Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Doğal öldürücü hücre aktivasyonunun hızlı, etiketsiz analizi için sahada konuşlandırılabilir lenssiz görüntüleme platformu

2.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68834

⸱

8 Ağustos 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Electronics and Information Engineering, Korea University, 2Department of Biotechnology and Bioinformatics, Korea University, 3Metaimmunetech Inc., 4Department of Gastroenterology and Hepatology, Guro Hospital, Korea University College of Medicine, 5Department of Laboratory Medicine, Anam Hospital, Korea University College of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, lenssiz gölge görüntüleme teknolojisini kullanarak doğal öldürücü (NK) hücre sayısı ve aktivitesinin hızlı tek hücreli analizi için etiketsiz bir yöntemi tanımlar. Bu yöntem, kırınım modellerinin bilgisayarlı analizi ile tek tek NK hücrelerindeki morfolojik değişiklikleri ölçer.

Özet

Doğal öldürücü (NK) hücreler, virüsle enfekte olmuş ve kötü huylu hücreleri ortadan kaldıran doğuştan gelen bağışıklığın önemli efektörleridir. NK hücre aktivitesinin izlenmesi, bağışıklık fonksiyonunu değerlendirmek için gereklidir. Bununla birlikte, akış sitometrisi gibi geleneksel yöntemler emek yoğun ve zaman alıcıdır. Bu protokol, lenssiz gölge görüntüleme teknolojisi (LSIT) kullanılarak doğal öldürücü (NK) hücre aktivitesinin hızlı analizi için etiketsiz bir tekniği tanımlar. Periferik kandan izole edilen ve tescilli bir aktivatör ile uyarılan NK hücreleri, LSIT platformu kullanılarak 5 dakika içinde analiz edildi. LSIT platformu, ışığın NK hücrelerine müdahalesiyle oluşan, gölge görüntüleri olarak bilinen holografik görüntüleri yakalar ve gölge parametrelerindeki değişiklikleri analiz ederek aktivasyon durumlarını izler. Tepeden tepeye mesafe (PPD) ve ikincil maksimum genişliğin standart sapması (WSM-SD) dahil olmak üzere gölge görüntülerden türetilen temel parametreler, hücre morfolojisini ve iç karmaşıklığı nicel olarak yansıtıyordu. Bu parametreler, hücrelerdeki morfolojik değişikliklere dayalı olarak NK hücre aktivitesinin kapsamlı bir değerlendirmesini ve niceliğini sağlamak için birleşik gölge parametresine (CSP) ve doğuştan gelen bağışıklık indeksine (I3) entegre edildi. Aktivasyondan sonra CSP'deki yüzde değişim olarak hesaplanan I3, NK hücre aktivitesinin doğrudan bir ölçüsü olarak görev yaptı. Sağlıklı bireylerden alınan NK hücreleri, bağışıklığı baskılanmış bireylerden sürekli olarak önemli ölçüde dahayüksek I3 değerleri göstermiştir. LSIT platformu, hasta başı teşhisi için uygun, hızlı ve uygun maliyetli bağışıklık profili oluşturma sağlar.

Giriş

Hücre morfolojisi, moleküler mekanizmaların önemli bir göstergesi olarak ortaya çıkmaktadır. Sadece hücre yapısının görsel bir temsilini sağlamakla kalmaz, aynı zamanda tek tek hücrelerin altında yatan süreçler ve işlevler hakkında değerli bilgiler sunar1. Bağışıklık hücrelerinin şeklini, boyutunu ve aktivitesini tek hücre düzeyinde analiz etmek, davranışları, heterojenlikleri ve sağlık ve hastalıktaki rolleri hakkında önemli bilgiler sağlar 2,3,4,5,6.

Bu önemli hücreler arasında, doğuştan gelen bağışıklık sisteminin merkezi bir bileşeni olan doğal öldürücü (NK) hücrelerbulunur 7,8. Virüsle enfekte olmuş ve kanserli hücreleri ortadan kaldırırlar ve sitokin salınımı yoluyla adaptif bağışıklık tepkisini düzenlerler 9,10,11. Kanser, viral enfeksiyonlar ve immün yetmezlikler sıklıkla NK hücrelerinin sayısını azaltır ve işlevlerini bozar 12,13,14. Bu nedenle, NK hücre aktivasyonu önemli bir biyobelirteç görevi görür ve bağışıklık sisteminin genel sağlığı hakkında bilgi sağlar. Sonuç olarak, NK hücre aktivasyonunun hızlı tek hücreli değerlendirmesi prognoz, tanı, hastalık izleme ve hasta tabakalaşması için gereklidir 15,16,17,18.

Şu anda, NK hücre aktivitesi, sitotoksik kapasitelerine (hedef hücreleri öldürme yeteneği) ve sitokin üretimine göre değerlendirilmektedir 19,20,21,22. Krom-51 (51Cr) salım testleri24,25, akış sitometrik deneyleri26,27 ve stimülasyondan sonra NK hücreleri tarafından salgılanan interferon-gama (IFN-γ) miktarını belirlemek için enzime bağlı immünosorbent testleri (ELISA) gibi hücre aracılı sitotoksisiteyi 23 ölçmek için geleneksel yöntemler 28,29,30 birkaç sınırlaması vardır. Bunlar arasında standardizasyon eksikliği, uzun protokoller (örneğin, bir gecede ELISA inkübasyonu), hücre etiketlemesine bağımlılık ve yüksek ekipman maliyetleri 31,32,33 yer alır. Bu zorluklar, hızlı sonuçlar, maliyet etkinliği, etiketsiz analiz ve yüksek verim sunan yenilikçi yöntemlere olan ihtiyacı vurgulamaktadır. Ek olarak, tek hücre düzeyinde NK hücre aktivasyonunun değerlendirilmesi, popülasyon heterojenliği ve stimülasyona bireysel hücresel tepkiler hakkında ayrıntılı bilgiler sağlar.

Bu sınırlamaların üstesinden gelmeyi amaçlayan gelişmekte olan teknolojiler arasında, lenssiz gölge görüntüleme teknolojisi (LSIT) özellikle etkili bir çözümdür 34,35,36. Basitleştirilmiş bir dijital satır içi holografi (DIH) olan LSIT, tek hücreli çözünürlükteNK hücre aktivasyonunun hızlı, etiketsiz, yüksek verimli analizini sağlar 37,38,39. DIH, mikroskobik nesneler hakkında üç boyutlu (3D) bilgileri yeniden oluşturmak için saçılan lazer ışığı ile dijital bir sensör üzerindeki doğrusal referans ışını arasındaki girişim desenlerini yakalar40,41. LSIT, 42,43,44,45 hücrelerinin kırınım modellerini (yani gölge görüntüleri) yakalamak için kısmen uyumlu bir LED, mikro iğne deliği ve CMOS sensörü kullanarak bu yaklaşımı basitleştirir. Bu tekniğin mantığı, bağışıklık hücrelerinin aktivasyonunun genellikle hücre boyutu, şekli, sitoplazmik tanecikliği ve nükleer yapıdaki değişiklikler dahil olmak üzere morfolojik değişikliklere neden olduğu gözlemine dayanmaktadır 46,47,48,49,50. LSIT, kırınım modelleri 51,52,53 üzerinde doğrudan etkisi olan bu değişikliklere karşı oldukça hassastır.

LSIT'in bu morfolojik değişikliklere ve bunların kırınım modelleri üzerindeki etkilerine olan duyarlılığı üzerine inşa edilen bu protokol, bundan sonra LSIT platformu54 olarak anılacak olan Cellytics NK platformunu kullanarak NK hücre sayısının ve fonksiyonel aktivitenin tek hücre düzeyinde hızlı ve doğru bir şekilde ölçülmesi için yeni bir yöntem sunar. Şekil 1A'da gösterildiği gibi, LSIT platformu numune işleme, etkinleştirme ve gölge görüntülemeyi kompakt bir çok kanallı iş akışına entegre eder. NK hücreleri tam kandan izole edildi, özel olarak formüle edilmiş bir aktivasyon stimülatör kokteyli (ASC) ile uyarıldı ve özel bir tahlil çipine yüklendi. ASC, maruziyetten sonraki 1 saat içinde NK hücrelerinde, LSIT platformu55,56 kullanılarak hassas bir şekilde tespit edilebilen, artan hücre boyutu ve iç karmaşıklık gibi morfolojik değişikliklere neden olur.

LSIT platformu, tek tek hücrelerin DIH modellerini (gölgelerini) yakalamak için bir LED ışık kaynağı ve bir CMOS sensörü kullanır (Şekil 1B). Özel bir algoritma daha sonra bu gölge modellerini analiz eder ve hücre boyutu ile ilişkili olan tepeden tepeye mesafe (PPD) ve sitoplazmanın karmaşıklığı ve düzensizliği ile ilişkili olan ikincil maksimumun genişliğinin standart sapması (WSM-SD) gibi temel parametreleri çıkarır (Şekil 1C, D). Platform, stimülasyondan önceki ve sonraki değerleri karşılaştırarak bileşik endeksleri hesaplar: birleşik gölge parametresi (CSP = PPD × WSM-SD) ve aktivasyondan sonra CSP'deki yüzde değişimi yansıtan doğuştan gelen bağışıklık indeksi (I³). CSP'nin tanıtılmasının nedeni, immün aktivasyonun hem hücre genişlemesini hem de artmış sitoplazmik karmaşıklığı içermesidir. İki kriterden yalnızca birine güvenmek, sınırda aktivasyonu kaçırabilir veya döküntü veya düzensiz aydınlatma gibi gürültüden etkilenebilir. CSP, her iki ölçümde de tutarlı kaymalar gerektirerek sınıflandırmayı geliştirir. Bu indeksler, floresan etiketleme veya karmaşık numune işleme olmadan farklı hücre popülasyonlarının aktivasyon durumlarını sınıflandırır.

Bu protokol, bağışıklık hücrelerinde aktivasyonun neden olduğu morfolojik değişiklikleri izlemek için hızlı, kantitatif ve etiketsiz bir yönteme ihtiyaç duyan araştırmacılar ve klinisyenler için özellikle yararlıdır. Temel immünolojik araştırmalar, klinik öncesi ilaç taraması ve immünoterapilerin değerlendirilmesi için uygundur ve immün durumun hızlı bir şekilde değerlendirilmesinin gerekli olduğu klinik ortamlarda tanısal veya prognostik bir araç olarak kullanılabilir. Bu yöntem, izole hücre popülasyonları, LSIT platformuna erişim ve spesifik bir NK hücre aktivasyon kokteyli gerektirir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm araştırmalar kurumsal yönergeleri takip etti ve Kore Üniversitesi Anam Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylandı (onay numarası: 2021AN0040). Reaktifler ve kullanılan ekipman Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Numune toplama ve işleme

NOT: Tüm insan kan örneklerini standart biyogüvenlik önlemleri ve uygun kişisel koruyucu ekipman kullanarak kullanın.

  1. Hastadan periferik tam kanı aseptik olarak steril bir heparin tüpünde toplayın.
  2. Antikoagülanı kanla karıştırmak için tüpü 8-10 kez hafifçe ters çevirin.
  3. Kan örneğini aldıktan hemen sonra analiz edin. Analiz gecikirse, numuneyi heparinize bir tüpte 2-8 °C'de saklayın ve 48 saat içinde kullanın.
    NOT: Tam kanı dondurmayın. Hücresel bütünlüğü korumak için taze örnekler kullanın.

2. NK hücre izolasyonu ve aktivasyonu

NOT: Bu protokol, hücre izolasyonu için NK Sep Kiti ve stimülasyon için NK Aktivasyon Kitinden oluşan NK Hazırlık Kitini kullanarak NK hücrelerinin doğrudan insan tam kanından izolasyonu ve aktivasyonu için optimize edilmiş ve kapsamlı bir iş akışı sunar. Bu kit, lenssiz bir görüntüleme sitometrisi platformu aracılığıyla hızlı fenotipik değerlendirmeyi mümkün kılmak için manyetik boncuk tabanlı negatif seçimi ve stimülasyonu entegre eder.

  1. Test öncesi kurulum
    1. Kitleri buzdolabından çıkarın ve oda sıcaklığına (15-28 °C) getirin.
      NOT: NK Sep kiti aşağıdaki bileşenleri içerir:
      (a) Yeşil kapak: Antikor kokteyli içeren reaksiyon tüpü.
      (b) Kırmızı kapak: Seyreltme ortamında (1,5 mL) manyetik parçacıklar içeren ayırma tüpü 1.
      (c) Mor kapak: Manyetik parçacıkları içeren ayırma tüpü 2.
      (d) Gri kapak: Geri kazanım tüpü (temiz ve boş).
      NK Aktivasyon kiti aşağıdaki bileşenleri içerir:
      (a) Araç: Kapalı bir alüminyum torba içinde sekiz şeffaf tüp.
      (b) ASC: Kapalı bir alüminyum torba içinde sekiz sarı tüp.
      Kapalı torbalardan sadece gerekli tüpleri çıkarın. Kullanılmayan bileşenleri yeniden kapatın ve soğutun.
    2. Gerekli ekipmanı hazırlayın: manyetik ayırıcı, steril uçlu pipetler ve 37 °C'ye ayarlanmış kalibre edilmiş bir inkübatör veya ısıtma bloğu.
  2. NK hücre izolasyon prosedürü
    1. Antikor kokteyli içeren yeşil kapaklı reaksiyon tüpüne 0.5 mL tam kan ekleyin. Tüpü 2-3 kez ters çevirerek hafifçe karıştırın ve 5 dakika inkübe edin.
    2. Tüm içeriği kırmızı kapaklı ayırma tüpüne 1 aktarın. 2-3 kez hafifçe karıştırın.
    3. Tüpü manyetik bir ayırıcı üzerine yerleştirin ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin.
    4. Mıknatıs yerindeyken, süpernatanın yaklaşık 1,5 mL'sini mor kapaklı ayırıcı tüpe 2 aktarın. 2-3 kez hafifçe karıştırın.
    5. Ayırma tüpünü iki manyetik standın üzerine yerleştirin ve 10 dakika inkübe edin.
    6. Mıknatıs hala takılıyken, süpernatantın yaklaşık 1.0 mL'sini gri kapaklı bir geri kazanım tüpüne aktarın. Dikkatlice karıştırın.
  3. NK hücre aktivasyonu
    1. Araç tüpüne 100 μL izole edilmiş NK hücre süspansiyonu ve ASC tüpüne 100 μL daha ekleyin
    2. İki tüpün içeriğini dikkatlice karıştırın.
    3. Tüpleri 37 °C'de 1 saat inkübe edin.
      NOT: Sabit bir inkübasyon sıcaklığını korumak için kalibre edilmiş bir ısıtma bloğu kullanın.

3. LSIT platformu ile görüntüleme ve analiz

NOT: Hücreler inkübasyondan hemen sonra analiz edilmelidir. Acil analiz mümkün değilse, inkübe edilmiş hücreleri 2-8 ° C'de saklayın ve 6 saat içinde analiz edin. LSIT platformu, DIH kullanarak insan kan örneklerinde hücre morfolojisini ve sayımını değerlendirir. Bağışıklık aktivitesini analiz etmek için, hem uyarılmamış hem de ASC ile uyarılmış NK hücreleri özel bir slayta yüklendi, cihaza yerleştirildi ve otomatik olarak görüntülendi.

  1. Cihaz kurulumu ve kalibrasyonu
    NOT: Bir numuneyi analiz etmeden önce daima arka plan kalibrasyonu yapın.
    1. LSIT platformunu açın. LED, fan ve kameranın çalıştığından emin olun.
    2. LSIT Capture yazılımını başlatın. Kimliğinizi ve şifrenizi girerek giriş yapın.
    3. Ayarlar'a gidin ve Kalibre Et'i seçin.
    4. Kapıyı açmak için dokunmatik ekrandaki Aç düğmesine basın veya fiziksel kayar kapı düğmesini kullanın. Çekmece açıldığında kalibrasyon sürgüsünü çıkarın ve saklayın.
    5. Test slaytı olmadığından emin olun. Çekmeceyi kapatın.
      NOT: Slaytların yüzeylerini temizlemek için yalnızca optik mendil kullanın.
    6. Optik yoğunluğu kalibre etmek için Arka planı ayarla'ya tıklayın.
    7. Kalibrasyon sürgüsünü yerine takın ve çekmeceyi kapatın.
    8. Kalibrasyonu başlat'a tıklayın.
      NOT: Cihazın üzerine sıvı dökülürse hemen kapatın. Silerek temizleyin. Cihazı sökmeyin.
  2. Tahlil slaytı hazırlama ve yükleme
    1. Bir tahlil slaytını poşetinden çıkarın, numune verileriyle etiketleyin ve temiz, düz bir yüzeye yerleştirin.
    2. Araç (uyarılmamış) numunesinin 10 μL'sini A ve B kanallarına pipetleyin.
    3. ASC ile uyarılan numunenin 10 μL'sini C ve D kanallarına pipetleyin.
      NOT: Kabarcık oluşumundan ve aşırı doldurmadan kaçının.
    4. Çekmeceyi çıkarmak için Aç'a basın, kalibrasyon sürgüsünü çıkarın ve bir saklama kutusuna yerleştirin.
    5. Hazırlanan tahlil slaytını yerleştirin ve Kapat'a basın.
  3. Görüntü alımı: Test Menüsü 1 - NK hücre aktivitesi
    NOT: Görüntü alımı başarısız olursa, aydınlatmayı ve s'yi kontrol edin.ampses seviyesi. Gerekirse yeniden kalibre edin.
    1. LSIT sistemine giriş yapın ve ana ekranda NK Hücre Aktivite Testini seçin.
    2. Örnek kimliğini girin veya barkod tarayıcıyı kullanın.
      NOT: Arşivlenmiş listeden örnek kimliğini almak için Geri Al düğmesini kullanın.
    3. Kaydı başlatmak için Yakala'ya basın.
    4. Görüntüyü yakaladıktan sonra Analiz Et'e tıklayın
    5. Ekranda görüntülenen NK hücre etkinliğini (%) ve hücre sayısını kontrol edin.
      NOT: Geçerli sonuçlar sayısal olarak görüntülenir. I3 aralığın altındaysa, "%≤100" görüntülenir. Aralığın üzerinde "%>300" görüntülenir.
    6. Sonuçları bir USB'ye indirin veya dokunmatik ekran menüsünü kullanarak yazdırın.
  4. Görüntü alımı: Test Menüsü 2 - hücre sayımı
    1. Ana arayüzdeki Test menüsü 2 altında Hücre sayma seçeneğini seçin.
    2. 10 μL numune miktarını yeni bir tahlil slayt kanalına yükleyin.
    3. Slaytı yerleştirin, çekmeceyi kapatın ve örnek kimliğini girin.
    4. Varsa seyreltme faktörünü girin.
    5. Sayım'a basın.
      NOT: Sonuç test aralığı içindeyse, NK hücrelerinin sayısı sistem ekranında sayısal bir değer olarak görüntülenir. Test aralığının altındaki sonuçlar için "≤ 10 hücre/μL", üzerindeki sonuçlar için "> 1.000 hücre/μL" görüntülenir.
    6. Sonuçları hücre/μL olarak görüntüleyin.
      NOT: Görüntülerdeki gerçek hücre sayısını görüntülemek için siyah sonuç alanını değiştirin.
    7. Sonuçları gözden geçirin ve indirin veya yazdırın.
      NOT: Doğru sonuçlar elde etmek için doğru seyreltme faktörünün girildiğinden emin olun.

4. Analiz sonrası temizlik

  1. Aç düğmesini veya fiziksel geçiş anahtarını kullanarak çekmeceyi açın.
  2. Kullanılan slaydı çıkarın.
  3. Sensörü korumak için kalibrasyon sürgüsünü çekmeceye geri yerleştirin.
  4. Çekmeceyi kapatın.
  5. Kullanılmış tüpleri, uçları ve kızakları laboratuvar atıkları yönetmeliklerine uygun olarak atın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokolü takiben, LSIT platformu, hücrelerdeki morfolojik değişikliklere dayalı olarak NK hücre aktivasyonunun kantitatif, etiketsiz bir değerlendirmesini sağlar. Şekil 2A , ASC ile veya ASC olmadan 2 saatlik inkübasyondan sonra sağlıklı donörlerden alınan birincil NK hücrelerinin Hema-3 ile boyanmış sitospin preparatlarını göstermektedir. ASC ile aktivasyon, araç (uyarılmamış) kontrollere kıyasla, öncelikle hücre büyümesi ve artan iç karmaşıklık veya taneciklik gibi belirgin değişiklikl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, NK Hazırlık Kiti kullanılarak hücre izolasyonu ve aktivasyonunu LSIT platformu üzerinden yapılan analizle birleştiren NK hücre aktivasyonunu ölçmek için standartlaştırılmış, etiketsiz bir yöntem sunar. 51Cr salınımı, akış sitometrisi ve ELISA gibi geleneksel tahlillere hızlı ve kantitatif bir alternatif sunar. Protokol, LSIT platformu ile donatılmış laboratuvarlar için geliştirilmiştir ve NK hücrelerinin sayısının ve I3'ün gölge görüntü analizi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

I.L., S.H., H.S.J. ve S.S., bu çalışmada sunulan LSIT platformunun geliştirilmesi ve ticarileştirilmesinde yer alan bir şirket olan Metaimmunetech Inc. ile bağlantılıdır. Özellikle, H.S.J. Kurucu ve CEO'dur, SH CEO'dur ve SS şirketin CTO'sudur. Bununla birlikte, yazarlar, bu makaledeki sonuçların ve yorumların objektif olarak rapor edildiğini ve herhangi bir ticari çıkardan etkilenmediğini teyit etmektedir. Diğer tüm yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmez.

Teşekkürler

Bu çalışma, Kore Ulusal Araştırma Vakfı'nın (NRF) Temel Bilim Araştırma Programları (Hibe #: RS-2024-00353675, Hibe #: 2021R1I1A3056109), IITP (Bilgi ve İletişim Teknolojileri Planlama ve Değerlendirme Enstitüsü) tarafından denetlenen ITRC (Bilgi Teknolojileri Araştırma Merkezi) destek programı ve Bilim ve BİT Bakanlığı (MSIT) tarafından finanse edilen Ar-Ge Sonuçları için Ticarileştirme Teşvik Ajansı (COMPA) tarafından desteklenmiştir. Kore (Hibe #: IITP-2025-RS-2023-00258971 (%50), Hibe #: 2710084652), Kore Okyanuslar ve Balıkçılık Bakanlığı tarafından finanse edilen Kore Deniz Bilimleri ve Teknolojisi Teşvik Enstitüsü (KIMST) destek programı (Hibe #: 20210660) ve Kore Üniversite Bursu. Yazarlar, Cellytics NK cihazının geliştirilmesinde Kore Üniversitesi'nden transfer edilen teknolojiye dayalı işbirlikleri için Metaimmunetech Inc.'e teşekkür eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.7 mL Mikrosantrifüj TüpleriAXYGENMCT-175-CSteril, DNase/RNase içermez
Test SlaytıMetaimmunetechAS050-GCellytics sistemi için özel slayt
Bir kutuda 50 slayt
Yazılımlı Cellytics sistemiMetaimmunetechCS001 SerisiLenssiz gölge görüntüleme platformu
Santrifüj (döner kepçe rotoru)LABOGEN1580R Serisi300– 500 &kez; G aralığı
CMOS Görüntü SensörüCellytics Cihazına dahildirTümleşikKırınım görüntüleme için kullanılır
Cytospin SantrifüjNasco KoreTXT3 Sito SantrifüjSitospin boyama için
Dijital Isıtma Bloğu (37 ° C)Daihan BilimselDH. WHB00349Hücre inkübasyonu için
ELISA Kiti (IFN-γ)R& D sistemiDIF50Cİnsan IFN-γ ELISA kiti
Guava easyCyte Akış SitometresiKırlangıç0500-5005CD107a ifade analizi için
Hema 3 İstatistik PaketiTermo Fisher122-911Sitospin boyama için
IL-12 (Rekombinant İnsan)R& D sistemiASC'nin Bileşeni
IL-2 (Rekombinant İnsan)Peprotech200-02ASC'nin Bileşeni
Manyetik Ayırma RafıMetaimmunetechM13R8 SerisiBoncuk ayırma için
Mikroskop SlaytlarıMarienfeld'in1000612Sitospin preparatları için
NK aktivasyon kitiMetaimmunetechMIT2301V, MIT2301ANK hücre aktivasyonu için
NK Eylül KitiMetaimmunetechMIT2301-500NK hücre izolasyonu için
PE Fare Anti-İnsan CD107a, 100testBD biyolojik bilimleri555801CD107a ifade analizi için
İğne Deliği AçıklığıCellytics Cihazına dahildirTümleşikLSIT aydınlatma yolunda kullanılır
Pipetler (2– 20 &mikro; L, 20– 200 &mikro; L)AXYGENT-200-YAyarlanabilir ses seviyesi
Gölge Kalibrasyon SlaydıMetaimmunetechAS050-GCihaz kalibrasyonu için.
1 Test slayt kutusunda 1 Kalibrasyon slaydı
Vorteks KarıştırıcıMerck SI-0246AYeniden süspansiyon için

Kaynaklar

  1. Alizadeh, E., et al. Cellular morphological features are predictive markers of cancer cell state. Comput Biol Med. 126, 104044(2020).
  2. Chen, D., Luo, Y., Cheng, G. Single cell and immunity: Better understanding immune cell heterogeneities with single cell sequencing. Clin Transl Med. 13 (1), e1159(2023).
  3. McWhorter, F. Y., Wang, T., Nguyen, P., Chung, T., Liu, W. F. Modulation of macrophage phenotype by cell shape. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (43), 17253-17258 (2013).
  4. Karetin, Y. Morphometry of cellular behavior of coelomocytes from starfish Asterias amurensis. PeerJ. 9, e12514(2021).
  5. Chen, D., Luo, Y., Cheng, G. Single cell and immunity: Better understanding immune cell heterogeneities with single-cell sequencing. Clin Transl Discov. 2 (4), e162(2022).
  6. Bendall, S. C., et al. Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum. Science. 332 (6030), 687-696 (2011).
  7. Vivier, E., et al. Innate or adaptive immunity? The example of natural killer cells. Science. 331 (6013), 44-49 (2011).
  8. Shimasaki, N., Jain, A., Campana, D. NK cells for cancer immunotherapy. Nat Rev Drug Discov. 19 (3), 200-218 (2020).
  9. Mujal, A. M., Delconte, R. B., Sun, J. C. Natural killer cells: From innate to adaptive features. Annu Rev Immunol. 39 (1), 417-447 (2021).
  10. Paolini, R., Bernardini, G., Molfetta, R., Santoni, A. NK cells and interferons. Cytokine Growth Factor Rev. 26 (2), 113-120 (2015).
  11. Cook, K. D., Waggoner, S. N., Whitmire, J. K. NK cells and their ability to modulate T cells during virus infections. Crit Rev Immunol. 34 (5), 359-388 (2014).
  12. Kaur, G., Sandeep, F., Olayinka, O., Gupta, G. Morphologic changes in circulating blood cells of COVID-19 patients. Cureus. 13 (2), e13416(2021).
  13. Hammer, Q., Cuapio, A., Bister, J., Björkström, N. K., Ljunggren, H. G. NK cells in COVID-19-from disease to vaccination. J Leukoc Biol. 114 (5), 507-512 (2023).
  14. Frutoso, M., Mortier, E. NK cell hyporesponsiveness: More is not always better. Int J Mol Sci. 20 (18), 4514(2019).
  15. Dufva, O., et al. Single-cell functional genomics reveals determinants of sensitivity and resistance to natural killer cells in blood cancers. Immunity. 56 (12), 2816-2835.e13 (2023).
  16. Song, P., Li, W., Guo, L., Ying, J., Gao, S., He, J. Identification and validation of a novel signature based on NK cell marker genes to predict prognosis and immunotherapy response in lung adenocarcinoma by integrated analysis of single-cell and bulk RNA-sequencing. Front Immunol. 13, 850745(2022).
  17. Viel, S., et al. Monitoring NK cell activity in patients with hematological malignancies. Oncoimmunology. 2 (9), e26011(2013).
  18. Strauss-Albee, D. M., et al. Human NK cell repertoire diversity reflects immune experience and correlates with viral susceptibility. Sci Transl Med. 7 (297), 297ra115(2015).
  19. Liu, S., Galat, V., Galat, Y., Lee, Y. K. A., Wainwright, D., Wu, J. NK cell-based cancer immunotherapy: from basic biology to clinical development. J Hematol Oncol. 14 (1), 7(2021).
  20. Kim, J. M., et al. Assessment of NK cell activity based on NK cell-specific receptor synergy in peripheral blood mononuclear cells and whole blood. Int J Mol Sci. 21 (21), 8112(2020).
  21. Lorenzo-Herrero, S., Sordo-Bahamonde, C., González, S., López-Soto, A. Evaluation of NK cell cytotoxic activity against malignant cells by the calcein assay. Methods Enzymol. 631, 483-495 (2020).
  22. Nederby, L., Jakobsen, A., Hokland, M., Hansen, T. F. Quantification of NK cell activity using whole blood: Methodological aspects of a new test. J Immunol Methods. 458, 21-25 (2018).
  23. Meza Guzman, L. G., Nicholson, S. E. Determining activation status of Natural Killer cells following stimulation via cytokines and surface receptors. Methods Mol Biol. 2463, 181-194 (2022).
  24. Elsner, L., Dressel, R. 51Cr-release to monitor NK cell cytotoxicity. Methods Enzymol. 631, 497-512 (2020).
  25. Neri, S., Mariani, E., Meneghetti, A., Cattini, L., Facchini, A. Calcein-acetyoxymethyl cytotoxicity assay: standardization of a method allowing additional analyses on recovered effector cells and supernatants. Clin Diagn Lab Immunol. 8 (6), 1131-1135 (2001).
  26. Zarcone, D., Tilden, A. B., Cloud, G., Friedman, H. M., Landay, A., Grossi, C. E. Flow cytometry evaluation of cell-mediated cytotoxicity. J Immunol Methods. 94 (1-2), 247-255 (1986).
  27. Ogino, T., Wang, X., Ferrone, S. Modified flow cytometry and cell-ELISA methodology to detect HLA class I antigen processing machinery components in cytoplasm and endoplasmic reticulum. J Immunol Methods. 278 (1-2), 33-44 (2003).
  28. Lion, E., Smits, E. L. J. M., Berneman, Z. N., Van Tendeloo, V. F. I. Quantification of IFN-gamma produced by human purified NK cells following tumor cell stimulation: comparison of three IFN-gamma assays. J Immunol Methods. 350 (1-2), 89-96 (2009).
  29. Cox, J. H., Ferrari, G., Janetzki, S. Measurement of cytokine release at the single cell level using the ELISPOT assay. Methods. 38 (4), 274-282 (2006).
  30. Clay, T., Hobeika, A., Mosca, P., Lyerly, H., Morse, M. Assays for monitoring cellular immune responses to active immunotherapy of cancer. Clin Cancer Res. 7 (5), 1127-1135 (2001).
  31. Somanchi, S. S., McCulley, K. J., Somanchi, A., Chan, L. L., Lee, D. A. A novel method for assessment of natural killer cell cytotoxicity using image cytometry. PLOS ONE. 10 (10), e0141074(2015).
  32. Rico, L. G., Ward, M. D., Bradford, J. A., Petriz, J. Flow cytometric quantification of cytotoxic activity in whole blood samples. Curr Protoc. 1 (8), e215(2021).
  33. Kang, H., Choi, A. R., Ryu, J. H., Oh, E. J. Establishing a reference interval for flow cytometry-based NK activity (FC-NKA) assay in healthy Korean population. Lab Med Online. 13 (4), 349-355 (2023).
  34. Baik, M., et al. Label-free CD34+ cell identification using deep learning and lens-free shadow imaging technology. Biosensors. 13 (12), 993(2023).
  35. Cheon, H., et al. Cellytics: A digital inline holography platform for single cell analysis in biomedical and environmental applications. 2024 IEEE SENSORS. 2024, 1-4 (2024).
  36. Roy, M., Jin, G., Seo, D., Nam, M. H., Seo, S. A simple and low-cost device performing blood cell counting based on lens-free shadow imaging technique. Sens Actuators B Chem. 201, 321-328 (2014).
  37. Kim, J., Lee, S. J. Digital in-line holographic microscopy for label-free identification and tracking of biological cells. Mil Med Res. 11 (1), 38(2024).
  38. Wu, Y., Ozcan, A. Lensless digital holographic microscopy and its applications in biomedicine and environmental monitoring. Methods. 136, 4-16 (2018).
  39. Baker, M., Gollier, F., Melzer, J. E., McLeod, E. Lensfree air-quality monitoring of fine and ultrafine particulate matter using vapor-condensed nanolenses. ACS Appl Nano Mater. 6 (13), 11166-11174 (2023).
  40. Palacios, F., Ricardo, J., Palacios, D., Gonçalves, E., Valin, J. L., De Souza, R. 3D image reconstruction of transparent microscopic objects using digital holography. Opt Commun. 248 (1-3), 41-50 (2005).
  41. Xu, W., Jericho, M. H., Meinertzhagen, I. A., Kreuzer, H. J. Digital in-line holography for biological applications. Proc Natl Acad Sci USA. 98 (20), 11301-11305 (2001).
  42. Shin, S., et al. Field-portable seawater toxicity monitoring platform using lens-free shadow imaging technology. Water Res. 230 (119585), 119585(2023).
  43. Su, T. W., Seo, S., Erlinger, A., Ozcan, A. High-throughput lensfree imaging and characterization of a heterogeneous cell solution on a chip. Biotechnol Bioeng. 102 (3), 856-868 (2009).
  44. Mudanyali, O., Erlinger, A., Seo, S., Su, T. W., Tseng, D., Ozcan, A. Lensless on-chip imaging of cells provides a new tool for high-throughput cell-biology and medical diagnostics. J Vis Exp. (34), e1650(2009).
  45. Roy, M., Seo, D., Oh, C. H., Nam, M. H., Kim, Y. J., Seo, S. Low-cost telemedicine device performing cell and particle size measurement based on lens-free shadow imaging technology. Biosens Bioelectron. 67, 715-723 (2015).
  46. Vaghashiya, R., et al. Machine learning based lens-free shadow imaging technique for field-portable cytometry. Biosensors. 12 (3), 144(2022).
  47. Roy, M., Seo, D., Oh, C. H., Nam, M. H., Seo, S. Staining-free cell viability measurement technique using lens-free shadow imaging platform. Sens Actuators B Chem. 224, 577-583 (2016).
  48. Cheon, H., et al. Multichannel Cellytics for rapid and cost-effective monitoring of leukocyte activation. Biosensors. 15 (3), 143(2025).
  49. Lee, A., et al. Quantification of natural killer cell activation using lens-free shadow imaging technology. Proc Conf Lasers Electro-Opt Pac Rim. CMP15A_02. , (2022).
  50. Seo, D., Oh, S., Lee, M., Hwang, Y., Seo, S. A field-portable cell analyzer without a microscope and reagents. Sensors. 18 (1), 85(2017).
  51. Seo, D., et al. Field-portable leukocyte classification device based on lens-free shadow imaging technique. Biosensors. 12 (2), 47(2022).
  52. Baik, M., et al. Machine learning based CD34+ cell detection using lens-free shadow imaging technology. Proc Conf Lasers Electro-Opt Pac. 2022, 1-2 (2022).
  53. Roy, M., Seo, D., Oh, S., Chae, Y., Nam, M. H., Seo, S. Automated micro-object detection for mobile diagnostics using lens-free imaging technology. Diagnostics. 6 (2), 17(2016).
  54. Lee, I., et al. Use of a platform with lens-free shadow imaging technology to monitor natural killer cell activity. Biosens Bioelectron. 261 (116512), 116512(2024).
  55. Jang, H., et al. Investigation of NK cell activity in healthy and immunocompromised individuals using lens-free shadow imaging technology. 2024 IEEE SENSORS. 2024, 1-4 (2024).
  56. Lee, A., Lee, I., Nam, M. H., Jun, H. S., Seo, S. Single cell-based rapid natural killer cell activity measurement by using lens-free shadow imaging technology. Proc SPIE Biophotonics Immune Responses. 123800H, (2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Doğal Katil HücrelerNK Hücre Aktivasyonuİmmün ProfillemeGölge GörüntülemeDoğuştan Gelen Bağışıklık İndeksiHücre MorfolojisiManyetik AyırmaSitoplazmik Kompleksite
Doğal öldürücü hücre aktivasyonunun hızlı, etiketsiz analizi için sahada konuşlandırılabilir lenssiz görüntüleme platformu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.