Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Hayvan Dokusunda Glikojen Sentaz Enzim Aktivitesinin Radyokimyasal Değerlendirilmesi

435 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/69103

⸱

24 Ekim 2025

 , 
1Indiana University School of Medicine-Muncie and Ball State University

Bu makalede

Özet

Hayvan dokusu tahlili, radyo etiketli glikozun glikojene dahil edilmesini ölçerek glikojen sentazın enzimatik aktivitesini belirlemek için nükleer sintilasyon tespitini kullanır.

Özet

Glikojen, birçok ökaryotik hücre için önemli bir metabolittir, enerji depolama ve hızlı enerji salınımının ayrılmaz bir parçasıdır. Molekülün yapısı, birincil işlevi büyüyen bir glikojen polimerinde glikoz birimlerinin sıralı bağlanmasını kolaylaştırma olan yüksek düzeyde düzenlenmiş bir enzim olan glikojen sentaza bağlıdır. Bu enzim, glikoz-6-fosfat tarafından allosterik olarak aktive edilir ve fosforilasyon ile birçok bölgede inhibe edilir. Glikojen sentaz enzimatik aktivitesi bilgisi, glikojen metabolizmasını, kas enerji seviyelerini ve diyabet ve glikojen depo hastalıkları gibi metabolik bozuklukları anlamanın önemli bir bileşenidir. Burada açıklanan, radyo etiketli [14C]-UDP-glikozdan glikojen moleküllerine entegre glikoz miktarını ölçerek hayvan kas dokusundaki glikojen sentazın aktivitesini belirlemenin oldukça hassas ve etkili bir yöntemidir. Bu prosedür radyoaktif 14C kullanır ve kullanım ve bertaraf için uygun izin ve laboratuvar alanı gerektirecektir. Bu prosedür ayrıca bir sıvı sintilasyon sayacına erişim gerektirecektir.

Giriş

Glikoz birimlerinden oluşan oldukça dallı bir polisakkarit olan glikojen, kaslar, karaciğer ve beyin dahil olmak üzere çeşitli dokularda önemli bir enerji rezervi görevi görür1. Sentezi ve bozunması, özel enzimler ve düzenleyici proteinlerden oluşan karmaşık bir sistem tarafından düzenlenir. Biyosentezi için hayati önem taşıyan, iki izoformu (GYS1 ve GYS2) olan glikojen sentaz (GYS) enzimidir. GYS1, karaciğer dışı hücrelerde glikozdan glikojen oluşumundan doğrudan sorumlu düzenleyici bir enzimdir, GYS2 ise karaciğerde işlev görür. Glikojenez olarak bilinen bu süreç, büyüyen bir glikojen zincirine tek bir glikoz biriminin sırayla eklenmesidir. GYS, bir alfa-1,4-glikosidik bağlantı2 oluşturarak, ara üridin difosfat glikozdan (UDP-glikoz) bir glikojen zincirinin sonuna glikoz transferini katalize eder. Glikojen dallanma enzimi ile koordineli olarak bu reaksiyon, glikojen moleküllerini genişleterek hem verimli enerji depolama hem de salınım sağlar.

Enzimin aktivitesini ölçmek için tahlil teknikleri mevcuttur ve spektrofotometrik çeşitlilik 3,4'ten oluşan daha yaygın yöntem gruplarından biri vardır. Bu tahliller tipik olarak dolaylı bağlı reaksiyonlardan oluşan bir sisteme dayanır ve aşağı akış ürünü olan NADH'nin absorbansını 340 nm'de ölçer. Glikojen sentaz tarafından UDP-glikozdan serbest bırakılan her UDP birimi için bir birim NADH tüketilir ve glikojen sentaz aktivitesi 5,6 ile doğrudan ilişkili olan ölçülebilir bir uyarım üretilir. Spektrofotometri tahlilleri nispeten ucuz ve erişilebilir olsa da, dolaylı bir reaksiyona güvenmenin küçük dezavantajı ve numune bulanıklığı ve daha düşük hassasiyetten kaynaklanan parazitin büyük dezavantajları ile birlikte gelirler, özellikle daha küçük numuneler veya az/yüksek fosforile glikojen sentaz içeren numuneler için bir sorun. Yukarıda açıklanan birleştirilmiş reaksiyonları kullanan florometrik tahliller, insan 7 ve fare8'den alınan kas dokusundaki duyarlılığı artırmak için geliştirilmiştir. Glikojen sentazın miktarını belirlemek için immünoblotlama9 ve immünohistokimya10 gibi başka teknikler de mevcuttur; Bununla birlikte, bu teknikler yalnızca enzimin fiziksel miktarını ölçebilir ve en iyi ihtimalle fosforilasyondan aktivite çıkarabilir, ancak enzim aktivitesini11 doğrudan ölçemez.

Bu enzim tahlil teknikleri arasında, radyokimyasal yöntemler, numune bulanıklığı ile etkileşime girmemeleri ve yüksek hassasiyetleri nedeniyle memeli dokusunda glikojen sentaz aktivitesini belirlemek için en yaygın kullanılanlar olmaya devam etmektedir 8,9. Bu tahliller, 14C12 veya 3H13 ile etiketlenmiş UDP-glikozdan radyoaktif etiketli glikozu glikojene dahil ederek, belirli bir süre boyunca enzim aktivitesinin doğrudan ölçülmesine izin verir. Aşağıdaki prosedürde, glikojen sentaz içeren bir doku örneği, UDP-glikoz ve glikojen primerine maruz bırakılır. Glikojen sentaz, aşağıdaki denklemde gösterilen reaksiyonu katalize eder:

UDP-[14C]glukoz + (glikojen)n → (glikojen)n+1[14C] + UDP

Belirli bir süre sonra, reaksiyon sonlandırılır ve radyoaktif işaretli glikoz içeren glikojen ya filtre kağıdı12 üzerine çökeltilir (aşağıda açıklandığı gibi) ya da Niederwanger ve ark.14 tarafından tarif edildiği gibi jel filtrasyonuna tabi tutulur ve bir sintilasyon detektörü kullanılarak ölçülür. Bu yöntem ayrıca, glikojen sentazın allosterik bir aktivatörü olan glikoz-6-fosfatı (G6P) içeren ayrı bir özdeş reaksiyonu da içerir. Yeterli G6P seviyelerine sahip koşullar altında, glikojen sentaz aktivitesi maksimum düzeyde aktive edilir ve belirli bir numunenin glikojen sentaz aktivitesi için mutlak potansiyeli gösterir. Burada açıklanan yöntem, Suzuki ve meslektaşları15'ten 96 oyuklu bir formata değiştirildi ve fare kas dokusunda kullanım için optimize edildi; ancak protokol diğer dokular ve hayvan türleri için değiştirilebilir.

Radyoaktif malzemelerle ilgili doğal maliyet ve güvenlik hususlarına rağmen, radyokimyasal analizler, cihazların mevcut olması koşuluyla, radyoaktif olmayan alternatiflere göre önemli avantajlar sunar. Aşağıdaki prosedür, glikojen metabolizmasında anahtar bir enzim olan glikojen sentazın hayvan kas dokusundaki aktivitesini belirlemenin oldukça hassas ve sağlam bir yolunu detaylandırmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm prosedürler Ball State Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. B6'nın erkek ve kadın kohortları; 129-Gaatm1Rabn/J 3 aylık vahşi tip fareler bu yazıda temsili bir örnek olarak kullanılmıştır. Kullanılan reaktifler ve ekipman Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Test öncesi hazırlık

  1. Servikal çıkık16 ile dokuyu toplayın ve glikojen depolarını korumak için hemen sıvı N2 içinde dondurun ve testin başlangıcına kadar sıvı N2 veya ultra düşük dondurucuda saklayın.
  2. Glikojen sentaz testinin başlamasından önce stok çözeltilerini hazırlayın (Tablo 1).
  3. Test için istenen çoğaltılmış fare örneklerinin ve kontrollerinin sayısını belirleyin. Her fare numunesi, her reaksiyon için iki tane olmak üzere toplam dört kopya gerektirir (G6P'nin varlığı veya yokluğu) (bkz. Şekil 1 ve Tablo 2).
  4. Kromatografi kağıdını 4 cm'lik şeritler halinde kesin. Glikojen bu kağıda yapışır ve yıkama işlemi sırasında bağlı kalır. Bir kağıt öğütücünün genişliğini (6 mm) kullanarak, kromatografi kağıdını ince ayrı parçalara ayırın.
  5. Bir kalem kullanarak, belirlenen kağıt şeritleri fare tanımlaması, boşluklar ve toplamlarla etiketleyin. Mürekkep kullanmaktan kaçının.
  6. Kromatografi kağıtlarını ahşap blok şablonuna yükleyin. Her şablon, 96 oyuklu bir plakanın bir sırasına karşılık gelen en fazla 12 kağıt tutar.
  7. Kromatografi kağıt kelepçeleri (pano üstleri) edinin.
  8. Kromatografi kağıtlarının kenarlarını sıkıştırarak, kağıtların yüzey alanının çoğunu açıkta bırakarak her reaksiyon sırası için bir kelepçe hazırlayın. Etiketli kenarların görünür olduğundan emin olun.
  9. 1,7 mL mikrofüj tüplerini numune tanımlamasıyla etiketleyin. Numune başına iki tüp; biri homojenat ve diğeri süpernatant için.
  10. Teste başlamadan önce hem + hem de - G6P reaksiyon karışımlarını hazırlayın, daha fazla bilgi için Tablo 3'e bakın. Her reaksiyon karışımından 2.400 μL alikot hazırlayın.

2. Radyokimyasal glikojen sentaz aktivite reaksiyonu

DİKKAT: Bu adım, radyoaktif bir malzeme olan [14C]-UDP-glikozun kullanımını içerir. Nükleer Düzenleme Komisyonu (NRC) tarafından onaylanan bir şekilde taşıyın, saklayın ve imha edin.

  1. 0.0012 μCi/ μL'lik bir nihai konsantrasyon için her iki (+/- G6P) reaksiyon karışımının 2.400 μL alikotlarına 30 μL [14C]-UDP-glikoz (0.1 μCi/ μL) ekleyin. Bu tarif 18 numune için uygundur.
    NOT: [14C]-UDP-glikoz hacmi, kullanımı korumak ve yeterli hassasiyeti sağlamak için değiştirilebilir. Örneğin, fare beyin dokusu için 50 μL ve fare kalbi için 25 μL kullanın.
  2. Girdap reaksiyon karışımları ve numuneleri, boşlukları ve toplamları tutacak 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 50 μL alikot (Tablo 2). Daha sonra plaka film ile kaplayın ve 4 C'ye yerleştirin.
  3. Proteaz inhibitörlerini oda sıcaklığında çözülmesi için ayarlayın. Bu inhibitörler ek bilgilerle birlikte Tablo 4'te listelenmiştir.
  4. 30-50 mg donmuş dokuyu kütleye dökün. ~30 mg iskelet kası ve kalp örnekleri için idealdir; Beyin için ~50 mg. Doku ve mikrofüj tüplerini sıvı N2'de tutun ve dokunun donmuş kalmasını sağlamak için dokuyu hızla tartın. Dokuyu daha fazla öğütmek için soğutulmuş bir havaneli kullanın.
  5. Buz üzerinde proteaz inhibitörleri ile homojenizasyon tamponu hazırlayın.
  6. Her seferinde bir numune, dokulu tüpü sıvı N2'den buza soğuk bir kapakla 1 dakika boyunca hareket ettirin. Hala sıvı N2'deyken numune tüpüne soğuk bir kapak (sıvı N2'de soğutulmuş üç küçük delikli tüp kapağı) ekleyin. Bu, tüpte kalan sıvı N2 buharlaştığı için doku kaybını önler. Sıvı N2'den çıktıktan sonra numuneler buzda kalmalıdır.
  7. Buz üzerine geldikten sonra, numuneye hacimce (10-30 μL/mg doku) homojenizasyon tamponu ekleyin ve numuneyi Tissue-Tearor ile homojenize edin. Bu iki adımı tamamladıktan sonra bir sonraki örneğe geçin.
    NOT: Numunelere eklenen tampon hacmi, doku kaynağına bağlı olarak optimize edilebilir. Örneğin: İskelet kası için 30 μL/mg, kalp için 15 μL/mg ve beyin için 10 μL/mg.
  8. Numuneleri 4 °C'de 3.600 g'da 5 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı temiz bir mikrofüj tüpüne aktarın. Pelete dokunmamaya dikkat edin. Vorteksleyin ve buz üzerinde v-tabanlı 96 oyuklu bir plakadaki karşılık gelen kuyucuklara ~150 μL ekleyin. Geri kalanını Bradford testi için süpernatant için saklayın (bkz. adım 2.15)
    NOT: İstenirse, immünoblotlama gibi daha sonraki testler için ek numune alikotları kaydedilebilir.
    DİKKAT: 2.9'dan 2.14'e kadar olan adımlar, 14C'nin kullanılmasını gerektirir. Kirlenmiş tüm malzemeleri NRC tarafından onaylanan bir şekilde bertaraf edin.
  9. Reaksiyon karışım plakasını 4 °C'den çıkarın ve film çıkarılmış halde termocycler üzerinde 30 °C'ye ısıtın. Bu süre zarfında 1 L -20 °C %66 etanol elde edin ve karıştırma plakası üzerinde bir karıştırma çubuğu ile bir yıkama kabına ekleyin.
  10. Reaksiyon kuyucuklarına 25 μL numune süpernatantı ve boş ve toplam kuyucuklara 25 μL homojenizasyon tamponu ekleyerek reaksiyonu başlatın. Reaksiyon plakasında bir seferde 1 sıraya eklemek için çok kanallı bir pipet kullanın ve sıralar arasında en az 1 dakika bekleyin. Her satır için reaksiyonun başlatıldığı zamanı kaydedin. Daha fazla bilgi için Tablo 2'ye bakın. Çok kanallı bir pipet kullanın ve eşit hacimde sıvı eklendiğinden emin olun.
  11. Reaksiyonun çalışması için 10-15 dakika bekleyin; Ancak, çalışma süresi satırlar arasında aynı olmalıdır.
  12. Çok kanallı bir pipet kullanarak her bir kuyucuktan 55 μL aspire edin ve önceden hazırlanmış ilgili kromatografi kağıtlarına dağıtın. Aspirasyondan önce yukarı ve aşağı pipetleyerek reaksiyonu karıştırın. Kromatografi kağıtlarının ortasındaki spot sıvı.
  13. Kuyudan sıvı gördükten sonra forseps kullanarak toplamları olan kağıtları kelepçeden çıkarın. Bunlar kuruması için alüminyum folyo üzerine güvenli bir şekilde yerleştirilebilir. Diğer tüm kromatografi kağıtlarını karıştıran %66 etanol banyosuna bırakın. Glikojen %66 etanolde çözünmezken, [14C]-UDP-glikoz çözünür ve kromatografi kağıtlarını yıkar.
  14. Reaksiyon plakasındaki her satır için 2.11 ve 2.12 adımlarını tekrarlayın. Reaksiyonun başlangıç ve bitiş zamanlarını kaydederek her satırın reaksiyon süresinin aynı olduğundan emin olun.
  15. Tüm sıralar karıştırılan %66 etanole eklendikten sonra 15 dakika yıkayın.
    NOT: Bu adım ve sonraki yıkama adımları sırasında, enzimatik aktivitenin hesaplanmasında gerekli olan normalizasyon için toplam protein hacminin belirlenmesinden sorumlu olan Bradford testi gibi tamamlayıcı testler için numune alikotları hazırlanabilir.
  16. Kromatografi kağıtlarını kaybetmeden %66 etanolü atın. 1 L yeni %66 etanol ile 30 dakika yıkayın. Bu %66 etanol oda sıcaklığında olabilir.
  17. Toplam üç adet 30 dakikalık %66 etanol yıkaması için önceki adımı tekrarlayın.
    NOT: İstenirse, son yıkama adımından elde edilen %66 etanol kaydedilebilir ve sonraki analizler için -20 °C'de saklanabilir.
  18. %66 etanol çıkarıldıktan sonra, tüm kromatografi kağıtlarını yıkama kabına asetona batırın. Aseton kurutma işlemini kolaylaştırır.
  19. Kromatografi kağıtlarını asetondan çıkarın ve alüminyum folyo üzerine koyun. Asetonu saklayın veya atın.
  20. Kromatografi kağıtlarını bir ısı lambası altında 15 dakika kurutun.
    NOT: Kuru kağıtlar süresiz olarak saklanabilir. Kağıtlar, sintilasyon algılamaya devam etmeye hazır olana kadar güvenli bir şekilde saklanabilir.

3. Sintilasyon tespiti ile aktiviteyi ölçme

  1. Forseps kullanarak kromatografi kağıtlarını sintilasyon raflarında tutulan sintilasyon şişelerine taşıyın. Örnek kağıtların nasıl yönlendirildiğini kaydedin.
  2. Kapak pompasını kullanarak her şişeye 5 mL sintilasyon sıvısı ekleyin. Her flakon için kapakları vidalayın.
  3. Numuneleri sintilasyon dedektörüne yükleyin ve durdurma rafını numunelerin arkasına yükleyin. 14C izleme programının seçildiğinden emin olun. Otomatik sayma'yı seçerek algılamayı başlatın.
  4. Sonuçları yazdır
  5. Sintilasyon tüplerini ve içindekileri NRC tarafından onaylanan bir şekilde atın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Protokolü takiben, sintilasyon detektöründen oluşturulan bir çıktı, glikojen sentazın aktivite seviyesi ile doğrudan ilişkili olan, flakon içeren her kromatografi kağıdından yayılan ölçülen iyonlaştırıcı radyasyon miktarını içerecektir. Sintilasyon detektörü, belirli bir süre boyunca her numune, boş ve toplam için tespit edilen radyasyonun dakika başına sayısını (CPM) hesaplayacaktır. İlk olarak BGBM'yi, kullanılan sintilasyon sayacının verimliliğine (DPM=BGBM/verimlilik) bağlı olarak DP...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Glikojen sentaz enzim aktivitesinin ölçümü, çeşitli metabolik ve hastalık durumlarında glikojen metabolizmasının izlenmesi için değerli bir araçtır. Glikoz-6-fosfatın (G6P) yokluğunda ve varlığında yapılan ölçüm, enzimin düzenleyici durumu ve fosforilasyon durumunun dolaylı bir indeksi hakkında fikir verir. [U-14C]-UDP-glikoz birleştirme testi, glikojen sentaz enzimatik aktivitesini ölçmek için etkili ve iyi belgelenmiş bir tekniktir ve fare iskelet kası gibi küçük doku örnekl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Finansman kısmen Ball State Üniversitesi, Indiana Üniversitesi Tıp Fakültesi-Muncie ve Aro Biotherapeutics tarafından sağlandı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
[14C] Uridin 5-difosfos-glukozAmerikan Radyo Etiketli KimyasallarARC 0154
31 ETCHR kromatografi makalesiWhatman3031 915
Benzamidin hidroklorür hidratSigmaB6506
Beta merkaptoetanolSigmaM3148
Kuru banyoTorey Pines ScientificSC25
Etanol (200 proof)PharmcoAaper111000200
Etilen glikol tetraasetik asit (EGTA)SigmaE4378
Etilen diamintetraasetik asit (EDTA)SigmaE5134
Glukoz-6-fosfat sodyum tuzuSigmaG7879
Tavşan karaciğerinden glikojen (Tip III)SigmaG8876
Mikroplaka, düz taban, 96 kuyuGreiner655101
Mikroplaka, PCR, 96 iyiDOT Scientific951-PCR
Çok Amaçlı Scintillasyon SayacıBeckman CoulterLS 6500
Potasyum florür dihidratSigma221872
Proteaz inhibitörü kokteyliGoldBioGB-108-2
Scintillation kokteyliReasearch Products International111195
Scintillasyon şişeleriReasearch Products International125509
Sodyum florürSigmaS7920
Doku YırtığıBiospec ÜrünleriModel 398
Tosillisin Klorometil Keton (TLCK)SigmaT7254
Trizma tabanı (%99,9)SigmaT1503
Trizma hidroklorürSigmaT3253
Uridin 5-difospo-glukozSigmaU-4625

Kaynaklar

  1. Preiss, J., Walsh, D. A. Biology of Carbohydrates. Ginsburg, V., Robbins, P. 1, John Wiley. 199-314 (1981).
  2. Pederson, B. A. Enzymology of Complex Alpha-Glucans. , CRC Press. 84-137 (2021).
  3. Wayllace, N. Z., et al. An enzyme-coupled continuous spectrophotometric assay for glycogen synthases. Mol Biol Rep. 39 (1), 585-591 (2012).
  4. Wilson, W. A. Spectrophotometric Methods for the Study of Eukaryotic Glycogen Metabolism. J Vis Exp. (174), e63046(2021).
  5. Danforth, W. H. Glycogen synthetase activity in skeletal muscle. Interconversion of two forms and control of glycogen synthesis. J Biol Chem. 240, 588-593 (1965).
  6. Leloir, L. F., Olavarria, J. M., Goldemberg, S. H., Carminatti, H. Biosynthesis of glycogen from uridine diphosphate glucose. Arch Biochem Biophys. 81 (2), 508-520 (1959).
  7. Schalin-Jantti, C., Harkonen, M., Groop, L. C. Impaired activation of glycogen synthase in people at increased risk for developing NIDDM. Diabetes. 41 (5), 598-604 (1992).
  8. Huang, X., Hansson, M., Laurila, E., Ahren, B., Groop, L. Fat feeding impairs glycogen synthase activity in mice without effects on its gene expression. Metabolism. 52 (5), 535-539 (2003).
  9. Holt, B. D., et al. A novel CD71 Centyrin: Gys1 siRNA conjugate reduces glycogen synthesis and glycogen levels in a mouse model of Pompe disease. Mol Ther. 33 (1), 235-248 (2025).
  10. Prats, C., et al. Phosphorylation-dependent translocation of glycogen synthase to a novel structure during glycogen resynthesis. J Biol Chem. 280 (24), 23165-23172 (2005).
  11. Perezleon, J. A., Osorio-Paz, I., Francois, L., Salceda, R. Immunohistochemical localization of glycogen synthase and GSK3beta: Control of glycogen content in retina. Neurochem Res. 38 (5), 1063-1069 (2013).
  12. Thomas, J. A., Schlender, K. K., Larner, J. A rapid filter paper assay for UDP-glucose-glycogen glucosyltransferase, including an improved biosynthesis of UDP-14C-glucose. Analytical Biochemistry. 25 (1), 486-499 (1968).
  13. Parker, G. J., Lund, K. C., Taylor, R. P., McClain, D. A. Insulin resistance of glycogen synthase mediated by O-linked N-acetylglucosamine. J Biol Chem. 278 (12), 10022-10027 (2003).
  14. Niederwanger, A., Kranebitter, M., Ritsch, A., Patsch, J. R., Pedrini, M. T. A gel filtration assay to determine glycogen synthase activity. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 820 (1), 143-145 (2005).
  15. Suzuki, Y., et al. Insulin control of glycogen metabolism in knockout mice lacking the muscle-specific protein phosphatase PP1G/RGL. Mol Cell Biol. 21 (8), 2683-2694 (2001).
  16. Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Quick and humane sacrifice of a mouse by cervical dislocation. CSH Protoc. 2006 (1), prot4357(2006).
  17. Gomes, F. R., et al. Glycogen storage and muscle glucose transporters (GLUT-4) of mice selectively bred for high voluntary wheel running. J Exp Biol. 212 (Pt 2), 238-248 (2009).
  18. Greenberg, C. C., Jurczak, M. J., Danos, A. M., Brady, M. J. Glycogen branches out: new perspectives on the role of glycogen metabolism in the integration of metabolic pathways. Am J Physiol Endocrinol Metab. 291 (1), E1-E8 (2006).
  19. Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).
  20. Gilboe, D. P., Larson, K. L., Nuttall, F. Q. Radioactive method for the assay of glycogen phosphorylases. Anal Biochem. 47 (1), 20-27 (1972).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Glikojen MetabolizmasRadyokimyasal Analizskelet KasUDP Glukoz nkorporasyonuGlikojen Depo Hastal klarS v SintilasyonKromatografi Ka dGlukoz 6 Fosfat
Hayvan Dokusunda Glikojen Sentaz Enzim Aktivitesinin Radyokimyasal Değerlendirilmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.