Bu makale, kuru göz tanı ve tedavisinde in vivo konfokal mikroskopinin işleyişini ve etkisini göstermekte ve gelecekteki araştırmalara temel oluşturmak için in vivo konfokal mikroskopinin uygulama ve sonuçlarını araştırmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu makale, kuru göz tanı ve tedavisinde in vivo konfokal mikroskopinin işleyişini ve etkisini göstermekte ve gelecekteki araştırmalara temel oluşturmak için in vivo konfokal mikroskopinin uygulama ve sonuçlarını araştırmaktadır.
İn vivo konfokal mikroskopi (İVKM), non-invaziv doğası ve yüksek çözünürlüğü nedeniyle büyük ilgi görmüştür. Kornea, konjonktiva, göz kapağı kenarı, meibomian bezleri ve Demodex gibi parazitler dahil olmak üzere kuru göz hastalığı (KGH) ile ilişkili çok sayıda oküler yüzey yapısının hücresel düzeyde in vivo olarak gözlemlenmesini ve objektif olarak ölçülmesini sağlar. Bu yetenek, oftalmologlara KGH'nin spesifik etiyolojilerini ve alt tiplerini belirlemede yardımcı olur, böylece kesin tanıyı, hedefe yönelik tedaviyi ve prognostik değerlendirmeyi kolaylaştırır. Bununla birlikte, İVKM operasyonu ve raporlaması için standartlaştırılmış protokoller eksik kalmaktadır. Bu cihazı etkili bir şekilde kullanmak ve yüksek kaliteli raporlar oluşturmak için hem oftalmik bilgi hem de teknik operasyonda yeterlilik şarttır. Bu makale, KGH hastaları için İVKM muayenesinin prosedür adımlarını ve nüanslarını detaylandırmaktadır. Bu, DED için ilk JoVE adım adım IVCM protokolüdür. Klinisyenler için bir referans görevi görmeyi, operasyonel verimsizliklerden kaçınmalarına ve klinik yönetime rehberlik etmek için sürekli olarak yüksek kaliteli kornea ve oküler yüzey görüntüleri elde etmelerine yardımcı olmayı amaçlamaktadır.
Yerel tıbbi kaynaklardaki kısıtlamalar veya hastanın mali yükleri nedeniyle, KGH'nin klinik tanısı genellikle yalnızca temel bir hususa (örneğin, yarık lamba mikroskobu altında gözlem, gözlerde kuruluk ve kaşıntı şikayeti) veya hatta tek bir göstergeye (örneğin, invaziv gözyaşı filmi kırılma zamanı, gözyaşı sekresyon testi veya Demodex istilası) odaklanır. IVCM uygulaması, protokolleri standartlaştırmak şöyle dursun, yaygın olarak mevcut değildir. Bununla birlikte, IVCM ile donatılmış oftalmik kurumlar için yazar, kornea, konjonktiva ve palpebral kenar dahil olmak üzere eksiklikleri önlemek için ilk kez hastaların kapsamlı bir mikroskobik incelemeden geçmesini önermektedir. Belirsiz KGH vakaları veya Demodex'i tespit etmek için IVCM özellikle açık bir cevap için uygundur.
Kuru göz hastalığı (KGH), gözyaşı sıvısının kalitesi veya miktarındaki anormallikler ve gözyaşı filminin stabilitesinin azalmasından kaynaklanan kronik bir oküler yüzey durumu olarak tanımlanır. Kuru Göz Atölyesi II'DE (DEWS II), DED beş tipte sınıflandırılır: sulu yetersiz kuru göz (ADE), evaporatif kuru göz (EDE), karışık kuru göz (MDE), kuru göze yatkınlık ve klinik öncesi kuru göz durumu1. Ralene ve ark. 2017-2022 yılları arasında yayınlanan literatür de dahil olmak üzere farklı kuru göz tiplerinde İVKM'nin önemli klinik uygulamalarını özetlemiştir2. Son araştırmalar, inflamasyonun KGH 3,4'ün patogenezinde anahtar bir rol oynadığını göstermiştir. Özellikle, dendritik hücrelerin (DC'ler) yoğunluğu, sistemik immün aracılı bir süreçle ilişkili KGH'nin iyi bir göstergesi olabilir5.
IVCM, konfokal lazer tomografi teknolojisini kullanır. 1 μm yatay ve dikey çözünürlük sunar. Cihazın detaylı teknik özellikleri Jeremy ve ark.6 tarafından hazırlanan raporda belgelenmiştir. Oküler yüzey muayenesi sırasında İVKM önce korneaya7, ardından konjonktiva ve meibomian bezlere8 uygulanır. Demodex blefariti son yıllarda artan klinik ilgi görmüştür 9,10. İVKM, kornea, konjonktiva ve palpebral kenarın net görüntülerini sağlar. Bu görüntüler, klinisyenlerin hastalık durumunu değerlendirmesine ve inflamatuar ve bağışıklık hücrelerinin görüntülenmesini ve miktarının belirlenmesini kolaylaştırmasına olanak tanır.
KGH değerlendirmesinde odak noktamız şunları içerir: kornea epitel hücreleri (CEC); subepitelyal sinir lifleri (SNF); interepitelyal ve subepitelyal inflamatuar/immün hücreler; konjonktival kadeh hücreleri (CGC'ler); konjonktival inflamatuar/immün hücreler; meibomian bezi asini ve delikleri; Demodex folliculorum ve Demodex brevis; ve çevre dokulardaki inflamatuar hücreler. Bu vurgu patofizyolojiden kaynaklanmaktadır: Meibomian bezi disfonksiyonu, gözyaşı filminin lipid tabakasının salgılanmasının azalmasına veya bileşiminin değişmesine yol açarak gözyaşı buharlaşmasının hızlanmasına ve oküler yüzey hasarına neden olur. Demodex istilası oküler kaşıntı ve rahatsızlığa katkıda bulunur. CGC'ler, kritik bir gözyaşı filmi bileşeni olan müsin salgılar; bunların tükenmesi müsin eksikliği olan KGH'ye neden olabilir. Tersine, KGH'nin kendisi CEC ve SNF dahil olmak üzere oküler yüzey yapılarına zarar verir ve ardından kornea ve konjonktival dokularda inflamatuar/immün hücre yoğunluğunu yükseltir. İdeal resimleri elde ettikten sonra, bahsedilen çok sayıda hücreyi saymak için yazılımın yerleşik niceliksel araçlarını etkili bir şekilde kullanabiliriz (Şekil 1). Ancak SNF'nin morfolojik çeşitliliği için, nicelemeye yardımcı olması için analitik yazılıma güvenmemiz gerekiyor11,12.
İVKM, oküler yüzey dokularındaki kornea tabakalarının, sinir liflerinin ve inflamatuar/immün hücrelerin gerçek zamanlı değerlendirilmesi için vazgeçilmezdir. CGC'leri değerlendirmek için impresyon sitolojisi alternatif bir yöntem olarak hizmet eder. Bu teknik, goblet hücre yoğunluğunun zirve yaptığı forniks konjonktivasını hedefler ve tipik olarak IVCM ölçümlerinden13,14 daha yüksek değerler verir. Bununla birlikte, sonuçlar boyama değişkenliğine ve operatör uzmanlığına tabidir, zaman yoğun protokol ise rutin klinik uygulamayı sınırlar. Meibomian bezi delik tıkanıklığı yarık lamba mikroskobu ile doğrudan gözlemlenebilir, ancak bu yöntem İVKM'nin doğru bir şekilde tanımladığı Demodex brevis kaynaklı tıkanıklıkları tespit edemez. Demodex enfestasyonunun teşhisi için ışık mikroskobu incelemesi ile kirpik epilasyonu düşük maliyetli bir yöntem sağlar. Teknik olarak basit olsa da, bu yaklaşım önemli sınırlamalar taşır: hasta rahatsızlığı çoklu örneklemeyi kısıtlar, kirpik foliküllerinin derinliklerinde veya meibomian bezi deliklerinde bulunan akarlar tespit edilemez durumda kalır15. Buna karşılık IVCM, kirpik folikülleri ve meibomian bezi delikleri de dahil olmak üzere birden fazla kapak kenarı bölgesinin minimum hasta rahatsızlığıyla kapsamlı bir şekilde incelenmesine olanak tanır. Bu yaklaşım, parazitlerin mikro habitatları içindeki gerçek zamanlı in vivo görselleştirilmesi yoluyla önemli ölçüde daha yüksek tanısal pozitiflik oranları elde eder16,17.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Muayene prosedürü Hankou Aier Göz Hastanesi Etik Kurulu tarafından onaylandı ve tüm hastalardan bilgilendirilmiş onam alındı.
NOT: Hasta seçimine dahil edilme kriterleri arasında kuru ve kaşıntılı göz şikayeti ile başvuran hastalar ve rutin göz muayenesi isteyen kişiler yer almaktadır. Hasta seçiminde dışlama kriterleri arasında kornea perforasyonu veya yaklaşan kornea perforasyonu olan hastalar, topikal oküler anesteziklere alerjisi olanlar, koopere olamayacak kadar genç (örn. 3 yaş altı) veya çok yaşlı bireyler, göz kapağı spekulumuna uyum sağlayamayan dar palpebral fissürleri olan hastalar, gebeler ve başka nedenlerle kooperasyon yapamayan bireyler yer almaktadır. Kısa bir iş akışı şeması Şekil 2'de bulunabilir. Ve detaylı işlem adımları aşağıdaki gibidir.
1. Ön inceleme
2. Muayene sırasında
3. Muayene sonrası
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm İVKM mikroskobik görüntüleri 384 piksel × 384 piksel çözünürlükte, 400 μm × 400 μm gözlem alanında elde edildi. Düzgün bir şekilde "sıfırlandığında", bu inceleme görüntü çerçevesinde yalnızca üç olası sonucu gösterecektir: i) Hiç görüntü yok (başarısız deney): Merkezi optik bölge hedef doku ile temas etmedi. ii) Sadece kısmi bir görüntü (Şekil 7) veya diğer anormal durumlar (Şekil 8) (başarısız deney): Merkezi optik bölge, h...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
"İn vivo konfokal mikroskopi" ve "kuru göz hastalığı" anahtar kelimelerinin kullanıldığı bir PubMed literatür taraması (erişim tarihi: Haziran 2025) 300'> yayın ortaya çıkardı. Özellikle, yıllık yayın oranları 2021'den bu yana yılda yaklaşık 40 makalede sabitlendi. Oküler yüzey bozukluklarında İVKM'nin daha geniş uygulamaları, son yirmi yılda (2004-2024) > 2.000 çalışma üretmiştir. Klinik olarak İVKM, oküler yüzey patolojilerinin hücresel düzeyde değerlendirilmesinde devrim yara...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
Yazarlar, Hankou Aier Göz Hastanesi'nden Lina Jin'e ve Wuhan Asya Kalp Hastanesi Oftalmoloji Bölümü'nden Min Chen'e bazı resimlere yardımcı oldukları için ve ameliyat prosedürü için çalışan tüm katılımcılara ve personele teşekkür eder. Bu araştırma, Wuhan Belediye Sağlık Komisyonu'ndan (WX23A20) Bilimsel Araştırma Projeleri'nden alınan bir hibe ile desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Emici pamuk topları | JIAN QI, Çin | http://www.hnjianqi.com | Alkol topları yapmak için, küçük |
| Alkol bazlı jel | Li Kang, Şanghay, Çin | 31107904 | El antiseptik durulama içermeyen jel, 500ml |
| Karbomer Göz Damlaları | Vidisic, Almanya | 8187195 | Steril oftalmik jel for coupling agent, 10g |
| Kornea temas başlığı (TomoCap) | Heidelberg, Almanya | 18829 | Optik ortam ve korneaya aseptik temas |
| Göz kapağı spekulumu | Asicon, Çin | 6102A | Gözleri açtığın için |
| Heidelberg Eye Explorer yazılımı | Heidelberg, Almanya | Sürüm 1.5.2.0 | IVCM cihazıyla birlikte gelen yazılım |
| IVCM cihazı | Heidelberg, Almanya | HRT-?,08398 | Sınavın ana ekipmanları |
| Tıbbi pamuk çubukları | Esound Med, Çin | www.e-soundmed.com | Hastaların gözlerini temizlemek ve gözlerin açılmasına yardımcı olmak için, 10cm |
| %75 Tıbbi alkol | HUICHANG, Çin | www.huichang888.cn | Alkol topları yapmak için, %75± %5 500ml |
| %0,4 oksibuprokain hidroklorür göz damlaları | Santen, Japonya | http://www.santen.co.jp | Oftalmik topikal anestezik, %0,4 (0,5ml: 2mg) |
| Tobramisin Göz Damlaları | TOBREX, Belçika | 8453824 | Anti-inflamatuar göz damlası, %0,3 (5ml: 15mg) |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.