Burada, Aspergillus türleri, Cryptococcus neoformans ve Pneumocystis jirovecii'nin eşzamanlı tespiti için PCR floresan prob yöntemine dayalı bir klinik test protokolü sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Burada, Aspergillus türleri, Cryptococcus neoformans ve Pneumocystis jirovecii'nin eşzamanlı tespiti için PCR floresan prob yöntemine dayalı bir klinik test protokolü sunuyoruz.
Bu protokol, PCR floresan prob tabanlı nükleik asit tespit kiti kullanılarak klinik balgam örneklerinde Aspergillus türleri, Cryptococcus neoformans ve Pneumocystis jirovecii'nin niteliksel tespiti için standartlaştırılmış bir prosedürü tanımlar. Bu işlem, klinik örnek toplama, alkali sıvılaştırma ön işlem, otomatik nükleik asit ekstraksiyonu ve çoklu gerçek zamanlı PCR tespitini içermektedir. Aspergillus türleri, C. neoformans ve P. jirovecii , hedefe özgü floresan problar (sırasıyla FAM, VIC ve CY5 kanalları) kullanılarak tespit edilir ve kalite güvencesi için entegre edilen dahili kontrol (ROX kanalı) bulunur. Analiz geçerliliği ve örnek sonuç yorumu, tanımlanmış döngü eşik (Ct) kesme değerlerine dayanır. Pozitif kontrol, tüm kanallarda Ct ≤ 33.7 olan S şeklinde amplifikasyon eğrileri göstermelidir, negatif kontrol ise hiç amplifikasyon göstermemelidir. Klinik örneklerde, FAM kanalında 33.7 ≤ Ct değeri Aspergillus türleri için pozitiflik, VIC veya CY5 kanalında ise C . neoformans veya P. jirovecii için pozitiflik ≤ VIC veya CY5 kanalında 36 olan CT değeri sırasıyla C. neoformans veya P. jirovecii için pozitifliği gösterir.
Aspergillus türleri, Cryptococcus neoformans ve Pneumocystis jirovecii gibi invaziv mantar enfeksiyonları, bağışıklık sistemi zayıf hastalar için önemli bir tehdit oluşturur ve yüksek morbidite ile ölüme yol açar. Uygun antifungal tedaviye başlamak ve klinik sonuçların iyileştirilmesi için zamanında ve doğru tanı çok önemlidir1. Kültür, mikroskopi ve antijen tespiti gibi geleneksel tanı yöntemlerinin belirgin sınırlamaları vardır. Kültür zaman alıcıdır ve düşük hassasiyet gösterir, mikroskopi tür düzeyinde tanımlamaya sahip değildir ve operatöre bağlıdır; antijen testleri (örneğin, ga....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Klinik örneklerin kullanımı ilgili etik komitesi tarafından onaylandı (Onay No.: ZYS-GCP-2025006). Tüm katılımcılar, verilerinin ve örneklerinin araştırmada kullanılmasına dair geniş ve bilgilendirilmiş onay sağladı. Bu protokolte kullanılan tüm reaktifler ve tüketim malzemeleriMateryallerin Table (T able of Materials) listelenmiştir.
1. Örnek koleksiyonu
2. Reaktif hazırlığı
NOT: Bu ad....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çoklu floresan prob PCR testi kullanılarak elde edilen temsil amplifikasyon eğrileri Şekil 1 ve Şekil 2'de gösterilmiştir. Test geçerliliği önceden belirlenmiş kontrol kriterlerine dayanarak belirlendi. Geçerli bir çalışmada, pozitif kontrol FAM, VIC, CY5 ve ROX kanallarında karakteristik S-şekilli amplifikasyon eğrileri üretirken, tüm algılama kanallarında döngü eşik (Ct) değerleri 33.7 ≤ (Şekil 1A
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışmada oluşturulan çoklu gerçek zamanlı PCR protokolü, klinik balgam örneklerinde üç önemli invaziv mantar patojeninin (Aspergillus türleri, Cryptococcus neoformans ve Pneumocystis jirovecii) eşzamanlı ve hızlı tespiti için standartlaştırılmış bir prosedür sağlar. Bu yöntem, klinik örneklerden patojenik DNA'nın doğrudan tespit edilmesini sağlar. Kültür, mikroskopi veya serolojik antijen testi gibi geleneksel tanı yaklaşımlarının aksine, bu moleküler yöntem kültürle ilişkili uzun iş.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.
Foshan'daki Shanshui İlçe Halk Hastanesi Klinik Laboratuvar Departmanı'na ekipman ve teknik destek sağladıkları için teşekkür etmek isteriz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Filtre Uçlu Steril Genişletilmiş Pipet Uçları (Raflı) | Xiaorui Biyoteknolojisi | S20221126 | |
| 1000 μ L Steril Pipet Uçları | Jiangsu Xinkang Tıbbi Aletler Şirketi, Ltd | 241101 | |
| 200 μ L Extended Filter Steril Pipet Uçları | Xiaorui Biyoteknolojisi | 241001 | |
| Liz Tüpleri | Pekin ZC Biyo-Bilim & Teknoloji Şirketi | F1040 | |
| Aspergillus spp, Cryptococcus neoformans ve Pneumocystis jirovecii | Pekin ZC Biyo-Bilim & Technology Co. | CT8143-48T | |
| Nükleik Asit Ekstraksiyon Reaktifi | Pekin ZC Biyo-Bilim & Teknoloji Şirketi | CN8053-B40T | |
| Örnek Sulandırma Tamponu | Pekin ZC Biyo-Bilim & Teknoloji Şirketi | SP7065 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.