Yöntem makalesi

Elektroakupunktur ile Nöral Devreler-visseral Fonksiyonların Düzenlenmesinde Fiber Fotometri Kaydı ile Kombine Optogenetiğin Uygulanması

DOI:

10.3791/68667

⸱

19 Eylül 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu deneyin amacı, optogenetik, intraserebral kalsiyum sinyal kaydı ve gastrik motilite izlemenin eşzamanlı entegrasyonu için yeni bir yaklaşım oluşturmak ve somatik stimülasyon ile akupunktur araştırmalarına uygulanan nöral devre-viseral fonksiyon etkileşimleri arasındaki ilişkinin gerçek zamanlı izlenmesi için yeni bir paradigma sunmaktır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, belirli nöron tiplerinin optogenetik manipülasyonu ve Zusanlı'daki elektroakupunkturun (ST36) in vivo anestezi altındaki farelerde nükleer kalsiyum sinyalleri ve mide hareketliliği üzerindeki etkilerinin gerçek zamanlı kaydı için bir tekniği açıklamaktadır. Akupunkturun etkinliğinin altında yatan merkezi mekanizmaların araştırılması teknolojik kısıtlamalarla sınırlandırılmıştır. Ancak optogenetik ve optik görüntüleme teknolojisindeki ilerlemeler sinir biliminin gelişimini hızlandırmıştır. Nöronal aktivitenin göstergesi olan kalsiyum dinamiklerindeki değişiklikleri görselleştirmek için başlangıçta genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerinden yararlanan fiber fotometri kaydı, beyin-davranış korelasyonlarını in vivo olarak karakterize etmek için önemli bir teknoloji olarak öne çıkıyor. Optogenetiğin uygulanması, nöronların genetik olarak kodlanmasını sağlayarak, ışık uyarımına yanıt olarak aktivasyonlarını veya inhibisyonlarını mümkün kılar. Bu yetenek, nöral devre işlevi ile davranışsal sonuçlar arasında nedensel bağlantıların kurulmasını kolaylaştırır. Eşzamanlı lif fotometrisi, kalsiyum kaydı ve optogenetik stimülasyon, nöronal aktivitenin gerçek zamanlı kaydı ve manipülasyonu için bir yöntem sağlar ve akupunkturun merkezi mekanizmalarını araştırmak için etkili bir yaklaşım olarak hizmet eder. Bununla birlikte, akupunktur araştırmalarında lif fotometrisi, kalsiyum kaydı, optogenetik ve viseral fonksiyon izlemenin eş zamanlı kullanımını belgeleyen çalışmaların azlığı devam etmektedir. Bu deneyin sonuçları, EA-ST36'nın PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT devresi ile ilgili mide hareketliliğini düzenleyebileceğini göstermektedir. Bu devrenin optogenetik uyarımı aynı etkiyi yaratır. İkisinin üst üste binmesinden sonra, kalsiyum sinyali ve mide hareketliliğindeki değişiklikler maksimuma ulaşır. Bu çalışma, optogenetik, intraserebral kalsiyum sinyal kaydı ve gastrik motilite izlemenin eşzamanlı entegrasyonu için yeni bir yaklaşım oluşturarak, somatik stimülasyon ile nöral devre-viseral fonksiyon etkileşimleri arasındaki ilişkinin gerçek zamanlı izlenmesi için yeni bir paradigma sunmuştur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Son yıllarda, biyomoleküler floresan sensörlerin yaygınlaşması, moleküler biyolojide fiber fotometrinin kullanımını teşvik ederek in vivo kaydıkolaylaştırmıştır 1. Bu ilerleme, beyindeki nöronal aktivite değişikliklerinin gerçek zamanlı izlenmesini sağlar. Optogenetiğin entegrasyonu, nöronal manipülasyona izin vererek, optik fiberi basitçe yerleştirerek optogenetik ve optik fiber kaydını anında gerçekleştirme avantajını sunar. Viseral fonksiyon kaydı ile birleştirilen bu yöntem, akupunkturun nöronal aktivite modifikasyonları yoluyla viseral fonksiyonları nasıl modüle ettiğini gözlemlemek için iyi bir zamansal çözünürlük ve çekirdek düzeyinde hedefleme sunar.

Çok sayıda çalışma, akupunkturun gastrointestinal fonksiyon 2,3,4 üzerindeki belirgin düzenleyici etkisini göstermiştir, ancak kesin merkezi mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. HuangDiNeiJing gibi birçok eski Çin tıp kitabı, ST36'nın (diz ekleminin arkasındaki yan tarafta, caput fibula5'ten yaklaşık 2 mm aşağıda) gastrointestinal hastalıkları tedavi etmek için sıklıkla kullanıldığını da kaydetmiştir. Son çalışmalar, gastrik fizyolojik süreçlerde (örneğin, beslenme davranışı6, yemeyi bırakma7, iştah bastırma8) ve patolojik süreçlerde (örneğin, mide ağrısı9, mide disfonksiyonu10) yer alan çekirdeklerin parasubtalamik çekirdeği (PSTn), dorsal rafe çekirdeğini (DRN), lateral parabrakiyal çekirdeği (LPB), soliter yolun çekirdeğini (NTS) ve vagusun dorsal motor çekirdeğini (DMV) kapsadığını göstermiştir. Çalışmalar, ST36'daki elektroakupunkturun DMV'deki c-Fos+ hücrelerinin sayısını artırabildiğini ve böylece NTS11'in kaudal alt çekirdeğindeki c-Fos+ ekspresyonunu artırabildiğini göstermiştir. Ek olarak, Parasentriküler çekirdeğin (PBN) parasentriküler nükleer kompleksin bileşiminde yer aldığı, gastrointestinal sinyaller12,13 gibi viseral duyusal bilgilerin entegrasyonunda önemli bir rol oynayan medulla oblongata NTS'ye yansıyabileceği belgelenmiştir. Yukarıdaki bilgiler, akupunkturun potansiyel olarak mide motilitesini modüle edebileceğini, PBN Glu-NTS Glu-DMV ChAT nöral devresi ile ilişkili olabileceğini düşündürmektedir. Glutamaterjik nöronlar öncelikle LPB ve NTS14'te yer alırken, kolinerjik nöronlar esas olarak gastrik fizyolojik ve patolojik süreçler sırasında DMV'de yer alır15. Akupunkturun nöral devreler ve viseral fonksiyonlar üzerindeki düzenleyici etkilerinin araştırılması, akupunktur mekanizmalarının daha net anlaşılmasını sağlayabilir ve viseral hastalıklarda klinik akupunktur müdahaleleri için teorik destek sağlayabilir.

Bununla birlikte, teknik sınırlamalar nedeniyle, viseral fonksiyonları modüle etmede elektroakupunkturun nöral devre mekanizmalarını araştıran sınırlı araştırma yapılmıştır. Bu nedenle, bu çalışma, ayrıntılı virüs enjeksiyonu sürecini tanıtmak için basitleştirilmiş kılavuzlar sunmaktadır. Özellikle, bu yazıda açıklanan metodoloji, akupunkturun çeşitli viseral fonksiyonları düzenlemesinde rol oynayan devre mekanizmalarını aydınlatmak için kullanılabilir.

Bu nedenle, bu çalışma, kalsiyum görüntüleme kaydı için optogenetiği fiber fotometri ile birleştirerek akupunkturun PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT nöral devresi ile ilişkili olabilecek gastrik motilite üzerindeki düzenleyici etkilerini araştırmayı amaçlamaktadır. Amaç, kalsiyum görüntüleme ve optogenetik senkronizasyon için bir protokol oluşturmak, viseral fonksiyon ve nöral devreleri araştırmak için yeni bir araştırma çerçevesi sunmaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm prosedürler, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından belirlenen laboratuvar hayvanı bakımı ve kullanımı için yönergeleri takip etti ve Akupunktur & Yakı Enstitüsü, Çin Tıp Bilimleri Akademisi'nin Hayvan Bakımı ve Kullanımı Etik Komitesi'nden onay aldı. Viral enjeksiyon ve fiber optik implantasyon için 25 g ağırlığındaki yetişkin erkek C57 fareleri kullanıldı. Hayvan deneyi protokolü, "Laboratuvar Hayvanlarının Refahının Etik İncelemesi için Kılavuz İlkeler" (GB/T 35892-2018) ulusal standardının gerekliliklerine sıkı sıkıya bağlı kaldı ve kurumun Etik Kurulu tarafından onaylandı.

NOT: Virüs enjeksiyonu ve fiber optik implantasyonu işlemi sırasında ortamı temiz tutun. Tüm operasyon boyunca maske takın. Viral yüksek ekspresyon periyodunu (21-28 gün) takiben, gastrik motiliteyi kaydetmek için ST36'da elektroakupunktur ve optogenetik manipülasyonları yapıldı. Hayvanlar, Çin Tıp Bilimleri Akademisi Akupunktur ve Yakı Enstitüsü'nün hayvan tesisinde, kontrollü koşullar altında (sıcaklık: 22-24 °C, nem: %50-%60, 12 saat aydınlık-karanlık döngüsü), yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlanarak barındırıldı. Kullanılan reaktifler ve ekipmanla ilgili özel bilgiler Malzeme Tablosunda bulunabilir.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

  1. Yüksek sıcaklıkta sterilizasyona tabi tutulan cerrahi aleti dezenfekte edin ve cerrahi alanı %70 etanol ile temizleyin.
  2. Anestezi: Fareye% 1.25 tribromoetanol (0.2 mL / 10 g ağırlık) intraperitoneal enjeksiyonu uygulayın. Anestezi derinliğini ölçmek için ayak parmağı sıkıştırma refleksinin yokluğunu değerlendirin.
  3. Saçları kafadan tıraş edin ve fareleri kulak ve diş çubuklarıyla donatılmış stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin. Cerrahi ışıktan zarar görmemesi için farelerin gözlerine eritromisin merhem sürün.
  4. Fiber optik halkayı (yüksük boyutu: 1,25 mm beyaz yüksük, fiber tipi: 200/0,37, fiber uzunluğu: 5,5 mm, yüksük iğnesi modeli: V8475) 30 dakika boyunca %75 etanol içinde bekletin ve ardından %70 etanolü tuzlu su ile yıkayın.
  5. Mikro enjektörü (1 μL) parafin (800-900 nL) ile yükleyin. Cam tüpü eritin ve iki bölüme ayırın. Enjeksiyon iğnesi olarak görev yapmak için bir iğne taşlama makinesi kullanarak uçtaki bir bölümü keskinleştirin. Mikro enjektörün gaz sızdırmazlığını sağlamak için tüpü parafinle doldurun ve bir tutkal tabancası kullanarak ucundaki mikro enjektöre bağlayın.

2. Viral enjeksiyon ameliyatı

  1. Kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisini gözlerden boynun arkasına kadar orta hat boyunca kesin. Daha sonra, oksipital kemiği ortaya çıkarmak için boyun kaslarını çıkarın. Kemik yüzeyini Hile silin 2O2 30 saniye boyunca ve ardından deri altı fasya ve bağ dokularını çıkarmak için kuru bir pamuklu çubukla temizleyin (Şekil 1A).
    NOT: Bu adım, diş çimentosunun oksipital kemiğe kaplanmasını kolaylaştırmak ve optik fiberin daha stabil bir şekilde sabitlenmesini sağlamaktır.
  2. Kafatasını düzleştirin.
    1. X ekseni tesviyesi: Koronal sütürde Bregema noktasından 3,5 mm uzakta olan iki noktayı işaretleyin ve iki noktayı bir çizgi oluşturacak şekilde birleştirin. Bu çizginin orta noktası sıfırdır. Orijinden 3,5 mm uzaklıktaki kemik yüzeyindeki Z ekseni farkının mutlak değeri 0,03 mm'≤ olmalıdır.
    2. Y ekseni tesviyesi: Lambdoid sütürde Lambda noktasından 3,5 mm uzakta olan iki noktayı işaretleyin, iki noktanın orta noktasını ayarlayın ve bu orta noktayı bir çizgi oluşturacak şekilde Lambda noktasına bağlayın. Bu çizginin orta noktası başka bir sıfırdır. Bu sıfır ile X ekseni sırasında kemik yüzeyinin ayarlandığı sıfır arasındaki Z ekseni farkının mutlak değeri 0,03 mm'≤ olmalıdır.
  3. Virüs enjeksiyonunun stereotaktik koordinatlarını bir işaretleyici kalemle işaretleyin. PBN için: -1,1 mm Anterior-Posterior (AP,Y ekseni), -5,45 mm Medial-Lateral (ML, X ekseni), -3,3 mm Dorsal-Ventral (DV, Z ekseni) (sıfır noktası bregma ile); NTS için: -0,35 mm AP, 0,2 mm ML, -3,3 mm DV (oksipital kemiğin en yüksek noktası sıfır noktası olacak şekilde); DMV için: -0,35 mm AP, 0,0 mm (oksipital kemiğin en yüksek noktası), -3,5 mm DV (oksipital kemiğin en yüksek noktası sıfır noktası olacak şekilde) (Şekil 1B). Beyin yüzeyini ortaya çıkarmak için belirlenen bölgelerden kafatasına nüfuz etmek için yüksek hızlı bir mikro matkap (0,8 mm matkap çapı) kullanın. Daha sonra, dura mater'i nazikçe delmek için ince forseps kullanın ve çıkarın, beyin yüzeyindeki nemi korumak için delinmiş açıklığa salin uygulayın.
  4. Kafatası yüzeyine (delinmiş bölge hariç) Single Bond Universal yapıştırıcı uygulayın ve kürlenmesi için 30 saniye ışığa maruz bırakın. Güçlü yapışma sağlamak için tek bağlı üniversal yapıştırıcıyı uygulamadan önce kuru bir kafatası yüzeyinin korunması önemlidir. Ayrıca uygulama sırasında yapıştırıcının kaslara bulaşmasından kaçınılmalıdır.
  5. Mikro enjektörü stereotaktik bir aparatın mekanik koluna takın. 250 nL virüs (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA) ile doldurun. İğne ucunun beyin yüzeyi ile teması üzerine derinliği (Z) 0 olarak ayarlayın. İğneyi parabrakiyal çekirdek (PBN) içindeki hedef bölgeye indirin ve virüsü PBN bölgesine 35 nL/dak hızında enjekte edin. Enjeksiyondan sonra iğneyi 10 dakika yerinde tutun, ardından 6 mm/dak hızla geri çekin. Daha sonra, iğneyi temizlemek için salin içeren bir Eppendorf tüpüne daldırın (Şekil 1C, D).
    NOT: Aşağıdaki tüm virüslerin enjeksiyon dozları 250 nL'dir; DMV 100 nL 16,17'dir.
  6. rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPRE'leri nükleus traktus solitarius'a (NTS) ve rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA'yı vagusun dorsal motor çekirdeğine (DMV) enjekte etmek için aynı protokolü kullanın (Şekil 1D). Tüm virüs titreleri ≥ 1 × 1012 VG/mL'dir.

3. Optik fiber implant ameliyatı

  1. Fiber optik halkayı optrode tutucu ile sabitleyin ve stereotaktik aparatın mekanik koluna takın. DMV viral enjeksiyon bölgesinin yaklaşık 100 μm yukarısındaki bir konuma karşılık gelen implantasyon koordinatlarını ayarlayın (Şekil 1E, F).
  2. 1-3 g diş çimentosunu 1 mL oda sıcaklığında sertleştirilmiş reçine ile homojen olana kadar karıştırın. Karışımı, fiber optik halkanın üst kısmının 5 mm'sini açıkta bırakarak, fiber optik halkanın etrafına ve kafatası yüzeyine derhal uygulayın. Çimento katılaştığında, tutucu vidayı serbest bırakın, kaldırın ve tutucuyu çıkarın (Şekil 1G).
  3. Farelerin posterior oksipital kafa derisini dikmek için emilebilir cerrahi dikişler (6-0) kullanın. Fareleri stereotaktik çerçeveden çıkarın ve anesteziden kurtulmak için sıcak bir ortama yerleştirin. Hayvanlar sınırsız hareket sergiledikten sonra, konaklama için temiz ve ferah bir kafese yerleştirildiler, 4-5 fare bir arada barındırıldı ve yiyecek ve suya serbest erişime izin verildi.
    NOT: Deney sırasında, daha büyük bir kafesin farelerin normal hareketi için faydalı olduğu ve kilolarını korumak için çok önemli olduğu gözlemlendi. Artan alan aynı zamanda implante edilen fiberle kazara temas olasılığını da azaltır, böylece potansiyel hasarı en aza indirir. 25 g veya daha ağır olan fareler, akupunktur üzerine intragastrik basınçta önemli değişiklikler gösterdi.

4. Balon yerleştirme ameliyatı

  1. Viral ekspresyonun zirvesinde (21-28 gün), fareleri 4-5 saat aç bırakın. Daha sonra, fareleri% 1.25 tribromoetanol (0.1 mL / 10 g ağırlık) intraperitoneal enjeksiyonu ile uyuşturun. 15 dakika sonra,% 10 Etil karbamat çözeltisinin (0.15 mL / 10 g ağırlık) intraperitoneal enjeksiyonunu uygulayın. Ayak parmağı sıkıştırma refleksinin olmadığını doğrulayarak anestezi derinliğini değerlendirin.
  2. Karın ve ST36 bölgelerindeki tüyleri tıraş edin. Isıtma yastığını açın ve sabit bir vücut ısısı sağlamak için hayvan ameliyat boyunca ısıtma yastığı üzerinde tutularak 37 °C'lik bir sıcaklığı koruyacak şekilde ayarlayın.
  3. Lateks balonu şırıngaya bağlayın ve lateks balonda (BS4 73-2787) hava kaçağı olup olmadığını kontrol etmek için içine hava enjekte edin.
  4. Mideyi ve duodenumun bir kısmını ksifoid çıkıntının altına maruz bırakın. Duodenumda yaklaşık 0,3 cm uzunluğunda, pilorun 0,5-1 cm distalinde küçük bir kesi yapın.
  5. Balonu, düğüm pilor sinüsüne yerleştirilecek şekilde duodenal kesiden bağırsak yönü boyunca mideye yerleştirin.
  6. Şırınganın iğnesini çıkarın, 5 mL saf su doldurun, havayı boşaltın ve balonun diğer ucunu şırıngaya bağlayın. Balondaki gazı boşaltmak için şırınganın luer kilidini yukarı doğru çekin, ardından saf suyu balona enjekte etmek için luer kilidini indirin. Düzeneği üç bir vanaya ve bir basınç dönüştürücüye bağlayın.

5. İntragastrik basıncın senkron kaydı ve kalsiyum görüntüleme

  1. Neurolog Digitimer Model, CED Micro1401-4, Inper Studio, Multichannel fiber optik kayıt sistemi, Inper Signal yazılımı ve Spike 2 yazılımını açın. Inper yazılımını, kalsiyum sinyal kaydını Spike2 yazılımı ve optogenetik stimülatör tarafından tetiklenecek şekilde ayarlayın ve Inper yazılımı tarafından lazer stimülasyonu ve kalsiyum sinyali alımının Spike2 yazılımı tarafından intragastrik basınç kaydıyla uyumlu olmasını sağlayın.
  2. Balona bağlanan tüm üç muslukları açın, Neurolog sayısallaştırıcı Modelindeki SIFIR düğmesini çevirin ve Spike 2 yazılımında taban çizgisinin 0 noktasına ayarlanıp ayarlanmadığını gözlemleyin. Balonun içindeki basıncı atmosferik basınçla eşitledikten sonra, intragastrik basınç 15-35 cm H2O görüntülenene kadar balonun içine saf su enjekte edin. Hem intragastrik basınç hem de kalsiyum sinyalleri stabil bir duruma ulaştığında, DMV'de intragastrik basınç ve kalsiyum sinyallerinin 60 s'lik bir taban çizgisini kaydedin (Şekil 2A).

6. ST36'da elektroakupunktur ve Lazer stimülasyonu

  1. Sol ST36 akupunktur noktasına bir akupunktur iğnesi (0,25 mm × 25 mm) sokun ve bir elektroakupunktur aparatına (10 Hz, 1 mA) bağlayın. İntragastrik basınç ve kalsiyum sinyallerindeki değişiklikleri kaydederken 60 saniye boyunca elektroakupunktur uygulayın.
  2. Başlangıç intragastrik basıncının ve kalsiyum sinyallerinin stabilizasyonunu takiben, intragastrik basınç ve kalsiyum sinyallerindeki değişiklikleri izleyerek 60 saniye boyunca lif boyunca optogenetik stimülasyon (635 nm, 5 ms, 5 Hz, 30 mW) verin.
  3. İntragastrik basınç ve kalsiyum sinyallerinin taban çizgisi tekrar stabilize olduğunda, elektroakupunkturu ST36'da (10 Hz, 1 mA) optogenetik stimülasyonla (635 nm, 5 ms, 5 Hz) 60 saniye boyunca birleştirin ve intragastrik basınç ve kalsiyum sinyallerindeki değişiklikleri kaydedin.

7. Viral enjeksiyon ve lif yerleştirmenin histolojik incelemesi

  1. Yukarıda belirtilen protokollerin tamamlanmasının ardından, farelere salin uygulayın ve hemen kalp yoluyla% 4 paraformaldehit ile sabitleyin. Farelerin beyinlerini hasat edin. %20 ve %30 sakaroz çözeltileri kullanarak gradyan dehidrasyonu gerçekleştirin, ardından hızlı dondurarak gömme maddesi ile gömdükten sonra kesitleyin. Virüs enjeksiyonu ve fiber optik implantasyon pozisyonlarının doğru olup olmadığını gözlemlemek için beyin dilimlerini farelerin beyin haritalarıyla karşılaştırın. Viral enjeksiyonların ve fiber implantların hassas konumlandırılması, intragastrik basınç ve kalsiyum sinyal verilerinin geçerliliğini destekledi (Şekil 1H,I).

8. Veri analizi

  1. Inper Veri Analizi yazılımını kullanarak kalsiyum sinyal verilerini ve Spike2 yazılımı ile mide hareketliliği verilerini analiz edin. Farklı uyaranların gastrik motilite ve kalsiyum sinyalleri üzerindeki düzenleyici etkilerini gözlemlemek için stimülasyon sırasındaki (60 s) ve stimülasyondan öncekiler (60 s) arasındaki kalsiyum sinyalleri veya gastrik motilite genlikleri arasındaki farkları karşılaştırın. Şekil 2'de gösterilen tüm veriler orijinal veri grafikleridir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Virüsler, DMV'ye implante edilen bir fiber ile farelerin parabrakiyal çekirdeğine (PBN), nükleus traktus solitarius'a (NTS) ve vagusun dorsal motor çekirdeğine (DMV) enjekte edildi (Şekil 1A-G). Pik viral ekspresyon döneminde, ST36'da elektroakupunktur ve optogenetik stimülasyonu takiben DMV içindeki intragastrik basınç ve kalsiyum sinyallerindeki değişiklikler kaydedildi. Bu çalışmanın amacı, ST36'da elektroakupunkturun ve optogenetik stimülasyonun PBNGlu-NTS

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akupunkturun merkezi bilimsel araştırması, otonom sinirlerin akupunktur noktası uyarımı yoluyla hedef organların düzenlenmesi ile ilgilidir. Q. Ma tarafından önerilen bulgular, akupunkturun uzak organ fonksiyon modülasyonu üzerindeki etkisinin, özellikle gastrointestinal hastalıklar ve sistemik inflamasyonla ilgili olanlar olmak üzere sempatik ve/veya parasempatik yolları aktive eden somatik otonomik reflekslerden kaynaklandığını ileri sürmüştür18. Bununla birlikt...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82174518, 82474661), Merkezi Kamu Refahı Araştırma Enstitüleri için Temel Araştırma Fonları (ZZ-2023008) ve Çin Çin Tıp Bilimleri Akademisi'nin Bilimsel ve Teknolojik Yenilik Projesi (CI2021A03402) tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Virüs
rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH poliA (AAV2/9)Beyin VTA'sıKedi#PT-0020
rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPRE'ler (AAV2/9)Beyin VTA'sıKedi#PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)Beyin VTA'sıKedi#PT-10973
Diğer
1 μ L mikro enjektörHamilton80135
3M EPSP Tek Bağ Üniversal YapıştırıcıDiş Dünyası Yetkilisi41269
Akupunktur İğnesiZhongYanTaiHe0.25/13 sn.
CED Mikro1401-4CED(İngiltere)1401-4
Diş çimentosu/Oda sıcaklığında sertleştirilmiş reçineYAMAHACHI DİŞYOK
İnce ForsepsGeri sarF11028-13 Serisi
Cam tüpDünya Hassas Aletler504949
HANS-200AHANS EnstitüsüHANS-200
Inper Signal (yazılım)InperYOK
Inper Studio(Venüs)InperB1502 Serisi
Lateks balonHarward AparatıBS4 73-2787
Çok kanallı fiber optik kayıt sistemi (Vista Pro)InperR5268 Serisi
Neurolog digitimer Model DijitalNL900D
Optik fiber ferrule InperV8475 Serisi
Spike 2 (yazılım)CED(İngiltere)YOK
Stereotaksik aletler (koordinat hesaplayıcı ile)David Kopf EnstrümanlarıKOPF 942 Serisi
TribromoetanolSigmaT48402 Serisi
tribromoetanolSigma T48402 Serisi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, S., et al. Perspective of calcium imaging technology applied to acupuncture research. Chin J Integr Med. 30 (1), 3-9 (2024).
  2. Xu, X., et al. Mechanism of electro-acupuncture in alleviating intestinal injury in septic mice via polyamine-related M2-macrophage polarization. Front Immunol. 15, e1373876(2024).
  3. Yaklai, K., Pattanakuhar, S., Chattipakorn, N., Chattipakorn, S. C. The role of acupuncture on the gut-brain-microbiota axis in irritable bowel syndrome. Am J Chin Med. 49 (2), 285-314 (2021).
  4. Wang, X. Y., Wang, H., Guan, Y. Y., Cai, R. L., Shen, G. M. Acupuncture for functional gastrointestinal disorders: a systematic review and meta-analysis. J Gastroenterol Hepatol. 36 (11), 3015-3026 (2021).
  5. China Association of Acupuncture and Moxibustion. Nomenclature and location of acupuncture points for laboratory animals Part 3: Mouse. World J Acupunct Moxibustion. 35 (2), 160-166 (2025).
  6. Chen, J., et al. A vagal-NTS neural pathway that stimulates feeding. Curr Biol. 30 (20), 3986-3998 (2020).
  7. Campos, C. A., Bowen, A. J., Schwartz, M. W., Palmiter, R. D. Parabrachial CGRP neurons control meal termination. Cell Metab. 23 (5), 811-820 (2016).
  8. Zhang, T., Perkins, M. H., Chang, H., Han, W., de Araujo, I. E. An inter-organ neural circuit for appetite suppression. Cell. 185 (14), 2478-2494 (2022).
  9. Zhang, F. C., et al. A vagus nerve dominant tetra-synaptic ascending pathway for gastric pain processing. Nat Commun. 15 (1), 9824(2024).
  10. Dong, W. Y., et al. Brain regulation of gastric dysfunction induced by stress. Nat Metab. 5 (9), 1494-1505 (2023).
  11. Iwa, M., Tateiwa, M., Sakita, M., Fujimiya, M., Takahashi, T. Anatomical evidence of regional specific effects of acupuncture on gastric motor function in rats. Auton Neurosci. 137 (1-2), 67-76 (2007).
  12. Browning, K. N., Travagli, R. A. Central nervous system control of gastrointestinal motility and secretion and modulation of gastrointestinal functions. Compr Physiol. 4 (4), 1339-1368 (2011).
  13. Sun, L., et al. Parabrachial nucleus circuit governs neuropathic pain-like behavior. Nat Commun. 11 (1), 21(2020).
  14. Simpson, E., et al. Lights, fiber, action! A primer on in vivo fiber photometry. Neuron. 112 (5), 718-739 (2024).
  15. Tao, J., et al. Highly selective brain-to-gut communication via genetically defined vagus neurons. Neuron. 109 (13), 2106-2115 (2021).
  16. Yao, L., Ye, Q., Liu, Y., et al. Electroacupuncture improves swallowing function in a post-stroke dysphagia mouse model by activating the motor cortex inputs to the nucleus tractus solitarii through the parabrachial nuclei. Nat Commun. 14 (1), 810(2023).
  17. Lyu, Q., Xue, W., Liu, R., et al. A brain-to-gut signal controls intestinal fat absorption. Nature. 634 (8035), 936-943 (2024).
  18. Ma, Q. Somatotopic organization of autonomic reflexes by acupuncture. Curr Opin Neurobiol. 76, e102602(2022).
  19. Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
  20. Liu, S., et al. Somatotopic organization and intensity dependence in driving distinct NPY-expressing sympathetic pathways by electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
  21. Luo, L. Architectures of neuronal circuits. Science. 373 (6559), eabg7285(2021).
  22. Yuan, Z., et al. A corticoamygdalar pathway controls reward devaluation and depression using dynamic inhibition code. Neuron. 111 (23), 3837-3853 (2023).
  23. Feng, J., et al. Monitoring norepinephrine release in vivo using next-generation GRABNE sensors. Neuron. 112 (12), 1930-1942 (2024).
  24. Smith, J., et al. Regulation of stress-induced sleep fragmentation by preoptic glutamatergic neurons. Curr Biol. 34 (1), 12-23 (2024).
  25. Li, Y., Liu, Z., Guo, Q., Luo, M. Long-term fiber photometry for neuroscience studies. Neurosci Bull. 35 (3), 425-433 (2019).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Optogenetik Stim lasyonKalsiyum Sinyali KaydN ral Devre Reg lasyonuGastrik MotiliteViseral FonksiyonGenetik Olarak Kodlanm ndikat rlerGer ek Zamanl Kay tBeyin Davran Korelasyonu

İlgili makaleler