Yöntem makalesi

Schwann Hücrelerinde Oksidatif Stres Hasarını Azaltmak için IL-1R1'i Hedefleyerek NF-κB Yolu Aktivitesini Azaltan Muskon Üzerine Deneysel Çalışma

DOI:

10.3791/69009

⸱

10 Ekim 2025

 ,  ,  , 
1Department of Rehabilitation, Baoshan Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Institute of Innovative Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, miskteki ana bileşen olan muscone'nin Schwann hücrelerinin proliferasyonu ve apoptozu üzerindeki etkisini incelemektedir. Sonuçlar, Bell felcinde oksidatif stres hasarını azaltmak için IL-1R1'i inhibe ederek misk azaltıcı NF-κB yolu aktivitesinin potansiyel mekanizmasını ön olarak göstermektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğal miskin Bell felcini nasıl tedavi ettiğinin altında yatan mekanizma net değildir. Bu çalışma, in vitro periferik sinir hasarının tedavisinde miskin potansiyel mekanizmasını ortaya çıkarmayı amaçlamaktadır. Bunu başarmak için, kobalt klorür (CoCl2) kullanılarak Schwann hücrelerinde (SC'ler) bir oksidatif stres hasarı modeli oluşturulmuştur . Muscone'un (Mus) bu yaralanma üzerindeki koruyucu etkilerini değerlendirmek ve mekanizmasını araştırmak için hücre canlılığı deneyleri, siRNA transfeksiyonu, enzime bağlı immünosorbent testleri (ELISA), kantitatif ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR), western blotlama, immünofloresan boyama ve hücrelerin ultrastrüktürel analizi kullanıldı. Sonuç olarak, Mus müdahalesinin hipoksi altında SC proliferasyonunu ve S-100b mRNA'yı arttırdığı, aynı zamanda reaktif oksijen türlerini (ROS) azalttığı ve süperoksit dismutaz (SOD) seviyelerini yükselttiği belirtilmektedir. Mus, IL-1β ve TNF-α'yi azaltarak hipoksik SK'lerde oksidatif stresi ve inflamasyonu iyileştirdi. Ayrıca Mus, C-JUN ve GDNF dahil olmak üzere oksijen metabolizması, hücre onarımı ve nörometabolizma ile ilgili temel göstergeleri modüle etti. SC membranına lokalize olan IL-1R1, hipoksi tarafından yukarı regüle edildi, ancak Mus müdahalesini takiben önemli ölçüde aşağı regüle edildi. Muş ayrıca NF-κB yolağı bileşenlerinin (IRAK1, IKK, p65, p50) ekspresyonunu inhibe etti ve IκB-α artırdı. Kritik olarak, siRNA yıkımı yoluyla IL-1R1 ekspresyonunun ortadan kaldırılması, Mus ile tutarlı bir etki gösterdi. Mus'un IL-1R1'i baskılayarak, NF-κB yolunun inhibisyonu yoluyla hipoksik SC'lerde inflamasyonu hafiflettiği sonucuna varılmıştır. Bu çalışma, IL-1R1'in hipoksiye bağlı SK disfonksiyonundaki rolünü göstermiştir. Ayrıca Mus, Bell felcini tedavi etmek için potansiyel olarak etkili bir ilaç olabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Misk (Mus), 3-metilsiklopentadekanon, 1906 gibi erken bir tarihte geyik miskinin doğal özünden izole edildi1. Değerli ve etkili bir geleneksel Çin tıbbı (TCM) olan misk, detümesans, anti-inflamasyon, resüsitasyon ve kan dolaşımını teşvik etme gibi kapsamlı iyileştirici etkilere sahiptir2. Misk içeren TCM, merkezi sinir sistemi hastalığı3, detoksifikasyon4, gastrointestinal tümörler5, viral hepatit6 ve koroner kalp hastalığı7 vb. dahil olmak üzere çeşitli yaygın hastalıklar için kullanılmıştır. Musk'ın aktif farmasötik bileşeni olan Mus, anti-inflamasyon8, anti-oksidasyon 8,9, nöronal hasar onarımı ve miyokard enfarktüsünü hafifletici10 vb. içeren mükemmel biyolojik etkiler göstermiştir. Mekanik olarak, çalışmalar Mus'un İnterlökin (IL)-1β, IL-6, tümör nekroz faktörü (TNF)-α, reaktif oksijen türleri (ROS)1,8 gibi inflamasyon sitokinlerinin salınımını azaltabildiğini ve mitojenle aktive olan protein kinazı (MAPK), aktive edilmiş B hücrelerinin nükleer faktör kappa-hafif zincir güçlendiricisini (NF-κB), rapamisinin AKT / mekanik hedefini (mTOR) ve CaN / Erk1/2 yolu1'i düzenleyebildiğini göstermiştir, 8,11 vb.

Çin'de, daha önceki literatür kayıtlarına ve klinik deneyimlere göre bazı doktorların Bell felcini doğal misk ile başarılı bir şekilde tedavi ettiği bildirilmiştir 12,13,14,15. Muş, tanı ve tedavi kılavuzlarında önerilen bir ilaç değildir, ancak az gelişmiş tıbbi alanlarda veya steroid veya antiviral ilaç kullanamayan bazı kişiler için Muş tercih edilen bir diğer seçenek olabilir. Son yıllarda yapılan literatür analizleri de periferik fasiyal felç tedavisi için yayınlanmış Çin tıbbı yama reçeteleri ve akupunktur noktası çalışmalarında en sık kullanılan Çin tıbbının misk olduğunu göstermektedir16. Muş ile ilgili birçok farmakolojik ve tıbbi çalışma olmasına rağmen, miskin Bell felcini tam olarak nasıl iyileştirdiği ve altta yatan nörokimyasal ve hücresel biyolojik mekanizmaların neler olduğu hala bilinmemektedir.

Akut idiyopatik bir yüz felci olan Bell felci, tüm yüz kaslarını innerve eden periferik fasiyal sinirin işlev bozukluğundan kaynaklanır. Bell felci semptomlarının en belirgin belirtisi, bir taraftaki yüz kaslarının zayıflığı ve sarkmasıdır. Bell'in yüz felci hayati tehlike oluşturmasa da hastanın yaşam kalitesini etkileyebilir ve hatta anksiyete ve depresyona neden olabilir. Özellikle endişe verici olan şey, hastaların %30'a kadarının uygun tedaviyle bile senkinezi, kontraktür, kalıcı yüz parezi ve yüz asimetrisi gibi uzun süreli sekellerden muzdarip olmasıdır. Bu nedenle Bell felcinin çözümünü bulmak ve felç riskini azaltmak en büyük amacımızdır. Bell felcinin patojenik mekanizması hakkındaki mevcut bilgiler belirsizliğini koruyor. Son araştırmalar, virüslerin yeniden aktivasyonunun Bell felcinin ana nedeni olabileceğini ve bu virüslerin Bell felci atağını tetiklemek için nöronal ödem ve iltihaplanmaya neden olabileceğini göstermiştir.

Son kanıtlara dayanarak, Mus'un fasiyal sinirdeki oksidatif stres hasarını iyileştirerek Bell felci semptomlarını hafiflettiğini varsaydık. Bu çalışma, Mus'un terapötik etkilerini deneysel olarak göstererek, SC'lerde yukarı regüle edilmiş IL-1R1'in NF-κB yolunu aktive ederek hücresel hasara neden olduğunu ortaya koydu. En önemlisi, Mus'un IL-1R1'i aşağı regüle ederek NF-κB sinyalini inhibe ettiğini gösterdik. Bulgularımız, in vitro oksidatif strese maruz kalan SC'lerde IL-1R1 yukarı regülasyonunun rolünü tanımladı ve Mus uygulamasını yeni bir terapötik strateji olarak konumlandırdı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu deneysel araştırma, Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin onayı ile yapılmıştır (Onay Numarası: LL-240077).

Hücre kültürü ve ilaç müdahalesi
Sıçan Schwann hücreleri (SC'ler), bazal ortam, %5 fetal sığır serumu, %1 Schwann hücre büyüme takviyesi, %1 penisilin ve %1 streptomisin içeren Schwann Hücre Ortamında kültürlendi. Tüm hücreler 37 °C'de% 5 CO2 atmosferinde tutuldu. %70-80 yoğunluğa kadar büyümelerine izin verildiğinde, SC'ler dört gruba ayrıldı (n = grup başına 5): (1) NC grubu; (2) NC+CoCl2 grubu; (3) NC+CoCl2+Mus grubu; (4) NC+CoCl2+siIL-1R1+Mus grubu.

Hipoksiyi taklit etmek için sıklıkla kullanılan bir ajan olan kobalt klorürün (CoCl2), hipoksi ile indüklenebilir faktörlerin bozunmasını ve stabilizasyonunu engellemesi ve HIF-1α proteini15'in birikmesi gibi hipoksiye benzer tepkileri tetiklediği bilinmektedir. Osuru ve ark.17'ye dayanan modifiye yönteme göre, NC+CoCl2 grubunda ve NC+CoCl2+Mus grubunda, SC'ler 8 saat boyunca 240 μM CoCl2 ile desteklenmiş Schwann Hücre Ortamında kültürlendi, nemlendirilmiş bir inkübatörde (%21 O2) 37 °C'de %95 hava ve %5 CO2 atmosferik koşullarda. Daha sonra Mus gruplarında 24 saat daha 1,25 μg/mL Mus müdahalesi uygulandı. Bu arada, NC+CoCl2+siIL-1R1+Mus grubunda, SC'ler önce 24 saatlik siRNA enfeksiyonu ile tedavi edildi, ardından 8 saat boyunca 240 μM CoCl2 ile sürekli olarak kültürlendi, ardından önceki gruplarda olduğu gibi 24 saat daha 1.25 μg/mL Mus müdahalesi yapıldı. Deneysel sürecin akış şeması Şekil 1'de gösterilmektedir.

Hücre canlılığı testi
SC'lerin canlılığı, üreticinin talimatlarına göre hücre sayma kiti-8 (CCK-8) tahlil reaktifi kullanılarak belirlendi. 5 × 105 hücre/kuyu yoğunluğunda kültürlenmiş SC'ler, %5CO2 nemlendirilmiş atmosferde 37 °C'de 100 μL tam büyüme ortamına sahip 96 oyuklu bir hücre kültürü plakasına ekildi. Birleşme %70-80'e ulaştığında, her bir oyuğa 10 μL CCK-8 çözeltisi ilave edildi ve plakalar 37 °C'de 1 saat inkübe edildi. 96 oyuklu plakaların optik yoğunluğu (OD), bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm'de ölçüldü ve hücre canlılığı hesaplandı. Hücreler dört gruba ayrıldı: NC grubu, NC+CoCl2 grubu, NC+CoCl2+Mus grubu ve NC+CoCl2+siIL-1R1+Mus grubu. Deneysel sonuçlar boş bir kuyucuk (orta+CCK8 çözeltisi) kullanılarak düzeltildi. Hücre hayatta kalma oranı = [(deney grubu - boş kuyu)/(NC grubu - boş kuyu)] × %100.

siRNA transfeksiyonu
Transfeksiyon, üreticinin ticari bir in vitro siRNA/miRNA transfeksiyon reaktifinin talimatlarına göre, 24 saat boyunca 100 ng/μL konsantrasyonda siIL-1R1'in (AUAGUCUUGGAUUUUCCCAA, GGAGAAAAUCCAAGACUAUGA) sentetik siRNA dupleksleri kullanılarak gerçekleştirildi. siIL-1R1 transfeksiyonundan sonra, siIL-1R1 ekspresyonları, 24 saatlik transfeksiyon18'den sonra RT-qPCR analizi yapılarak değerlendirildi ve verimliliğin %80'den yüksek olması sağlanmalıdır

Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA)
Kültür sonrası süpernatanlar toplandı ve gruba özgü koşullar altında (2950 g, 20 dakika, 25 °C) santrifüjlendi. Hücre dışı IL-1β, TNF-α, ROS ve SOD seviyeleri, kit talimatları izlenerek ELISA ile test edildi. 450 nm'de nihai absorbans okumaları bir mikroplaka okuyucu kullanılarak elde edildi.

RNA izolasyonu ve kantitatif gerçek zamanlı PCR (RT-qPCR)
Üretici talimatlarını takiben, TRizol reaktifi kullanılarak kültürlenmiş hücrelerden toplam RNA ekstrakte edildi. Hedef genler (IL-1β, TNF-α, S-100b, IL-1R1), bir PCR cihazında 40 döngü boyunca 20 μL SYBR qPCR karışım reaksiyonlarında amplifiye edildi. Aktin β kullanılan veri normalizasyonu, erime eğrisi analizi ile doğrulanan PCR özgüllüğü. 2−ΔΔCt yöntemi, üç kopya halinde test edilen beş bağımsız numuneden nispi ekspresyonu ölçtü. Primerler Tablo 1'de listelenmiştir.

Batı lekesi
Tedaviyi takiben, tüm deney gruplarından SC'ler 24 saat inkübe edildi ve hasat edildi. Toplam protein, bir toplam protein ekstraksiyon kiti kullanılarak ekstrakte edildi. Protein lizatları, 98 °C'de 5 dakika denatüre edilmiş sodyum dodesil-sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yükleme tamponu ile birleştirildi ve %10-12 SDS-poliakrilamid jeller üzerinde ayrıldı (şerit başına 20 μg). Çözünmüş proteinler elektroforetik olarak poliviniliden florür (PVDF) membranlarına aktarıldı. Membranlar, oda sıcaklığında 60 dakika boyunca %5 yağsız kuru sütle bloke edildi, daha sonra aşağıdaki birincil antikorlarla 6 mL'lik bir hacimde 4 °C'de gece boyunca inkübe edildi: anti-HIF-1α antikoru (1:1000), anti-GAPDH antikoru (1:1000), anti-IL-1R1 antikoru (1:1000), anti-C-JUN antikoru (1:1000), anti-GDNF antikoru (1:1000), anti-IRAK1 antikoru (1:1000), anti-IKK antikoru (1:1000), anti-p65 antikoru (1:800), anti-p50 antikoru (1:900), anti-IκB-α antikoru (1:900) ve anti-β-aktin antikoru (1:1000). Yıkamadan sonra, membranlar 25 ° C'de 60 dakika boyunca yaban turpu peroksidaz (HRP) konjuge ikincil antikorlarla incelendi. Protein sinyalleri, Image Studio Digits Ver 4.0 kullanılarak tespit edildi. Bant yoğunlukları ImageJ yazılımı ile ölçüldü ve β-aktin ve GAPDH ekspresyonuna normalleştirildi. Üç bağımsız deney yapıldı.

İmmünofloresan
SK'lerde IL-1R1 lokalizasyonu Zhao ve ark.19'u takiben değerlendirildi. Logaritmik büyüme fazı sırasında tripsinizasyon yoluyla hücreleri hasat edin, taze tam ortamda yeniden süspanse edin ve tek tip bir tek hücreli süspansiyon elde etmek için iyice öğütün. Hücreleri, steril lameller içeren kültür plakalarına tohumlayın. Hücreler tam birleşmeye ulaştığında, fosfat tamponlu salin (PBS) ile 1-2 kez durulayın, lameller dikkatlice çıkarın ve yapışık hücreleri PBS'de %4 paraformaldehit ile 10 dakika sabitleyin, %0.05 Triton X-100 (10 dakika) ile geçirgenleştirin ve %5 keçi serumu (1 saat) ile bloke edin. Birincil inkübasyonda tavşan anti-sıçan IL-1R1 mAb kullanıldı. PBS yıkamalarından sonra numuneler, oda sıcaklığında 2 saat boyunca FITC konjuge keçi anti-tavşan IgG ile inkübe edildi. Montaj için lamel üzerine suda çözünür montaj maddeleri ekleyin. İmmün etiketli hücreler, uyarma dalga boyu 492 nm ve emisyon dalga boyu 520 nm olan bir floresan mikroskobu kullanılarak görselleştirildi ve ölçüldü.

Üst yapı analizi
Zhao ve arkadaşlarının protokol19'unu takiben, SC'ler %2.5 glutaraldehit içinde sabitlendi ve gece boyunca 4°C'de %1 osmiyum tetroksit içinde sabitlendi. Numuneler bir etanol/aseton dehidrasyon serisine tabi tutuldu. Ultra ince kesitler (80 nm), transmisyon elektron mikroskobu kullanılarak ultrastrüktürel incelemeden önce uranil asetat ve kurşun sitrat ile boyandı.

Tehlikeli kimyasal reaktiflerin imhası
CoCl2 içeren ortam ve çözeltiler, belirlenmiş bir ağır metal atık kabında toplanır. Pipet uçları, santrifüj tüpleri ve eldivenler de dahil olmak üzere yukarıda belirtilen sıvılarla temas eden tüm tek kullanımlık malzemeler, ağır metal tehlikeli atık olarak sınıflandırılır ve uygun şekilde bertaraf edilmek üzere ilgili makamlar tarafından onaylanmış lisanslı bir tehlikeli atık yönetim şirketine aktarılır. Atık paraformaldehit çözeltisini özel bir aldehit atık kabına atın. Kullanılmış sarf malzemeleri aldehit atığı olarak toplanmalı ve aynı lisanslı tehlikeli atık yönetim şirketi tarafından işlenmelidir.

İstatistiksel analiz
Çoklu grup karşılaştırmaları, GraphPad Prism 8.0'da Tukey'in post-hoc testi ile tek yönlü ANOVA ile analiz edildi. İstatistiksel anlamlılık P < 0.05 olarak tanımlandı. Veriler ortalama ±± standart sapma (SD) olarak sunulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mus'un Schwann hücrelerinin oksidatif stres hasarı üzerine in vitro koruyucu etkileri
HIF-1α'nın ekspresyonu, hipoksik koşullardaki değişikliklere yanıt olarak değişiklikler sergiledi20. Hipoksiyi modellemek için, SC'ler, western blotlama yoluyla kanonik bir hipoksi belirteci olan yüksek HIF-1α protein seviyeleri ile doğrulandığı gibi hipoksiye başarılı bir şekilde indüklenen CoCl2'ye maruz bırakıldı (Şekil 2A)....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bell paralizisi, tek taraflı fasiyal güçsüzlük ile karakterize idiyopatik periferik fasiyal sinir felcidir. Miyelin kılıfı, nöronların23 etkin işleyişinde çeşitli önemli işlevleri yerine getirir. Sinir uyarılarının düzgün iletilmesini sağlar, besleyici faktörler sağlayarak nöronları destekler ve rejenerasyon sürecine yardımcı olur24 . Bu nedenle, periferik sinir sistemindeki miyelin kaybı, Kas atrofisi, parestezi, uyuşukluk ve felce neden o...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, herhangi bir çıkar çatışmasına sahip olmadıklarını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yazarlar, Baoshan Bölge Sağlık Komisyonu Yetenekleri (Mükemmel Akademik Liderler) Programı (BSWSYX-2024-02), Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Harcama Bütçesi Programı (2021LK003), Baoshan Bölge Sağlık Komisyonu Mükemmel Gençlik (Yucai) Programı (BSWSYC-2024-02) ve Keynote Tıp Disiplinleri ve Karakteristik Markalarda B Sınıfı Yetiştirme Projesi, Baoshan Bölgesi Sağlık Komisyonu, Şanghay (BSZK-2023-BP07). Bu fon sağlayan kuruluşların, çalışmanın tasarımında veya makalenin yayına sunulması kararında herhangi bir rolü yoktu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%0,25 tripsin sindirim solüsyonu (EDTA'sız)Hizmet biyografisiG4002 Serisi
10x TBSEubiotechBF0153 Serisi
10-180 KDPrestained Renkli Protein MarkörüEubiotechP0069
%5 yağsız kuru sütBeyotime Biyoteknoloji, ÇinP0216-300g
anti-C-JUN antikoruHücre Sinyali, ABD#9165T
anti-GAPDH antikoruabcam, Birleşik KrallıkAB245355
anti-GDNF antikoruHücre Sinyali, ABD#47808
anti-HIF-1&alfa; antikorHücre Sinyali, ABD#14179
anti-IKK antikoruHücre Sinyali, ABD#2682
anti-IL-1R1 antikoruHücre Sinyali, ABD#6775WB için
anti-IL-1R1 antikoruprotein teknolojisi84094-6-RRimmünofloresan için
anti-IRAK1 antikoruHücre Sinyali, ABD#4395
anti-Iκ B-α antikorHücre Sinyali, ABD#8943
Anti-P50 antikoruabcam, Birleşik KrallıkAB305263
Anti-p65 antikor abcam, Birleşik KrallıkAB16502
anti-rat IL-1R1 mAb Beyotime Biyoteknoloji, ÇinAF7212
Anti-β-aktin antikoruABCAMAB179467
BCA Protein Miktar Belirleme KitiEubiotechWB2123 (İngilizce)
Hücre sayım kiti-8 (CCK-8) tahlil reaktifiBeyotime Biyoteknoloji, ÇinC0048M
Kobalt klorür (CoCl2)Macklin, ÇinC804815
EuECL YıldızıEubiotechWB2131 (İngilizce)
Fetal sığır serumu (FBS)Bergolin, ÇinPWL001 Serisi
Fitc etiketli keçi anti-tavşan IgGHizmet biyografisiGB22303
Floresan mikroskop Nikon 
Hieff Trans in vitro siRNA/miRNA transfeksiyon reaktifiYEASEN, Çin40806ES01
Yaban turpu peroksidaz (HRP) konjuge ikincil antikorlar
Hrp etiketli keçi anti-fare IgG		Servicebio, ÇinGB23301
IL-1β, TNF-α, ROS ve SOD ELISA KitiBOSTER, ÇinBES1762K, BES0481K, BES5018K, BES2920K
Misk Mantarı (Mus)Aladdin, ÇinM141496
PBS arabelleğiHizmet biyografisiG4202 Serisi
Penisilin-Streptomisin Solüsyonu, 100xProcellPB180120
Poliviniliden florür (PVDF) membranlarMillipore, Amerika Birleşik DevletleriIPFL00010
Sıçan Schwann hücreleri (SC'ler)Procell Yaşam Bilimleri ve Teknoloji ÇinCM-M111 Serisi
RIPA Lizis TamponuEubiotechWB2116 (İngilizce)
Schwann Hücre OrtamıScienCell, Amerika Birleşik Devletleri1701
SDS-PAGE yükleme arabelleğiBeyotime Biyoteknoloji, ÇinP0015
SDS-PAGE Protein l Yükleme Tamponu, 5xEubiotechWB2122 (İngilizce)
si-IL-1R1Gen EvrenselRX0114371
Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jelelektroforezi (SDS-PAGE) Hazırlama kitiEubiotechWB2118 (İngilizce)
SYBR qPCR KarışımıBeyotime Biyoteknoloji, ÇinD7260 Serisi
Toplam Protein Ekstraksiyon KitiBeyotime Biyoteknoloji, ÇinPP123-01
Transmisyon elektron mikroskobuHitachi HT7800 
TrizolBeyotime Biyoteknoloji, ÇinR0011
Ara-20EubiotechWB2114 (İngilizce)
Suda çözünür montaj maddeleriAbsin, ÇinABS9240 Serisi
Batı Transfer TamponuEubiotechWB2129 (İngilizce)

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhai, X., et al. Muscone ameliorates ovariectomy-induced bone loss and receptor activator of nuclear factor-κb ligand-induced osteoclastogenesis by suppressing TNF receptor-associated factor 6-mediated signaling pathways. Front. Pharmacol. 11, 348(2020).
  2. Lv, S., et al. Chemical compositions and pharmacological activities of natural musk (Moschus) and artificial musk: A review. J Ethnopharmacol. 284, 114799(2022).
  3. Dong, X., et al. Xingnaojing injection alleviates cerebral ischemia/reperfusion injury through regulating endoplasmic reticulum stress in vivo and in vitro. Heliyon. 10 (3), e25267(2024).
  4. Lu, L., et al. The atheroprotective roles of heart-protecting musk pills against atherosclerosis development in apolipoprotein E-deficient mice. Ann Transl Med. 7 (23), 714(2019).
  5. Zhuang, Q., et al. Pien Tze Huang inhibits tumor cell proliferation and promotes apoptosis via suppressing the STAT3 pathway in a colorectal cancer mouse model. Int J Oncol. 40 (5), 1569-1574 (2012).
  6. Yang, H. X., et al. Babaodan capsules for viral hepatitis: Systematic review of clinical efficacy and safety and Meta-analysis of randomized clinical trials. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 44 (22), 4953-4961 (2019).
  7. Li, J., et al. Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, Containing Moschus, Corydalis and Ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis. Am J Chin Med. 48 (1), 107-126 (2020).
  8. Li, Y. C., et al. Muscone and (+)-borneol cooperatively strengthen CREB induction of claudin 5 in IL-1β-induced endothelium injury. Antioxidants (Basel). 11 (8), 1455(2022).
  9. Yu, S., et al. Muscone relieves inflammatory pain by inhibiting microglial activation-mediated inflammatory response via abrogation of the NOX4/JAK2-STAT3 pathway and NLRP3 inflammasome. Int Immunopharmacol. 82, 106355(2020).
  10. Du, Y., et al. Hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF-1alpha)/vascular endothelial growth factor (VEGF) pathway participates in angiogenesis of myocardial infarction in muscone-treated mice: Preliminary study. Med Sci Monit. 24, 8870-8877 (2018).
  11. Dong, J., Li, H., Bai, Y., Wu, C. Muscone ameliorates diabetic peripheral neuropathy through activating AKT/mTOR signalling pathway. J Pharm Pharmacol. 71 (11), 1706-1713 (2019).
  12. Zhao, M. Acupoint application for facial neuritis: 32 cases. Sichuan Tradit Chinese Med. 2, 54(1996).
  13. Wang, L., Chen, X. Clinical observation and analysis of 96 cases of facial neuritis treated by integrated Chinese and Western medicine. J Mod Integr Chinese West Med. 4, 617-618 (1997).
  14. Meng, S., Hu, C., Zhang, H., Shang, C. Observation of curative effect of acupuncture with musk combined with physical factors on facial neuritis. New Chinese Med. 45, 134-136 (2013).
  15. Chen, N., Qin, Y. Effect of artificial musk acupoint application combined with acupuncture on peripheral facial paralysis. People's Mil Med. 60, 1197-1198 (2017).
  16. Qi, Q., Ni, S., Li, C., Wang, X. Literature analysis of acupoint application of Chinese medicine in treatment of peripheral facial palsy. J Extern Treat Chinese Med. 23, 59-60 (2014).
  17. Osuru, H. P., Lavallee, M., Thiele, R. H. Molecular and cellular response of the myocardium (H9C2 cells) towards hypoxia and HIF-1alpha inhibition. Front Cardiovasc Med. 9, 711421(2022).
  18. Lai, W., Yu, L. Insulin-like growth factor 1 ameliorates pre-eclampsia by inhibiting zinc finger E-box binding homeobox 1 by up-regulation of microRNA-183. J Cell Mol Med. 27 (9), 1179-1191 (2023).
  19. Zhao, L., Qu, W., Wu, Y., Ma, H., Jiang, H. Dorsal root ganglion-derived Schwann cells combined with poly(lactic-co-glycolic acid)/chitosan conduits for the repair of sciatic nerve defects in rats. Neural Regen Res. 9 (22), 1961-1967 (2014).
  20. Tong, Y., et al. Effect of a hypoxic microenvironment after radiofrequency ablation on residual hepatocellular cell migration and invasion. Cancer Sci. 108 (4), 753-762 (2017).
  21. Zeng, H. T., et al. Modulating oxidative stress in B cells promotes immunotherapy in food allergy. Oxid Med Cell Longev. 2022, 3605977(2022).
  22. Wang, D., et al. Circulating brain-derived neurotrophic factor, antioxidant enzymes activities, and mitochondrial DNA in bipolar disorder: An exploratory report. Front Psychiatry. 11, 514658(2020).
  23. Stadelmann, C., Timmler, S., Barrantes-Freer, A., Simons, M. Myelin in the central nervous system: Structure, function, and pathology. Physiol Rev. 99 (3), 1381-1431 (2019).
  24. Intisar, A., et al. An electroceutical approach enhances myelination via upregulation of lipid biosynthesis in the dorsal root ganglion. Biofabrication. 14 (1), ac457c(2022).
  25. Kamil, K., Yazid, M. D., Idrus, R. B. H., Das, S., Kumar, J. Peripheral demyelinating diseases: From biology to translational medicine. Front Neurol. 10, 87(2019).
  26. Ma, Y., et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles promote the proliferation of Schwann cells by regulating the PI3K/AKT signaling pathway via transferring miR-21. Stem Cells Int. 2021, 1496101(2021).
  27. Su, Y., et al. Aptamer engineering exosomes loaded on biomimetic periosteum to promote angiogenesis and bone regeneration by targeting injured nerves via JNK3 MAPK pathway. Mater Today Bio. 16, 100434(2022).
  28. Tian, T., et al. IL1alpha antagonizes IL1beta and promotes adaptive immune rejection of malignant tumors. Cancer Immunol Res. 8 (5), 660-671 (2020).
  29. Mosley, B., et al. The interleukin-1 receptor binds the human interleukin-1 alpha precursor but not the interleukin-1 beta precursor. J Biol Chem. 262 (7), 2941-2944 (1987).
  30. Krumm, B., Xiang, Y., Deng, J. Structural biology of the IL-1 superfamily: Key cytokines in the regulation of immune and inflammatory responses. Protein Sci. 23 (5), 526-538 (2014).
  31. De Benedetti, F., et al. Canakinumab for the treatment of autoinflammatory recurrent fever syndromes. N Engl J Med. 378 (20), 1908-1919 (2018).
  32. Liskiewicz, A., et al. Methamphetamine-associated cognitive decline is attenuated by neutralizing IL-1 signaling. Brain Behav Immun. 80, 247-254 (2019).
  33. Zhang, H., et al. Activated Schwann cells and increased inflammatory cytokines IL-1beta, IL-6, and TNF-alpha in patients' sural nerve are lack of tight relationship with specific sensory disturbances in Parkinson's disease. CNS Neurosci Ther. 26 (5), 518-526 (2020).
  34. Su, D., et al. Tumor-neuroglia interaction promotes pancreatic cancer metastasis. Theranostics. 10 (11), 5029-5047 (2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

NF KappaB YolaPeriferik Sinir YaralanmassiRNA TransfeksiyonuH cre Canl l AnaliziWestern Blottingmm nofloresan Boyama

İlgili makaleler