Yöntem makalesi

Araştırma ortamlarında olumlu pekiştirme eğitimi yoluyla Gerbil refahını artırmak

DOI:

10.3791/68657

⸱

15 Ağustos 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Translational Animal Research Center, University Medical Center of the Johannes Gutenberg University Mainz

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Clicker eğitimi, laboratuvar gerbilleri için olumlu bir pekiştirme tekniği olarak hizmet eder. Bu yöntem, olumlu pekiştirme yoluyla stresi azaltmayı ve taşıma verimliliğini artırmayı ve böylece deney hayvanlarının refahına katkıda bulunmayı amaçlar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stresi en aza indirerek ve türe uygun kullanımı teşvik ederek laboratuvar hayvanlarının refahını iyileştirmek, dünya çapında çağdaş biyomedikal araştırmaların merkezi bir hedefidir. Yaygın olarak tanınan bir olumlu pekiştirme eğitimi biçimi olan tıklama eğitimi, istenen davranış ile ödül arasında köprü kurmak için koşullu bir pekiştirici olarak bir tıklama sesi kullanır ve hayvanların daha hızlı ve daha az stresle öğrenmesini sağlar. Araştırma grubumuz daha önce clicker eğitiminin farelerde ve sıçanlarda bir bilişsel zenginleştirme biçimi olarak işlev gördüğünü göstermiştir. Bu çalışmada, bu eğitim yaklaşımını Moğol gerbilleri (Meriones unguiculatus) için başarıyla uyarladık ve protokolü gerbillerin türe özgü davranışsal özelliklerine göre uyarladık. 43 akraba içi gerbilden (27 kadın ve 16 erkek) oluşan bir kohort, standart bir 10 günlük tıklama eğitim protokolüne tabi tutuldu ve bu süre zarfında, bir yiyecek ödülü karşılığında deneycinin eline gönüllü olarak yaklaşmayı ve onunla etkileşime girmeyi öğrendiler. Eğitim süresinin ardından hayvanlar, eğitimin keşif davranışı ve insan-hayvan etkileşimi üzerindeki etkilerini değerlendirmek için Açık Alan Testi ve standartlaştırılmış insan etkileşimi testi de dahil olmak üzere davranışsal değerlendirmelere tabi tutuldu. Bulgularımız, gerbillerde clicker eğitiminin uygulanmasının hızlı, verimli ve iyi tolere edildiğini göstermektedir. Eğitimli hayvanlar, özellikle dişiler, deneycinin eliyle artan gönüllü etkileşim gösterdi ve kaygı benzeri davranışları azalttı. Bu sonuçlar, türe uyarlanmış clicker eğitim protokollerinin, deneyci ve hayvan arasındaki güvenin geliştirilmesini kolaylaştırabileceğini, sonuçta stresi azaltabileceğini ve hem hayvan refahını hem de deneysel sonuçların güvenilirliğini artırabileceğini göstermektedir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stresi azaltmak ve refahı artırmak için biyomedikal araştırmalarda hayvan kullanımının rafine edilmesi, yaygın olarak tanınan uluslararası bir hedeftir 1,2,3. 2022 yılında Avrupa Komisyonu, Avrupa Birliği'nde (Alures) kullanılan 838.539 hayvandan 3.440'ının gerbil olduğunu bildirmiştir4. Almanya'da, Hayvan Refahı Yasası (TierSchG)5 Bölüm 7 (2) uyarınca 2023 yılında hayvan deneylerinde yaklaşık 1,46 milyon omurgalı ve kafadanbacaklı kullanıldı. Bilimsel amaçlarla öldürülen hayvanlarla birlikte 2023 yılında Almanya'da kullanılan toplam laboratuvar hayvanı sayısı yaklaşık 2,1 milyonaulaştı6. Bu rakamlar, biyomedikal araştırmalarda gerbil kullanımının önemini vurgulamakta ve hayvan refahı protokollerinde sürekli iyileştirmelere duyulan ihtiyacı vurgulamaktadır.

Laboratuvar hayvanlarının davranışsal ihtiyaçları ve türe özgü refahı destekleyen yönetim stratejilerinin önemi, etik ve bilimsel uygulama için gerekli olarak geniş çapta kabul görmüştür7. Hayvancılıkta insan-hayvan etkileşimleri, genellikle, işleyici ile hayvan arasında bir bağ oluşturmadan, hayvanları kirli kafeslerden temiz kafeslere aktarma temel göreviyle sınırlıdır. Bu sosyal etkileşim eksikliği, hayvan davranışını ve fizyolojisini olumsuz yönde etkileyen ve sonuçta deneysel sonuçları etkileyen strese yol açabilir8. Yanlış kullanım, araştırma verilerinde iyi bilinen bir değişkenlik kaynağıdır9. Örneğin, fareleri kuyruğundan kaldırmak kaygı ve stresi artırırken, tünel veya açık el yöntemleri gönüllü bir yaklaşımı teşvik eder ve kaygı benzeri davranışları azaltır10,11. Elleçleme, glukokortikoid seviyeleri12 gibi fizyolojik belirteçler üzerindeki tutarlı etkileri nedeniyle küçük memeli çalışmalarında standartlaştırılmış bir akut stres etkeni olarak bile kullanılır. Bu bulgular, kısa insan etkileşimlerinin önemli etkisini ve rafine edilmiş düşük stresli taşıma tekniklerine olan ihtiyacı vurgulamaktadır13.

Eğitime dayalı arıtma, hem hayvan refahını hem de araştırma kalitesini artırmak için etkili bir yöntem olarak giderek daha fazla kabul görmüştür10,14. Hayvan araştırmalarında kullanılan en etkili eğitim yöntemlerinden biri, genellikle gıda ödülleri15,16 ile eşleştirilen clicker eğitimidir. Son on yılda, bu eğitim yaklaşımına artan bilimsel ilgiyi yansıtan clicker eğitimi üzerine 34 çalışma yayınlanmıştır17. Araştırmalar, köpeklerin (%47) ve atların (%30) en sık eğitilen laboratuvar hayvanları olduğunu, bunu kediler, sığırlar, balıklar, keçiler ve maymunların (her biri %3) izlediğini göstermektedir17. Eğitimli hayvanlar prosedürlere gönüllü olarak katılabilir, stresi azaltabilir ve fiziksel kısıtlama ihtiyacını en aza indirebilir18.

Küçük memelilere de pozitif pekiştirme protokolleri uygulanmıştır. Son çalışmalar, hayvancılık prosedürleri için tavşanlarda ve davranışsal araştırmalar için gerbillerde başarılı bir eğitim olduğunu bildirmektedir19,20. Önceki bazı çalışmalarda, clicker ile eğitilmiş farelerin deneycilerle daha fazla temas ve idrara çıkma, dışkılama, seslendirme ve yüzmeye başlama gibi stresle ilişkili daha az davranışsal gösterge sergilediğini gösterdik 21,22,23. Bu, tavşanlar, kemirgenler ve gelincikler gibi küçük memelilerin eğitiminin korku tepkilerini azalttığı ve olumlu pekiştirme teknikleri yoluyla ele almayı kolaylaştırdığı gösterilen veterinerlik alanından elde edilen bulgularla tutarlıdır24. Özellikle, eğitim performansında cinsiyete özgü bir fark da gözlemledik: dişi fareler, eğitim seansları boyunca erkeklerden daha fazla motivasyon ve daha yüksek tepki sıklığı gösterdi. Bu, dişi farelerin standart koşullar altında gönüllü eğitim görevlerine daha kolay katılabileceğini düşündürmektedir21.

Umut verici olmakla birlikte, gerbiller için mevcut eğitim yaklaşımları tipik olarak belirli davranışsal paradigmalara bağlıdır ve günlük hayvancılık rutinlerinde genel kullanım için tasarlanmamıştır25. Moğol gerbilleri (Meriones unguiculatus) için - belirli bir deney düzeneğinden bağımsız olarak - geniş çapta uygulanabilir, standartlaştırılmış bir protokol henüz oluşturulmamıştır. Bu boşluğu gidermek için, bu çalışma, gerbillerin türe özgü özelliklerine göre uyarlanmış basit bir tıklayıcı eğitim protokolü geliştirmeyi ve doğrulamayı amaçladı. Protokol, nazik kullanım ve deneyci ile gönüllü katılım yoluyla stresin azaltılmasına odaklanır. Bu yaklaşımın hayvan refahını iyileştireceğini, daha tutarlı davranışsal temeller oluşturacağını ve deneysel sonuçların güvenilirliğini artıracağını varsayıyoruz. Basitliği ve esnekliği nedeniyle, çok çeşitli laboratuvar ortamlarında kolayca uygulanabilir.

Önerilen eğitim protokolünün etkinliğini ve uygulanabilirliğini değerlendirmek için aşağıdaki spesifik, test edilebilir tahminleri formüle ettik:
Eğitimli gerbiller, 10 günlük bir eğitim süresi içinde hedef davranışı - gönüllü olarak deneycinin elinde oturarak - güvenilir bir şekilde gerçekleştirecektir.
Eğitimli hayvanlar, eğitimsiz kontrollere kıyasla standart bir testte deneyci ile daha fazla gönüllü etkileşim gösterecektir.
Eğitimli hayvanlar, özellikle açık alan testinin merkez bölgesinde daha fazla zaman geçirerek, azaltılmış kaygı benzeri davranışlarla tutarlı davranışsal göstergeler sergileyecektir.
Dişi gerbiller, eğitime erkeklerden daha güçlü davranışsal tepkiler gösterebilir ve potansiyel olarak insan etkileşimine adaptasyondaki cinsiyet farklılıklarını yansıtır.
Bu tahminler davranışsal değerlendirmelerin tasarımına rehberlik etmiş ve protokol için değerlendirme kriterlerini bilgilendirmiştir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gerbillerin ele alınması ve deneysel prosedürler, hayvan bakımı için Avrupa, ulusal ve kurumsal yönergelere uygun olarak yürütülmüştür. Yerel makamların G 21-1-100 lisansı tarafından onaylanmıştır. Protokol, hafta sonları (Cumartesi ve Pazar) molalarla birlikte 10 günlük eğitim (Pazartesi'den Cuma'ya) içerir. Protokol, belirli ihtiyaçları karşılamak için kolayca uyarlanabilir. Gerekli tüm malzemeler Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Hayvan hazırlama

  1. Kurumsal yetiştirme tesisinden gerekli sayıda hayvanı temin edin. Hayvanları açık bir muhafaza sisteminde 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsünün altında tutun.
  2. Yavruları 5 haftalıkken sütten kesin. Sütten kesildikten sonra hayvanları küpe edin ve kafes başına 2-3 bireyden oluşan aynı cinsiyetten gruplar halinde barındırın.
  3. Tüm gerbilleri Tip 4 kafeslerde (590 x 380 x 200 mm; 1.815 m2) arkaya ve yuvaya yerleştirin. Her kafesi en az üç tünelle donatın ve zenginleştirmek için odun çiğneyin. Yiyecek ve su ad libitum sağlayın (Malzeme Tablosuna bakınız).
  4. Seçim yanlılığını en aza indirmek ve tedaviler arasında karşılaştırılabilir temel koşulları sağlamak için hayvanları eğitimli (dişiler: n=27; erkekler: n=16) ve eğitimsiz (dişiler: n=16; erkekler: n=5) gruplara rastgele atayın. Adım 2.2'de belirtildiği gibi, hayvanları üreme kafesi ortamında hem yiyecek ödülüne hem de deneycinin eline alıştırın. protokolün. Eğitimin başlangıcında, hayvanlar (dişiler ve erkekler) yaklaşık 8 haftalıktı.

2. Hayvan alışkanlığı

NOT: Gerbiller taşınmadıysa, alışma süresi azaltılabilir. Protokolün grafiksel genel görünümü Şekil 1'de gösterilmiştir. Çiftlik içi yetiştirilmiş hayvanlarda, ebeveyn hayvanlar iyi bir şekilde alışmışsa ve yavruların hareket ettiği andan itibaren haftada en az bir kez el temelli alışkanlık devam ederse, yavrular için alışma süresi büyük ölçüde kısaltılabilir. Bu hazırlık aşaması, neofobiyi azaltmak ve olumlu bir gıda işleme derneği kurmak için tasarlanmıştır ve clicker tabanlı eğitime sorunsuz bir geçiş sağlar.

figure-protocol-1
Şekil 1: Dış kaynaklı ve kurum içi yetiştirilen hayvanlar için alışma ve eğitim protokolüne genel bakış: Bu şekil, dış kaynaklı gerbiller ve kurum içi yetiştirilmiş gerbiller için kullanılan alışkanlık ve eğitim protokolünün zaman çizelgesini ve temel prosedür adımlarını özetlemektedir. Protokol, hayvanların kökenine ve ön maruziyetine göre ayarlanan ilk elleçleme, gıda alışkanlığı, tıklayıcı tanıtımı ve tıklayıcı eğitimini içerir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. 1. Hafta: Dış kaynaklı hayvanlar için alışkanlık
    1. Varışta, kafes başına 2-3 hayvandan oluşan aynı cinsiyetten gruplar halinde ev gerbilleri. İklimlendirmeyi desteklemek için az miktarda tanıdık gıda peletlerinin yanı sıra taşıma kutusundan yuvalama ve yatak malzemesi ekleyin.
    2. Her kafese en az 3-4 tünel (örneğin, karton tüpler veya plastik barınaklar) sağlayın ve türe özgü kazma davranışına izin vermek için yatakları yaklaşık 8-10 cm derinliğe kadar doldurun.
    3. Gerbilleri kuyruğundan kaldırmaktan kaçının, çünkü bu strese neden olabilir ve kuyruk yaralanması riski oluşturabilir26. Bunun yerine, gerektiğinde hayvanları nazikçe transfer etmek için çukurlu elleçleme kullanın (bkz. Şekil 2A).
    4. Yatağa ~ 5 g kabak veya ayçiçeği çekirdeği serperek hemen gıda temelli alışkanlığı başlatın (Malzeme Tablosuna bakınız). Bu, kazmayı teşvik eder ve hayvanları ödülle tanıştırır.
    5. Ertesi gün, ~10 ödül tohumu içeren bir elinizi 2-3 dakika boyunca kafese sokun. Hayvanlar tohumları doğrudan almazsa, yatağa ~ 5 g tohum koyun.
    6. Hayvanlar elden yiyecek alana kadar bu işlemi günde bir kez tekrarlayın. Bu genellikle yaklaşık bir hafta sürer. Daha önce başarılı olduysanız, clicker eğitimine geçin (bkz. adım 3).
    7. Alışkanlık sırasında, elinizde farklı tohum türleri sunarak ve 2-3 dakika sonra kalan tohumları sayarak yiyecek tercihlerini değerlendirin.
      NOT: İstenen davranışı pekiştirmek için yiyecekleri yalnızca ödül olarak küçük porsiyonlarda verin. Mama ödülünün laboratuvar hayvanları için beslenme kurallarına uygun olduğundan emin olun. Bu protokolde kabak ve ayçiçeği çekirdeği kullanılırken, tesis hijyen gereksinimlerini karşılamaları halinde diğer uygun ödüller kullanılabilir. Laboratuvar hayvanları için tasarlanmış ticari olarak temin edilebilen ödül mamaları da kabul edilebilir.
  2. 1. Hafta: Evde yetiştirilen hayvanlar için alışkanlık
    1. Adım 2.1.3'te açıklandığı gibi, ~ 5 g kabak veya ayçiçeği çekirdeğini yatak takımına koyarak doğrudan üreme kafesinde yiyecek ödülüne alışmaya başlayın. Bu adım, ödüle aşinalık sağlamak için doğumdan önce üreme çifti ile başlatılmalıdır.
    2. Damızlık hayvanlar yataktan tohumları güvenilir bir şekilde tükettikten sonra, adım 2.1.4'te belirtilen prosedürü izleyerek ödülü deneycinin elinden verin. Hayvanların günde 2-3 dakika boyunca ödülü gönüllü olarak keşfetmesine ve almasına izin verin.
    3. Dişi doğum yaptıktan sonra, en az 1 hafta boyunca el temelli alışkanlığı askıya alın. Bu süre zarfında, maruziyeti sürdürmek için haftada 1-5 kez doğrudan kafes yatağına yiyecek ödülleri vermeye devam edin.
    4. Yavrular hareketli hale geldiğinde (doğumdan yaklaşık 18-21. gün) el temelli alışkanlığa devam edin. Hayvanların seans başına 2-3 dakika ödülle eli keşfetmesine izin verin. Bu, yavruların eğitim bağlamına erken alışmasını destekler.
    5. 5 haftalıkken, yavruları sütten kesin ve onları kafes başına 2-3 hayvandan oluşan aynı cinsiyetten gruplar halinde gruplandırın. Nakil gününde mama ödülünü yeni kafes yatağına koyarak alışkanlığa devam edin.
    6. Sütten kesmeyi takip eden gün, yukarıda açıklandığı gibi elle gıda dağıtımını yeniden başlatın (adım 2.1.4 ve 2.1.5).
    7. Hayvanlar elden yiyecek alana kadar bu işlemi günde bir kez tekrarlayın.
    8. Gençler ödülü tutarlı bir şekilde elinden aldıktan sonra, eğitim protokolüne devam edin (bkz. adım 3). Bu genellikle yaklaşık 1 hafta sürer. Daha önce başarılı olduysanız, clicker eğitimine geçin (bkz. adım 3).

figure-protocol-2
Şekil 2: Pozitif pekiştirme kullanarak bir gerbilin ele alınması ve alıştırılması. (A) Bir gerbilin çukurlu kullanımı: Bir gerbil, stresi en aza indirmek için iki elinizle çukurlu bir şekilde nazikçe kepçelenir. (B) Eğitimin başlangıcı: Deneycinin eli, avuç içinde yiyecek ödülleri ile kafes zeminine yerleştirilir. Gerbil bir ödül alır ve davranışı işaretlemek için bir tıklama kullanılır. (C) Gerbil gönüllü olarak deneycinin eline oturur ve bu da başarılı bir eğitim olduğunu gösterir. Yiyecek ödülü görünür bir şekilde avuç içine yerleştirilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

3. Clicker eğitimi

NOT: Eğitime yalnızca gerbil deneycinin elinden yiyecek kabul ederse başlayın. Aksi takdirde, gıda alışkanlığı aşamasını adım 2.1'de açıklanan sürenin ötesine uzatın. veya 2.2.

  1. Eğitime genel bakış
    1. Gerbil başına günde her biri 4 dakika süren bir eğitim seansı yapın. Stresi azaltmak ve tanıdık bir ortam sağlamak için eğitimi doğrudan hayvanın ev kafesinde gerçekleştirin. Tüm zenginleştirme öğelerinin çıkarılması gerekli değildir, ancak kafeste en az bir tüp veya tünel kaldığından ve kafes tabanında deneycinin eli için yeterli alan olduğundan emin olun.
      NOT: İdeal olarak, eğitim özel bir sessiz odada yapılmalıdır. Bu mümkün değilse, çevresel gürültüye ve rahatsızlıklara maruz kalmayı etkili bir şekilde azaltması koşuluyla, hayvan tesisi içinde ses korumalı bir kabin kullanılabilir.
    2. İşitsel ipuçlarının kafa karıştırıcı değişkenler haline gelmesini önlemek için, eğitim oturumları sırasında sözlü iletişimden veya sesli seslerden kesinlikle kaçının. Hayvanlarla herhangi bir sesli etkileşimi, eğitim bağlamı dışındaki dönemlerle sınırlayın.
    3. Hedef davranışın tekrarını (örneğin, deneycinin elinde gönüllü olarak oturmak) eğitim sırasında başarılı bir alışkanlık ve öğrenmenin pratik bir göstergesi olarak kullanın. Bu davranış art arda üç gün boyunca oturum başına en az 5 kez gözlemlendiğinde eğitimin başarılı olduğunu düşünün (bkz. adım 3.4.4).
  2. Eğitim hazırlığı
    1. Gerekli tüm malzemeleri hazırlayın: ödül olarak ayçiçeği çekirdeğini ikiye veya kabak çekirdeğini üçe bölün. Bir ayak tıklayıcısı, renk ipuçlarını (ses yok) veya başka herhangi bir sessiz zamanlayıcı (dijital veya analog) kullanan bir zamanlayıcı uygulaması ve temiz bir ikincil kafes sağlayın (bkz.
    2. Çevresel stres faktörlerini en aza indirmek için ev kafesini eğitimin yapılacağı sessiz, dikkat dağıtıcı olmayan bir alana taşıyın. Gerbiller işitsel uyaranlara karşı oldukça hassas olduğundan, seans sırasında konuşma, kapı çarpma veya ekipman sesleri gibi ani veya yüksek seslerden kaçının.
    3. Bir tünel dışındaki tüm zenginleştirme öğelerini kaldırın. Kalan tünelin eğitim alanına erişimi engellemediğinden emin olun. Bir eli yerleştirmek için yeterli alan olduğundan emin olun.
    4. Herhangi bir refakatçi hayvanı, ayrılma sırasındaki stresi azaltmak için az miktarda ev kafesi yatağı ve zenginleştirme dahil olmak üzere temiz ikincil kafese aktarın.
    5. Ayak tıklayıcısını (ayakla basıldığında tıklama sesi çıkaran mekanik bir cihaz; Malzeme Tablosuna bakın) masanın veya antrenman yüzeyinin altına yerleştirin. Bu, eğitmenin ellerini kullanmadan istenen davranışı işaretlemesine olanak tanır ve her iki elini de hayvanla etkileşim için hazır tutarken tutarlı bir zamanlama sağlar.
  3. Eğitim günü 1-5: Clicker tanıtımı
    1. Zamanlayıcıyı başlatın: Uygulamada Başlat'a dokunun veya sessiz zamanlayıcıdaki düğmeye basın.
    2. Kafesin önünde durun veya oturun. Seçilen tohumdan beş parçayı avucunuzun içine yerleştirin ve elinizi kafesin bir köşesindeki alt tabakanın üzerine düz bir şekilde koyun.
    3. Gerbilin elinden bir tohum aldığı anı tıklayın (Şekil 2B). Sırayla birden fazla tohum alınırsa, her birinin arkasına tıklayın. Yiyecek ödülünü elden besleme davranışıyla ilişkilendirmek için tıklama sesini kullanın.
    4. Hayvan istenen davranışı 5x gerçekleştirdiğinde veya zamanlayıcı sıfıra ulaştığında (4 dakika sonra) eğitimi sonlandırın.
    5. 3. günden itibaren, gerbilin davranışına bağlı olarak, tohumları birer birer sunmaya başlayın. Hayvanı gerinmeye veya ön ayaklarıyla kısa bir temas kurmaya teşvik etmek için elinizi kafes tabanının hemen üzerinde tutun (Şekil 2C). Bu, davranışı kademeli olarak şekillendirmeye yardımcı olur ve hayvanı bir sonraki eğitim aşamasına hazırlar (bkz. adım 3.4).
  4. Eğitim günü 6-10
    NOT: İsteğe bağlı eğitim ipucu: Bir gerbil elin üzerine tırmanmak konusunda isteksizse, görevi daha küçük, güven artırıcı adımlara bölün. İlk olarak, hayvanın tırmanmasını beklemeden önce ele dokunma davranışını pekiştirin. Stresi azaltmak ve işlemeye alışmak için daha fazla zamana ihtiyaç duyan hayvanları desteklemek için bu şekillendirme stratejisini kullanın.
    1. Bir seferde yalnızca bir tohum sunun. Gerbil'i ödüle erişmek için elin üzerine tam olarak tırmanmaya teşvik etmek için elinizi alt tabakanın biraz üzerinde tutun. Bu adım, önceki şekillendirme sürecini temel alır ve nihai hedef davranışa geçişi temsil eder.
    2. Gerbil sürekli olarak elin üzerine tırmandığında, davranışı pekiştirmek için tıklayın. İkinci elinizi kullanarak tohumu sunmaya başlayın (bkz. Şekil 3). Eğitim elini kafes tabanının üzerinde tutun, böylece gerbil üzerine tam olarak tırmanmalıdır. Tohumu başparmağınız ve işaret parmağınız arasında tutmak için bir elinizi kullanın (Şekil 3A) veya bir elinizi kullanarak ödülü, hayvanın üzerine tırmanmaya teşvik edildiği diğer elin avucunun üzerinde sunun (Şekil 3B).
    3. Eğitim başarısını, gerbilin seans başına 5 kez gönüllü olarak deneycinin elinde oturması ve ödülü avuçtan veya ikinci elden kabul etmesi olarak değerlendirin.
    4. Eğitimi en fazla 3 haftalık bir süreden sonra (haftada 5 gün) veya eğitim hedefi art arda 3 günlük bir süre boyunca tutarlı bir şekilde gösterildiğinde sonlandırın.
      NOT: Protokol 3 haftaya kadar yapılandırılmış bir eğitim aşaması tanımlasa da, özellikle eğitimin sonu ile deneysel prosedürlerin başlangıcı arasında bir gecikme beklendiği durumlarda, gerekirse pekiştirme oturumlarına bu sürenin ötesinde devam edilebilir. Devam eden olumlu pekiştirme, öğrenilen davranışın korunmasına ve zaman içinde güvenilirliğin sağlanmasına yardımcı olabilir. Eğitim aşamasının başarıyla tamamlanmasından sonra haftada bir kez pekiştirmeye devam etmenizi öneririz. Bununla birlikte, hayvanlar arasında tutarlılık ve karşılaştırılabilirliği sağlamak için, deneysel görevlere geçmeden önce hedef davranışın istikrarlı ve tekrarlanan performansı ile tanımlanan net bir eğitim son noktası belgelenmelidir.

figure-protocol-3
Şekil 3: Ödül dağıtımı sırasında el konumlandırma örnekleri. (A) Ödül, aynı elin başparmak ve işaret parmakları arasında tutulurken, hayvan avuç içi üzerinde oturur. (B) Ödül, ikinci ve işaret parmaklarıyla tutulurken, hayvan diğer elin avucunun üzerinde oturur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Eğitim sonrası davranış testlerinin yapılması (10+ gün)

  1. Etkileşim testi
    NOT: Bağımlı değişkenler: Birincil bağımlı değişken, testin ikinci dakikası boyunca hayvan ile deneycinin eli arasındaki istemli etkileşimin süresidir. Etkileşim, burnunu çekmek, tırmanmak veya ön ayaklarla ele dokunmak gibi doğrudan fiziksel temas olarak tanımlanır10. Davranışsal puanlama, video kayıtlarına dayanır ve manuel olarak veya davranışsal analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirilebilir.
    1. Etkileşim testinin yapılacağı masanın üzerine tripod üzerine monte edilmiş bir kamera yerleştirin.
    2. Hayvanlar gruplar halinde barındırılıyorsa, hayvanları ev kafesinden bir avuç yatak takımı içeren temiz bir ikincil kafese aktarın.
    3. Tüm tünelleri veya sığınakları ev kafesinden çıkarın ve temiz kafese yerleştirin. Test kafesinde (=ev kafesi) sadece yatak takımlarını bırakın. Artık sadece yatak takımları içeren ev kafesini kameranın altına yerleştirin.
    4. Test hayvanını nazikçe ev kafesine geri döndürmek için çukurlu taşıma kullanın.
    5. Kayda başla. 1 dakika boyunca kafesin önünde hareketsiz kalın. 1 dakika sonra, eldivenli bir elinizi 1 dakika daha kafesin ön kenarına yakın bir yere yerleştirin.
    6. Farklı cinsiyetteki hayvanlar arasında eldivenleri değiştirin.
  2. Açık alan testi
    NOT: Bağımlı değişkenler: Ölçülen değişkenler, kat edilen toplam mesafeyi, merkez bölgesinde ve çevre bölgesinde geçirilen süreyi, merkez girişlerinin sayısını ve yetiştirme olaylarını içerir. Bu göstergeler genel lokomotor aktiviteyi ve kaygı benzeri davranışları yansıtır. Artan merkez süresi tipik olarak azalmış kaygı olarak yorumlanır. Davranış video ile kaydedilir ve otomatik izleme yazılımı kullanılarak analiz edilir (bkz. Malzeme Tablosu).
    1. Açık alan arenasının (100 cm x 100 cm x 40 cm) üzerine bir kamera yerleştirin.
    2. Video kaydına başlayın, ardından çukurlu tutma kullanarak hayvanı nazikçe arenanın ortasına yerleştirin. 7 dakika boyunca davranışı kaydedin.
    3. Testten sonra hayvanı ev kafesine geri koyun. Açık alan kutusunu ve duvarlarını her hayvandan sonra p etanol ile temizleyin. Bir sonraki hayvanı arenaya yerleştirmeden önce etanolün tamamen buharlaşmasını bekleyin.

5. İstatistiksel analiz

  1. Hayvanlarla doğrudan etkileşimin doğası gereği eğitim oturumları sırasında deneycinin tam olarak kör edilmesi mümkün olmasa da, gözlemci yanlılığını azaltmak için davranışsal veri analizini kör bir şekilde gerçekleştirin.
  2. Hem etkileşim hem de açık alan testleri için tüm oturumları videoya kaydedin. Bağımlı değişkenleri eğitimli gözlemciler tarafından manuel olarak (etkileşim testi) veya açık alan kayıtları (merkez bölgesinde geçirilen süre) için davranışsal analiz yazılımı (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanarak otomatik olarak toplayın.
  3. İstatistiksel analizden önce, Shapiro-Wilk testini kullanarak tüm verileri normal dağılım için test edin. Aykırı değerleri belirleyin ve Sağlam Regresyon ve Aykırı Değer Kaldırma (ROUT) yöntemini kullanarak yanlış bulma oranı (Q) olarak ayarlanmış şekilde hariç tutun. Eğitim ve cinsiyetin davranışsal sonuçlar üzerindeki etkilerini analiz etmek için, etkileşim testi için iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA ve açık alan testinin merkezinde geçirilen süreyi değerlendirmek için karışık iki yönlü bir ANOVA uygulayın.
  4. Etkileşim testini ve açık alanın merkez bölgesinde geçirilen kümülatif süreyi ana bağımlı değişkenler olarak sınıflandırın. Tukey'in Dürüst Anlamlı Fark (HSD) testini kullanarak post hoc karşılaştırmalar yapın. < 0.05'lik bir p değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Tüm istatistiksel analizler istatistiksel yazılımlar kullanılarak yapıldı (bakınız Materyal Tablosu).

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eğitimli tüm gerbiller, verilen görevi 10 gün içinde öğrendi ve bu türde clicker eğitiminin fizibilitesini gösterdi. Şekil 4 , kadın (n = 27) ve erkek (n = 16) gerbillerin 1. günden 10. güne kadar olan eğitim başarısını göstermektedir. Erkek ve kadın gerbillerde Eğitim Günü'nün 1. gününe karşı 10. gündeki performansı analiz eden tekrarlanan ölçümler ANOVA, zaman ve cinsiyet arasında anlamlı bir etkileşim etkisi olmadığını ortaya koydu (F(1, 41) = 0.003; p = 0.955), bu da zaman içindeki iyileşmenin her iki cinsiyet için de benzer olduğunu gösterdi. Zamanın oldukça önemli bir etkisi gözlendi (F (1, 41) = 38.83, p < 0.0001), bu da her iki cinsiyetten gerbillerin 10. güne kadar eğitim protokolüne tam olarak uyduğunu gösterdi.

Eğitimli gerbillerin kendilerine verilen görevi 10 gün içinde yerine getirmeleri, bu türdeki clicker eğitim metodolojisinin etkinliğini doğrulamaktadır. Bu başarı oranı, tıklayıcının istenen davranış ile birincil ödül (ayçiçeği/kabak çekirdeği) arasındaki boşluğu dolduran ikincil bir pekiştireç olarak işlev gördüğü edimsel koşullanmanın temel ilkeleriyle uyumludur. Tıklayıcı, davranış ile ödül arasında bir köprü görevi görür ve eğitmenin istenen davranışın tam olarak gerçekleştiği anı kesin bir zamanlama ile işaretlemesine olanak tanır. Bu, eylem ile olumlu sonucu arasında açık ve anında bir ilişki kurulmasına yardımcı olur.

Eğitim protokolünün tamamlanmasını takiben, özellikle eğitim günü 10'dan sonra davranış testleri yapıldı. İki yönlü karışık ANOVA analizi, eğitimli gerbillerin deneycinin eliyle gönüllü etkileşimi artırdığını göstermiştir (Şekil 5A). Eğitimin önemli bir etkisi tespit edildi (F (1, 60) = 22.89; p < 0.0001), eğitimli hayvanlar deneyci ile daha sık etkileşime girdi. Post hoc analiz, kadınlarda (p < 0.0001, n = 27) ve erkeklerde (p = 0.049, n = 16) eğitimin spesifik farklılıklarını ortaya çıkardı. Cinsiyet etkisi gözlenmedi (F (1, 60) = 0.621, p = 0.434), bu da erkek ve dişi gerbillerin genel olarak benzer performans gösterdiğini düşündürdü. Analiz, cinsiyet ve eğitim arasında anlamlı bir etkileşim olmadığını ortaya koydu (F(1, 60) = 0.078, p = 0.781).

Gerbillerin artan gönüllü etkileşimi, clicker eğitiminin olumlu pekiştirme yoluyla doğuştan gelen korku tepkilerini etkili bir şekilde azalttığını göstermektedir. Bu, hem hayvan refahını hem de veri kalitesini iyileştirerek işleme ve deneysel prosedürler sırasında stresi en aza indirmeye yardımcı olabilir.

Eğitim sonrası kaygı benzeri davranışların bir değerlendirmesi Açık Alan Testi kullanılarak gerçekleştirildi. Şekil 5B , merkez bölgede geçirilen kümülatif süreyi göstermektedir. Açık Alan Testinin merkez bölgesindeki kümülatif süre boyunca cinsiyet ve antrenman arasında bir etkileşim gözlenmedi (F(1, 60) = 0.101, p = 0.751). Ek olarak, cinsiyetin anlamlı bir ana etkisi bulunmadı (F(1, 60) = 0.001, p = 0.969. Eğitimin oldukça anlamlı bir ana etkisi gözlenmiştir (F(1, 60) = 17.26, p < 0.0001; HSD Tukey testi: kadınlarda ve erkeklerde sırasıyla p = 0.003 ve p = 0.052), eğitimli gerbillerin eğitimsiz olanlara göre merkezde önemli ölçüde daha fazla zaman geçirdiğini göstermektedir. Bu sonuçlar, hayvanlar 10 günlük eğitim süresini tamamladıktan sonra ölçülen davranışsal tepkileri yansıtmaktadır.

OFT, kemirgenlerin yeni ortamları keşfederken yaşadıkları doğal yaklaşım-kaçınma çatışmasından yararlanır27. Gerbiller, doğuştan gelen keşfetme dürtülerini, potansiyel olarak tehlikeli açık alanlardan kaçınma konusundaki doğal eğilimleriyle dengeleyebilir. Bu nedenle, eğitimli gerbillerin kaygı uyandıran merkez bölgesinde daha fazla zaman geçirmeleri, clicker eğitiminin genel davranışsal keşif istekliliğini artırdığını ve bu da genel refahta iyileşmelere işaret edebileceğini göstermektedir.

figure-results-1
Şekil 4: Clicker eğitimi doğrulaması. Erkek ve kadın denekler için 1. güne karşı 1. gün eğitim başarısı: Eğitim başarısı, eğitim protokolünün 1. ve 10. gününde kadın (beyaz çubuklar, n = 27) ve erkek (gri çubuklar, n = 16) gerbillerde değerlendirildi. İki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA, eğitim gününün anlamlı bir ana etkisini ortaya çıkardı (p < 0.0001). Tukey'in HSD testi kullanılarak yapılan çoklu karşılaştırmalar, hem kadınlarda (p < 0.0001, n = 27) hem de erkeklerde (p < 0.0001, n = 16) eğitim başarısında 1. günden 10. güne kadar anlamlı bir artış gösterdi. Veriler ortalama ± SD olarak sunulur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 5: Davranışsal değerlendirme. (A) Etkileşim testi: Hayvanlar 10 günlük eğitim süresini tamamladıktan sonra, deneycinin eliyle etkileşim süresi (s cinsinden), eğitimli (gri çubuklar) ve eğitimsiz (beyaz çubuklar) dişi ve erkek Gerbillerde ölçüldü. İki yönlü karma varyans analizi, eğitimin önemli bir ana etkisi (p < 0.05) ve anlamlı bir etkileşim etkisi (p < 0.05) ortaya koydu. Tukey'in HSD testini kullanan post hoc analiz, eğitimli farelerin, eğitimsiz farelere kıyasla deneycinin eliyle önemli ölçüde daha uzun süre etkileşime girdiğini gösterdi (dişiler: p < 0.0001, erkekler: p = 0.0497). Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. Eğitilen kadın sayısı: n= 27; eğitimsiz dişiler: n =16; eğitilen erkekler: n = 16; Eğitimsiz erkekler: n = 5. (B) Açık Alan Testi: Test, eğitim protokolünün tamamlanmasından sonra, özellikle eğitim günü 10'dan sonra gerçekleştirilmiştir. Merkez bölge(ler)de geçirilen kümülatif süre, eğitimli (gri çubuklar) ve eğitimsiz (beyaz çubuklar) dişi ve erkek gerbillerde ölçüldü. Eğitimin merkez bölge keşfi üzerindeki etkilerini analiz etmek için iki yönlü karma ANOVA uygulandı. Tukey'in HSD testi kullanılarak yapılan çoklu karşılaştırmalar, eğitimli kadınların eğitimsiz kadınlara kıyasla merkez bölgede anlamlı olarak daha fazla zaman geçirdiğini ortaya koydu (p = 0.003). Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur. Eğitilen kadın sayısı: n= 27; eğitimsiz dişiler: n =16; eğitilen erkekler: n = 16; Eğitimsiz erkekler: n = 5. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bulgular, deneysel ortamlarda insan etkileşimine gerbilleri alıştırmak için önerilen protokolün etkinliğini göstermektedir. Eğitilen tüm hayvanların istenen görevi 10 gün içinde tamamlama yeteneği, bu yöntemin verimliliğini vurgulamaktadır.

Protokoldeki kritik bir adım, deneycinin eline kademeli olarak alışmaktır ve gerbillerin insan etkileşimini olumlu bir uyaranla ilişkilendirmesini sağlar. Türe özgü ödüllerin kullanılması, eğitim sürecini daha da optimize eder. Eğitim oturumlarının süresini ayarlamak veya ödül türünü değiştirmek gibi değişiklikler, protokolü gerbiller arasındaki bireysel farklılıklara göre daha da uyarlayabilir ve deneyin özel gereksinimleri için optimize edebilir.

Fareler ve Moğol gerbilleri arasındaki davranış ve öğrenme dinamiklerindeki dikkate değer türe özgü farklılıklara odaklanıyoruz. Eğitim protokolleri tasarlanırken bu tür farklılıklar göz önünde bulundurulmalıdır. Örneğin, fareler daha neofobik ve strese duyarlı olma eğilimindedir ve genellikle yeni ortamlara ve insan etkileşimine alışmak için daha fazla zamana ihtiyaç duyarlar28. Buna karşılık, gerbiller daha yüksek keşif dürtüsü ve sosyal merak sergiler, bu da eğitim görevlerine daha hızlı katılımı kolaylaştırabilir29. Bu çalışmada, gerbiller deneycinin eline kolayca yaklaştı ve tıklayıcıyı fareler için tipik olarak bildirilenden daha az oturumda bir ödülle ilişkilendirmeyi öğrendi21,22. Bununla birlikte, gerbiller, özellikle erkeklerde, fare modellerinde daha az belirgin olan cinsiyete özgü stresi veya motivasyon faktörlerini yansıtabilen daha fazla bireysel değişkenlik göstermiştir. Bu ayrımlar, türe uyarlanmış eğitim stratejilerinin önemini vurgulamakta ve gerbillerin gönüllü etkileşime daha fazla vurgu yapan daha kısa, ödül odaklı oturumlardan faydalanabileceğini, farelerin ise daha kademeli duyarsızlaştırma ve tutarlı tekrarlama gerektirebileceğini göstermektedir. Bu davranışsal ve bilişsel farklılıkları anlamak, eğitim protokollerini iyileştirmek ve türler arasında etkinliklerini en üst düzeye çıkarmak için çok önemlidir.

Moğol gerbilleri, belirli bir deney düzeneğine hazırlık yapmak yerine pozitif insan-hayvan etkileşimine ve temel davranışsal koşullandırmaya odaklanan, spesifik olmayan veya genelleştirilmiş tıklama eğitiminden önemli ölçüde yararlanabilir. Bu tür genelleştirilmiş eğitim, kullanım toleransını artırır, bazal stres seviyelerini azaltır ve çok çeşitli deneysel bağlamlarda değerli olan daha öngörülebilir bir davranışsal temel faktörleri teşvik eder30. Spesifik olmayan eğitim, davranışsal esnekliği ve deneyci ile tutarlı gönüllü etkileşimi teşvik ederek hayvanları farklı ortamlara, kurulumlara veya test paradigmalarına daha uyumlu hale getirir 16,31,32. Bu, özellikle hayvanların çeşitli prosedürlere maruz kaldığı uzun süreli çalışmalarda veya çok aşamalı deneylerde faydalıdır. Bu çalışmada, eğitim doğrudan tek bir test protokolüne bağlı olmasa da, gerbiller deneyci ile daha iyi etkileşim gösterdi ve stresle ilgili davranışları azalttı, bu da olumlu pekiştirme yoluyla genel alışkanlığın genel deneysel esnekliği ve hayvan refahını artırabileceği fikrini destekledi.

Deneyci ile artan etkileşime ek olarak, eğitimli dişi hayvanlar açık alan testinin merkez bölgesinde önemli ölçüde daha fazla zaman harcadılar. Bu davranış örüntüsü genellikle, özellikle yeni veya hafif caydırıcı ortamlara yanıt olarak, kemirgenlerde kaygı benzeri davranışlarda bir azalma olarak yorumlanır33. Bu bulgular, clicker eğitiminin kaygının davranışsal göstergelerinin azalmasına katkıda bulunabileceğini ve böylece hayvanların deneysel prosedürlerle başa çıkma kapasitesini artırabileceğini düşündürmektedir. Bu, pozitif pekiştirmeye dayalı alışkanlık protokollerinin laboratuvar gerbillerinde strese dayanıklılığı ve davranışsal stabiliteyi artırabileceğine dair daha geniş bir sonucu desteklemektedir. Stres azaltmanın ötesinde, clicker eğitiminin deneysel sonuçlar için daha geniş etkileri vardır34. Eğitimli gerbiller, araştırma sonuçlarını karıştırabilecek strese bağlı fizyolojik varyasyonları en aza indiren daha fazla kullanım toleransı gösterdi. Laboratuvar tavşanları ve fareler de dahil olmak üzere diğer türlerde de benzer bulgular bildirilmiştir, burada clicker tarafından eğitilmiş hayvanlar artan deneyci etkileşimi ve azalmış idrara çıkma, dışkılama, seslendirme ve yüzmeye çıkma gibi daha az anksiyete ve depresyonla ilgili davranışlar sergilemiştir19,21.

Bu sonuçlar, clicker eğitiminin stresle ilgili tepkilerdeki değişkenliği azaltarak hem hayvan refahını hem de davranışsal verilerin tutarlılığını iyileştirme potansiyelini vurgulamaktadır. Bu protokolün amacının, hayvanları, kan alımı gibi doğası gereği caydırıcı prosedürleri tıklayıcı gibi pozitif uyaranlarla ilişkilendirmeye şartlandırmak olmadığını açıklığa kavuşturmak önemlidir. Daha ziyade amaç, temel stresi azaltmak, hayvanları insan etkileşimine alıştırmak ve nötr veya hafif zorlu görevlere gönüllü katılımı teşvik etmektir. Bazı çalışmalar, hayvanları daha invaziv prosedürlere hazırlamak için pozitif pekiştirmenin kullanımını araştırmış olsada35, bu, dikkatli bir şekilde yapılandırılmış bir duyarsızlaştırma süreci gerektirir ve mevcut protokolün kapsamı dışındadır. Rahatsızlıkla ilişkili bağlamlarda tıklama ipuçlarının yanlış uygulanması, gerçekten de istenmeyen olumsuz çağrışımlara neden olabilir. Bununla birlikte, doğru uygulandığında, olumlu pekiştirme teknikleri, öngörülebilirliği artırarak ve bir dereceye kadar kontrole izin vererek hayvanların potansiyel olarak caydırıcı prosedürlerle başa çıkmalarına yardımcı olabilir36. Köpekler ve insan olmayan primatlar gibi diğer türlerde başarılı bir şekilde gösterildiği gibi, gerbillerin bu tür bağlamlar için güvenilir bir şekilde eğitilip eğitilemeyeceğini belirlemek için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır37,38.

Başarısına rağmen, yöntemin sınırlamaları vardır. Bazı gerbiller, öğrenme hızındaki bireysel değişkenliği gösteren daha uzun alışkanlık süreleri gerektiriyordu. Ek olarak, nispeten düşük sayıda eğitimsiz erkek gerbil, analizin istatistiksel gücünü sınırlayarak sağlam sonuçlar çıkarmayı zorlaştırır. Bu gruptaki örneklem büyüklüğünün arttırılması, sonuçların güvenilirliğini ve yorumlanabilirliğini artıracaktır. Daha ileri çalışmalar, stres tepkileri ve öğrenme mekanizmalarındaki potansiyel cinsiyet farklılıklarını araştırmalıdır.

Bu çalışmanın daha geniş etkileri stres azaltmanın ötesine uzanmaktadır. Standart yetiştiriciliğin bir parçası olarak yapılandırılmış eğitim protokollerinin uygulanması, strese bağlı fizyolojik tepkilerin neden olduğu değişkenliği azaltabilir ve deneysel sonuçların güvenilirliğini artırabilir39,40. Bu, özellikle stresin kritik bir kafa karıştırıcı faktör olduğu sinirbilim veya metabolik araştırma gibi disiplinlerde geçerlidir. İstenmeyen zenginleştirme etkilerinden kaçınmak için eğitim prosedürlerinin dikkatli bir şekilde raporlanması ve standardizasyonu esastır.

İleriye dönük olarak, gelecekteki araştırmalar alternatif takviye programlarını, eğitim prosedürlerinin otomasyonunu ve türler arasındaki uzun vadeli etkileri araştırmalıdır. Artan bilimsel destekle clicker eğitimi, hem veri kalitesini hem de hayvan refahını artırabilecek değerli bir iyileştirme stratejisini temsil eder. Laboratuvarlar arasında eğitim ve kullanım protokollerinin standartlaştırılması, tekrarlanabilirliğin artırılmasına yardımcı olabilir ve biyomedikal araştırmalarda insancıl ve etkili uygulamaların daha geniş çapta benimsenmesini destekleyebilir.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar rekabet eden hiçbir mali çıkar beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Mainz Johannes Gutenberg Üniversitesi Tıp Merkezi Translasyonel Hayvan Araştırma Merkezi tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Kafesler Zoonlab GmbH3010006590 x 380 x 200 mm; 1.815 m2
KameraSonyHDR-CX240Edijital HD Video Kamera Kaydedici
Gıda peletleriSsniffV1644-000Sanat. Nr. I-Clicker-Blau
Ayak Tıklayıcıhttps://www.hundeschulen.com
GraphPad PrizmaGraphPad Yazılımı, Inc.Windows için https://www.graphpad.com/featuresSürüm 10
Açık alan KutuNoldusMXO1S-M001opal 100 x 100 x 40 cm
Kabak çekirdeğiREWE8820911REWE Bio
Pilon görüntüleyiciBaslerhttps://www.baslerweb.com/de-de/software/pylon/
Ayçiçeğitohumları Seeberger4744292
TripodManfrottoGT- mkbfra4gtxp bhBefree GT
TünellerPlexx14179152 x 76 x 3 mm

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Animal Use Alternatives (3Rs). , National Agricultural Library. Accessed May 21, 2025 https://www.nal.usda.gov/animal-health-and-welfare/animal-use-alternatives (2025).
  2. The 3Rs. , NC3Rsy. Accessed May 21, 2025 https://nc3rs.org.uk/who-we-are/3rs (2025).
  3. Locke, P., Romanchik, R., Kincaid, B., Golden, E. The 3RS and non-human animals in biomedical research: the next 65 years. , https://www.ufaw.org.uk/ (2025).
  4. Number of animals used in experiments in 2022. , European Commission. https://webgate.ec.europa.eu/envdataportal/content/alures/section1_number-of-animals.html (2022).
  5. Tierschutzgesetz TierSchG, 2022. , Bundesministerium der Justiz. https://www.gesetze-im-internet.de/tierschg/BJNR012770972.html (2022).
  6. Verwendung von Versuchstieren im Berichtsjahr 2023. , Bundesinstitut für Risikobewertung (BfR). https://www.bf3r.de/de/verwendung_von_versuchstieren_im_berichtsjahr_2023-318066.html (2022).
  7. Mulholland, M. M., Neal Webb, S. J., Schapiro, S. J. Behavioral Needs and Management of Laboratory Animals. Handbook Lab Animal Sci. 4, 14(2021).
  8. Gärtner, K., et al. Stress response of rats to handling and experimental procedures. Lab Anim. 14 (3), 267-274 (1980).
  9. Marcotte, M., et al. Handling Techniques to Reduce Stress in Mice. J Vis Exp. (175), e62593(2021).
  10. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat Meth. 7, 825-826 (2010).
  11. Gouveia, K., Hurst, J. L. Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels. PLoS One. 8 (6), e66401(2013).
  12. Ryabinin, A. E., Wang, Y. M., Finn, D. A. Different levels of Fos immunoreactivity after repeated handling and injection stress in two inbred strains of mice. Pharmacol Biochem Behav. 63 (1), 143-151 (1999).
  13. Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemp Top Lab Anim Sci. 43 (6), 42-51 (2004).
  14. Rinwa, P., Eriksson, M., Cotgreave, I., Bäckberg, M. 3R-Refinement principles: elevating rodent well-being and research quality. Lab Anim Res. 40 (1), 1-11 (2024).
  15. Skinner, B. F. Operant behavior. Ame Psychol. 18 (8), 503-515 (1963).
  16. Leidinger, C. S., Kaiser, N., Baumgart, N., Baumgart, J. Using Clicker Training and Social Observation to Teach Rats to Voluntarily Change Cages. J Vis Exp. (140), e58511(2018).
  17. Pfaller-Sadovsky, N., Hurtado-Parrado, C., Cardillo, D., Medina, L. G., Friedman, S. G. What's in a Click? The Efficacy of Conditioned Reinforcement in Applied Animal Training: A Systematic Review and Meta-Analysis. Animals. 10, 1757(2020).
  18. Prescott, M. J., Buchanan-Smith, H. M. Training laboratory-housed non-human primates, part 1: a UK survey. Animal Welfare. 16, 21-36 (2007).
  19. Hohlbaum, K., Kahnau, P., Wilzopolski, J., Fischer-Tenhagen, C. Training Laboratory Rabbits to Refine Routine Husbandry Procedures. J Vis Exp. (204), e66008(2024).
  20. Jüchter, C., Beutelmann, R., Klump, G. M. Speech sound discrimination by Mongolian gerbils. Hear Res. 418, 108472(2022).
  21. Leidinger, C., Herrmann, F., Thöne-Reineke, C., Baumgart, N., Baumgart, J. Introducing clicker training as a cognitive enrichment for laboratory mice. J Vis Exp. , e55415(2017).
  22. Dickmann, J., et al. Clicker training mice for improved compliance in the catwalk test. Animals. 12 (24), 3545(2022).
  23. Leidinger, C. Refinement Strategies in Breeding and Keeping of Laboratory Mice. , https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/2088 (2018).
  24. Brown, S. A. Small mammal training in the veterinary practice. Vet Clin North Am Exotic Animal Pract. 15 (3), 469-485 (2012).
  25. Mankin, E. A., et al. The hippocampal code for space in Mongolian gerbils. Hippocampus. 29 (9), 787(2019).
  26. Busch, M., et al. Tiergerechte Haltung von Mongolischen Wüstenrennmäusen (Meriones unguiculatus). , gv-solas.de. (2021).
  27. Bridges, N. J., Starkey, N. J. Sex differences in Mongolian gerbils in four tests of anxiety. Physiol Behav. 83, 119-127 (2004).
  28. Walker, M. D., Mason, G. Female C57BL/6 mice show consistent individual differences in spontaneous interaction with environmental enrichment that are predicted by neophobia. Behav Brain Res. 224 (1), 207-212 (2011).
  29. Anselme, P. Animal Behavior and Cognition Exploratory Search: Information Matters More than Primary Reward. Animal Behav Cogni. 10 (4), 366-383 (2023).
  30. Tejedor-Real, P., Sahagún, M., Biguet, N. F., Mallet, J. Neonatal Handling Prevents the Effects of Phencyclidine in an Animal Model of Negative Symptoms of Schizophrenia. Biol Psychiatry. 61 (7), 865-872 (2007).
  31. Chen, K., et al. Exercise training improves motor skill learning via selective activation of mTOR. Sci Adv. 5 (7), eaaw1888(2019).
  32. Codita, A., et al. Effects of spatial and cognitive enrichment on activity pattern and learning performance in three strains of mice in the IntelliMaze. Behav Genet. 42 (3), 449-460 (2012).
  33. Wang, S., et al. The different baseline characteristics of cognitive behavior test between Mongolian gerbils and rats. Behav Brain Res. 352, 28-34 (2018).
  34. Baumans, V., Van Loo, P. L. P. How to improve housing conditions of laboratory animals: The possibilities of environmental refinement. Vet J. 195 (1), 24-32 (2012).
  35. Fiderer, D., Thoene-Reineke, C., Wiegard, M. Clicker Training in Minipigs to Reduce Stress during Blood Collection-An Example of Applied Refinement. Animals. 14 (19), 2819(2024).
  36. Layton, R., et al. A Positive-Reinforcement Training Regimen for Refined Sample Collection in Laboratory Pigs. Animals. 15 (4), 471(2025).
  37. Schapiro, S. J., Bloomsmith, M. A., Laule, G. E. Positive reinforcement training as a technique to alter nonhuman primate behavior: Quantitative assessments of effectiveness. J Appl Animal Welfare Sci. 6 (3), 175-187 (2003).
  38. Meunier, L. V. D. Selection, Acclimation, Training, and Preparation of Dogs for the Research Setting. ILAR J. 47 (4), 326-347 (2006).
  39. Golbidi, S., Frisbee, J. C., Laher, I. X. Chronic stress impacts the cardiovascular system: Animal models and clinical outcomes. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (12), H1476-H1498 (2015).
  40. Liu, X., Zheng, X., Liu, Y., Du, X., Chen, Z. Effects of adaptation to handling on the circadian rhythmicity of blood solutes in Mongolian gerbils. Animal Model Exp Med. 2 (2), 127-131 (2019).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Clicker E itimiLaboratuvar Hayvan RefahT re zg Tutma ve Ta maBili sel Zenginle tirmeMo ol GerbilleriDavran sal De erlendirmeA k Alan Testinsan Hayvan Etkile imi
Video yakında

İlgili makaleler