Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Langendorff Perfüzyonu ve Yerçekimi Sedimentasyonu ile Yetişkin Fare Kardiyomiyositlerinin İzolasyonu ve Arındırılması

284 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/69102

⸱

31 Mart 2026

 ,  , 
1Deqing People's Hospital, 2School of Medicine, Nanjing University of Chinese Medicine, 3Anesthesiology Department, Shanxi Provincial People's Hospital Affiliated Shanxi Medical University

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, yetişkin fare kardiyomiyositleri için ekstraksiyon prosedürünü optimize etmeyi ve kolaylaştırmayı amaçlamak, nihai hedefi kardiyovasküler hastalıklarda araştırma metodolojilerini geliştirmektir. Bu protokol, yüksek canlılık ve saflığa sahip kardiyomiyositleri kısaltılmış işlem süresi içinde etkili bir şekilde elde eder; böylece daha güvenilir deneyler yapılabilir ve terapötik ilerlemeleri hızlandırır.

Özet

Kardiyovasküler hastalıklar küresel sağlık sorunu olmaya devam etmekte ve güvenilir in vitro modellere kritik bir ihtiyaç yaratmaktadır. Bu çalışma, mevcut yöntemlerdeki düşük canlılık ve kardiyomiyosit olmayan kontaminasyonun sınırlamalarını ele almak için yetişkin fare kardiyomiyositlerinin izolasyonu ve kültürü için optimize edilmiş bir protokol sunmaktadır. Protokol, antikoagülasyon için heparin sodyum kullanan ve sindirim için yalnızca kollagenaz tip II (1,2 mg/mL) kullanılan retrograd Langendorff perfüzyona dayanmaktadır. Kardiyomiyositler, yerçekimi tortulmasıyla arındırıldı ve laminin kaplı yüzeylerde kültürlendi. Bu yöntem, kalp başına 8,75 ± 0,36 ×10,5 kardiyomiyosit, yüksek rod şeklindeki hücre oranı (%91,2 ± %2,11) ve yüksek saflık (cTNT⁺DAPI⁺ hücrelerine göre yüzdesi DAPI⁺ hücrelerine göre yaklaşık %97,47 ± %1,365) vermiştir; bu hücreler berrak sarkomik yapılar sergilemiştir. Yüksek kaliteli yetişkin kardiyomiyositleri elde etmek için standartlaştırılmış ve tekrarlanabilir bir yöntem sunarak, bu protokol in vitro çalışmalar ile patofizyolojik önem arasındaki boşluğu etkili bir şekilde kapatır ve böylece ileri kardiyovasküler araştırmaları destekler.

Giriş

Kardiyovasküler hastalıklar, dünya çapında ölümlerin başlıca nedeniolmaya devam ediyor 1. Kardiyomiyositler, kalp araştırmalarında merkezi bir odak olarak, uzun süredir kardiyak fizyoloji ve patolojinin araştırılmasında temel araçlarolarak hizmet etmiştir 2. Ticari olarak sunulan kardiyomiyosit hücre hatları ve yakın zamanda popüler hale getirilen insan pluripotent kök hücresinden türetilen kardiyomiyositler (hPSC-CM'ler) erişilebilirlik ve manipülasyon kolaylığı açısından daha büyük avantajlarsunarken, ex vivo izole edilen primer kardiyomiyositler, kardiyak fizyolojik ve patolojik mekanizmalarla üst yapısal ve fonksiyonel korelasyon göstermektedir. Bu nedenle, in vitro kardiyomiyosit izolasyonu tekniklerini ustalıkla öğrenmek son derece önemlidir.

Kardiyomiyositler, gelişim boyunca belirgin morfolojik ve fonksiyonel dönüşümler gösterir. Özellikle, bu hücreler embriyonik gelişim ve yenidoğan dönemi (doğumdan sonraki 7 gün içinde) proliferatif potansiyeli korur, ancak bu rejeneratif kapasite bundan sonra kalıcı olarakkaybolur 6. Doğum sonrası olgunlaşma sürecinde, kardiyomiyositler önemli morfolojik yeniden yapılanmaya geçer ve nihayetinde 2 aylıkken karakteristik yetişkin fenotiplerini kazanırlar - çubuk şeklindeki morfolojiye ve yüksek organize sarkomikyapıya sahiptir 7,8. Bu gelişim evresine bağlı özellikler, yetişkin fare kardiyomiyositlerinin kardiyak patofizyoloji mekanik çalışmalarında kullanılmasının kritik önemini vurgulamaktadır.

Bu alanın ilerlemesi için kritik önemde, özellikle insan kalp fizyolojisini doğru şekilde taklit eden yetişkin türeyli hücrelerin güvenilir şekilde alınmasıdır. Yetişkin fare kardiyomiyositleri için mevcut izolasyon protokolleri birkaç kalıcı zorlukla karşı karşıyadır: (i) hücresel canlılıktan zayıf, (ii) heterojen popülasyon özellikleri ve (iii) teknik olarak zorlu prosedürler - bunların hepsi birlikte araştırma ilerlemesiniengeller 9,10. Bu, hem verimin hem de saflığın artırılması için izolasyon metodolojilerinin optimize edilmesinin acil bir gerekliliğini vurguluyor ve böylece kardiyovasküler hastalıkların araştırılması için daha fizyolojik olarak ilgili hücresel platformlar sağlanıyor.

Perfüzyon parametreleri, enzimatik sindirim protokolleri ve reaktif formülasyonlarının sistematik optimizasyonu sayesinde, bu çalışma yetişkin fare kardiyomiyositlerinin izole edilmesi ve kültürlenmesi için geliştirilmiş bir metodoloji başarıyla kurmuştur. Optimize edilmiş protokol, iyi korunmuş morfolojik bütünlüğe sahip kardiomiyositler üretir; yüksek çubuk şeklindeki oranlar ve açıkça görünür sarkomik yapılarla karakterize edilir. Bu gelişmeler, kardiyomiyosit patofizyolojisinin derinlemesine incelenmesi için sağlam bir deneysel platform sağlar ve kardiyokardiyo-kardiyosit hücresel mekanizmalarına odaklanan kardiyovasküler hastalık araştırmalarını önemli ölçüde kolaylaştırmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri, Deqing Halk Hastanesi Etik Komitesi tarafından onaylanan Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) yönergelerine sıkı sıkıya uyarak gerçekleştirilmiştir. Çalışmada, GemPharmatech Co., Ltd.'den satın alınan 8-12 haftalık erkek C57BL/6 fareleri kullanıldı. Tüm hayvanlar, ulusal standartlara uygun çevresel parametrelere sahip SPF dereceli bariyer tesislerinde barındırıldı (oda sıcaklığı 22 ± 2 °C, bilgili nem 50 ± 10%, 12/12-saat ışık/karanlık döngü). Deneyler boyunca, bu çalışma "3R" ilkelerine (Yerini Alma, Azaltma, Geliştirme) titizlikle bağlı kalmış ve hayvan acısını en aza indirmek için anestezi ve analjezi gibi standart prosedürler uygulamıştır.

NOT: Kısaca, sağlam kalp fare torakal boşluğundan hızla çıkarılır ve Langendorff cihazı aracılığıyla kollagenaz tip II çözeltisi ile retrograd perfüzyona maruz bırakılır ve ekstrasellüler matriksi enzimatik olarak sindirilir. Tam doku sindiriminden sonra, yumuşamış miyokard dikkatlice tek hücreli bir süspansiyona ayrılır. Ortaya çıkan hücre süspansiyonu, sindirilmemiş doku parçalarını çıkarmak için sıralı olarak filtrelenir, ardından canlı kardiyomiyositleri zenginleştirmek için yerçekimi sedimentasyonu yapılır. Saflaştırılmış kardiyomiyositler daha sonra sonraki deneysel uygulamalar için kullanılabilir.

1. Langendorff perfüzyon cihazı hazırlığı

NOT: Langendorff sisteminin toplam boru hacmi 15,5 mL'dir. Perfüzyon akış hızı kardiyak perfüzyon için 3,5 mL/dakika ve sistem yıkama için 10-15 mL/d'dir.

  1. Langendorff perfüzyon sistemini %75 etanol 50 mL ile yuyun.
    NOT: Sterilliği sağlamak için aylık 1 M HCl ile cam boru temizliği yapın.
  2. Etanol kalıntılarını gidermek ve hava kabarcıklarını gidermek için 250 mL steril ddH2Oile durulayın.
  3. Su banyosu sıcaklığını 42 °C'ye ayarlayın. Pompayı açarak dolaşımlı ısıtmayı başlatın ve Serpentine borusunun dış boşluğunu sıcak suyla doldurun.
    NOT: Bu, perfüzyonun kalbe 37 °C'de ulaşmasını sağlar.

2. Tampon hazırlığı

  1. Tablo 1'de listelenen formülasyonlara göre Krebs-Bikarbonat çözelti tamponu (KB), perfüzyon tamponu (PB), sindirim tamponu (DB), miyosit kaplama ortamı (MPM) ve miyosit kültür ortamı (MCM) hazırlanır.
    NOT: Kullanım gününde taze hazırlanın.
  2. Buz üzerinde 10 mL KB tampon önceden soğutma.
  3. Lümeni PB ile doldur. Akış hızını 3,5 mL/da'ya ayarlayın ve atık su sıcaklığını ölçün (37 °C optimaldir).
  4. 7 mL DB'yi boru hattına boşaltın ve ardından perfüzyon hattını kapatın.
  5. Heparin sodyum çözeltisi (%0,5, 62,5 KU) hazırlayın ve 300 μL insülin şırıngasına yükleyin.
  6. 10 mL PB ve 10 mL KB iki ayrı Petri kabına koyup buzun üzerinde önceden soğutulun.
  7. 100 μm hücre süzgecini 50 mL'lik santrifüj tüpünün kapağına yerleştirin, 1 mL KB ile önceden ıslatın ve 50 mL santrifüj tüpüne sabitleyin.

3. Kardiyak ekstraksiyon ve kanülasyon

NOT: Bu protokolde, dış kontaminasyonu en aza indirmek için işlem boyunca steril eldivenler, aletler, gazlı bez ve pamuklu çubuklar kullanıldı. Tam aseptik teknik birincil hücre kültürü için gerekli olsa da, burada hücre izolasyonu için sterilliği korumak yerine sonraki histolojik ve moleküler analizler için hayvan refahı ve doku bütünlüğünü desteklemek amacıyla hizmet etmiştir.

  1. Faruse, 80 mg/kg pentobarbital sodyum (farmasötik kalitede) intraperitoneal enjeksiyon ile 5 IU/g vücut ağırlığında heparin sodyumla anestezi yapın. Derin anestezi sağlanana kadar yakından takip edin. Anestezinin başarısını doğrulamak için farenin parmaklarını sıkmak ve parmak sıkma refleksinin kaybolmasını gözlemleyin.
  2. Göğüs tüylerini depilatif krem ile çıkarın.
  3. Fareyi bir köpük tahtaya sabitleyin ve göğüs derisini %75 alkolle dezenfekte edin.
  4. Toraks derisini forsepsle kaldırın ve xiphoid sürecinde bir kesi yapın.
  5. Xiphoid'u yükseltin ve kaburgaları iki taraflı olarak aksiller bölgelere doğru kesin, ardından diyaframı tamamen kesin.
    NOT: Kalbe zarar vermekten kaçının.
  6. Kalbi tamamen açığa çıkarmak için hemostatik penslerle göğüs göğüsünü ve kaburgaları hareketsiz hale getirin.
  7. Kanı emin ve karaciğeri doku ile nazikçe arka uzuvlara doğru kaydırın. Pamuk çubuklarını dikkatlice kullanarak kalbi manipüle ederek alt vena cava'yı ortaya çıkarın.
  8. Hazırlanmış insülin şırıngası ile inferior vena kavaya 300 μL heparin sodyum çözeltisi (2.5. adımdan itibaren) enjekte edin.
    NOT: Hava kabarcıklarının girmesini önlemeye özen gösterin.
  9. Timik dokuyu kesin, ardından çevresindeki damarları ve arterleri kesin. Kalbi hemen önceden soğutulan PB tamponuna (2.6. adımdan itibaren) aktarın.
    NOT: Timus çıkarılması aort görüşünü artırır. Eksizyon sırasında bir aort segmentini koruyun. Miyokard kasılması, önceden soğuttulan PB çözeltisi ile yavaşlatıldı. Anestezi altında kardiyak eksizyon insancıl ötenazi sağlar.
  10. Mikroforseps kullanarak aortu yakalayın ve Langendorff perfüzyon sisteminin kanülüne monte edin. 5-0 ipek dikişle sabitlen.
    NOT: Bu adımı hızlıca yapın. Kalp atma sırasında perfüzyon sisteminin kapalı olduğundan emin olun.

4. Kardiyak perfüzyon

  1. Perfüzyon sistemini aç ve 2 dakika 30 saniye süreyle zamanlamayı başlat. Bu dönemde, atık su, PB tamponundan oluşur ve toplanmasına gerek kalmaz.
  2. 2 dakika 30 saniye aralığını tamamladıktan sonra, DB tamponunu toplamaya ve yeniden dolaştırmaya başlayın ve 15 dakika için zamanlayın.
    NOT: Miyokard durumunu izleyin - optimal sindirim, doku elastikiyetinin azalması ve saydamlığın artmasıyla gösterilir. Sindirim eksik görünürse, süre orta derecede uzatılabilir, ancak kardiyomiyosit hasarını önlemek için toplamda 20 dakikayı geçmemelidir.
  3. Zamanlanmış süreden sonra DB'den PB tamponuna geçin ve perfüzyona ek 4 dakika 30 saniye devam edin. Bu aşamadaki atık su, DB tamponu içerir; Topla.
  4. Perfüzyonu son zamanlama aralığından sonra sistemi kapatarak sonlandırın.

5. Hücre ayrışması ve arındırılması

  1. Kalbi kanülden çıkar ve önceden soğutulmuş KB tamponuna (adım 2.6'da hazırlanmış) aktar.
    NOT: Enzimatik sindirim, kalbin KB tamponuna hemen aktarılmasıyla sona erdi. Bu, kalıntı enzimi hızla seyreltir, aşırı sindirimi önler ve yüksek hücre canlılığını sağlar.
  2. İnce makas kullanarak, atriyal ve aort dokularını dikkatlice kesin, sadece miyokard korun.
  3. Miyokard dokusunu mikroforseps kullanarak mekanik olarak küçük parçalara (<1 mm3) ayırın.
  4. Doku parçalarını 2 mL'lik damlacı kullanarak nazikçe üfleyerek tek hücreli bir süspansiyon elde edin.
    NOT: Üfleme sırasında çubuk şeklindeki kardiyomiyosit morfolojisini korumak için son derece dikkatli olun. Standart pipet uçlarından kaçının, çünkü dar delikleri hücresel bütünlüğü mekanik olarak bozabilir.
  5. Ortaya çıkan hücre süspansiyonu, önceden ıslanmış 100 μm hücre süzgecinden (2.7. adımda monte edilmiş) 50 mL'lik bir tüpten filtreleyin.
  6. Filtrelenmiş süspansiyonu 15 mL'lik bir tüpe aktarın ve kardiyomiyositlerin yerçekimi tortulmasıyla (15 dakika, 4 °C) yerleşmesine izin verin.
    NOT: 15 mL tüplerin azalmış bazal yüzey alanı, 50 mL tüplere kıyasla hücre iyileşme verimliliğini önemli ölçüde artırır.
  7. Süpernatantı dikkatlice aspire edin, peletlenmiş kardiyomiyositleri 2 mL transfer pipeti kullanarak 10 mL buz gibi soğuk KB tamponunda yeniden askıya alın ve 15 dakika, 4 °C sıcaklığında sedimentasyonu tekrarlayın.
  8. 5.4-5.7 numaralı adımları tekrarlayarak uygulamalara uygun, sağlam ve çubuk şeklinde kardiyomiyositlerden oluşan saf bir preparat elde edin.

6. Hücre kültürü

  1. Kültür tabaklarını 10 μg/mL laminin ile kaplayın ve 37 °C'de 2 saat kuluçka yapın.
    NOT: Çubuk şeklindeki kardiyomiyositlere mekanik hasarı en aza indirmek ve diferansiyel kaplamayla ilişkili uzun işlem süresini azaltmak için, bu çalışmada diferansiyel kaplama yerine laminin kaplama kullanılmıştır; bu strateji sadece hücresel bağlanma verimliliğini artırmakla kalmaz, aynı zamanda kardiyomiyositlerin doğal fizyolojik özelliklerini de korur.
  2. 4 mL önceden ısıtılmış (37 °C) MPM'de kardiyomiyositleri yeniden süspansiyona alın. Laminin çözeltisi çıkarıldıktan sonra, kardiyomiyositleri kaplı tabaklara tohumlayın. 37 °C'de %2CO2 ile 1 saat kuluçka yapın. Hücre morfolojisini, boyutunu ve yoğunluğunu mikroskop altında gözlemleyin.
  3. İnkubasyondan sonra, MPM'yi dikkatlice dekantasyon yapın ve önceden ısıtılmış (37 °C) MCM ile değiştirin. Kuluçkasyonu 37 °C'de %2CO2 ile 24 saat sürdürün.
  4. 24 saat sonra, kardiyomiyositleri yapısal bütünlük ve morfoloji açısından inceleyin.
    NOT: İşlem boyunca sıkı aseptik tekniği koruyun.
    DIKKAT: Kollagenaz tip II solunum yolu alerjileri, cilt ve göz tahrişine neden olabilir. İyi havalandırılan bir alanda çalıştığınıza ve toz solumaktan veya cilt ile mukoza zarlarıyla temas etmekten kaçındığınızdan emin olun. Tüm atılmış fare kalp dokuları, kan örnekleri ve onlarla temas eden tek kullanımlık malzemeler, biyotehlike sembolü işaretli özel ve sızdırmaz kaplarda biyolojik tehlike atıkları olarak toplanmalıdır. Bu malzemeler daha sonra merkezi dekontaminasyon ve bertaraf prosedürlerine tabi tutulur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Yetişkin fare kardiyomiyositlerinin izolasyon ve kültür prosedürü, gerekli enstrümantasyon ve tüp düzeni Şekil 1'de gösterilerek protokolde gösterilmiştir. Morfolojik değerlendirme, taze izole edilmiş kardiyomiyositlerin yanı sıra 1 saat ve 24 saat kültürlenenlerin hepsinin karakteristik çubuk şeklinde veya fusiform morfolojiye sahip olduğunu ve açıkça görülebilir çizgilere sahip olduğunu ortaya koydu (Şekil 2A-C).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışma, yetişkin fare kardiyomiyosit izolasyonu ve kültürü için optimize edilmiş bir protokol oluşturarak kardiyovasküler araştırmalarda önemli bir metodolojik atılım sunmaktadır. Tampon bileşiminin ve enzimatik sindirim parametrelerinin sistematik olarak iyileştirilmesi sayesinde, bu yaklaşım kültür sisteminin güvenilirliğini belirgin şekilde artırırken, hem kardiyoyositlerin saflığını hem de canlılığını artırır. Bu teknik gelişmeler, birincil yetişkin kardiyomiyositler kullanılarak...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklamak zorunda kalacak bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82400312) tarafından sağlanan mali desteği minnettarlıkla takdir ediyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
BDMAladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinD111028
BSAAladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinB265994
C57BL/6 fare GemPharmatech Co., Ltd8– 12 haftalık erkek 
CaCl2Aladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinC431202
Kollagenaz tip IIWorthington Biyokimyasal Şirketi (ABD)LS004176LOT#:43D23502    Enzim aktivite birimleri: 270u/mg dw
FBSBeyotime Biotechnology, ÇinC0226
GlikozAladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinD639737
HEPESSigma-AldrichH7006
KClAladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinP112134
KH2PO4Aladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinP104075
L-glutaminThermo Fisher Scientific25030081
MEMThermo Fisher Scientific11095080
MgSO4Aladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinM116444
Na2HPO4Aladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinS274390
NaClAladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinC111547
NaH2PO4Aladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinS108339
NaHCO3Aladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinS112338
Penisillin-streptomisin (100x)Beyotime Biotechnology, ÇinC0222
Primovert Ters Hücre Kültürü Mikroskobu Carl Zeiss
TaurineAladdin Bilimsel Şirketi, Şanghay, ÇinT103829

Kaynaklar

  1. Crea, F. The burden of cardiovascular risk factors: a global perspective. Eur Heart J. 43 (30), 2817-2820 (2022).
  2. Ackers-Johnson, M., et al. A simplified, Langendorff-free method for concomitant isolation of viable cardiac myocytes and nonmyocytes from the adult mouse heart. Circ Res. 119 (8), 909-920 (2016).
  3. Claycomb, W. C., Palazzo, M. C. Culture of the terminally differentiated adult cardiac muscle cell: a light and scanning electron microscope study. Dev Biol. 80 (2), 466-482 (1980).
  4. Karakikes, I., Ameen, M., Termglinchan, V., Wu, J. C. Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: insights into molecular, cellular, and functional phenotypes. Circ Res. 117 (1), 80-88 (2015).
  5. Protze, S. I., Lee, J. H., Keller, G. M. Human pluripotent stem cell-derived cardiovascular cells: From developmental biology to therapeutic applications. Cell Stem Cell. 25 (3), 311-327 (2019).
  6. Porrello, E. R., et al. Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart. Science. 331 (6020), 1078-1080 (2011).
  7. Mohamed, T. M. A., et al. Regulation of cell cycle to stimulate adult cardiomyocyte proliferation and cardiac regeneration. Cell. 173 (1), 104-116.e12 (2018).
  8. Wang, W. E., et al. Dedifferentiation, proliferation, and redifferentiation of adult mammalian cardiomyocytes after ischemic injury. Circulation. 136 (9), 834-848 (2017).
  9. Pinz, I., Zhu, M., Mende, U., Ingwall, J. S. An improved isolation procedure for adult mouse cardiomyocytes. Cell Biochem Biophys. 61 (1), 93-101 (2011).
  10. Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. Isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy. J Vis Exp. (87), e51357(2014).
  11. Alam, P., Maliken, B. D., Ivey, M. J., Jones, S. M., Kanisicak, O. Isolation, transfection, and long-term culture of adult mouse and rat cardiomyocytes. J Vis Exp. (164), e61073(2020).
  12. Kruppenbacher, J. P., May, T., Eggers, H. J., Piper, H. M. Cardiomyocytes of adult mice in long-term culture. Naturwissenschaften. 80 (3), 132-134 (1993).
  13. Dambrot, C., et al. Serum supplemented culture medium masks hypertrophic phenotypes in human pluripotent stem cell derived cardiomyocytes. J Cell Mol Med. 18 (8), 1509-1518 (2014).
  14. Karliner, J. S., Simpson, P. C., Taylor, J. E., Honbo, N., Woloszyn, W. Adrenergic receptor characteristics of cardiac myocytes cultured in serum-free medium: comparison with serum-supplemented medium. Biochem Biophys Res Commun. 128 (1), 376-382 (1985).
  15. Zheng, X., et al. Proteomic analysis for the assessment of different lots of fetal bovine serum as a raw material for cell culture. Part IV. Application of proteomics to the manufacture of biological drugs. Biotechnol Prog. 22 (5), 1294-1300 (2006).
  16. O'Connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpson, P. C. Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes. Methods Mol Biol. 357, 271-296 (2007).
  17. Gong, Y., et al. Mitochondrial tumor suppressor 1A attenuates myocardial infarction injury by maintaining the coupling between mitochondria and endoplasmic reticulum. Circulation. 152 (3), 183-201 (2025).
  18. Xiao, C., et al. FMO2 prevents pathological cardiac hypertrophy by maintaining the ER-mitochondria association through interaction with IP3R2-Grp75-VDAC1. Circulation. 151 (23), 1667-1685 (2025).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Kardiyomiyosit İzolasyonuYetişkin Fare KalbiKardiyomiyosit PurifikasyonuKollajenaz SindirimiLaminin KaplamaHücre CanlılığıSarkomerik YapıKardiyovasküler Araştırmalar
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.