir, ancak çoğu çalışmada kullanılan pompanın türü belirtilmez. Tüm bileşenleri paslanmaz çelikten yapılmış pompalar tavsiye edilir. Bu mümkün değilse, FTIR analizi kullanılarak malzemeler kimyasal bileşimleri açısından belirtilmelidir. Kullanılan malzemelerin spektrumları kütüphaneye dahil edilmeli ve numunelerden alınan partiküller, potansiyel kontaminasyonu hesaba katmak için bunlarla karşılaştırılmalıdır.
Pervanelerle donatılmış pompalar için, daha büyük MP parçacıkları pompadan geçerken hasar görebilir ve hatta parçalanabilir. MP'lerin varlığının abartılmasını önlemek için numune alma pompasının plastik parçacıkların parçalanmasına katkıda bulunup bulunmadığının değerlendirilmesi önemlidir. Bu, bilinen sayıda iyi karakterize edilmiş MP partikülünün önceden temizlenmiş suya eklenmesi ve filtreleme sisteminden pompalanmasıyla test edilebilir. Pompalamadan sonra, parçalanma veya yüzey değişikliği gibi herhangi bir fiziksel değişikliğin meydana gelip gelmediğini belirlemek için parçacıklar yeniden karakterize edilmelidir. Bu doğrulama adımı, numune alma işleminin mekanik bozulma nedeniyle MP sayılarını yapay olarak artırmamasını sağlamaya yardımcı olur.
Büyük miktarda numune alınan su sağlamak için sahada kullanıma uygun bir filtreleme sistemi gereklidir. Protokolümüzde, kontaminasyonu önlemek için, filtreleme sistemi (numune alma sistemi SLO-P-202300155 kapsamında patentlidir ve patent bekleyen EPO-EP24217168.4'tür) paslanmaz çelikten yapılmıştır ve tüm bileşenleri kaynaklıdır ve Teflon (PTFE) veya plastik malzemelerden yapılmış başka herhangi bir yalıtım bandı içermez. Filtreler çok hızlı tıkanabildiğinden, partiküllerin istenen boyut sınıflarına doğrudan dağıtılmasına da izin verebilen kademeli filtreleme bir seçenek olarak dahil edilmiştir. Tipik olarak, gözenek boyutları 100 μm ve 20 μm veya 10 μm olan filtreler kullanılır. Olası tıkanma sorunlarını gidermek için ek filtreler eklenebilir (örneğin, 100 μm ile 20 μm arasında gözeneklere sahip ek bir filtre). Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441 Eki, dört aşamalı kademeli filtrelemeyi önermektedir: ilk filtre 100 μm, ikincisi 20 μm, üçüncüsü 100 μm ve dördüncüsü 20 μm gözeneklere sahiptir. İlk iki filtre MP analizi için kullanılır ve üçüncü ve dördüncüsü MP kontaminasyon seviyelerinin değerlendirilmesi (numune alma kalite kontrolü) ve tüm partiküllerin ilk ikisi tarafından filtrelendiğinden emin olmak için kullanılır.
Akış ölçer (özellikle mekanik ise), örneklenen suyun hacmini doğru bir şekilde ölçmek için numune alma için filtre dizisinden sonra kurulmalıdır. Numune alma sırasında sistem basıncının izlenmesi önemlidir. Basınç 4 barı aşarsa, bu filtrenin tıkandığını gösterir ve filtreye veya sisteme zarar vermemek için sistem derhal kapatılmalıdır. Milletvekillerinin daha fazla parçalanmasını önlemek için, örnekleme mümkün olan en düşük basınçta yapılmalıdır.
Belirtildiği gibi, Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441, 100 μm ve 20 μm filtrelerin kullanılmasını önermektedir. Bu çalışmada naylon filtreler kullanılmıştır. Ancak bu durumda filtrelerden MP partiküllerinin toplanarak doğrudan ATR-FTIR veya FTIR veya Raman mikroskobu ile yansıma modunda çalışmaya uygun reflektif lamlara aktarılması gerekmektedir. Naylon ağ filtreler, 100 μm gözenek boyutuna sahip filtrelerden filtrelemede etkilidir, çünkü bu boyuttaki parçacıklar manuel olarak işlenebilir. Bununla birlikte, 20 μm filtreler kullanıldığında, FTIR veya Raman mikroskobu kullanılarak iletim veya yansıma modunda ölçümleri kolaylaştırmak için silikon veya alüminyum kaplı filtreler önerilir.
Literatür, milletvekillerinin34 varlığını hafife almamak için en az 500 L su numunesi alınmasını önermektedir. (AB) 2024/1441 sayılı Komisyon Yetki Devri Kararı Ekine göre 1m3 su numunesi alınmalıdır. Numunedeki MP konsantrasyonunun fazla tahmin edilmesini önlemek için önerilen hacmin dikkate alınması gerekir. Bu büyük su hacmi, filtrenin tıkanma riskini artırır ve kademeli filtrelemeyi şiddetle tavsiye eder.
Sunulan sistemden alınan numuneler, bir stereomikroskop kullanılarak hemen MP analizi için hazırlanır. Bu, zaman ve maliyet açısından oldukça verimli bir yöntemdir. Birçok çalışma, kum ve organik maddeyi uzaklaştırmak için ön arıtma adımlarını detaylandırmaktadır; Bununla birlikte, bu prosedürler zaman alıcıdır ve toksik kimyasalların kullanımını içerebilir. Bu tür ön işlem adımları, özellikle daha küçük olanlar (< 100 μm) olmak üzere ek parçalanmaya veya partikül kaybına yol açtığından sonuçları olumsuz etkileyebilir35. Bu nedenle, gerekmedikçe bu adımlardan kaçınmak tercih edilir. Bu tür talimatlar, FTIR mikro-spektroskopisi ile numune analizinin, kullanılan analitik yöntemle uyumlu olmaları halinde doğrudan orijinal toplama filtreleri üzerinde yapılabileceği ve gerekirse bir yüzdürme adımının kullanılabileceği önerildiği 2024/1441 sayılı Komisyon Yetkilendirilmiş Kararında da açıklanmıştır.
İlk olarak, filtre numuneleri stereomikroskoplarla analiz edilir, bu sayede her parçacık fotoğrafla belgelenir, kimlik etiketlenir, boyut açısından ölçülür ve şekil açısından değerlendirilir. Şeklin belirlenmesi, milletvekillerinin kaynağı hakkında bilgi sağlayabileceği için önemlidir. Lifler tipik olarak tekstil yıkamadan gelir ve atık su arıtma tesislerinden kaynaklanırken, parçalar tipik olarak çevredeki büyük plastik parçacıkların bozunmasından gelir. Analizin ikinci bölümünde, her bir parçacığın kimyasal bileşimi ATR-FTIR veya FTIR/Raman mikroskobu kullanılarak belirlenir. Genel olarak, filtreden yansıtıcı slaytlara kadar tüm parçacıklar, FTIR mikroskobu ile yansıtıcı modda analiz yapmak için aktarılır. Numune 20 μm'lik bir silikon filtre üzerinde toplanırsa, filtrenin aşırı kum parçacıkları ile kaplanmaması koşuluyla Raman veya FTIR mikroskobu ile doğrudan analiz yapılabilir. Parçacıklar kuma gömülüyse, mineraller, metal oksitler ve doğal organik maddeler gibi plastik olmayan malzemelerin varlığını azaltmak için yoğunluk ayırma ve/veya kimyasal veya enzimatik işlemler uygulanabilir. Su, IR radyasyonunu güçlü bir şekilde emdiği için MP parçacıkları ölçümden önce kurutulmalıdır.
Sonuçların güvenilirliğini sağlamak için aşağıdaki kalite kontrol unsurları dikkate alınmalıdır: İlk olarak, hava kirliliğinin önlenmesi: Numune alma sırasında atmosferik kirlenmeyi önlemek için kapalı bir filtre sistemi gereklidir. Analiz sürecinde hava yoluyla bulaşan kontaminasyonu önlemek için beyaz pamuklu bir laboratuvar önlüğü ve bir HEPA filtreden hava filtrasyonu gereklidir. İkincisi, filtre sistemi tarafından kontaminasyonun önlenmesi: Polimerlerin kaçınılmaz olduğu sistemin tek bileşeni hortumlardır. Silikon hortumlar tavsiye edilir ve gözle görülür hasar durumunda değiştirilmelidir. Pompanın bileşenlerini bilmek ve polimer varlığı tespit edilirse pompayı numunelerin potansiyel kontaminasyonu açısından test etmek gerekir. Üçüncüsü, laboratuvar çalışmaları sırasında kontaminasyonun önlenmesi: MPS analizi için yalnızca camdan yapılmış ve ultra saf suyla yıkanmış laboratuvar ekipmanı uygundur. Dördüncüsü, sonuçların tekrarlanabilirliğini ve istatistiksel anlamlılığını sağlamak için paralel numuneler: bu filtreleme sistemi, dört daldan aynı anda numune alınmasına izin verir. Tüm numuneler için aynı koşulları sağlamak ve zamandan tasarruf etmek için en az üç paralel numune alınmalıdır. Beşinci olarak, boş numuneler numune alma ve laboratuvar süreçlerinin tüm adımlarına dahil edilmelidir. Saha örneklemesi sırasında, 100 μm ve 20 μm numune filtrelerinden sonra 100 μm ve 20 μm boş filtreler takılır, Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441 Ekinde önerildiği gibi. Numune alma prosedüründe elde edilen boş numuneler, aynı prosedür izlenerek tüm analitik adımlarda dikkate alınmalıdır.
Bu belgede özetlenen protokol, Komisyon Yetkilendirilmiş Kararı (AB) 2024/1441'de belirtilen tüm gereklilikleri karşılamaktadır ve bu nedenle, yeraltı suyunda milletvekillerini inceleyen veya izleyen tüm araştırmacılara mükemmel bir kaynak sağlamaktadır. Açıklanan filtreleme sistemi, farklı derinliklerde MP'lerin örneklenmesini sağladığı için tatlı su veya deniz suları için de kullanılabilir. Numune alma yöntemi basit, kullanıcı dostudur ve çoğu durumda numunenin ön işlemine gerek kalmadan hızlı ve doğru sonuçlar sağlar.