Method Article

Postmenopozal Osteoporozun Sıçan Modelinde Bupleurumun Kemik Koruyucu Rolü

DOI:

10.3791/68675

⸱

August 22nd, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1YouJiang Medical University for Nationalities, 2Affiliated Hospital of YouJiang Medical University for Nationalities, 3ShenZhen International Travel Health Care Center (ShenZhen Customs Port Clinic)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, Bupleurum (Chai hu) oral sıvısının proinflamatuar faktörleri baskılayarak ve anti-inflamatuar faktörleri artırarak kemik mikroyapısını iyileştirdiğini göstermek için postmenopozal osteoporozun yumurtalıklı bir sıçan modeli kullandık. Bu, anti-enflamatuar mekanizmasının östrojen eksikliğine bağlı osteoporozu kısmen azalttığını göstermektedir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokol, Chai hu uygulamasının overiektomize (OVX) sıçanlarda postmenopozal osteoporoz üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçlamaktadır. Sekiz haftalık dişi Sprague-Dawley sıçanlarına, postmenopozal osteoporoz modeli oluşturmak için dorsal yaklaşım kullanılarak bilateral overektomi uygulandı. Art arda 12 hafta boyunca oral gavaj ile farklı dozlarda Chai hu oral sıvı uygulandı, ardından kemik mikroyapısının değerlendirilmesi ve inflamatuar sitokin seviyelerinin ölçümleri yapıldı. Orta ve yüksek doz Chai hu tedavisi, OVX sıçanlarında kemik kaybını kısmen inhibe etti, proinflamatuar sitokin ekspresyonunu azalttı ve anti-inflamatuar sitokin seviyelerini artırdı. Düşük dozlardan yüksek dozlara kadar kemik yıkımının şiddetinde önemli bir azalma oldu ve kemik mikroyapısal rekonstrüksiyonunda doza bağlı iyileşmeler gözlendi. Chai hu, östrojen eksikliğine bağlı kemik kaybını ve mikroyapısal bozulmayı hafifletti, böylece bu OVX modelinde OP ilerlemesini baskıladı. Bunun, ilgili yolların anti-enflamatuar etkilerinden kaynaklanmış olması muhtemeldi.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Osteoporoz (OP), kemik kütlesinde azalma, kemik kuvvetinde azalma ve kemik mikromimarisinin harabiyeti ile karakterize yaygın bir metabolik kemik hastalığıdır1. OP, birincil veya ikincil olarak ortaya çıkabilir ve birincil OP, postmenopozal OP (PMOP), senil OP ve idiyopatik OP (genellikle ergenlerde görülür) olarak sınıflandırılır. Bunlar arasında, tip I PMOP esas olarak, dolaşımdaki östrojen2 seviyelerinin azalması nedeniyle menopozdan sonra kemik yoğunluğunda belirgin bir azalmanın olduğu PM kadınlarında görülür. Sistemik bir metabolik kemik hastalığıdır ve osteoklast aktivitesinin artması ve yoğun diferansiyasyonile sonuçlanır 3. Ek olarak, kemik rezorpsiyonunun yoğunluğu oluşumundan çok daha fazladır, bu da kemik kütlesinin azalmasına, kemik kırılganlığının ve kırık riskinin artmasına neden olur4.

Mevcut araştırmalar, osteoartrit ve periodontitis gibi birçok kronik enflamatuar hastalığın önemli kemik kaybı ile ilişkili olduğunu bulmuştur, bu da inflamasyonun OP5 ile yakından ilişkili olabileceğini düşündürmektedir. PM kadınları yaşlandıkça, endokrin değişikliklerine ek olarak, fizyolojik ve bağışıklık fonksiyonları azalır ve vücut uzun süre kronik iltihap durumunda kalır. Bu inflamasyonu teşvik eden faktörlerin ve T hücresi kaynaklı sitokinlerin çoğu kemik kaybında önemli rol oynar. Bu nedenle, PMOP aynı zamanda kronik inflamatuar bir hastalık olarak da kabul edilmektedir 6,7.

Geleneksel Çin tıbbı (TCM), PMOP'un önlenmesi ve tedavisinde uzun bir geçmişe ve zengin klinik deneyime sahiptir, bütünsel yönetim ve bireyselleştirilmiş tanı ve tedaviye odaklanır ve aynı anda endokrin ve bağışıklık sistemlerini düzenleyebilir, bu da menopoz sonrası kadınlar için bir nimettir8. Kadınların büyük bir bölümünün tıbbi tedaviye erişmesini sağlar. Modern farmakolojik çalışmalar ve klinik çalışmalar, TCM'nin çoklu hedefleme, düşük toksisite ve yan etki avantajlarına sahip olduğunu ve ucuz olduğunu göstermiştir. PMOP9'un TCM tedavisinde komplikasyon riski büyük ölçüde azaltılabilir.

Chai hu'nun kendisi anti-enflamatuar10 ve antidepresan11özelliklere sahiptir ve vücuttaki hormon salgısınıdüzenleyebilir 12 ve sağlığayardımcı olabilir 13. Chai hu, yatıştırıcı duygular, sindirimi teşvik etme ve mide ve bağırsaklarda emilim etkisine sahip olan TCM bileşik formülü Xiaoyao Pills'de önemli bir rol oynayan ana bileşendir. Aynı zamanda qi ve kan enerjisini yenilemenin yanı sıra adet döngüsünün semptomlarını ve buna bağlı rahatsızlığı düzenlemesiyle de bilinir14. Chai hu'nun ana bileşeni, esas olarak tümör nekroz faktörü α (TNF-α), interlökin 1β ve IL-615 gibi pro-inflamatuar sitokinlerin ekspresyonunun inhibe edilmesinde kendini gösteren güçlü anti-enflamatuar aktiviteye sahip Chai hu saponindir. Ek olarak, anti-inflamatuar sitokin IL-10'un ekspresyonunu arttırır, böylece kolit, endometrit ve hepatit16 gibi iltihabı hafifletir.

Standart OP tedavileri ile karşılaştırıldığında (bifosfonatların17, seçici östrojen reseptör modülatörlerinin18 ve denosumab19 kullanımı dahil), yaygın olarak kullanılan bir TCM olarak Chai hu, çok bileşenli, çok hedefli bir etki mekanizmasının potansiyel avantajına sahiptir. Standart tedaviler genellikle gastrointestinal rahatsızlık, çenelerin osteonekroz riskinin artması ve grip benzeri semptomların yanı sıra yüksek uzun süreliilaç maliyetleri 21 gibi belirli yan etkilerle ilişkili olabilen spesifik kemik metabolik yollarını20 (osteoklast aktivitesinin inhibisyonu) hedefler.

İlgili literatürün gözden geçirilmesi, Chai hu'nun OP'li PM sıçanlarına müdahale etmek için kullanılmasının terapötik hafifletici etkilere sahip olabileceğini bulmuştur22. Bu nedenle, biyoinformatik ve farmakolojik analizin yanı sıra yerleştirme bölgelerini23 tahmin etmek için moleküler yerleştirme simülasyonuna dayanarak, Chai hu'nun enflamatuar sürece müdahale edebileceğini, vücudun bağışıklık durumunu modüle edebileceğini ve kemik bağışıklık homeostazını geri yükleyebileceğini varsaydık. Bunlar, kemik rekonstrüksiyon durumunun stabilitesini destekleyecek ve OP'yi hafifletmek için istenen terapötik etkiyi elde edecektir.

Bu çalışmada art arda 12 hafta boyunca Chai hu oral sıvı (konsantrasyon: 1 g / mL) uygulaması kullanılmıştır. Dozlama rejimi, TCM ve farmakokinetik çalışmalarda klinik olarak yaygın dozlara dayanarak tasarlanmıştır24.

Bu uygulama yönteminin genel amacı, stabil ve klinik olarak anlamlı bir doz protokolü oluşturmak, böylece Chai hu'nun hedef modelde (postmenopozal osteoporozun bir sıçan modeli) sürekli müdahale etkisini sistematik olarak değerlendirmektir. Bu uygulama yaklaşımı, ilacın deney süresi boyunca etkili plazma konsantrasyonunu korumasını sağlar ve sonraki değerlendirmeler (kemik metabolizması göstergeleri ve inflamatuar faktör seviyeleri gibi) için güvenilir bir müdahale temeli sağlar. Ayrıca, Chai hu'nun ilgili hastalıklardaki rolünü ve doz-etki ilişkisini netleştirmeye yardımcı olurken, deneysel araştırmalarda geleneksel Çin ilaçlarının standartlaştırılmış uygulaması için bir referans paradigması sunar.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanları içeren tüm deneysel prosedürler, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na (8. baskı) uygun olarak yürütülmüş ve Youjiang Tıp Üniversitesi Milliyetler için Hayvan Etik Komitesi (Onay No. 2024071001) tarafından özel olarak onaylanmıştır.

1. Ağ farmakolojisinin analizi

NOT: Siberfarmakoloji, sistem biyolojisi, hesaplamalı biyoloji ve farmakolojiyi birleştiren ve biyomoleküler ağları analiz ederek ilaçların etki mekanizmasını ve ilaç-ilaç etkileşimlerini anlamayı amaçlayan bir yaklaşımdır25.

  1. Geleneksel Çin Tıbbı Sistemleri Farmakoloji Veritabanı ve Analiz Platformu (TCMSP: http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php) gibi araçları kullanarak iyi oral biyoyararlanım (OB) ve ilaç benzerliği (DL) olan aktif bileşikleri tarayın. OB'yi %≥30'a ve DL'yi ≥0.18'e ayarlayın26. Chai hu'yu arayın ve Bitki Ayrıntıları'na tıklayın ve tüm bileşik verileri indirin. İndirilen dosyayı Chaihu olarak adlandırın.
  2. Çekirdek bileşenin MOL ID'sini TCMSP veritabanına yapıştırarak çekirdek bileşenin hedef adını elde edin. TCMSP toplu aramasına yapıştırın ve Hedef Tahmini'ni seçin, ardından Gönder'i tıklayın.
  3. UniProtsh veritabanını açın, Hedef Adı sütununu aramaya kopyalayın ve yapıştırılan hedef protein adıyla tamamen aynı olan kalın protein adını bulun. Karşılık gelen protein adını bulduktan sonra, karşılık gelen gen adlarını ondan sonraki sütunda toplayın.
  4. GeneCards (https://www.genecards.org) veritabanındaki osteoporoz ile ilgili genleri Relevance skor ≥ 1'e göre filtreleyin ve tüm (5741) genleri27 elde edin.
    NOT: GeneCards veri tabanından Relevance skoru ≥ 1 olan genlerin seçilme nedenleri aşağıdaki gibidir: 1 ≥ bir skor, genin hedef hastalıkla belgelenmiş ilişkilere sahip olduğunu gösterir ve onu, rapor edilmiş bir ilişkisi olmayan genlerden açıkça ayırır (skor = 0). Bu eşik, ilgisiz genlerden aşırı müdahaleyi önlerken, güvenilir hastalık ilgisi olan genlerin korunmasını sağlar. Daha düşük bir eşik (<1), doğrulanmış ilişkileri olmayan genleri içerebilir ve böylece yanlış pozitifleri artırabilir.
  5. Hastalıkla ilgili gen setlerini kesişim için ilaç hedefleriyle birleştirdikten sonra kesişen genleri elde edin. Hastalık hedefleri ve ilaç aktif bileşenleri arasındaki etkileşimlere dayanarak, Cytoscape yazılımını kullanarak geleneksel bir Çin tıbbı-aktif bileşen-hedef-hastalık kesişim ağı oluşturun.
  6. String veritabanı (https://cn.string-db.org/) aracılığıyla protein-protein etkileşimi (PPI) bilgilerini elde edin ve bir PPI ağı oluşturun. Cytoscape'i (https://www.cytoscape.org) açın, indirilen TSV dosyasını yükleme ağına yükleyin, ardından TOP10 veya TOP20 > Hesapla'yı seçin ve Gönder'e tıklayın.
  7. Cytoscape'e aktarmak için iki tablo oluşturun. Network adlı bir elektronik tablo dosyası oluşturun. Sütun A'da, geleneksel Çin tıbbının kısaltmasıyla değiştirilen aynı MOL ID'lerini (CH1, CH2...) girin. Sütun B'yi MOL ID olarak etiketleyin ve MOL ID'lerine göre artan düzende sıralayın. C sütununu sembol olarak etiketleyin. Chaihu ile ilgili dosyalardan bileşen kimliklerini (MOL kimlikleri) ve gen adlarını sırasıyla B ve C Sütunlarına kopyalayın. Ardından Sütun B'yi silin ve Sütun A'yı MOL ID olarak yeniden adlandırın.
  8. Tabloyu metnin sonuna kadar genişletin. Sembol sütununa, geleneksel Çin tıbbının kısaltması ile değiştirilen MOL ID'lerini (CH1, CH2...) girin. MOL ID sütununa geleneksel Çin tıbbının kısaltmasını girin: CH. Yukarıdaki adımlarla, bilgi takviyesi ve Geleneksel Çin Tıbbı - Bileşen - Hedef ağının inşası tamamlanmıştır.
  9. Ardından, ikinci form olan TYPE dosyasını yapın. Yeni bir e-tablo oluşturun ve TYPE olarak adlandırın. Sütun A'yı Terim ve sütun B'yi TÜR olarak etiketleyin. Gen adını terim sütununa kopyalayın ve tür sütununda gen özelliğini verin (amaç geni aramaktır; tüm gen adları seçilecektir, böylece kullanımı kolaydır). Malzemeleri Terim sütununa girin ve bileşene drug1 özelliğini verin.
  10. Cytoscape yazılımına aktarın. Ağ dosyasını yüklemek için Ağı İçe Aktar ve tür dosyasını yüklemek için tabloyu içe aktar. Arama kutusuna gene yazın, tüm genlerin seçilmesi için Enter tuşuna basın, seçili genleri sola çekin ve ardından Layout > Attribute() > Selected'ı tıklatın (parantez içinde yuvarlak veya kare seçin).
  11. İlaç etkisinin temel bileşiklerini ve moleküler mekanizmalarını belirlemek için ağ farmakolojisi analizinin sonuçlarını deneysel verilerle birleştirin.

2. Moleküler yerleştirme

NOT: Moleküler yerleştirme, küçük bir molekül (ligand) ile bir hedef protein veya biyomolekül28 arasındaki optimal bağlanma modunu ve afiniteyi tahmin etmek için kullanılan bir hesaplama tekniğidir.

  1. Reseptör ve ligand hazırlığı
    1. Reseptör (Protein) kaynağı: Hedef proteinlerin PDB dosyasını RCSB Protein Veri Bankası'ndan (https://www.rcsb.org) edinin. 3Q4B'de arama yapın (IL-6 reseptör örneği), Dosyaları PDB formatında indir> tıklayın.
    2. Düzenle'ye tıklayarak kristalografik su moleküllerini kaldırın > Sil > Su, yabancı iyonlar ve esansiyel olmayan ligandlar (metal iyonları gibi kritik kofaktörleri koruyun) tıklayarak Düzenle > Sil > Heteroatomlar'a tıklayın. Düzenle > Hidrojenler > Ekle'ye tıklayarak eksik hidrojen atomlarını ekleyin. protein.pdbqt olarak kaydedin. Compute Gasteiger> ardından Macromolecule> Grid'> Loads'ı tıklayarak > PDBQT Olarak Kaydet'i seçin > Ücretleri Hesapla'ya tıklayın.
    3. Ligand (Küçük Molekül) kaynağı: Ligand yapısını PubChem'den (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov) indirin. Saikosaponin A'yı (CID:6443568) arayın, 3D Konformer'e tıklayın > SDF'yi İndirin'e tıklayın.
    4. SDF formatındaki Saikosaponin A dosyasını düşük enerjili üç boyutlu konformasyonlara sahip PDB formatındaki bir dosyaya dönüştürmek için Open Babel yazılımını kullanın ve saikosaponinA olarak adlandırın.
  2. Yerleştirme parametresi kurulumu (AutoDock araçları)
    1. Reseptör ve ligand dosyalarını yükleyin. Küçük molekül dosyası saikosaponin A'yı içe aktarın ve bir PDBQT dosyası olarak kaydedin. Daha sonra, reseptörü ve ligandı yükleyin: Makromolekül > Aç'> Yerleştirme'ye tıklayın, IL6_receptor.pdbqt'yi seçin; ardından Ligand > Aç'> Yerleştirme'ye tıklayın, saikosaponinA.pdbqt'yi seçin.
    2. Izgara kutusunu yapılandırın: Izgara > Izgara Kutusu'na tıklayın, kutu boyutunu etkin siteyi tam olarak kapsayacak şekilde ayarlayın (ince ayar yapmak için sol paneldeki kontrol kadranını kullanın), ardından Dosya > Kaydetmeyi Kapat'a tıklayarak mevcut ayarları kaydedin ve dosyayı grid.gpf olarak adlandırın.
    3. AutoGrid çalıştırma programını ayarlayın: AutoGrid'i Çalıştır'a tıklayın, grid.gpf dosyasını seçin ve ardından Başlat'a tıklayın. Ardından, yerleştirme parametrelerini yapılandırın: Sırayla, Yerleştirme menüsü altında, Makromolekül'e tıklayın ve IL6_receptor.pdbqt protein dosyasını seçin; Ligand'a tıklayın ve küçük molekül dosyası saikosaponin A.pdbqt'yi seçin; Genetik Algoritmayı ayarlayın ve onaylayın; Yerleştirme Parametrelerini ayarlayın ve onaylayın. Son olarak, Çıktı'da Lamarckian (4,2) algoritmasını seçin, dosyayı dock.dpf olarak adlandırın ve kaydedin.
    4. AutoGrid'i çalıştırın ve sonuçları kaydedin: AutoDock'u Çalıştır'a tıklayın, dock.dpf dosyasını seçin ve simülasyonu başlatın. Tamamlandığında, Karmaşık Yaz'a tıklayın, karmaşık yapıyı adlandırın ve PDBQT biçiminde kaydedin.
  3. PyMOL Kullanarak Sonuç Analizi
    1. Önceki moleküler yerleştirme adımından elde edilen PDBQT formatındaki dosyayı Open Babel yazılımını kullanarak PDB formatına dönüştürün. Ardından, sonraki görselleştirme işlemleri için PDB formatındaki dosyayı PyMOL yazılımına aktarın.
    2. Ligandı bulun ve tek tek ayırın: Ligandı seçtikten sonra, Sele'ye tıklayarak ve ardından Renk'ten bir Renk seçerek rengini değiştirin. Sele sütununda, ligandı yeni bir bağımsız nesne olarak çıkarmak için Eylem altında Nesneyi Ayıkla'ya tıklayın.
    3. Hidrojen bağı mesafesi ölçümü: Sele sütununda, Eylem'e tıklayın, Polar Kontaklar'ı bulun ve Nesnedeki Diğer Atomlara'ya tıklayın; Hidrojen bağları sarı çizgiler olarak gösterilecektir. Sihirbaz sütunundaki Ölçüm seçeneğini tıklatın, Hidrojen Bağının Her İki Ucundaki Atomları sırayla tıklatın ve ardından ölçümü tamamlamak için Bitti'yi tıklatın.
  4. Görüntüyü dışa aktarma: Dosyada Görüntüyü PNG Olarak Dışa Aktar'ı tıklayın. Yüksek tanımlı görüntü oluşturma gerekiyorsa, ray 300 (piksel ayarlanabilir) girin ve Enter tuşuna basın.

3. Mikro-CT analizi

  1. Derin anestezi için dişi SD sıçanlara (32 haftalık, 320-350 g) intraperitoneal olarak pentobarbital sodyum (40 mg / kg) enjekte edin, kornea refleksi (pamuklu çubuk dokunuşunda göz kırpma yok) ve ağrı refleksi (forseps çimdiklemeye arka bacak kasılması yok) ile doğrulandı.
    1. Arka bacak izolasyon ameliyatı yapın. Cerrahi anestezik dozun 3-5 katı (40 mg / kg) bir dozda intraperitoneal pentobarbital sodyum enjeksiyonu ile sıçanları ötenazi yapın, sırtüstü yatırın ve kasık bağı boyunca kasık simfizinin 1 cm yukarısında 3 cm enine bir kesi yapın. Femoral arteri (pulsatil tübüler yapı) ortaya çıkarmak için gracilis ve sartorius kasları arasındaki boşluğu künt bir şekilde inceleyin. Femoral arterin her iki ucunu 4-0 dikiş kullanarak, arada bağlanmamış bir bölüm bırakarak, damarı oftalmik makasla kesmeden ve kesmeden önce bağlayın.
    2. Femur başını asetabulumdan çıkarmak için alt ekstremiteyi içten döndürün ve femur başı bütünlüğünü koruyarak eklem kapsülünü ve yuvarlak bağı kesin. Sağlam arka ayağı önceden soğutulmuş tuzlu suya batırın, ardından 24-48 saat boyunca% 4 formaldehit çözeltisinde sabitleyin.
  2. Görüntüleme kurulumu: Sabit uyluk kemiğini mikro-CT taraması için tesise teslim edin. Mikro-CT cihazını açın ve Küçük Hayvan Kemiği Taraması ön ayar programını seçin. Aşağıdaki tarama parametrelerini kullanın: X-ışını voltajı = 90 kV, X-ışını akımı = 80 μA, Görüş alanı (FOV) = 36 mm, Piksel boyutu = 72,0 μm, Döndürme = 360°, Tarama süresi = 14 dk.
  3. Sabit sıçanın sol bacak uyluk kemiğini numune tutucuya yerleştirin, fotoğrafı çekilecek femoral epifizi sabitleyin, cihazı başlatın ve makinenin kendi kendine testinin tamamlanmasını bekleyin. Örneğin ortalandığını doğrulamak için bir önizleme taraması (düşük çözünürlüklü hızlı tarama) başlatın, ardından ilgilenilen bölgeyi tüm uyluk kemiğini kapsayacak şekilde ayarlayın.
  4. Tarama ve fotoğraf çekme işlemi tamamlandığında, X-ışını ışık kaynağı otomatik olarak kapanacaktır. Şu anda, makinenin içindeki radyasyon değeri standardı aşıyor ve koruyucu ekipman olmadan numunenin çıkarılması kesinlikle yasaktır.
  5. Görüntü analizi: Tarayıcının yerleşik yazılımını kullanarak kemik parametrelerini (kemik mineral yoğunluğu [BMD], trabeküler sayı) analiz edin. Daha fazla değerlendirme için yeniden yapılandırılmış görüntüleri kaydedin ve dışa aktarın.

4. Sıçan kemik dokusundan RNA ekstraksiyonu için kantitatif gerçek zamanlı PCR

  1. Yapışık kasları ve fasyayı sağ uyluk kemiğinden çıkarın. 100-200 mg kemik dokusunu küçük parçalar halinde kesin. 2-3 öğütme boncuğu ve 500 μL RNA ekstraksiyon tamponu ekleyin. 70 Hz'de 4 °C'de 5 dakika boyunca bir doku öğütücü kullanarak homojenize edin.
  2. Faz ayrımı: Santrifüjlemeden sonra, çözelti bir üst sulu faza (RNA içerir) ve bir alt koyu çökeltiye (proteinler, DNA ve polisakkaritler içerir) ayrılır. 500 μL süpernatanı dikkatlice RNaz içermeyen 1.5 mL'lik yeni bir tüpe aktarın.
  3. Toplam RNA ekstraksiyonu için izolasyondan elde edilen üst çözeltiyi üreticinin talimatlarına göre işleyin.
  4. Lizis çözeltisine izopropanol ekledikten sonra, çözeltiyi karıştırmak için tüpü hafifçe ters çevirin ve oda sıcaklığında 10 dakika bekletin. Bu noktada görsel bir kontrol yapın; beyaz topaklayıcı RNA çökeltileri gözlenirse (tüp duvarına yapışarak), RNA'nın etkili bir şekilde çökeltildiğini gösterir.
  5. Kalan sıvıyı aspire etmek için 200 μL'lik bir pipet ucu kullanın. Beyaz RNA peletini tüpün altında/duvarında tutun. RNA'yı 50-100 μL RNaz içermeyen suda yeniden süspanse edin ve -80 °C'de saklayın.
  6. 2 μL RNA şablonu, 10 μL ana karışım, 2 μL DNaz ve 5 μL Nükleaz İçermeyen Suyu nükleaz içermeyen bir tüpte karıştırın. Pipetleme ile nazikçe karıştırın.
  7. Genomik DNA kontaminasyonunu gidermek için 37 ° C'de 2 dakika inkübe edin. 55 °C'de 15 dakika inkübe edin. Reaksiyonun sonunda, reaksiyonu durdurmak için 85 ° C'de 5 dakika inkübe edin.
  8. Ters kopyalanmış DNA'yı buz üzerine yerleştirerek gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR sistemini yapılandırın. Tüm bileşenleri önceden karıştırın: 10 μL qPCR SYBR Green Master Mix (Rox Yok), 0,4 μL İleri Astar ve Ters Astar ve 8,2 μL RNaz içermeyen su, 1 μL DNA'yı bölün ve ekleyin, buz üzerinde manipüle edin ve ışıktan koruyun.
  9. qPCR programını şu şekilde çalıştırın: 95 °C'de 5 dakika ön denatürasyon, 1 döngü ve ardından 95 °C'de 10 saniye boyunca 40 döngü denatürasyon. SYBR Green kanalında 60 döngü boyunca 30 saniye boyunca 40 ° C'de tavlama, uzatma, floresan alımı gerçekleştirin. 65-95 °C arasındaki sıcaklıklar için 0,5 °C artış/adım ve 5 s/adım ile bir erime eğrisi elde edin. Kullanılan astarlar Tablo 1'de verilmiştir.

5. Hayvan hazırlama

  1. 48 dişi nullipar SD sıçan elde edin (SPF dereceli, 8 haftalık, vücut ağırlığı 200-220 g).
  2. Deneysel prosedürlerden önce, tüm sıçanları SPF dereceli bir izolasyon tesisinde 7 günlük karantina süresi ile iklimlendirin ve SPF kontrollü bir laboratuvar ortamında barındırın (sıcaklık: 22-24 °C, nem:% 45 -% 55).

6. Test ilacının hazırlanması

  1. Chai hu oral sıvı alın (Çin Ulusal Tıbbi Ürün Onayı No. Z41021539). Formülasyon, tatlandırıcı ajan, sükroz ve propilen glikol dahil olmak üzere yardımcı maddelerle birlikte aktif bileşen olarak Chai hu (Kuzey kaynağı) içerir. Her 10 mL'lik şişe, 10 g ham bitkiye eşdeğer bir ekstrakt içerir.

7. Yumurtalıklı sıçan modelinin hazırlanması

  1. Ameliyat öncesi hazırlık: Suya ad libitum erişimi ile 12 saat boyunca hızlı sıçanlar. Tüm cerrahi aletleri otoklavlayarak alet sterilizasyonu gerçekleştirin.
  2. Anestezi ve hazırlık: Pentobarbital sodyumu intraperitoneal enjeksiyonla (40 mg / kg) uygulayın. Kornea refleks yokluğunu (pamuklu çubukla kornea dokunuşunda göz kırpma yok) ve ayak parmağını kıstırma refleksi yokluğunu (klemplemede arka bacak geri çekilmesi yok) değerlendirerek anestezi derinliğini kontrol edin. 15-20 dakika sonra ameliyat bölgesini tıraş edin, iyotla dezenfekte edin ve fenestre bir örtü ile örtün. Hayvanın gözlerinin kurumasını önlemek için operasyon sırasında A vitamini göz merhemi (15.000 IU / g içeren) uygulayın (Tablo 2).
  3. Yumurtalıklı sıçan modeli: Ameliyatı özel bir steril ameliyathanede gerçekleştirin. Tüm personel tam izolasyon önlüğü giydi. Ameliyattan önce tezgahı ve çevresindeki ekipmanı% 75 etanol ile silin (Tablo 2) ve havadaki ve yüzeylerdeki mikropları ortadan kaldırmak için ultraviyole lambaları en az 30 dakika boyunca açın.
    1. Sırt derisinde 1 cm'lik bir kesi yapın, deri altı dokuyu künt bir şekilde inceleyin, kas tabakasını sıkıştırın ve 1 cm'lik bir kesi yapın. Yağ pedini bulun ve yumurtalığı tanımlamak için dışını kapatın (parlak kırmızı renkte). Fallop tüpünü 4-0 sütür ile bağlayın, yumurtalık dokusunu eksize edin ve %4 paraformaldehit içeren 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne yerleştirin (Tablo 2).
  4. Yaranın kapatılması ve dezenfeksiyonu: Dikişten önce yaraya penisilin tozu serpin. 6 numaralı emilmeyen dikiş ile kas tabakasını dikin ve 2 numaralı dikiş ile cildi kapatın. Kapalı insizyonu iyotla dezenfekte edin ve topikal penisilin tozu uygulayın.
  5. Ameliyat sonrası bakım: Vücut ısısını korumak için fareleri ılık su şişeleri ve havlularla taze kafeslere koyun. Bağırsak tıkanıklığını önlemek için ameliyattan sonra 24 saat boyunca hızlı (suya izin verilir) hayvanlar. Art arda 3 gün boyunca her gün insizyon bölgesine penisilin tozu uygulayın.
    1. Ameliyat sonrası hemen ağrıyı azaltmak için cerrahi insizyonun etrafına lidokain (%1-%2 konsantrasyon, maksimum 5 mg/kg) enjekte edin. 3-5 gün boyunca sürekli analjezi sağlayın, ani kesilmeyi önlemek için ağrı şiddetine bağlı olarak dozu kademeli olarak inceltin.
    2. Dilin düşmesini ve hava yolu tıkanıklığını önlemek için uyanmadan önce hayvanı yan pozisyonda veya baş aşağı pozisyonda tutun; Uyandıktan sonra otonom rahat konumlandırmaya izin verin. Savaşmayı veya çapraz enfeksiyonu önlemek için ameliyat sonrası hayvanları tamamen iyileşene kadar diğerlerinden izole edin (Şekil 1).

8. Deneysel gruplama ve ilaç uygulaması

  1. Grup dağılımı: Toplam 40 SD sıçanını normal kontrol, model kontrolü, düşük konsantrasyonlu Chai hu, orta konsantrasyonlu Chai hu ve yüksek konsantrasyonlu Chai hu olmak üzere beş gruba (grup başına n = 8) bölün.
  2. Orta doz (5 mL / kg) grubu için, 29,30'da bulunan yönergelere göre dozu seçin. Düşük konsantrasyon grubu için 1: 2: 4'lük bir konsantrasyon gradyan oranını takip edin: 2.5 mL / kg, orta konsantrasyon grubu: 5 mL / kg ve yüksek konsantrasyon grubu: 10 mL / kg.
  3. İlacın uygulanması: Oral gavaj kullanın ve ilacı günde bir kez uygulayın. Normal kontrol grubu ve model kontrol grubu için (bilateral overektomiye tabi tutulan hayvanlar), eşit miktarda salin ile oral gavaj yapın. Ameliyattan sonra 1. haftada tedaviye başlayın ve 12 hafta boyunca devam edin.

9. Deney sonrası analiz ve veri toplama

  1. Beş hayvan grubu üzerinde aşağıdaki analizleri gerçekleştirin: kemik yapısının mikro-BT'si ve sıçan femur dokularında inflamatuar sitokin mRNA ekspresyonunun belirlenmesi.
  2. Femoral trabeküler mikroyapının görselleştirilmiş görüntülerini içeren verileri toplayın; kantitatif kemik parametreleri (kemik mineral yoğunluğu, kemik hacmi fraksiyonu, trabeküler kalınlık standart sapması, trabeküler aralık, trabeküler sayı ve bağlantı yoğunluğu dahil); ve femoral dokularda proinflamatuar sitokinlerin (IL-6, IL-17) ve anti-inflamatuar sitokinlerin (IL-4, IL-10) nispi mRNA ekspresyon seviyeleri.
  3. GraphPad Prism 10.1.2 yazılımını kullanarak tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ile veri analizleri gerçekleştirin. Gruplar arası ortalamalar için istatistiksel anlamlılık p < 0.05 olarak tanımlandı. Post-hoc çoklu karşılaştırmalar Tukey'in testi kullanılarak yapıldı.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

GO fonksiyonu ve KEGG yolu zenginleştirme analizi

Chai Hu'nun PMOP üzerindeki potansiyel etki mekanizmasını tahmin etmek için biyoinformatikte GO ve KEGG zenginleştirme analizine güvendik. Hastalıklar için Chai hu'nun aktif bileşenleri ile kesişen hedef genlerin GO zenginleştirme analizi 2138 önemli giriş sağladı ve her grup için ilk on önemli sonuç listelendi (Şekil 2D). Biyolojik süreçlerle ilgili olarak

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PMOP, genellikle PM kadınlarında ortaya çıkan sistemik bir kemik metabolizması bozukluğudur ve osteoblast-osteoklast dengesinin bozulmasına neden olan östrojen eksikliğinden kaynaklanır, bu da osteoklast kemik rezorpsiyonunun artmasına ve osteoblast kemik üretiminin azalmasına neden olur31. Giderek artan sayıda çalışma, vücuttaki enflamatuar faktör seviyelerinin osteoklastlar ve osteoblastlar arasındaki farklılaşmayı da etkilediğini ve proinflamatuar faktörlerin a...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Baise Şehri Bilimsel Araştırma ve Teknoloji Geliştirme Programı ve 2025 Guangxi Üniversiteleri Genç ve Orta Yaşlı Öğretmenler Bilimsel Araştırma Temel Yetenek Geliştirme Projesi (Proje No.: 2025KY0549) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, el yazması düzenlemesi için Imperial College London ve YMUN'dan Dr. Dev Sooranna'ya teşekkür eder. ZY ve LYR bu çalışmaya eşit derecede katkıda bulundular.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
%0.9 sodyum klorür enjeksiyonu HuarenfarmasötikH1712059
1&kez; PBS Termo Balıkçı10010023
%75 alkol NanjingreajanC069156931
%95 etanol NanjingreajanC0691520075
Susuz etanolMacklin HakkındaE809056
Bupleurum chinense Henan Baiquan Eczane A.Ş.Z41021539
dekalsifikasyon çözeltisi güneş biyosuE1171 (İngilizce)
eritromisin merhem Guangzhou Baiyunshan İlaç Grubu Şirketi Limited Baiyunshan Hejigong İlaç FabrikasıH44023088
İzopropil alkol Jinan Jinrihe Kimya A.Ş.23727-29-9
penisilin V potasyum kapsülleriSichuan İlaçH20103156
poliformaldehit (CH2O)nBeyotimeP0099
povidon-iyot dezenfektanı Guangdong Hengjian İlaç A.Ş.H44023924
Gerçek Zamanlı Floresan PCR KitiYeasen Biyoteknoloji11201ES03
RNA Ekstraksiyon KitiMonadbiyoteknolojiMI20201S
RNA Ters Transkripsiyon KitiYuGongBiyoteknolojiEG15123S
Sodyum pentobarbital Şangay Jixiang Biyoteknoloji A.Ş.JX082085
Trizol Termo Balıkçı15596026CN

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. An, H., et al. Hyperoside alleviates postmenopausal osteoporosis via regulating mir-19a-5p/il-17a axis. Am J Reprod Immunol. 90 (1), e13709(2023).
  2. Wang, S., et al. Alginate oligosaccharide alleviates senile osteoporosis via the RANKL-RANK pathway in d-galactose-induced c57bl/6j mice. Chem Biol Drug Des. 99 (1), 46-55 (2021).
  3. Jiang, N., Qi, B., Li, G., Yao, L., Fan, X. Morin improves the bone histomorphology and biochemical markers in an animal model of ovariectomy-induced osteoporosis by suppressing autophagy and apoptosis. Food Sci Nutri. 12 (12), 10099-10109 (2024).
  4. Ramchand, S. K., Leder, B. Z. Sequential therapy for the long-term treatment of postmenopausal osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab. 109 (2), 303-311 (2024).
  5. Juluri, R., et al. Association of postmenopausal osteoporosis and periodontal disease: A double-blind case-control study. J Int Oral Health. 7 (9), 119-123 (2015).
  6. Zhang, C., et al. Oxidative stress: A common pathological state in a high-risk population for osteoporosis. Biomed Pharmacother. 163, 114834(2023).
  7. Mansoori, M. N., et al. IL-18bp is decreased in osteoporotic women: Prevents inflammasome-mediated IL-18 activation and reduces Th17 differentiation. Sci Rep. 6, 33680(2016).
  8. Shanshan, J., Baorong, H., Tianyuan, C., Xiaoqiang, H. Research progress of Chinese medicine in treating postmenopausal women with osteoporosis. Front Med Sci Res. 5 (10), 92-98 (2023).
  9. Faiella, E., et al. Percutaneous vertebroplasty: A minimally invasive procedure for the management of vertebral compression fractures. Osteology. 2 (4), 139-151 (2022).
  10. Yue, L. C., et al. Correction: Saikosaponin d exerts an antidepressant effect by regulating Homer1-mGluR5 and mTOR signaling in a rat model of chronic unpredictable mild stress. Chinese Med. 18 (1), 147-147 (2023).
  11. Yue, T., Ge, Z., Ruonan, S., Hanqing, W., Nan, Z. Saikosaponin a activates tet1/dll3/notch1 signalling and promotes hippocampal neurogenesis to improve depression-like behavior in mice. J ethnopharmacol. 319 (P3), 117289-117289 (2023).
  12. Xuedong, A. N., et al. Shugan jieyu capsule improve sleep and emotional disorder in coronavirus disease 2019 convalescence patients: A randomized, double-blind, placebo-controlled trial. J Tradit Chin Med. 42 (5), 803-809 (2022).
  13. Ying, H. S. H. Experience of professor huang ying in treating postmenopausal syndrome by chaihu guizhi decoction. J Trad Chinese Med. 38 (23), 4557-4560 (2023).
  14. Yang, Y. X., et al. Studies on the anti-inflammatory effect of xiaoyao pills in the treatment of postmenopausal osteoporosis in mice. J Vis Exp. (210), e67051(2024).
  15. Wu, S. J., Tam, K. W., Tsai, W. H., Chang, C. C., Chao, J. C. Curcumin and saikosaponin a inhibit chemical-induced liver inflammation and fibrosis in rats. Am J Chin Med. 38 (1), 99-111 (2010).
  16. Zhou, Q. R., Chen, M. Y., Wang, M. D. Treatment of chronic endometritis by penning granule: A clinical randomized controlled trial. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 36 (9), 1055-1060 (2016).
  17. Weibing, J., Yankun, D., Jinxin, Z., Suqin, D. Clinical efficacy and safety evaluation of calcitriol combined with bisphosphonates in the therapy of postmenopausal osteoporosis: Based on a retrospective cohort study. BioMed Res Int. 2022, 2711938-2711938 (2022).
  18. Hussain, I., Talaulikar, V. S. A systematic review of randomised clinical trials - the safety of vaginal hormones and selective estrogen receptor modulators for the treatment of genitourinary menopausal symptoms in breast cancer survivors. Post Reprod Health. 29 (4), 222-231 (2023).
  19. Anastasilakis, A. D., et al. Follistatins, activins and inhibins during osteoporosis therapy with denosumab or zoledronate and after their discontinuation. Diabetes Obesity Metab. 27 (4), 2288-2293 (2025).
  20. Si, Y., et al. Curcumin-encapsulated exosomes in bisphosphonate-modified hydrogel microspheres promote bone repair through macrophage polarization and DNA damage mitigation. Materials Today Bio. 32, 101874-101874 (2025).
  21. Shouguo, L. Clinical observation of qiangjin zhuangji decoction combined with denosumab in the treatment of postmenopausal osteoporosis. , (2024).
  22. Yeom, M., Kim, E. Y., Kim, J. H., Jung, H. S., Sohn, Y. High doses of bupleurum falcatum partially prevents estrogen deficiency-induced bone loss with anti-osteoclastogenic activity due to enhanced inos/no signaling. Front Pharmacol. 9, 1314(2018).
  23. Lu, L., Yinliang, X., Liu, Y., Zhenzhong, J., Xiaoyan, L. Analysis of the mechanism of action of euphorbia fischeriana steud on cirrhosis based on network pharmacology. Medicine. 102 (37), e35118(2023).
  24. Nan, L. S. HPLC-UV for the determination of plasma concentration of saikosaponin C in rats' serum. Info Trad Chin Med. 32 (02), 66-68 (2015).
  25. Sakle, N. S., More, S. A., Mokale, S. N. A network pharmacology-based approach to explore potential targets of caesalpinia pulcherima: An updated prototype in drug discovery. Sci Rep. 10 (1), 17217(2020).
  26. Ru, J., et al. Tcmsp: A database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  27. Bowen, Y., Qiuwen, Z., Xiaodong, W., Jingxin, M., Shuqing, Z. Using network pharmacology and molecular docking verification to explore the mechanism of ursolic acid in the treatment of osteoporosis. Medicine. 101 (49), e32222(2022).
  28. Belghalia, E., et al. In silico research on new sulfonamide derivatives as brd4 inhibitors targeting acute myeloid leukemia using various computational techniques, including 3D-QSAR, HQSAR, molecular docking, ADME/Tox, and molecular dynamics. J Biomol Struct Dyn. 42 (17), 9201-9219 (2023).
  29. Chinese pharmacopoeia Commission. The Pharmacopeia of the People's Republic of China 2020 Edition: Volume I. , CHINA MEDICAL SCIENCE PRESS. (2020).
  30. Chinese pharmacopoeia Commission. The pharmacopoeia of the People's Republic of China 2020 edition: volume IV. , CHINA MEDICAL SCIENCE PRESS. (2020).
  31. Xu, S., et al. Material Basis and Mechanism of Erzhi Pill for Preventing Osteoporosis Based on Network Pharmacology. Chin Pharma J. 53 (22), 1913-1920 (2018).
  32. Lee, D. K., et al. Phospholipase c β4 promotes rankl-dependent osteoclastogenesis by interacting with mkk3 and p38 mapk. Exp Mol Med. 57 (2), 323-334 (2025).
  33. Huang, Q., et al. The effects of Ti and Ta particle surface chemistry on inflammation, osteogenesis, and osteoclastogenesis in vitro and in vivo. Colloid Interf Sci Commun. 54, 100716(2023).
  34. Zhao, M., et al. Comprehensive comparison on the anti-inflammation and gc-ms-based metabolomics discrimination between bupleuri chinense dc. And b. Scorzonerifolium willd. Front Pharmacol. 13, 1005011(2022).
  35. Bin, L., et al. Analysis of mutual-detoxication compatibility rules of "bupleuri radix decreaseing liver's yin essence" based on data mining. Chin Trad Herbal Drugs. 53 (14), 4428-4436 (2022).
  36. Ying, W., Xuefeng, Z., Minjing, L., Tingting, Z., Ping, L. Xiaochaihu decoction in diabetic kidney disease: A study based on network pharmacology and molecular docking technology. Integrat Med Nephrol Androl. 8 (1), 13-13 (2021).
  37. Sheng, Z., Hongcheng, L., Min, X. Identifying immune cell infiltration and effective diagnostic biomarkers in rheumatoid arthritis by bioinformatics analysis. Front Immunol. 12, 726747(2021).
  38. Menon, S. M. P., Elengoe, A. Evaluation of the role of kras gene in colon cancer pathway using string and cytoscape software. Biomed Res Ther. 7 (6), 3835-3842 (2020).
  39. Yang, J., et al. Bioinformatics identification based on causal association inference using multi-omics reveals the underlying mechanism of gui-zhi-shao-yao-zhi-mu decoction in modulating rheumatoid arthritis. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 136, 156332(2024).
  40. Yang, M., et al. Purification of harvested rainwater using gravity-driven ceramic membrane: A visualization study combining micro-CT and Comsol simulations. J Environ Manag. 373, 123333(2024).
  41. Jui-Ting, H., et al. A comparison of micro-CT and dental CT in assessing cortical bone morphology and trabecular bone microarchitecture. PloS one. 9 (9), e107545(2014).
  42. Yang, S. S., et al. Grem1 inhibits osteogenic differentiation of mbmscs in ovx rats through bmp/smad1/5 signaling pathway. Regenerat Ther. 28, 527-535 (2025).
  43. Huang, W., Zheng, X., Yang, X., Fan, S. Stimulation of osteogenic differentiation by saikosaponin-a in bone marrow stromal cells via wnt/β-catenin pathway. Calcified Tiss Int. 100 (4), 392-401 (2017).
  44. Hattori, T., et al. The fixed herbal drug composition "saikokaryukotsuboreito" prevents bone loss with an association of serum IL-6 reductions in the ovariectomized mouse model. Phytomedicine. 17 (3-4), 170-177 (2010).
  45. Wu, X., et al. Inhibition of lipopolysaccharide-induced inflammatory bone loss by saikosaponin d is associated with regulation of the rankl/rank pathway. Drug Des Dev Ther. 15, 4741-4757 (2021).
  46. Yu-Ting, H., et al. Effects of saikosaponin d on differentially expressed genes, Ctla-4, IL-10, and IL-17 in mice with autoimmune hepatitis. J Shanghai Jiaotong Uni. 40 (03), 303-309 (2020).
  47. Allergy, Z. C. F., et al. Sebocytes contribute to skin inflammation by promoting the differentiation of t helper 17 cells. Br J Dermatol. 178 (3), 722-730 (2018).
  48. Piao, C. H., Song, C. H., Lee, E. J., Chai, O. H. Saikosaponin a ameliorates nasal inflammation by suppressing il-6/ror-γt/STAT3/IL-17/nf-κb pathway in ova-induced allergic rhinitis. Chem Biol Interact. 315, 108874(2020).
  49. Zhimeng, L., et al. Il-17/il-17 receptor pathway-mediated inflammatory response in apostichopus japonicus supports the conserved functions of cytokines in invertebrates. J Immunol. 208 (2), 464-479 (2022).
  50. Wang, X., et al. Forsythiaside a repairs uvb-induced skin inflammatory damage by il-17 signaling pathway. Food Biosci. 64, 105845-105845 (2025).
  51. Ridvan, G., Emine, Y. Evaluation of the awareness and knowledge levels of dentists regarding bisphosphonates and bisphosphonate-related jaw necrosis. J Craniofac Surg. 36 (4), e376-e382 (2025).
  52. Lijuan, W., et al. An ultra-performance liquid chromatography photodiode array detection tandem mass spectrometric method for simultaneous determination of seven major bioactive constituents in Xiaochaihutang and its application to a fourteen-compound compatibility study. J Chromatograph Sci. 53 (9), 1570-1576 (2015).
  53. Wang, D. L., Fang, F. F., Liu, C. S., Su, J. C. expert consensus on integrated traditional chinese and western medicine diagnosis and treatment for osteoporotic fractures. Zhongguo gu shang China. J Orthopaed Traumatol. 37 (3), 242-250 (2024).
  54. Shimeng, L., et al. Antidepressant active components of bupleurum chinense dc-paeonia lactiflora pall herb pair: Pharmacological mechanisms. BioMed Res Int. 2022, 1024693-1024693 (2022).
  55. Ran, S., et al. Bupleurum in treatment of depression disorder: A comprehensive review. Pharmaceuticals (Basel). 17 (4), 512(2024).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Postmenopausal OsteoporosisOvariectomized RatsBone MicrostructureChai Hu TreatmentBone Loss InhibitionInflammatory CytokinesAnti Inflammatory PathwaysEstrogen DeficiencyBone DestructionDose Response

Related Articles