Yöntem makalesi

Huaihua Tozu Kullanılarak UPLC-Q-Orbitrap Kütle Spektrometrisinde DDA ve DIA Edinim Modlarının Karşılaştırmalı Çalışması

DOI:

10.3791/69227

⸱

3 Ekim 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacy, Shizuishan Maternal and Child Health Hospital, 3Department of Assets and Laboratory Management, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, karmaşık bir TCM olan Huaihua Tozu'nu analiz etmek için DDA ve DIA modlarını (UPLC-QE-Orbitrap MS) karşılaştırmaktadır. Optimize edilmiş DDA ve DIA yöntemleri geliştirildi; bileşikler Bileşik Kaşif aracılığıyla tanımlandı. Performans (bileşik tanımlama, tekrarlanabilirlik, spektral kalite, duyarlılık) değerlendirildi ve TCM tarama modu seçimi için ampirik rehberlik sağlandı.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, karmaşık geleneksel Çin tıbbı (TCM) formülasyonlarının kapsamlı kimyasal profilinin çıkarılması için ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi-dört kutuplu-orbitrap yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) ile birleştirilmiş iki kütle spektrometrisi elde etme modunun, veriye bağlı edinimin (DDA) ve veriden bağımsız edinimin (DIA) karşılaştırmalı performansını sistematik olarak değerlendirmektedir. Huaihua TozuKlasik formüle edilmiş bir reçete olan , ampirik değerlendirme için bir model sistem olarak kullanıldı. Optimize edilmiş DDA ve DIA edinim yöntemleri ayrı ayrı oluşturulmuştur: DDA yöntemi, özelleştirilmiş parçalanma parametreleriyle hedeflenen bir öncü iyon seçim stratejisini içerirken, DIA yöntemi, hedef m/z aralığını kapsamak için bölümlere ayrılmış bir değişken pencere stratejisi kullandı ve tüm öncü iyonlar üzerinde tarafsız parçalanma gerçekleştirdi. Bileşik tanımlama, Compound Discoverer yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi. Karşılaştırmalı değerlendirme, özellikle tanımlanan bileşiklerin sayısını, tekrarlanabilirliği, MS/MS spektral kalitesini ve düşük bolluktaki aktif bileşenler için tespit hassasiyetini kapsayan iki edinim modunun performans özelliklerine odaklandı. Sonuçlar, DDA modunun daha yüksek toplam tespit edilen bileşik sayısı sağladığını, oysa DIA modunun daha yüksek oranda yüksek güvenilirlikli tanımlamalar ürettiğini gösterdi (spektral eşleşme skorları ile %10.63 >0.8). Özellikle, DIA yaklaşımı, altı temsili bileşik için alıkonma süresi ve tepe alanında önemli ölçüde üstün tekrarlanabilirlik sergiledi ve rutin, iki edinim modu arasında alıkonma süresi RSD'sinde >3 kat fark gösterdi. Bununla birlikte, DDA, farklı fragman iyonlarına sahip daha temiz MS/MS spektrumları üretirken, DIA spektrumları kirletici iyonlardan kaynaklanan girişim sergiledi. Eş zamanlı olarak DIA, iyon kromatogramları ve MS/MS fragmanları DDA modunda ekstrakte edilemeyen düşük bolluktaki aktif bileşenleri etkili bir şekilde tespit etti. Bu çalışma, karmaşık TCM formülasyon araştırmaları için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi elde etme modlarının seçimini bilgilendirmek için kritik deneysel kanıtlara ve analitik veri kümelerine katkıda bulunmaktadır. Sonraki araştırmacılar, kapsamlı bileşik karakterizasyonunda ikili hedeflere ulaşmak için her iki yaklaşımın tamamlayıcı avantajlarını entegre edebilirler.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geleneksel Çin tıbbı (TCM) formülleri, bileşen konsantrasyonlarında önemli farklılıklar gösteren, özellikle de analitik teknolojiler için ciddi zorluklar oluşturan çok sayıda düşük bolluktaki aktif bileşenin varlığına sahip karmaşık kimyasal sistemlere sahiptir. Klasik ve ünlü bir geleneksel Çin tıbbı formülü olan Huaihua Tozu, dört şifalı bitkiden oluşur: Sophora japonica, Platycladus orientalis yaprakları, Schizonepeta tenuifolia sivri uçları ve Citrus aurantium kabuğu. Bu formül, flavonoidler, alkaloidler ve uçucu yağlar dahil olmak üzere, konsantrasyonlarında önemli farklılıklar bulunan çok çeşitli biyoaktif maddeler içerir. TCM formüllerinin maddi temelini incelemek için karmaşık sistemlerin1 temsili bir modeli olarak hizmet eder. Kimyasal bileşiminin doğru, kapsamlı ve güvenilir karakterizasyonu, farmakodinamik malzeme temelinin aydınlatılması ve kalite kontrol standartlarının iyileştirilmesi için kritik bir ön koşuldur.

Ultra Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi-Dört Kutuplu-Elektrostatik Alan Orbitrap Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometresi (UPLC-QE-Orbitrap MS), olağanüstü çözünürlüğü, hassasiyeti ve kütle doğruluğu sayesinde karmaşık TCM sistemlerindeki kimyasal bileşenleri analiz etmek için temel bir platform olarak ortaya çıkmıştır. Veri toplama stratejileri açısından, Veriye Bağlı Edinim (DDA) ve Veriden Bağımsız Edinim (DIA) iki ana moddur 2,3,4 (Şekil 1). DDA modu, önceden belirlenmiş kurallara (örneğin, öncü iyon yoğunluğu eşikleri, dinamik dışlama) dayalı olarak yüksek bolluktaki iyonların parçalanmasını seçici olarak tetikleyerek yapısal aydınlatmayı kolaylaştıran hedeflenen yüksek kaliteli MS/MS spektrumlarını sağlar. Bununla birlikte, düşük bolluktaki iyonları örtmede 5,6,7,8 sınırlamaları vardır. Buna karşılık, DIA modu, sürekli veya değişken pencereler kullanarak belirli bir kütle-yük oranı aralığında tüm öncü iyonların ayrımcı olmayan parçalanmasını gerçekleştirir. Teorik olarak, tespit edilebilir tüm iyonları yakalar, tespitin genişliğini ve tekrarlanabilirliğini önemli ölçüde artırır, özellikle hedeflenmemiş küresel analiz için uygundur, ancak ortaya çıkan karışık MS/MS spektrumlarınınyorumlanması daha karmaşıktır 5,9.

Şu anda, DDA ve DIA teknikleri TCM analizinde ayrı ayrı uygulanmış olsa da, aynı karmaşık TCM formül sistemi (örneğin, Huaihua Tozu) içinde tanımlama genişliği (özellikle düşük bolluklu bileşenler için), MS/MS spektrum kalitesi ve tespit hassasiyeti gibi temel performans göstergeleri üzerine sistematik, ampirik karşılaştırmalı çalışmalar yetersiz kalmaktadır. Karmaşık TCM matrislerinde bu iki modun uygulanabilir senaryolarını, avantajlarını ve sınırlamalarını açıklığa kavuşturmak, araştırmacıların belirli deneysel hedeflere dayalı olarak strateji seçimini optimize etmeleri için çok önemlidir10.

Okuyuculara bu protokolün uygulanabilirliği konusunda rehberlik etmek için temel parametreler ve sınırlamalar burada özetlenmiştir. Yöntem, flavonoidler ve alkaloidler içeren bir sistem için optimize edilmiş parametrelerle karmaşık bitkisel matrislerin profilini çıkarmak için oldukça etkilidir. Kritik DIA değişken penceresi, ampirik testlerden sonra 30 m/z olarak ayarlandı; Bu parametre, farklı fizikokimyasal özelliklere sahip numuneler için ayarlanmalıdır. Yöntem, düşük bolluktaki iyonları (tepe alanı ~105) güvenilir bir şekilde tespit eder, ancak veri kalitesini sağlamak için ayrı pozitif ve negatif iyonizasyon modlarında alım gerektirir. Birincil sınırlama, DIA'nın güvenli tanımlamalar için spektral kitaplıklara ve gelişmiş ters evrişim yazılımına bağımlılığıdır ve bu da hesaplamalı kaynak gereksinimlerini etkiler.

Buna göre, bu çalışma, klasik formül Huaihua Tozu'nu vaka çalışması olarak kullanarak, UPLC-QE-Orbitrap MS platformunda DDA ve DIA tarama modlarının kapsamlı performansının derinlemesine ve sistematik bir karşılaştırmasını yapmayı amaçlamaktadır. Huaihua Tozu analizi için özel olarak tasarlanmış optimize edilmiş DDA ve DIA tarama yöntemleri geliştirilecektir. Veri işleme, iki modu aşağıdaki boyutlarda değerlendirmek ve karşılaştırmak için Compound Discoverer yazılımı kullanılarak gerçekleştirilecektir: (1) tanımlanan bileşiklerin toplam sayısı; (2) edinilen MS/MS spektrumlarının kalitesi; (3) pik alanların tekrarlanabilirliği ve temsili bileşiklerin alıkonma süreleri; ve 4) düşük bolluktaki aktif bileşenler için algılama hassasiyeti. Bu araştırmanın, karmaşık TCM sistemleri çalışmalarında yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi tarama modlarının seçilmesi için sağlam deneysel kanıtlar ve veri desteği sağlaması, DDA ve DIA'nın "genişlik ve derinlik arasında bir denge" elde etmek ve TCM modernizasyonunu ilerletmek için tamamlayıcı avantajlarının potansiyelini keşfetmesi bekleniyor.

Deney sırasında, DIA edinme modunda segmentlere ayrılmış değişken penceresinin parametre ayarıyla ilgili olarak, bunu 30 m/z olarak ayarlamanızı öneririz. Aynı zamanda pozitif ve negatif iyonların ayrı ayrı toplanma etkisi daha iyidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipman Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Huaihua Tozu test çözeltisinin hazırlanması

  1. Çin Farmakopesi'nin (Bölüm I) 2020 baskısındaki "Tavada kızartılmış Sophora Çiçeği" işleme normlarına uygun olarak, orijinal Sophora çiçeği materyalinden uygun miktarda alın, yabancı maddeleri ve dalları çıkarın, kül ve kalıntıları eleyin, sıcak bir tavaya koyun ve koyu sarı olana kadar kısık ateşte (100 °C) karıştırarak kızartın. Çıkarın ve soğutun.
  2. Platycladus orientalis yapraklarının işlenmiş ürünlerini, Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısında (Bölüm IV) yer alan "0213 Genel Hazırlama Kuralları"na göre hazırlayın. Orijinal Platycladus orientalis yapraklarından uygun miktarda alın, safsızlıkları giderin, sıcak bir tavaya koyun ve sararana kadar kısık ateşte (100 ºC) karıştırarak kızartın. Çıkarın ve soğutun.
  3. Zhike'nin işlenmiş ürünlerini, Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısında (Bölüm I) "kepekli tavada kızartılmış Fructus Aurantii" yöntemine göre hazırlayın. Uygun miktarda ham Zhike malzemesi alın, yabancı maddeleri çıkarın, 100 dereceye ısıtın ve 1:10 oranında (malzemelerden yardımcı maddelere) uygun miktarda buğday kepeği serpin.
    1. Duman yükseldiğinde, çiğ Zhike dilimlerini ekleyin ve hızlıca karıştırarak kızartın. Yüzey sarıya veya koyu sarıya döndüğünde, kepeği çıkarın, eleyin, soğutun ve bir kenara koyun.
  4. Huaihua Tozu'nu Çin Tıbbi Formulolojisi'nin (Yeni Yüzyıl 3. Her bitkisel tozdan 1 g'ı doğru bir şekilde tartın (5 numaralı elekten elenmiş).
    1. Tozları bir havanda birleştirin ve geleneksel Çin tıbbı tozları için "öğütme ve karıştırma yöntemine" göre karıştırın: 10 dakika boyunca tek yönde nazikçe ve tutarlı bir şekilde öğütün.
    2. Görünür çizgiler, topaklar veya renk değişimleri gözlenmediğinde tozun eşit şekilde karıştırıldığını düşünün, bu da tüm karışım boyunca homojen bir görünüm sağlar. Bu yöntemi kullanarak son Huaihua Tozu örneğini hazırlayın.
  5. Standartlaştırılmış bir görsel inceleme protokolü kullanarak karıştırma homojenliğini değerlendirin. Toz karışımını beyaz bir arka plan üzerinde tutarlı aydınlatma koşulları altında inceleyin.
    NOT: Karışımı yalnızca aşağıdaki kriterlerin tümünü karşılıyorsa homojen olarak kabul edin: tek tek bileşenlerin görünür çizgileri veya yamaları olmadan baştan sona tek tip renk; kaba veya ince sapma olmadan tutarlı doku; birden fazla noktadan örneklendiğinde renk tonunda belirgin bir değişiklik yok; ve yakından incelendiğinde tespit edilebilen topaklanmış granüler topaklar yoktur. Tutarlılığı sağlamak için bu değerlendirmeyi iki bağımsız analist tarafından gerçekleştirin.
  6. İyi karıştırılmış Huaihua Tozu örneğinin 0,1 g'ını doğru bir şekilde tartın. Numuneyi 10 mL'lik hacimsel bir şişeye aktarın. 8 mL metanol ekleyin.
  7. 500 W güç ve 40 kHz frekans ile 60 dakika boyunca ultrasonik ekstraksiyon gerçekleştirin. Oda sıcaklığına soğutun. Hacmi metanol ile işarete kadar tamamlayın.
    1. 10 mg/mL Huaihua Tozu ekstraktının nihai konsantrasyonunu elde etmek için iyice çalkalayın. 0,22 μm mikro gözenekli membrandan (PVDF) süzün. Süzüntüyü test için bir numune şişesine aktarın.
      NOT: Deney sırasında, organik atık sıvı ve diğer ilgili toksik ve zararlı reaktifler sınıflandırıldı ve etiketlendi. Ve her 2 haftada bir, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Varlık ve Deneysel Yönetim Ofisi personeli, onu birleşik geri dönüşüm ve işleme için nitelikli bir kuruma naklediyor.

2. UPLC-Q-Orbitrap HRMS için algılama koşulları

  1. Kromatografik sistem parametre ayarları
    1. Bir C18 kolonu kullanın (3,0 mm × 100 mm, 2,6 μm). Kolon sıcaklığını 30 °C'de tutun. Mobil faz A (suda %0,1 formik asit) ve mobil faz B (asetonitril) kullanın.
    2. Gradyanı şu şekilde programlayın: 0-10 dk, %5-%20 B; 10-25 dk, %20-%50 B; 25-40 dk, %50-%95 B; 40-45 dk, %95 B. Akış hızını 0,3 mL/dk'ya ayarlayın. Numunenin 5 μL'sini enjekte edin.
  2. Kütle spektrometresi çalışmasını aşağıdaki parametre ayarlarıyla gerçekleştirin.
    NOT: İyon kaynağı: Isıtmalı Elektrosprey İyonizasyon (H-ESI); Tarama modu: DDA toplama modunda, hem pozitif hem de negatif iyonları aynı anda alın; DIA toplama modunda, pozitif ve negatif iyonları ayrı ayrı alın; İyon kaynağı parametreleri: Püskürtme gerilimi +3,5 kV (pozitif iyonlar)/-2,8 kV (negatif iyonlar); kılıf hava akış hızı 40 arb; yardımcı hava akış hızı 10 arb; üfleme gazı hızı 1 arb; İyon iletim tüpü sıcaklığı: 320 °C; Buharlaşma sıcaklığı: 350 °C; S-Lens RF seviyesi: %55.
    1. Veriye Bağlı Edinme (DDA) yönteminin oluşturulması ve optimizasyonu
      1. Tam MS Taraması (Tam MS) için aşağıdaki ayarları seçin:
        NOT: Çözünürlük: 35.000; Tarama aralığı: 100-1000 m/z; Otomatik Kazanç Kontrolü (AGC) Hedefi: 3e6; Maksimum enjeksiyon süresi (Maks IT): 100 ms.
      2. Veriye Bağımlı MS/MS Taraması (dd-MS2) için aşağıdaki ayarları seçin:
        1. Moleküler iyon seçimi için 5e4 yoğunluk eşiğini koruyun. Yüksüz iyonları ve izotop tepe noktalarını hariç tutun (izotop dışlamayı etkinleştirin). Yüksek yoğunluklu iyonların tekrar tekrar seçilmesini önlemek için 15 sn'lik bir dışlama süresi ve ±10 ppm'lik bir kütle toleransı ile dinamik dışlama uygulayın.
        2. Parçalanma ayarları için aşağıdakileri koruyun: İzolasyon penceresi: 1,0 m/z; Parçalanma yöntemi: Yüksek enerjili çarpışma ayrışması (HCD); Normalleştirilmiş çarpışma enerjisi (NCE): 20, 40, 60 V; İkincil çözünürlük: 17.500; AGC Hedefi: 1e5; Maksimum BT: 50 ms; TopN stratejisi: Her tarama döngüsünde parçalanma için en yüksek yoğunluğa sahip ilk 3 moleküler iyonu seçin.
    2. DIA Yönteminin oluşturulması ve optimizasyonu
      1. Tam MS Taraması için, DDA yöntemindekiyle aynı parametreleri kullanın.
      2. Veriden Bağımsız MS/MS Taraması (DIA-MS/MS) için bölümlere ayrılmış değişken izolasyon penceresi stratejisi oluşturun.
      3. Hedef aralığı 100-1000 m/z olarak tanımlayın. Optimize edilmiş kromatografik koşullar altında yüksek kaliteli DDA spektrumlarını kullanarak pencereleri tüm m/z aralığında iyon bolluğu dağılımına göre bölün. Doygunluk veya yetersizlikten kaçınarak segmentler arasındaki toplam iyon bolluğunu dengelemek için değişken pencereler ayarlayın.
      4. Kapsamı ve döngü süresini dengelemek için 30 pencereye optimize edin.
        NOT: Parçalanma ayarları - Parçalanma yöntemi: HCD; Yakınlaşma: 20, 40, 60 V; Çözünürlük: 17.500; AGC Hedefi: 1e6; Maks IT: Otomatik; Parçalı değişken pencere: 30 m/z.; Döngü sayısı: 30.
      5. Her bir izolasyon penceresi segmentinin merkezi moleküler ağırlığına dayalı olarak dahil etme listesini oluşturun, örneğin, m/z 115, 145, 175, 205 ... 925, 955, 985.
    3. Veri toplama süreci
      1. Sistem dengelemesi: Kromatografik kolonu mobil faz ile en az 5 dakika dengeleyin.
      2. Deney öncesi numune çalıştırma: Huaihua Tozu test solüsyonunu hazırlama prosedürüne göre hazırlayın. Ardışık 5 numune enjekte edin. Sistem kararlılığını değerlendirin (tutma süresi RSD %2<, toplam iyon akımı yoğunluğu RSD %5<).
      3. Boş çalıştırma: Arka plan çıkarma işlemi için metanol boş çözeltisini enjekte edin.
      4. Huaihua Tozu numune çalışıyor: Her numuneyi rastgele sırayla enjeksiyonla analiz edin. Her tarama modu (DDA, DIA) için tüm örnekleri bağımsız olarak çalıştırın.
    4. Bilgi işlem
      1. Bileşik tanımlama
        1. Kütle spektrometrisi ile elde edilen ham verileri Compound Discoverer yazılımına aktarın. Bilinmeyen bileşenler için bir tanımlama iş akışı oluşturun. Tepe işleme ve tepe hizalaması gerçekleştirin. Ölçülen MS/MS spektrumlarını mzCloud çevrimiçi MS/MS veritabanı ve mzVault yerel MS/MS veritabanı ile eşleştirin.
        2. Aşağıdaki filtreleme parametrelerini uygulayın: tepe alanı eşiği 105, hem birincil hem de ikincil iyonlar için kütle sapması ± 5 ppm ve eşleştirme puanı ≥80. Kimyasal bileşenleri tanımlamak için filtrelenmiş iyonları veritabanlarından, referans standartlarından ve ilgili literatürden alınan bileşik bilgilerle karşılaştırın.
        3. Compound Discoverer yazılımındaki özel işlem: Yeni bir analiz süreci oluşturun ve Stats Online ve Local Database Searchers iş akışıyla Doğal Ürün/Doğal Ürün Bilinmeyen Kimliği'ni seçin.
        4. Tepe tanımlama ve çıkarma için Bileşikleri Tespit Et düğümünün dahil edildiğinden emin olun. İş akışına mzCloud'da ara ve mzVault veritabanlarında ara seçeneklerini ekleyin.
        5. Ham veri dosyasını ekleyin ve filtreleme parametrelerini ayarlayın (tepe alan eşiği 105, kütle sapması ± hem birincil hem de ikincil iyonlar için 5 ppm). Analizi yürütmek için çalıştır'a tıklayın.
      2. İlgili göstergelerin karşılaştırmalı analizi
        1. Tanımlama miktarı: Hem DDA hem de DIA modları için pozitif ve negatif iyon modlarında tanımlanan bileşiklerin toplam sayısını karşılaştırın. Her mod için iyon dağılım haritaları oluşturun.
        2. Tekrarlanabilirlik çalışması: DDA ve DIA modları arasında yüksek bolluğa (rutin, quercitrin), orta bolluğa (neohesperidin, naringin) ve düşük bolluğa (psoralenol, trimetilkolşisinik asit) sahip temsili bileşiklerin alıkonma süresi (RT) ve tepe alanı (AA) farklılıklarını karşılaştırın (n = 5).
        3. MS/MS spektrum kalitesi: DDA ve DIA modları altında Q-Marker'da önemli bir bileşik olan pulegonun MS/MS fragman iyon spektrumlarının kalitesini değerlendirin.
        4. Düşük bolluklu bileşenlerin tespiti: DDA ve DIA modlarında temsili düşük bolluklu bileşiklerin (karvon, adenozin) MS/MS fragmanlarının tespitini karşılaştırın5.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bileşiklerin genel tanımlanması

Huaihua Tozu'nun iki edinim modu altındaki toplam iyon akımı kromatogramları, minimum genel farklarla Şekil 2'de gösterilmektedir. DDA edinim modunda, hem pozitif hem de negatif iyon modlarında toplam 14.958 bileşik tanımlanırken, DIA edinim modunda 9.489 bileşik tanımlanmıştır (Şekil 3A). Bunlar arasında, DIA modunda yük...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, DIA edinim modunda, segmentlere ayrılmış değişken penceresinin değer ayarının çok büyük olmaması gerektiğini bulduğumuzu özellikle belirtmekte fayda var. 300mz ve 100mz'ye ayarlamaya çalıştık, ancak son spektral etki zayıftı. Tekrarlanan keşif ve denemelerden sonra nihayet en uygun olarak 30mz'lik satın alma penceresini seçtik. Bu nedenle, edinme penceresinin ayarlanması, deneyin başarısı veya başarısızlığı üzerinde çok önemli bir etkiye sahiptir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Sichuan Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı Gençlik Fonu (No.2025ZNSFSC1823) tarafından mali olarak desteklenmiştir; Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji İnovasyon Fide Projesi (MZGC20230055); ve Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi "Xinglin Scholars" Kreş Yetenek Özel Projesi (MPRC2022017) için Disiplin Yetenek Araştırma Teşvik Programı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AsetonitrilTermo Balıkçı/Kromatografik saflık
Compound Discoverer 3.3 yazılımıTermo Balıkçı/Kütle spektrometresi veri işleme ve bileşik tanımlama
Fructus aurantiiSichuan Neijiang220709Huaihua Tozu reçetesindeki otlar
Platycladus orientalis yapraklarıŞandong Linyi240619Huaihua Tozu reçetesindeki otlar
Schizonepeta başakJiangsu Taizhou240601Huaihua Tozu reçetesindeki otlar
Sophora çiçeğiSichuan Guangan241017Huaihua Tozu reçetesindeki otlar
Ultrasonik temizleme makinesiJietuo Ultrasonik Temizleme Ekipmanları Co, LTD240HTHuaihua Tozunun bileşen ekstraksiyonu
UPLC-Q-Orbitrap İKYSTermo Balıkçı/Yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi
SuWatsons Şirketi/Ultra saf su

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, D., et al. Establishment of fingerprint and chemical composition study of the classic formula Huaihua San based on two mass spectrometry techniques. Chin Herb Med. 56 (10), 3499-3512 (2025).
  2. Stincone, P., et al. Evaluation of data-dependent MS/MS acquisition parameters for non-targeted metabolomics and molecular networking of environmental samples: Focus on the Q Exactive platform. Anal Chem. 95 (34), 12673-12682 (2023).
  3. Guo, J., Huan, T. Comparison of fullscan, datadependent, and dataindependent acquisition modes in liquid chromatographymass spectrometry based untargeted metabolomics. Anal Chem. 92 (12), 8072-8080 (2020).
  4. FernándezCosta, C., et al. Impact of the identification strategy on the reproducibility of the DDA and DIA results. J Proteome Res. 19 (8), 3153-3161 (2020).
  5. Wang, H. D., et al. A novel hybrid scan approach enabling the ionmobility separation and the alternate datadependent and dataindependent acquisitions (HDDIDDA): Its combination with offline two-dimensional liquid chromatography for comprehensively characterizing the multicomponents from Compound Danshen Dripping Pill. Anal Chim Acta. 1193, 339320(2022).
  6. El Boudlali, H., et al. High-resolution accuratemass spectrometry-baseduntargeted metabolomics: Reproducibility and detection power across data-dependent acquisition, dataindependent acquisition, and AcquireX. Comput Struct Biotechnol J. 27, 2412-2423 (2025).
  7. Guo, J., Shen, S., Xing, S., Huan, T. DaDIA: Hybridizing data-dependent and data-independent acquisition modes for generating high-quality metabolomic data. Anal Chem. 93 (4), 2669-2677 (2021).
  8. Wu, Y., Wang, Y. A comparative study of dataindependent acquisition and datadependent acquisition in liquid chromatographymass spectrometrybased untargeted metabolomics analysis of Panax genus sample. Anal Bioanal Chem. 417 (14), 3215-3228 (2025).
  9. Barkovits, K., et al. Reproducibility, specificity, and accuracy of relative quantification using spectral library-based data-independent acquisition. Mol Cell Proteomics. 19 (1), 181-197 (2020).
  10. Barbier Saint Hilaire, P., et al. Comparative evaluation of data-dependent and data-independent acquisition workflows implemented on an Orbitrap Fusion for untargeted metabolomics. Metabolites. 10 (4), 158(2020).
  11. Zheng, R. L., et al. Screening and extraction process optimization for potential α-glucosidase inhibitors from quinoa seeds. Food Med Homol. 1, 9420004(2024).
  12. Cao, Z. X., et al. Analysis and comparison of staminate flowers components in five Chinese walnut varieties. Food Med Homol. 1, 9420005(2024).
  13. Zhou, J. W., et al. Anti-virulence potential of carvone against Serratia marcescens. Food Med Homol. 1, 9420001(2024).
  14. Tabb, D. L., et al. Interrogating dataindependent acquisition LCMS/MS for affinity proteomics. J Proteins Proteom. 15 (3), 281-298 (2024).
  15. Wartmann, Y., Boxler, M. I., Kraemer, T., Steuer, A. E. Impact of three different peak picking software tools on the quality of untargeted metabolomics data. J Pharm Biomed Anal. 248, 116302(2024).
  16. Bilbao, A., et al. Processing strategies and software solutions for data-independent acquisition in mass spectrometry. Proteomics. 15 (56), 964-980 (2015).
  17. Guan, S., Taylor, P. P., Han, Z., Moran, M. F., Ma, B. Data-dependentindependent acquisition (DDIA) proteomics. J Proteome Res. 19 (8), 3230-3237 (2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

DDA Kazan mGeleneksel in T bbBile ik Tan mlamaMS MS Spektral KalitesiTespit HassasiyetiKimyasal Profilleme

İlgili makaleler