Yöntem makalesi

Farelerde Canlı Görüntüleme ve Ovaryan Vasküler Fonksiyonun Ölçülmesi için Doppler Ultrasonografi

DOI:

10.3791/69169

⸱

14 Kasım 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Animal Science, Cornell University, 2Biotechnology Resource Center Imaging Facility, Cornell University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yumurtlama öncesi dönemde yumurtalık kan akışındaki değişiklikler yumurtlama için gereklidir. Doppler ultrasonografi insanlarda ve büyük hayvanlarda over hemodinamiği ve perfüzyonunu değerlendirmek için kullanılmıştır. Farelerde yumurtlama öncesi ve periovulatuar fazlarda yumurtalık hemodinamisini değerlendirmek için Doppler ultrasonografi uygulamak için bir protokol sunulmuştur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yumurtalık vasküler fonksiyonunu etkili bir şekilde değerlendirmek ve yumurtalık fizyolojisi ve patolojisindeki rolünü anlamak için, normal kan akışını bozmadan gerçek zamanlı değişiklikleri yakalamak için invazif olmayan in vivo yaklaşımlar gereklidir. Doppler ultrasonografi, daha büyük türlerde yumurtalık kan akışını değerlendirmek için köklü, invaziv olmayan bir araçtır, ancak yumurtlama gibi yumurtalık biyolojisi araştırmaları için en yaygın kullanılan hayvan modellerinden biri olan farelerde uygulaması sınırlı kalmıştır. Yumurtlama, folikül uyarıcı hormon tarafından uyarılan koordineli foliküler olgunlaşmaya ve ardından folikül duvarının yırtılmasına ve döllenme için oositlerin salınmasına yol açan yumurtlama öncesi luteinize edici hormon (LH) dalgalanmasına bağlı olan sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. LH dalgalanması ayrıca yumurtalık damar sisteminde bir dizi yapısal ve fonksiyonel değişikliği (vasküler yeniden şekillenme) tetikler, örneğin anjiyogenez ve yumurtlamadan kısa bir süre önce foliküler rüptür bölgesindeki kılcal damarların daralması gibi. Ek olarak, LH dalgalanmasını takiben yumurtalık kan akışında hızlı bir artış birçok türde rapor edilmiştir, ancak farelerde bildirilmemiştir. Bu protokol, murin yumurtalık damar sistemini görselleştirmek ve hemodinamik parametreleri ölçmek için Doppler ultrasonografiyi kullanır. Burada sunulan protokol, hormon hazırlama, anestezi, farenin konumlandırılması, güç ve renkli Doppler kullanılarak yumurtalık ve damar sisteminin tanımlanması ve kan akış hızı ve direnç parametrelerinin ölçülmesi için ayrıntılı yöntemler bildirmektedir. Bu yöntem, canlı farelerde yumurtalık vasküler fonksiyonunun gerçek zamanlı, boylamsal değerlendirmesine olanak tanır ve yumurtalık vasküler fonksiyonunu hem fizyolojik hem de patolojik bağlamlarda incelemek için güçlü bir araç sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yumurtalık oldukça vaskülarize bir organdır ve damar sistemindeki sıkı bir şekilde düzenlenmiş döngüsel, yapısal ve fonksiyonel değişiklikler (vasküler yeniden şekillenme), folikül gelişimi, yumurtlama ve korpus luteum oluşumu dahil olmak üzere normal yumurtalık fizyolojisi için gereklidir 1,2,3,4. Vasküler yeniden şekillenme, vasküler geçirgenlikteki değişiklikler, anjiyogenez, vazodilatasyon, vazokonstriksiyon ve kan akışındaki değişiklikler (hemodinamik) gibi bir dizi koordineli süreci kapsar. Bu süreçler, yumurtalığın kızgınlık döngüsü 1,2,3,5,6,7,8,9 boyunca hormonal ipuçlarına yanıt olarak kan akışını hızla ayarlamasını sağlar. Vasküler yeniden şekillenme ve yumurtalık kan akışındaki bozulmalar yumurtlamayı bozar ve polikistik over sendromu 2,3,10,11 gibi doğurganlık bozukluklarında rol oynar. Obezitenin de benzer şekilde anjiyogenezi bozduğu ve endotelin-212,13 gibi vasküler mediatörlerin ekspresyonunu azalttığı gösterilmiştir. Ek olarak, çoğunlukla in vitro fertilizasyon sırasında gonadotropin tedavisi yoluyla yumurtalık stimülasyonu ile ilişkili bir komplikasyon olan yumurtalık hiperstimülasyon sendromu, genellikle yumurtalıkta artmış stromal kan akışı gösterir ve düzensiz vasküler fonksiyonun zararlı sonuçlarını vurgular14. Toplu olarak bu koşullar, yumurtalık damarlarının yeniden şekillenmesinin kadın doğurganlığının korunmasındaki merkezi rolünü vurgulamakta ve yumurtalık fonksiyonunu desteklemede hemodinamiğin öneminin altını çizmektedir.

Yumurtalık vasküler fonksiyonunun doğru değerlendirilmesi, fizyolojik ortamı bozmadan hemodinamiğin gerçek zamanlı ölçümünü gerektirir. İnsanlarda ve sığır, koyun ve at gibi büyük hayvan modellerinde Doppler ultrasonografi, yumurtalık kan akışını ve vasküler mimariyi değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan, invaziv olmayan bir araçtır 15,16,17,18. Bu teknik, yumurtalık vaskülarizasyonunun dinamik analizini sağlar ve kan akışındaki hormon kaynaklı değişiklikleri yakalayarak yumurtalık fonksiyonu ve işlev bozukluğu 15,16,17,18 hakkında değerli bilgiler sunar.

Kısa üreme döngüleri ve genetik izlenebilirlikleri nedeniyle yumurtalık biyolojisi araştırmaları için bir model olarak laboratuar farelerinin yaygın olarak kullanılmasına rağmen, bu modelde yumurtalık kan akışını incelemek için non-invaziv, in vivo yöntemler sınırlı kalmaktadır19,20. Mevcut yaklaşımlar, yumurtalığın dışsallaştırılmasını (intravital mikroskopi) gerektiren oldukça invaziv prosedürlere veya zamansal çözünürlükten yoksun ve fizyolojik bağlamı bozan CLARITY yaklaşımı veya tam montajlı görüntüleme gibi tekniklere dayanmaktadır 1,2,3,4. Genetik manipülasyon ve üreme çalışmaları için en çok kullanılan memeli modeli olan fare, yumurtalık hemodinamiğinin moleküler mekanizmalarını keşfetme ve hedefe yönelik müdahaleleri değerlendirme fırsatı sunar. Bu, dinamik yumurtalık vasküler değişikliklerini in vivo olarak izlemek için non-invaziv, uzunlamasına ve kantitatif görüntüleme yaklaşımlarına olan ihtiyacı vurgulamaktadır.

Kadın doğurganlığında merkezi bir olay olan yumurtlama süreci, kadın doğurganlığında yumurtalık damarlarının yeniden şekillenmesinin önemini örneklemektedir. Folikül uyarıcı hormon (FSH) kaynaklı foliküler olgunlaşma ile başlar ve foliküler rüptürü ve oosit salınımını tetikleyen LH dalgalanması ile sonuçlanır1. FSH'nin etkilerini taklit eden at koryonik gonadotropin (eCG) ile uyarılmayı takiben yumurtalık damar ağı genişler2. Bu vasküler büyüme, gelişmekte olan folikülleri desteklemek için yumurtalık medullasından kortekse doğru ilerler2. Yumurtlamadan kısa bir süre önce, kan damarları granüloza hücre tabakasına uzanır ve foliküler apekste lokalize vazokonstriksiyon gözlenir - nihai rüptür ve oosit salınımıbölgesi 3. Bu koordineli vasküler değişiklikler başarılı yumurtlama için kritik öneme sahiptir 1,2,3. Büyük hayvan modellerinde ve insanlarda yapılan Doppler çalışmaları, yumurtalık perfüzyonunda hızlı bir artış ve yumurtlama öncesi folikül içindeki kan akışının lokalize yeniden dağılımı dahil olmak üzere, yumurtlama öncesi dönemde hemodinamikte, tabanda artan akış (yumurtalık stromasına en yakın - apeksin karşısında) ve apekste azalan akış16 ile işaretlenen değişiklikleri ortaya çıkarmıştır. LH dalgalanmasının hemen ardından yumurtalık kan akış hızındaki artış, kadınlarda başarılı yumurtlama ile ilişkilendirilmiştir15. Bununla birlikte, sağlam murin yumurtalığındaki bu hemodinamik değişiklikleri henüz uzunlamasına izleyen hiçbir çalışma, yaygın olarak kullanılan bu modelde vasküler yeniden şekillenme anlayışımızı sınırlamıştır.

Bu boşluğu gidermek için, hız ve direnç indeksleri de dahil olmak üzere yumurtalık hemodinamiğinin ölçülmesinin yanı sıra murin yumurtalığının ve damar sisteminin invazif olmayan bir şekilde görüntülenmesini sağlayan bir Doppler ultrasonografi protokolü sunuyoruz. Bu çalışmada kullanılan MS-700 probu, kılcal damarların ayrıntılı analizini engelleyen sınırlı çözünürlüğe (eksenel/lateral: 30/58 μm) sahip olmasına rağmen, yine de ana yumurtalık kan damarlarının net bir şekilde görüntülenmesine ve miktarının belirlenmesine olanak tanır. Gelecekteki uygulamalarda kontrast maddelerin kullanılması vasküler görselleştirmeyi daha da geliştirebilir. Genel olarak, bu yaklaşım, mevcut invaziv tekniklere göre önemli bir avantaj olan fizyolojik bütünlüğü korurken, yumurtlama öncesi dönem gibi tanımlanmış zaman noktalarında aynı hayvanda tekrarlanan, uzunlamasına ölçümlere izin verir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kullanılan tüm fareler, Cornell Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin etik onayı ile Ulusal Sağlık Enstitüsü Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na sıkı sıkıya bağlı olarak muhafaza edildi. Bu protokolde kullanılan tüm hayvanlar olgunlaşmamış (21-23 günlük) C57BL6 fareleriydi.

1. Süperovülasyon için hormonal stimülasyon

  1. 10-12 g ağırlığındaki 21-23 günlük farelere intraperitoneal olarak 5 IU hamile kısrak serum gonadotropini (PMSG) ve ardından 48 saat sonra 5 IU insan koryonik gonadotropini (hCG) enjekte edin. Her enjeksiyonu, 50 μL hormonu (5000 IU'luk bir stok şişesinden sulandırılmış) 950 μL steril fosfat tamponlu salin içinde seyrelterek hazırlayın ve fare başına 0.1 mL uygulayın.

2. Ultrason makinesi açılma sırası ve dönüştürücü kurulumu

  1. Görüntüleme sisteminin arkasında bulunan ana gücü açın. Sistem önyüklendikten sonra, monitörü ve bilgisayarı uyandırmak için arabanın sol tarafındaki bilgisayar bekleme anahtarını değiştirin.
  2. İstenen dönüştürücüyü (burada kullanılan MS-700 - 30-70 MHz) görüntüleme ünitesindeki (en sağdaki bağlantı noktası) aktif dönüştürücü bağlantı noktasına bağlayın. Dönüştürücü konektöründeki kilitleme pimini bağlantı noktasındaki çentikle hizalayın, ardından konektörü tamamen içeri itin ve sabitlemek için kilitleme kolunu dikey konuma çevirin.
  3. Yazılım simgesine tıklayarak analiz yazılımını başlatın. Program açıldığında ve dönüştürücü algılandığında (otomatik olarak), yumurtalık uygulama paketini seçin. Yeni bir çalışma oluşturmak için Yeni'ye tıklayın ve açılır menüden uygun adı seçin. Çalışma Bilgileri penceresinde gerekli alanları girin: Çalışma adı; Seri adı; Uygulama paketi: Yumurtalık; Ölçüm paketi: Vasküler.

3. Anestezi, fare hazırlığı ve ultrason sahnesi kurulumu

  1. Fizyolojik izleme ünitesini açın (sıcaklık ve kalp atış hızı). Platformun ısıtıldığından emin olun (37 °C).
  2. İzofluran seviyesinin buharlaştırıcı haznesindeki minimum dolum çizgisinin üzerinde olup olmadığını kontrol edin. Gerekirse, uygun kişisel koruyucu ekipman kullanarak izofluran ekleyin. Oksijen tankı valfini yavaşça ve tamamen açın. Oksijen akış hızını dakikada 1 litreye ayarlayın.
  3. Oksijen ve izofluranın indüksiyon odasına akmasına izin vermek için y parçalı boru üzerindeki vanayı ayarlayın. Bu adım sırasında fare platformundaki burun konisine giden vananın kapalı olduğundan emin olun. Buharlaştırıcı kadranını indüksiyon için %3-4 izofluran (hacim/hacim) verecek şekilde ayarlayın.
  4. Fareyi indüksiyon odasına yerleştirin ve kapağı sıkıca kapatın.
    NOT: İndüksiyon odası işlevsel olarak hava geçirmezdir. Bir hayvanı asla aktif gaz akışı olmayan kapalı bir odada bırakmayın.
  5. Kalp atış hızı izleme için uygun teması sağlamak için elektrotların her birine az miktarda elektrot kremi uygulayarak görüntüleme platformunu hazırlayın.
  6. Hayvan tamamen sakinleştirildikten sonra, musluğu görüntüleme platformundaki burun konisine açarak ve musluğu indüksiyon odasına kapatarak gaz akışını yeniden yönlendirin.
  7. Fareyi yavaşça ısıtılmış görüntüleme platformuna aktarın. Fareyi yüzüstü pozisyona getirin (sırt tarafı yukarı bakacak şekilde) (Şekil 1A). Burun konisini hayvanın burnunun üzerine güvenli bir şekilde yerleştirin ve anesteziyi sürdürmek için hem burnun hem de ağzın kapalı olduğundan emin olun. Fizyolojik izleme için elektrot kremindeki her ayağı ilgili elektrot pedine bantlayın. Anestezi sırasında korneanın kurumasını önlemek için oftalmik merhem sürün.
  8. Düğmeyi sola çevirerek anesteziyi sürdürmek için izofluran konsantrasyonunu %1.5-2.0'a düşürün. Ayak parmağı sıkıştırma refleks yöntemini kullanarak yeterli anestezi derinliğini onaylayın (geri çekilme gözlenmemelidir). Görüntüleme seansı sırasında her 5 dakikada bir hayvanın yaşamsal belirtilerini dikkatle izleyin: (i) solunum hızı; (ii) kalp atışı hızı; (iii) rahatsızlığa işaret edebilecek herhangi bir hareket; ve (iv) görüntüleme platformunun baştan sona doğru sıcaklığa ısıtıldığından emin olun.
  9. Bölgeyi elektrikli tıraş makinesiyle tıraş ederek sırtın sağ alt kadranını hazırlayın. Sağ arka ayaktan sırtın orta hattına kadar, omurganın hemen yanında kalacak şekilde tıraş edin. Kalan tüyleri almak için önceden tıraş edilmiş bölgeye 30 saniye ila 1 dakika boyunca ince bir tabaka vücut tüy giderici krem uygulayın. Nemli bir gazlı bezle iyice silin. Optimum akustik bağlantıyı sağlamak için traş edilen bölgeye cömert, eşit bir ultrason jeli tabakası uygulayın.
  10. Dönüştürücü probu, yönlendirme çentiği operatörün soluna bakacak şekilde mekanik standda fareye göre enine modda konumlandırın. Kelepçeyi kullanarak probu yerine sabitleyin.

4. Doppler ultrasonografi kullanılarak yumurtalık ve yumurtalık kan damarlarının tanımlanması

  1. Kontrol panelinde, anatomik yapıların görselleştirilmesine izin veren standart gri tonlamalı görüntüleme penceresini etkinleştirmek için B-Mode tuşuna basın.
  2. Dönüştürücüyü ultrason jeli ile kaplanmış traş edilmiş alana yavaşça indirin.
    1. Görüntüleme platformunun ve farenin düz (tezgah yüzeyine paralel) yerleştirildiğinden ve dönüştürücünün fareye ve platforma dik (90° açı - dikey) indirildiğinden emin olun (Şekil 1A).
    2. Yumurtalığı bulmak için cildi sola doğru çekin, ardından dönüştürücüyü traş edilmiş kadranın üst bölgesinin yakınına, sırtın orta hattına daha yakın bir yere yerleştirin. Probun sol kenarını, sağ kenar sağ yan kanadın biraz üzerine uzanacak şekilde omurgaya bitişik olarak hizalayın.
  3. Yumurtalığı tanımlamak için önce görünür korteks ve medulla ile büyük, açık gri oval bir yapı (5 mm × 6 mm) olan böbreği tespit edin. Ardından görüntüleme platformunu hafifçe ileri doğru (farenin başına doğru) iterek yumurtalık ve periyumurtalık yağ dokusunun (POAT) görünmesini sağlayın.
    NOT: Yumurtalık, omuriliğin lateralinde yer alan, yaklaşık 1 x 2 mm (yumurtlama öncesi aşamada) küçük, dairesel, hipoekoik (koyu gri) bir yapıdır. POAT hiperekoik (parlak beyaz) görünür.
  4. B modunda yumurtalık videolarını çekmek ve saklamak için kare sayısının artmasını bekleyin (100 kareye kadar) ve tuş takımındaki Cine Store düğmesine basın.
  5. Yumurtalık tanımlamasını doğrulamak ve düşük hızlı akışa karşı yüksek hassasiyete sahip kan damarlarını görselleştirmek için, kontrol panelinde belirlenen tuşa basarak B Modundan güç Doppler Moduna geçin.
  6. Tuş takımındaki düğmeleri çevirerek yumurtalık damar sisteminin optimum şekilde görüntülenmesi için aşağıdaki güç Doppler ayarlarını yapın: Doppler Kazancı: 32-55 dB; Hassasiyet: 5; Dinamik Aralık: 15 DR; Hız 1 kHz.
    NOT: Değerler sol taraftaki panelde görüntülenebilir ve düğmeler çevrildiğinde değişecektir
  7. Güç Doppler Modunda veya renkli Doppler Modunda (tuş takımında belirtilen tuşa basın), damar sisteminin farklı yönlerini görselleştirmek için platformu hafifçe ileri geri hareket ettirerek aşağıdaki damarları tanımlayın: (i) Abdominal aorttan dallanan ve yumurtalık hilusuna girmek için POAT yönünden gelen yumurtalık arteri (OA); (ii) Merkezi medulla içindeki medüller damarlar (MV); ve (iii) Dış kortekste gelişen folikülleri çevreleyen kortikal damarlar (CV) (Şekil 1B).
    NOT: Kortikal damarlar, küçük çapları ve düşük akış hızları nedeniyle tutarlı bir şekilde görünmeyebilir. Folikülün tabanındaki damarlar daha kolay tespit edilebilirken, apekstekiler özellikle yumurtlamadan hemen önce genellikle görünmez.
  8. Ekranda görüntülenen videoyu kaydetmek için istediğiniz zaman güçlü veya renkli Doppler modunda yumurtalık ve damar sisteminin videolarını çekmek için Cine mağazasına basın.
  9. Arteriyel ve venöz akışı ayırt etmek için tuş takımındaki renkli Doppler Modu tuşuna basın. Bu modda, akış yönü renk kodludur: kırmızı, dönüştürücüye doğru akışı, mavi ise dönüştürücüden uzaklaşan akışı gösterir. Ortalama hızı daha yüksek olan damar yumurtalık arteridir.
  10. Kan perfüzyonundaki değişiklikler, kan damarlarının boyutunu ve renk yoğunluğunu (güç Doppler'de sarı, renkli Doppler'de kırmızı veya mavi) görselleştirerek renkli veya güçlü Doppler modunda değerlendirilebilir.

5. Hemodinamiğin renkli ve güçlü Doppler ultrasonografi ile değerlendirilmesi

  1. Renkli Doppler veya güç Doppler modundayken, ultrason sistemi klavyesindeki Darbeli Dalga (PW) Doppler düğmesine basın. Bu, örnek hacim kapısını (yani iki yatay çizgiyi) getirir. Alt paneldeki Doppler spektral dalga formunu etkinleştirmek için PW düğmesine ikinci kez basın.
  2. Numune kapısını (ayarlanabilir ölçüm aracı - kullanıcının hızların ölçüleceği alanı tanımlamasına olanak tanır) damar lümeninin merkezine yerleştirin ve kan akış yönü ile hizalamayı sağlayın. İnsonasyon açısını tekneye mümkün olduğunca paralel olacak şekilde ayarlayın ve doğru hız hesaplamaları sağlamak için ≤60°'de tutun. İlgili açı düğmesini çevirerek sonsuzluk açısını ayarlayın.
  3. Numune kapısını her kap tipi için aşağıdaki konumlara yerleştirin. Yumurtalık arteri: Yumurtalığa giriş noktasının hemen proksimalindeki damar içinde. Medüller damar: MV'nin kortikal damarlara dallandığı merkezi dallanma noktasında. Bu dallanma noktası, yumurtalığa girdikten hemen sonra bir kan havuzu olarak görünür. Kortikal damar: tanımlanabildiğinde, büyüyen bir folikülün tabanındaki bir damar içinde.
  4. Numune kapısı istenen konuma yerleştirildikten ve net bir darbe dalga formu göründüğünde, hem ultrason görüntüsünü hem de karşılık gelen spektral Doppler dalga formunu kaydetmek ve kaydetmek için Cine Store'a basın.
  5. Görüntüleme tamamlandıktan sonra fareyi yavaşça görüntüleme platformundan çıkarın. Arkadaki ultrason jelini silin ve fareyi tamamen uyanana kadar bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin.

6. Verileri dışa aktarma ve kaydetme

  1. Tüm görüntülemeyi tamamladıktan ve Cine Store işlevini kullanarak istenen sabit kareleri ve sinema döngülerini kaydettikten sonra, ultrason sistemi klavyesinin sol üst tarafında bulunan Çalışma Yönetimi düğmesine basın. Bu, geçerli oturumdan kaydedilen tüm görüntülerin ve sinema döngülerinin bir listesini görüntüleyen Çalışma Tarayıcısı penceresini açacaktır.
  2. Çalışma Tarayıcısı penceresinde, kaydedilecek dosyaları seçin.
    1. Bir serinin tamamını kaydetmek için ilgili seri adını seçin -- bu, ilişkili tüm görüntüleri ve sinema döngülerini otomatik olarak vurgulayacaktır. Tıkla Kopyalamak için düğmesine basın.
    2. İstendiğinde, dışa aktarılan dosyaların kaydedilmesi gereken hedef klasöre veya harici sürücüye tıklayın. Dışa aktarmayı tamamlamadan önce dosya formatının ve hedef yolunun doğru olduğunu onaylayın.

7. Sırayı kapatın ve temizleyin

NOT: Bu adımlar, görüntüleme tamamlandıktan ve tüm veriler kaydedilip dışa aktarıldıktan hemen sonra tamamlanmalıdır.

  1. Gerekli tüm verileri dışa aktardıktan sonra, Kapat Analiz yazılımı uygulamasının Çalışma Tarayıcısı penceresindeki simge. Bu, hem alıcı bilgisayarı hem de kontrol panelini güvenli bir şekilde kapatacaktır.
  2. Sistem soğutma fanlarının 5-10 dakika çalışmasına izin verin. Soğutma tamamlandığında, görüntüleme arabasının arkasında bulunan düğmeyi kullanarak ana gücü kapatın.
  3. Tüm yardımcı ekipmanları kapatın: oksijen kaynağı, izofluran buharlaştırıcı ve fizyolojik izleme ünitesi.
  4. Ultrason dönüştürücüyü temizleyin: önce kalan ultrason jelini tüy bırakmayan mendiller kullanarak silin, ardından yüzeyi nemli tüy bırakmayan mendiller veya hassas elektronik ekipmanlar için önerilen dezenfektan mendillerle dezenfekte edin.
  5. Fare platformunu ve klavyeyi dezenfektan mendillerle temizleyin. Hassas bileşenlere zarar verebileceğinden fare platformunun elektrotlarında etil alkol kullanmayın.
  6. İndüksiyon odasını nemli kağıt havlularla silin. Kağıt havluları biyolojik tehlike atık kabına atın.
  7. Tüm tek kullanımlık malzemeleri (örn. eldiven, cerrahi bant, gazlı bez, pamuk uçlu aplikatörler) belirlenen biyolojik tehlike kabına atın.

8. Doppler darbe dalga formları kullanılarak hemodinamik parametrelerin ölçümü

  1. Analiz uygulamasında, kopyala'ya tıklayın, açılır menüden uygun adı seçin, çalışmanın kaydedildiği yere gidin, seçin ve içe aktarmak için tamam'a tıklayın.
  2. İstediğiniz PW Doppler görüntüsünü açın ve ölçüm panelini açmak için sol alt köşedeki ölçümler simgesine tıklayın.
  3. PSV ve EDV dalgalarının üst kısmına tıklayarak spektral Doppler dalga biçiminden en yüksek üç tepe sistolik hızı (PSV) ve diyastol sonu hızı (EDV) ölçmek için ölçüm panelinin sol üst köşesindeki hız ölçüm aracına tıklayın (araç, tıklama noktasından x eksenine kadar dalganın boyutunu otomatik olarak ölçecektir. Yalnızca net ve tutarlı PSV ve EDV zirveleri ile en az üç farklı kardiyak döngü gösteren dalga formlarını dahil edin.
  4. Ortalama hızı hesaplamak için önce seçilen üç PSV değerinin ortalamasını ve üç EDV değerinin ortalamasını hesaplayın. Ardından aşağıdaki formülü kullanarak ortalama hızı hesaplayın: Ortalama hız = (Ortalama PSV + Ortalama EDV)/2.
  5. 10 mm/s'lik algılama eşiğinin altındaki hızlar için, 5 mm/s'lik bir değer atayın (eşiğin altındaki ortalama hız) veya araştırma amacına göre ölçümü atın.
  6. Direnç indeksini (RI) hesaplamak için standart formülü kullanın: RI = (PSV - EDV)/PSV. Bu indeks, vasküler direncin bir ölçüsünü sağlar ve doğruluk için ortalama PSV ve EDV değerleri kullanılarak hesaplanmalıdır.
  7. Pulsatilite indeksini (PI) hesaplamak için standart formülü kullanın: PI = (PSV - EDV)/Ortalama hız

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolün amacı, murin yumurtalığını ve damar sistemini görüntülemek, yumurtalık perfüzyonundaki değişiklikleri değerlendirmek ve yumurtalık hemodinamiğini ölçmek için Doppler ultrasonografi uygulamaktır.

Şekil 2, hCG enjeksiyonunu takiben periovulatuar dönem boyunca (yumurtlamadan 12 saat önce ve 12 saat sonra) birden fazla zaman noktasında aynı yumurtalığın temsili görüntülerini göstermektedir. Şekil 2A<...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Doppler ultrasonografi kullanılarak yumurtalık hemodinamiğinin in vivo olarak görüntülenmesi ve ölçülmesi için invazif olmayan bir yöntem sunmaktadır. Mevcut yöntemlerden farklı olarak bu yaklaşım, damar fonksiyonunu bozmadan kan akışının gerçek zamanlı değerlendirilmesine olanak sağlar. Doppler ultrasonografi, insanlarda ve büyük hayvan modellerinde yumurtalık morfolojisini ve vasküler fonksiyonu değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan ve etkili bir araçtır 15,...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma NICHD 1R01HD109392 ile desteklenmiştir. Görüntüleme verileri, VisualSonics Vevo-2100 ultrasonu için NIH S10OD016191 ile Cornell Biyoteknoloji Kaynak Merkezi (BRC) Görüntüleme Tesisi aracılığıyla elde edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3M Cerrahi bantVWR International LLCMMM1534-3
Aquasonic Clear Ultrason İletim Jeli ParkerPKR-03-08
Saç MakinesiSkull Shaver LLCBBT 2020
İnsan Korionik GonadotropiniSigma Aldrich9002-61-3
Nair Vücut Kremi saç çıkarıcıNairTüy alma
Optixcare Eye Lube Plus AventixOPX-4252
Parker Signacreme Elektrot KremiParkerPKR-17-05-CS
Hamile kısrak Serumu GonadotropinYaratıcı EnzimlerNATE-0969
VisualSonics Vevo 2100 görüntüleme sistemiVisualSonics Inc.

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Duffy, D. M., Ko, C., Jo, M., Brannstrom, M., Curry, T. E. Jr Ovulation: Parallels with inflammatory processes. Endocr Rev. 40 (2), 369-416 (2018).
  2. Feng, Y., et al. Clarity reveals dynamics of ovarian follicular architecture and vasculature in three-dimensions. Sci Rep. 7 (1), 44810(2017).
  3. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  4. Fan, H. Y., Liu, Z., Johnson, P. F., Richards, J. S. CCAAT/enhancer-binding proteins (C/EBP)-α and -β are essential for ovulation, luteinization, and the expression of key target genes. Mol Endocrinol. 25 (2), 253-268 (2011).
  5. Janson, P. O., Albrecht, I., Ahrén, K. Effects of prostaglandin F2α on ovarian blood flow and vascular resistance in the pseudopregnant rabbit. Acta Endocrinol (Copenh). 79 (2), 337-350 (1975).
  6. Brännström, M., et al. Preovulatory changes of blood flow in different regions of the human follicle. Fertil Steril. 69 (3), 435-442 (1998).
  7. Murdoch, W. J., Nix, K. J., Dunn, T. G. Dynamics of ovarian blood supply to periovulatory follicles of the ewe. Biol Reprod. 28 (4), 1001-1006 (1983).
  8. Siddiqui, M., et al. Temporal relationships of the LH surge and ovulation to echotexture and power Doppler signals of blood flow in the wall of the preovulatory follicle in heifers. Reprod Fertil Dev. 22, 1110-1117 (2010).
  9. Acosta, T. J., Miyamoto, A. Vascular control of ovarian function: Ovulation, corpus luteum formation and regression. Anim Reprod Sci. 82 - 83, 127-140 (2004).
  10. Tal, R., Seifer, D. B., Arici, A. The emerging role of angiogenic factor dysregulation in the pathogenesis of polycystic ovarian syndrome. Semin Reprod Med. 33 (3), 195-207 (2015).
  11. Di Pietro, M., Pascuali, N., Parborell, F., Abramovich, D. Ovarian angiogenesis in polycystic ovary syndrome. Reproduction. 155 (5), R199-R209 (2018).
  12. Velazquez, C., et al. Beneficial effects of metformin on mice female fertility after a high-fat diet intake. Mol Cell Endocrinol. 575, 111995(2023).
  13. Yang, P. -K., et al. Obesity alters ovarian folliculogenesis through disrupted angiogenesis from increased IL-10 production. Mol Metab. 49, 101189(2021).
  14. Agrawal, R., et al. Serum vascular endothelial growth factor and Doppler blood flow velocities in in vitro fertilization: Relevance to ovarian hyperstimulation syndrome and polycystic ovaries. Fertil Steril. 70 (4), 651-658 (1998).
  15. Waseda, T., et al. Hemodynamic response of ovarian artery after hCG injection. Mol Cell Endocrinol. 202 (1), 71-75 (2003).
  16. Acosta, T. J., Hayashi, K. G., Ohtani, M., Miyamoto, A. Local changes in blood flow within the preovulatory follicle wall and early corpus luteum in cows. Reproduction. 125 (5), 759-767 (2003).
  17. Petridis, I. G., et al. Doppler ultrasonographic examination in sheep. Small Rumin Res. 152, 22-32 (2017).
  18. Miro, J. Ovarian ultrasonography in the mare. Reprod Domest Anim. 47 (s3), 30-33 (2012).
  19. Cunha, G. R., et al. Reproductive tract biology: Of mice and. Differentiation. 110, 49-63 (2019).
  20. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  21. Lee, W., Novy, M. J. Effects of luteinizing hormone and indomethacin on blood flow and steroidogenesis in the rabbit ovary. Biol Reprod. 18 (5), 799-807 (1978).
  22. Janson, P. O. Effects of the luteinizing hormone on blood flow in the follicular rabbit ovary, as measured by radioactive microspheres. Acta Endocrinol (Copenh). 79 (1), 122-133 (1975).
  23. Dowell, R. T., Gairola, C. G., Diana, J. N. Reproductive organ blood flow measured using radioactive microspheres in diestrous and estrous mice. Am J Physiol. 262 (4 Pt 2), R666-R670 (1992).
  24. De Visscher, G., Haseldonckx, M., Flameng, W. Fluorescent microsphere technique to measure cerebral blood flow in the rat. Nat Protoc. 1 (4), 2162-2170 (2006).
  25. Deveci, D., Egginton, S. Development of the fluorescent microsphere technique for quantifying regional blood flow in small mammals. Exp Physiol. 84, 615-630 (1999).
  26. Raz, T., et al. The hemodynamic basis for positional- and inter-fetal dependent effects in dual arterial supply of mouse pregnancies. PLoS One. 7 (12), e52273(2012).
  27. Fiorentino, G., Parrilli, A., Garagna, S., Zuccotti, M. Three-dimensional micro-computed tomography of the adult mouse ovary. Front Cell Dev Biol. 8, e52273(2020).
  28. Christensen-Jeffries, K., Browning, R. J., Tang, M. X., Dunsby, C., Eckersley, R. J. In vivo acoustic super-resolution and super-resolved velocity mapping using microbubbles. IEEE Trans Med Imaging. 34 (2), 433-440 (2015).
  29. Bar-Zion, A., et al. Doppler slicing for ultrasound super-resolution without contrast agents. BioRxiv. , (2021).
  30. You, Q., et al. Contrast-free super-resolution power Doppler (CS-PD) based on deep neural networks. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 70 (10), 1355-1368 (2023).
  31. Harmon, J. N., et al. Quantitative tissue perfusion imaging using nonlinear ultrasound localization microscopy. Sci Rep. 12 (1), 21943(2022).
  32. Welsh, A. W., et al. Three-dimensional US fractional moving blood volume: Validation of renal perfusion quantification. Radiology. 293 (2), 460-468 (2019).
  33. Schnell, D., Darmon, M. Bedside Doppler ultrasound for the assessment of renal perfusion in the ICU: Advantages and limitations of the available techniques. Crit Ultrasound J. 7 (1), 24(2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Over Kan Ak mOver Vask laritesiG DopplerRenkli DopplerKan Ak H zPreovulatuar HemodinamikFare Overi

İlgili makaleler