Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Vitreus kollajen lif ağını görselleştirmek için domuz gözlerinin konfokal yansıma mikroskobuna hazırlanması

648 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68823

⸱

17 Ekim 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Utah, 2Department of Biomedical Engineering, University of Utah, 3Department of Chemistry, University of Utah, 4Department of Mechanical Engineering, University of Utah

Bu makalede

Özet

Bu yöntem, konfokal yansıma mikroskobu kullanarak vitreus gövdesindeki kollajen liflerinin doğal yapısını görselleştirir.

Özet

Vitreus, lens ve retina arasındaki boşluğu dolduran berrak bir jeldir. Yapısı, muhtemelen viskoelastik özellikleri etkileyen ve retina hastalığına katkıda bulunan bir kolajen lifleri ağı tarafından desteklenir. Bununla birlikte, bu kollajen ağının organizasyonu, vitreusun doğal haliyle görüntülenmesi zor olduğu için zayıf bir şekilde karakterize edilmiştir. Vitreusa uygulanan birçok görüntüleme tekniği dehidrasyona ve distorsiyona neden olur ve boya bazlı yöntemler artefaktlara veya spesifik olmayan etiketlemeye neden olarak kollajen ağının incelenmesini zorlaştırabilir. Bu protokolde şunları özetliyoruz: 1) görüntüleme için domuz gözlerini diseksiyon yöntemi; 2) gözleri ters çevrilmiş bir mikroskoba monte etmek için bir strateji; 3) konfokal yansıma mikroskobu kullanılarak vitreus kollajen ağının doğal durumunda görüntülenmesi için kılavuzlar; ve 4) ağ özelliklerinin nicel görüntü analizi için talimatlar. Yaygın tuzakları vurguluyor ve önemli teknik noktaları vurguluyoruz. Bu çalışmada vitreusa konfokal reflektans mikroskobu uygulanmaktadır. Önceki vitreus görüntüleme stratejileriyle karşılaştırıldığında, bu yaklaşım eksojen boyalar veya dehidrasyon artefaktları olmadan vitreus kollajen liflerinin doğal yapısını, oryantasyonunu ve dağılımını korur. Konfokal reflektans mikroskobu, sağlık ve hastalıkta vitreus jel sertliğinin yapısal temelini araştırabilir.

Giriş

Vitreus, gözdeki lens ile retina arasındaki hücre dışı matristir. Retina üzerindeki vitreustan traksiyon, retina dekolmanı, makula deliği ve vitreomaküler traksiyon gibi hastalıklarda görme kaybında büyük rol oynar 1,2,3,4. Vitreusun traksiyonel kuvvetleri retinaya iletme yeteneği, jel sertliği ile belirlenir ve bu da ana bileşenleri olan kollajen ve hyaluronik asit5'in özelliklerine bağlıdır. Vitreusun jel sertliği muhtemelen kollajen lifleri ağının özelliklerinden etkilenir, çünkü yapay kollajen jellerin sertliği yoğunluk, hizalama ve lif genişliği6 gibi ağ özellikleri tarafından yönlendirilir.

Yüksek su içeriği ve düşük kollajen konsantrasyonu7 nedeniyle vitreus kollajen lif ağının görüntülenmesi zordur, bu da mikroskopi veya transmisyon elektron mikroskobu için işleme sırasında artefakt bozulmaya yol açar. Geleneksel histoloji ve transmisyon elektron mikroskobu, ince kesit için vitreusu sertleştirmek için işlem gerektirir. Histolojik gömme için gerekli dehidrasyon, camsı liflerin bir petek konfigürasyonunda8 toplanmasına neden olur ve donma sırasında buz kristali oluşumu, hücre dışı matriste9 gözenek boyutunu arttırır. Artefaktı en aza indirmek için vitreusa plastik gömme8 ve hızlı dondurma10 uygulanmıştır, ancak muhtemelen bir miktar artefakt kalmıştır. Faz kontrast mikroskobu, kesit gerektirmeyen ve vitreusa uygulanmış bir yöntemdir, ancak gözden küçük bir vitreus parçasının çıkarılmasını gerektirir, böylece ağın orijinal konumunu ve yönünü kaybeder11. Daha yakın zamanlarda, büyük kesitli bir domuz gözü boyunca liflerin ortalama yönelimini haritalamak için kantitatif polarize ışık mikroskobu kullanılmıştır, ancak tek tek lifler çözülememiştir12. Ek olarak, boya bazlı etiketleme yaklaşımları (örneğin, tripan mavisi, picrosirius kırmızısı, 5-(4,6-Diklorotriazinil) Aminofloresein) artefaktlara veya spesifik olmayan etiketlemeye neden olabilir ve bu nedenle doğal kollajen ağını korumak için kaçınılmıştır.

Filas ve ark. polarize ışık mikroskobu çalışması için, yani bir agaroz blok12'de brüt diseksiyon için ve numuneyi daha önce vitreusa uygulanmamış olan konfokal yansıma mikroskobu kullanarak görüntüledik. Bu yöntemi kullanarak, hidratlı, neredeyse fizyolojik bir durumda vitreus kollajen lif ağının görüntülerini elde ettik. Bu, donma-kırılma veya dehidrasyona dayalı yaklaşımlara kıyasla azaltılmış artefaktlar dahil olmak üzere önceki yöntemlere göre çeşitli avantajlar sunar10,13. Bu protokol, daldırma hedefi en az 30x büyütme, sayısal açıklığı 0,9'dan büyük ve çalışma mesafesi 200 μm'den büyük olan ters çevrilmiş bir konfokal mikroskop gerektirir. Fiberlerin net çözünürlüğünü kolaylaştırmak için numune hazırlama ve görüntü elde etme için temel rehberlik ekliyoruz. Bu yaklaşım, vitreus kollajen matrisinin doğala yakın bir durumunu koruyarak, araştırmacıların vitreus sertliğini ve patolojik değişikliklerini anlamak için muhtemelen çok önemli olan lif oryantasyonunu, yoğunluğunu ve uzamsal dağılım parametrelerini nicel olarak analiz etmelerini sağlar. Bu teknik, özellikle vitreus kollajen ağı, yapısı ve vitreoretinal hastalıkların patogenezi ile ilgilenen araştırmacılar için uygundur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Doku hazırlığı ve diseksiyonu

NOT: Bu araştırma kurumsal yönergelere uygun olarak yapılmıştır. Kurumumuzda ex vivo domuz gözleri üzerinde deney yapmak için Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nden onay alınması gerekmemiştir.

  1. Bir et işleme tesisinden ex vivo domuz gözleri elde edin. Ölümden sonraki 48 saat içinde gözleri kullanın.
    NOT: Vitreus görünümü daha uzun postmortem süre ile değişmese de, retina ve koroid bozulur ve diseksiyon sırasında hücresel ve pigmente kalıntıların dağılmasına yol açar. Bu kalıntı, fiber görüntüleme ve analizini etkileyebilir.
  2. Küredeki fazla kas ve bağ dokusunu çıkarın.
  3. Üç uçlu kaideyi ekstra büyük silikon buz küpü kalıbı gibi bir küp kalıbın tabanına yerleştirin (Şekil 1A ve Şekil 2).
  4. Küreyi üç uçlu kaidenin üzerine yerleştirin ve limbus çatallara dayanacak şekilde konumlandırın.
  5. 100 mL damıtılmış suya 3 g genel amaçlı agaroz ekleyerek ve ardından çözeltiyi eriyene kadar ısıtarak %3'lük bir agaroz jeli yapın. Çözelti yaklaşık 37 dereceye kadar soğuduktan sonra, göz agaroza batırılıncaya kadar kalıba dökün.
    NOT: Bu, diseksiyon için gözü stabilize etmek için gözü agaroz jel içine gömecektir.
  6. Agaroz küpü en az 4 saat soğutun.
    NOT: Bu, jelin göze yapışmasını arttırır ve diseksiyon sırasında gözün hareketsiz kalmasını sağlar
  7. Soğuduktan sonra agaroz küpü kalıptan çıkarın. Ardından, kaideyi küpten çıkarın (Şekil 1B).
  8. 1 x 8 Lego tuğla, plaka ve fayans kombinasyonunu kullanarak agaroz küple aynı boyutlarda üç taraflı bir çerçeve oluşturun (Şekil 3).
    NOT: Bu, küpü yerine sabitleyecek ve diseksiyon sırasında bıçak için bir kılavuz sağlayacaktır. Lego çerçevesinin yüksekliği, gözün kesileceği yeri belirleyecektir. Bu, yarı saydam agaroz jel aracılığıyla görselleştirilebilir.
  9. Soğutulmuş agaroz küpünü Lego çerçevesine yerleştirin. Yüksek profilli bir mikrotom bıçağını kör kenarlarından tutun ve bıçağı Lego çerçevesinin üst kısmıyla hizalayın. Küpün üstüne aşağı doğru hafif bir baskı uygulayın ve mikrotom bıçağını tüm küp ve gömülü göz boyunca yavaşça ileri geri sürükleyin (Şekil 1C).
    NOT: Bu, agarozun içine gömülü olan ve "göz kapağı" olarak adlandırılacak bir göz dokusu bölümü oluşturacaktır.

2. Görüntüleme için montaj örneği

  1. Mikrotom bıçağını kullanarak, küpün tüm kesim yüzeyinden yaklaşık 1 mm agaroz kesin (Şekil 4A).
    NOT: Bu, agaroz küpün kesik yüzeyinin üzerine uzanan küçük bir göz kapağı bölümü bırakacaktır
  2. Agaroz küpünün kesik yüzeyini, özellikle göz kapağının sınırına yakın bir yerde kurutmak için bir mendil veya küçük üçgen selüloz sünger kullanın.
  3. Küçük bir plastik sandviç torbasına yaklaşık bir çay kaşığı çok amaçlı silikon kalafat ekleyin ve kalafat için bir sıkma torbası oluşturmak üzere torbanın alt köşelerinden birinde 3 mm'lik bir delik açın.
  4. Sıkma torbasını kullanarak, agaroz küpünün kesik yüzeyine, göz kapağının kenarı boyunca ince bir kalafat damlası uygulayın ve numunenin etrafında su geçirmez bir kenarlık oluşturun (Şekil 4B). Bu, vitreus jelinin göz kapağından dışarı sızmasını önleyecektir.
  5. Göz kapağının üzerine büyük bir lamel camı yerleştirin ve göz kapağının kesilen yüzeyi herhangi bir hava veya sıvı sıkışmadan lamel ile temas edecek şekilde aşağı doğru bastırın (Şekil 4C). Silikon boncuğun lamel ile sürekli bir sızdırmazlık sağladığını doğrulayın.
    NOT: Silikon kalafat sürekli bir sızdırmazlık oluşturmazsa, camsı sıvı dışarı sızabilir ve numuneye hava girmesine izin verebilir. Havaya maruz kalmak, vitreusun büzülmesine neden olur, bu da daha parlak ve daha yoğun liflerin yanı sıra lifsiz sıvı bir alan ile sonuçlanır. Vitreus lamel ile temas halinde değilse, görüntülenmesi zor olacaktır.
  6. Agaroz küpünü tutarken, numuneyi ters çevirin ve ters çevrilmiş bir mikroskopta görüntülemek için büyük lamel adaptörüne yerleştirin (Şekil 4D ve Şekil 5).

3. Görüntü edinme

  1. Dönen disk tipi olmayan ters çevrilmiş bir konfokal mikroskop kullanın. En az 0,90 sayısal açıklığa sahip, 30x-60x arasında büyütme oranına ve en az 200 μm çalışma mesafesine sahip bir su objektifi (kuplör olarak su veya oküler kayganlaştırıcı jel ile) veya yağ objektifi kullanın.
  2. Yansıma görüntüleri elde etmek için konfokal mikroskobun ışık yolu ayarlarını yapın. Floresan görüntüleme için heyecan verici ışığı yeniden yönlendirmek ve yayılan ışığı iletmek için kullanılan dikroik aynanın yerine, aydınlatıcı lazerin bir kısmını yeniden yönlendiren ve yansıyan ışığın bir kısmını ileten bir ışın ayırıcı ayna olduğundan emin olun.
    NOT: Vitreus kollajen liflerinden gelen yansıma sinyali biraz zayıftır, bu nedenle arka plan gürültüsü lifleri görüntüleme yeteneğini etkileyebilir. 473 nm dalga boyu ile gelişmiş bir sinyal-gürültü oranı gözlendi, ancak 405 nm ile 635 nm arasında değişen dalga boylarına sahip vitreus kollajen liflerini görüntüleyebildik.
  3. Algılama dalga boylarını, aydınlatıcı lazerin dalga boyunu içerecek şekilde ayarlayın.
  4. Numune içindeki Z konumunu yönlendirmek için lazer gücünü mümkün olan en düşük ayara düşürün ve lamelden yansıyan ışığın flaşını belirleyin. Bu, lamel altında ve üstünde gerçekleşecektir (Şekil 6).
    NOT: Lamelin yanında, arka planda önemli bir yansıtıcı sinyal vardır. Lamelden uzakta, kolajen liflerinden yansıyan ışıktan gelen sinyal azalır.
  5. Z konumunu, lamel üst kısmının üzerinde ve numunenin içinde yer alacak şekilde ayarlayın.
  6. Lazer gücünü, genellikle bir floresan uygulaması için kullanılandan daha yüksek bir seviyeye yükseltin.
    NOT: Görüntüleme alanının merkezinde olacak bir yansıtıcı halka artefaktı vardır. Görüntüleme alanını yakınlaştırma ve merkezden uzaklaştırma kombinasyonu bu artefaktın dışlanmasına yardımcı olabilir (Şekil 7).
  7. Konfokal mikroskoplarda sinyal-gürültü oranını artırmak için standart yöntemler olan görüntü alma ayarlarında çizgi ortalamasını kullanın ve piksel bekleme süresini artırın.

4. CT-FIRE 14 kullanarak fiber genişliğinin görüntü analizi

  1. Bu web sitesindeki talimatları izleyerek CT Fire'ı kurun: https://github.com/uw-loci/curvelets/wiki/Downloads-and-Installation-(CTF).
    NOT: Burada kullanılan sürümler "CT-FIRE V3.0 BetaWindows64-2018b" ve MATLAB çalışma zamanı "MCR-2018b-win64" idi. Yazılımın çalışması için her ikisinin de indirilmesi gerekir.
  2. Görüntüleri 8 bit tif'e dönüştürün ve 8 bit tif görüntülerini CT-FIRE'da açın.
  3. Yazılımın sağ üst köşede CT-Fire olarak ayarlandığından emin olun ve ardından Çalıştır'ı seçin.
  4. CT-FIRE, analiz sonuçlarını otomatik olarak orijinal görüntü ile aynı klasörde bulunan "ctfireout" adlı bir klasöre yükleyecektir. "OL_ctFIRE" adıyla başlayan dosyayı orijinal görüntüyle karşılaştırarak ayıklama kalitesini inceleyin. Bu protokolü takip etmek için, görüntü segmentasyonu (yani fiberlerin tanımlanması) için aşağıdaki varsayılan ayarları kullanın: thresh_im2: 5; s_xlinkbox: 8; thresh_ext: 70; thresh_dang_L: 15; thresh_short_L: 15; s_fiberdir: 4; thresh_linkd: 15; thresh_linka: -150; thresh_flen: 15
    1. Lifler doğru bir şekilde tanımlanmamışsa, sağ üst köşedeki parametreler bölümünün altındaki Güncelle düğmesine tıklayarak parametreleri ayarlayın.
      NOT: Parametrelerin nasıl ayarlanacağına ilişkin kılavuz, CTFIRE uygulama klasöründe bulunan CT-FIRE kılavuzunun "20 Notlar" bölümünde 3. sayfada bulunabilir. Ek ipuçları, Liu ve ark. bölüm 3.5.215'teki makalesinde bulunabilir.
  5. Çıktı görüntülerinde görünen fiberleri sınırlamak için istenirse çıktı ayarlarını yapın. Bu protokolü takip etmek için aşağıdaki varsayılan ayarları kullanın: Minimum fiber uzunluğu [piksel]: 30; Resim Arş. [dpi]: 300; Fiber çizgi genişliği [0-2]: 0.5; Maksimum fiber genişliği [piksel]: 15
  6. Genişlik birimlerini pikselden μm'ye dönüştürmek için orijinal görüntüyü Fiji'de açın. Bir oran hesaplamak için görüntü penceresinin sol üst köşesinde hem piksel hem de μm olarak görünen görüntünün boyutlarını kullanın.

5. TWOMBLI16 kullanılarak lif yoğunluğu, eğrilik, hizalama, boşluk, hif büyüme birimi ve fraktal boyutun görüntü analizi

  1. TWOMBLI'yi https://github.com/wershofe/TWOMBLI'dan indirin.
  2. Dosyadaki talimatları izleyin: "Kurulum ve bağımlılıklar" altındaki TwombliDocumentation.
  3. TWOMBLI_v1/programs klasörünü açın ve AnamorfProperties.xml dosyayı AnamorfPropertiesEH.xml dosyayla değiştirin (Ek Dosya 1).
  4. TWOMBLI_v1/programlar klasöründe, Twombli_v1.ijm dosyasını Twombli_v2.ijm dosyasıyla değiştirin (Ek Dosya 2).
  5. İçinde "test HDM", "test maskeleri", "HDM" ve "maskeler" adlı boş klasörler bulunan bir klasör oluşturun.
  6. Görüntüleri 8 bit tif'e dönüştürün.
  7. Bir "test seti girişi" klasörüne 3-5 resim koyun.
  8. Analiz edilecek tüm görüntüleri "uygun" adı verilen alt klasörler olmadan tek bir klasöre koyun.
  9. Fiji'de Eklentiler | Makrolar | Koşmak | twombli/Programlar'da Twombli_v2.ijm'yi seçin.
  10. TWOMBLI'yi çalıştırmak için istemleri izleyin. Bu protokolü takip etmek için aşağıdaki parametreleri kullanın: Kontrast Doygunluğu, 0.35; Minimum Çizgi Genişliği, 3; Maksimum Çizgi Genişliği, 3; Min Eğrilik Penceresi, 40; Maksimum Eğrilik Penceresi, 40; Minimum Dal Uzunluğu, 10; Maksimum Ekran HDM, 100; Minimum boşluk çapı, 0
    NOT: Görüntülerin parametrelerinin ayarlanması gerekebilir. Yazılım, kullanıcıya parametreleri seçme konusunda rehberlik edecektir ve ek talimatlar programla birlikte gelen dosya TwombliDocumentation.docx bulunabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Üç genç yetişkin domuzun (4 aylık bir dişi, 5 aylık bir erkek ve 6 aylık bir dişi) her birinden birer göz, gözün alt limbus boyunca eksenel bir düzlemde kesilmesinden sonra görüntülendi. XY kesit düzleminde 4 mm aralıklı altı görüntüleme konumu elde edildi. Her görüntüleme konumunda, 70 μm x 70 μm görüntülerden oluşan bitişik 4 x 4 ızgara elde edildi (Şekil 8). Her domuz için, her görüntü birkaç parametre için ayrı ayrı analiz edildi (Tablo 1).

Li...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Önceki vitreus görüntüleme yöntemleri, artefakt lif agregasyonu13, lif organizasyonu, oryantasyon ve konumkaybı 17 gösterdi veya daha küçük bir görüş alanıyla çok daha yüksek çözünürlüğe dayanıyordu ve lif dağılımına ilişkin içgörülerisınırladı 10. Ex vivo, büyük kesitli taze dokunun konfokal yansıma mikroskobu, doğal lif organizasyonunu, oryantasyonunu ve konumunu korurken vitreus kollajen liflerinin mikron ölçeğind...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Tüm yazarlar ilgili herhangi bir çıkar çatışması bildirmemektedir.

Teşekkürler

Ulusal Sağlık Enstitüleri Çekirdek Hibe EY014800; Körlüğü Önleme Araştırmaları, New York, NY'den, Utah Üniversitesi Oftalmoloji ve Görsel Bilimler Bölümü'ne Sınırsız Hibe; NIH NEI K08 EY034549; İlköğretim Çocuk Hastanesi Vakfı; E. Matilda Ziegler Vakfı; Domuz gözleri için Dr. Guillaume L. Hoareau ve M. Austin Johnson'a teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Agarose IVWR0710-500G
Çok amaçlı silikon 1 silikon silikon silikon temiz, temizGE2795576
Selüloz sünger (Weck-Cel Göz Mızrağı)Beaver -Visitec000865
Özel 3 uçlu kaide NANA
Büyük kaplama camı monte etmek için özel adaptörNANA
Büyük coverslip cam, 1.42" x  2.36" No.1Ted Pella260460-100
Lego (klasik taban plakası, 1 x 8 karo, 1 x 8 tuğla, 1 x 6 plaka)Lego11023, 3008, 3666, 4162
Mikrotom bıçakları (yüksek profil) & nbsp;Lieca Biosystems14035838926
Olympus UPlanSApo 30x silikon objektifOlympusUPLSAPO30XS
Silikon büyük buz küpü tepsisi (Samuelworld)Amazon713243280060
Mendil mendilleri (Kimwipes) Kimberly Clark34120

Kaynaklar

  1. Sebag, J. Vitreous and vision degrading myodesopsia. Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).
  2. Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. Structure and mechanics of the vitreoretinal interface. J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).
  3. Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. Complications of acute posterior vitreous detachment. Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).
  4. Ketkar, M., et al. Vitreomacular traction - a review. Eye. 39 (4), 710-717 (2025).
  5. Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).
  6. Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices. PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).
  7. Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).
  8. Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'. Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).
  9. Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro. Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).
  10. Bos, K. J., et al. Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy. Micron. 32 (3), 301-306 (2001).
  11. Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body. Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).
  12. Filas, B. A., et al. Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).
  13. Los, L. I. The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration. Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).
  14. Bredfeldt, J. S., et al. Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer. J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).
  15. Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. Methods for quantifying fibrillar collagen alignment. Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).
  16. Wershof, E., et al. A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix. Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).
  17. François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy. Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).
  18. Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye. Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).
  19. Harris, J. R. Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy. Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).
  20. Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. Size-dependent rheology of type I collagen networks. Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).
  21. Raub, C. B., et al. Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy. Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Vitreus Kollajen AğıDomuz Gözü DiseksiyonuVitreus Jel GörüntülemeKollajen Lif OrganizasyonuEvirmeye MikroskopAgaroz GömmeRetina DekolmanıLif Ağı AnaliziJel Sertliği
Vitreus kollajen lif ağını görselleştirmek için domuz gözlerinin konfokal yansıma mikroskobuna hazırlanması
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.