Yöntem makalesi

Fare Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunda Vasküler Rekonstrüksiyon için Sütür Teknikleri

642 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/69234

⸱

14 Ekim 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Graduate School of Medicine, Kyoto University

Bu makalede

Özet

Suprahepatik inferior vena kava (SHIVC), portal ven ve infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) dahil olmak üzere alıcılarda vasküler rekonstrüksiyonlar, başarılı fare ortotopik karaciğer nakli için anahtar prosedürlerdir. Burada fare karaciğer nakli modelinde SHIVC ve IHIVC rekonstrüksiyonu için dikiş teknikleri ve ipuçları sunuyoruz.

Özet

Organ nakillerindeki klinik sorunları ele almak için hayvan modellerini kullanan translasyonel araştırmalar esastır. Fare ortotopik karaciğer transplantasyonu (LT), karaciğer rejenerasyonu, iskemi-reperfüzyon hasarı ve LT sonrası immün yanıtların mekanizmalarını araştırmak için yararlı bir araç olmasına rağmen, bu prosedürdeki teknik zorluklar uygulanabilirliğini kısıtlamaktadır. Başarılı fare ortotopik LT için anahtar yönler, suprahepatik inferior vena kava (SHIVC), portal ven (PV) ve infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) dahil olmak üzere alıcılarda vasküler rekonstrüksiyondur. Bu damarların yeniden yapılandırılmasındaki teknik zorluklara ek olarak, anhepatik fazın 20 dakika içinde zaman sınırlaması bu prosedürü daha zor hale getirmektedir. PV rekonstrüksiyonu için bir manşet tekniği kullanılabilse de, anhepatik faz sırasında SHIVC'yi yeniden yapılandırmak için güvenli ve hızlı bir sütür tekniği gereklidir. IHIVC rekonstrüksiyonu için hem manşet hem de sütür teknikleri uygulanabilirken, sütür tekniği donör cerrahisinde ve sırt masası hazırlığında daha kısa ameliyat süresine yol açar ve manşet tekniğine göre daha büyük bir vasküler lümeni koruyabilir. Burada, fare ortotopik LT'yi kolaylaştırmak için bir sütür tekniği kullanarak SHIVC ve IHIVC rekonstrüksiyonu için kılavuzlar sunuyoruz.

Giriş

Cerrahi teknikler, immünsüpresif ilaçlar ve yoğun bakım tıbbındaki gelişmelerle birlikte organ nakli, son dönem organ hastalıkları için standart bir tedavi olarak kabul edilmiştir. Karaciğer nakli (LT) şu anda son dönem karaciğer hastalığı ve bazı karaciğer maligniteleri için tek iyileştirici tedavidir. LT'deki klinik sorunları ele almak için hayvan modellerini kullanan translasyonel araştırma esastır. Fare modellerinde genetiği değiştirilmiş çeşitli hayvanlar mevcut olduğundan, fare ortotopik LT, LT1'i takiben karaciğer rejenerasyonu, iskemi-reperfüzyon hasarı ve bağışıklık tepkilerine ilişkin mekanik içgörüleri keşfetmek için önemli bir araçtır. Ancak, bu prosedürdeki teknik zorluklar fizibilitesini kısıtladığından, bu model üzerinde çalışan araştırma grupları sınırlıdır 2,3,4,5,6,7,8,9,10.

Fare ortotopik LT ilk olarak Qian ve ark. 1991'de2. Sıçanlarda ortotopik LT teknikleri uygulanarak geliştirilen cerrahi prosedür üç adımdan oluşur: donör cerrahisi, karaciğer greftinin sırt masası hazırlığı ve alıcı operasyonu6. Fare LT'sinin teknik olarak zorlu kısımları, suprahepatik inferior vena kava (SHIVC), portal ven (PV) ve infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) dahil olmak üzere alıcılarda biliyer ve vasküler rekonstrüksiyondur. Cerrahi tekniklere ek olarak, başarılı fare ortotopik LT 2,6,11 için klemplemeden PV akışının serbest bırakılmasına kadar anhepatik faz 20 dakika içinde olmalıdır. Ayrıca, deneyimlerimize göre, fare LT'sinde uzun süreli sağkalım elde etmek için PV klemplenmesinden IHIVC salınımına kadar toplam reperfüzyon süresi 30 dakika içinde olmalıdır. Bu, kararsız sistemik hemodinamik durumun tercih edilen süresini yaklaşık 30 dakika12 olarak tanımlayan sıçan LT için önceki raporla tutarlıdır. Bu nedenle, fare LT'sindeki teknik zorluklar ve zaman sınırlamaları bu prosedürü daha zorlu hale getirir.

PV rekonstrüksiyonu için manşet tekniği kullanılabilse de, anhepatik faz sırasında SHIVC'yi yeniden yapılandırmak için bir sütür tekniği gereklidir. Bu nedenle, SHIVC anastomozu için güvenli ve hızlı bir dikiş tekniği şarttır. IHIVC rekonstrüksiyonu için hem manşet hem de sütür teknikleri uygulanabilirken, önceki çalışmaların çoğunda manşet tekniğikullanılmıştır 5,6,7,11,13. Ancak IHIVC rekonstrüksiyonunda manşet tekniğinin kullanılması donör ve back-table operasyonlarında daha uzun operasyon süresine yol açmaktadır. Ek olarak, alıcı inferior vena kava (IVC) marjının kısa olması nedeniyle yeni başlayanlar için manşet takmak dikiş atmaktan daha zor olabilir13.

Burada, fare ortotopik LT'de bir sütür tekniği kullanılarak başarılı SHIVC ve IHIVC rekonstrüksiyonu için kılavuzlar sunuyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri Kyoto Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylanmış ve Kyoto Üniversitesi Hayvanları Koruma Yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Fare ameliyatları genel anestezi altında izofluran inhalasyonu kullanılarak yapıldı. Buharlaştırıcı, anesteziyi indüklemek için 1 L/dk oksijen ile %3 izoflurana ayarlandı. Laparotomi sonrası anesteziyi sürdürmek için izofluran %1'e düşürüldü. Daha önce yayınlanmış vasküler rekonstrüksiyon protokolümüz13'te kullanılanlar da dahil olmak üzere bu protokolde kullanılan mikrocerrahi aletler Malzeme Tablosunda listelenmiştir. Fare ortotopik LT13'ü gerçekleştirmek için bir Mikroskop gerekliydi. Farenin vücut sıcaklığını korumak için bir Isıtma yastığı kullanıldı13.

1. Hayvanlar

  1. 25-30 g ağırlığında bir fare kullanın.
    NOT: 20-35 g ağırlığındaki fareler kullanılabilse de, yaklaşık 25 g fareler hem donörler hem de alıcılar için uygundur. Yaş ve karaciğer yağlanması LT sonuçlarını etkilediğinden, deneylerin her amacı için uygun fareler seçilmelidir.

2. Donör karaciğerde IHIVC diseksiyonu

  1. IHIVC'yi çevre dokudan izole edin. Gerekirse lomber damarları bir elektrokoter ile kapatın.
  2. Damar duvarını ortaya çıkarmak için yağı IHIVC'den çıkarın.
  3. IHIVC'yi sağ renal arter ve venin üzerinde diseke edin (Şekil 1).
    NOT: IHIVC rekonstrüksiyonu için sütür tekniği kullanılıyorsa, donör bölgede sağ renal venin diseksiyonu gereksizdir. IHIVC rekonstrüksiyonu için sütür tekniği uygulanırken donör ameliyatı genellikle 30 dakikadan az sürer.

3. Donör karaciğerde SHIVC'nin diseksiyonu

  1. Depolama solüsyonunun PV'den perfüzyonundan sonra, SHIVC'nin ön ve arka duvarlarını kesin (Şekil 1).
    NOT: SHIVC arka duvarının diyafram krusundan izolasyonu, rekonstrüksiyon için yeterli bir marj elde etmek için çok önemlidir.

4. Karaciğer greftinin sırt masası hazırlığı

  1. Daha önce açıklandığı gibi PV'ye bir manşet takın13.
  2. Bir cl takınamp IHIVC'ye klips.
  3. Karaciğeri ters çevirin ve SHIVC'nin kütüğünü ortaya çıkarın.
  4. SHIVC'nin her iki kenarına 10-0 naylonlu bir destek dikişi yerleştirin ve bulldog kelepçeleriyle tutun.
    NOT: Arka masa hazırlığı, IHIVC'ye manşet takılmadan yaklaşık 10 dakika sürer.

5. Alıcıda SHIVC'nin yeniden yapılandırılması

  1. Karaciğeri aşağı doğru geri çekmek için SHIVC'yi 4-0 ipekle çevreleyin.
  2. Anhepatik fazdan önce izofluran konsantrasyonunu %0.3-0.5'e düşürün.
  3. IHIVC'yi bir mikroserrefin kullanarak sağ renal venin üzerine klempleyin.
  4. PV'yi bir Pean forseps13 kullanarak kelepçeleyin.
  5. Karaciğeri aşağı doğru geri çekerken bir bulldog kelepçesi kullanarak SHIVC'yi diyaframla sıkıştırın.
  6. SHIVC'nin ön duvarını kesin ve ardından arka duvarı kesin (Şekil 1).
    NOT: SHIVC arka duvarının alıcı ve donörlerde diyafram krusundan izolasyonu, rekonstrüksiyon için yeterli bir marj elde etmek için çok önemlidir.
  7. PV ve IHIVC'yi alıcının karaciğerine yakın bir şekilde diseke ettikten sonra, karaciğeri alıcıdan çıkarın (Şekil 1).
  8. Hazırlanan karaciğer greftini alıcının karın boşluğuna koyun ve karaciğeri uygun şekilde yerleştirin.
  9. SHIVC'nin sağ ucuna bir kalma sütürü yerleştirin ve bağlayın ve dikişi alıcının ventral tarafına doğru çekmek için bir bulldog klempi ile tutun (Şekil 2A).
    NOT: SHIVC'nin sağ tarafı karın boşluğunun derinliklerinde yer alır. Arka duvar öne gelecek şekilde SHIVC'nin sağ tarafını dışarı çekin.
  10. SHIVC'nin sol ucuna bir destek dikişi yerleştirin ve bağlayın.
  11. SHIVC'nin arka duvarında sol taraftan intraluminal yöntemle sürekli dikişe başlayın (Şekil 2A).
  12. SHIVC'nin arka duvarının sağ ucuna ulaştığınızda, ameliyat masasını saat yönünün tersine 90° çevirin.
    NOT: Solak cerrahlar için ameliyat masasını saat yönünde 90° döndürün. Alternatif olarak, cerrahlar ön duvarı döndürmeden önden arkaya doğru dikebilirler.
  13. Sağ taraftan SHIVC'nin ön duvarına üst üste sütür ile sütüre devam edin (Şekil 2A).
    NOT: Arka duvar için yaklaşık altı ila sekiz dikiş ve ön duvar için sekiz ila on dikiş gereklidir. Ön duvarın sol ucundaki dikiş kanamayı önlemek için önemlidir.
  14. SHIVC'deki havayı yıkadıktan sonra, sürekli dikişi SHIVC'nin sol tarafındaki kalıcı sütür ile bağlayın.
  15. Alıcı konumunu orijinal konumuna geri döndürmek için ameliyat masasını saat yönünde 90° döndürün.
  16. PV'nin yeniden yapılandırılması ve reperfüzyonundan sonra, SHIVC'nin kelepçesini açın.
    NOT: SHIVC rekonstrüksiyonu 10-15 dakika sürer. PV klempleme süresi LT sonuçlarını etkileyebileceğinden, anhepatik süre (PV klemplemeden PV klemplemeye kadar) cerrahın becerisine bağlı olarak 20 dakikaya kadar sabitlenmelidir. PV reperfüzyonundan sonra, anesteziyi sürdürmek için izofluran %1'e sıfırlanır.

6. Alıcıda IHIVC'nin yeniden yapılandırılması

  1. IHIVC'nin her iki ucuna 10-0 naylon ile kalıcı dikişler yerleştirin ve bağlayın.
  2. IHIVC kütüğünün geniş ve düz olması için her iki tarafa doğru çekmek için kalan dikişleri bulldog kelepçeleriyle tutun.
  3. Arka duvarın sol tarafında intraluminal bir yöntemle sürekli sütür atmaya başlayın (Şekil 2B).
  4. Sağ tarafa ulaştıktan sonra, alıcının sağ tarafından ön duvara tekrar tekrar dikiş atmaya devam edin (Şekil 2B).
    NOT: IHIVC rekonstrüksiyonu için ameliyat masasının döndürülmesi gerekli değildir. Her bir arka ve ön duvar için yaklaşık altı ila sekiz dikiş yeterlidir.
  5. IHIVC'deki havayı yıkayın.
  6. IHIVC klipslerini greft tarafından ve ardından alıcı tarafından ayırın.
    NOT: Sürekli sütür ile IHIVC'nin sol tarafındaki kalıcı sütür ile ligasyonu gereksizdir. IHIVC rekonstrüksiyonu 8-10 dakika sürer. PV klemplenmesinden IHIVC salınımına kadar toplam reperfüzyon süresi 30 dakika içinde olmalıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bir fare alıcısı, uzun bir soğuk iskemik süre olmaksızın normal bir karaciğer grefti kullanılarak başarılı vasküler rekonstrüksiyon yapıldığında 30 dakika içinde anesteziden kurtuldu. Bu prosedür için %>90'lık bir başarı oranı yetenekli olarak kabul edilebilir. Bir cerrahtaki öğrenme eğrilerini LT sonrası iyileşme oranları (anesteziden iyileşme), anhepatik süre (klemplemeden PV akışının serbest bırakılmasına kadar) ve toplam reperfüzyon süresi (PV'nin klemplenmesinden IHIVC akışının serbest bırakılmasına kadar) açısın...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu makale, fare ortotopik LT'de SHIVC ve IHIVC'nin bir sütür tekniği ile rekonstrüksiyonu için ayrıntılı teknikleri belgelemiştir. Vasküler rekonstrüksiyon, özellikle anhepatik faz sırasında bir dikiş tekniği gerektiren SHIVC anastomozu, başarılı fare LT'si için çok önemli bir beceridir. Güvenli ve emniyetli dikiş tekniğine ek olarak, fare ortotopik LT 2,7,11'de tekrarlanabilir sonuçlar için anh...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma Japonya Bilimi Teşvik Derneği tarafından desteklenmiştir (Hibe Numarası: 24K19356).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
10-0 Mikro dikişAROSurgical Instruments CorporationT4A10N07
16 G intravenöz kateterTERUMOSR-FF2032 SerisiIHIVC manşeti
20 G intravenöz kateterTERUMOSR-FF1651 SerisiPV manşeti
8-0 örgü ipekNatsume SeisakushoCR9-80B28-0 ipek
Belzer UW Soğuk Depolama Çözümü AstellasOrgan Koruma Sıvısı
Bulldog kelepçesiB BRAUNFB329R SerisiBulldog kelepçesi
Bulldog kelepçeleriNatsume SeisakushoC-42-S-2SHIVC bağlama için
C57BL/6 fareler   Oryantal Biyo Hizmeti
ForsepsGüzel Bilim Araçları11231-30
İzofluran inhalasyon solüsyonuViatrisAnestezi
Mikro Körelmiş Uçlar 0.1 mm x 0.06 mm Güzel Bilim Araçları11253-20Düz mikroforseps
Mikro makasMuranaka Tıbbi Aletler451-609-13
Mikro serrafineGüzel Bilim Araçları18055-03IHIVC bağlama için
Mikro serrafineGüzel Bilim Araçları18055-04PV bağlama için
Kilitli Mikro Serrafine Kelepçe AplikatörüGüzel Bilim Araçları18056-14Damar klipsi aplikatörü
Mikro Serifinler Güzel Bilim Araçları18055-4Damar klipsi
Mikro sütür foecepsAesculapFD281R Serisi
Mikro serrafine kelepçe aplikatörüGüzel Bilim Araçları18056-14
İğne tutucuAesculapFD231R Serisi
No.11 Yedek BıçaklarFEATHER Güvenlik Jilet11Bıçak
Oftalmik makas, yuvarlak sapB BRAUNFD103R SerisiMikromakas
Plastik dikdörtgen şekilli kap   Daiso10 cm uzunluğunda, 15 cm genişliğinde ve 6 cm yüksekliğinde
SuperGrip İpuçlarıGüzel Bilim Araçları00649-11 Kavisli mikroforseps
SZX7OlympusSZX7Mikroskop
Vannas makasıDünya Hassas Aletler501232
Damar klipsiBEAR Medic ŞirketiTKF-1-30Karaciğer greftine IHIVC klempleme için

Kaynaklar

  1. Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance. Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).
  2. Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
  3. Tian, Y., Rudiger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model. Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).
  4. Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).
  5. Klein, I., Gassel, H. J., Thiede, A., Crispe, I. N., Steger, U. A microsurgical approach to hepatic and extrahepatic antigen presentation and its effects on the migration pattern of activated CD8(+) T cells. Microsurgery. 27 (4), 289-294 (2007).
  6. Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).
  7. Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model. World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).
  8. Kageyama, S., et al. Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury. Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).
  9. Kojima, H., et al. T cell CEACAM1-TIM-3 crosstalk alleviates liver transplant injury in mice and humans. Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248.e9 (2023).
  10. Tanaka, K., et al. Recipient toll-like receptor 4 determines the outcome of ischemia-reperfusion injury in steatotic liver transplantation in mice. Am J Transplant. 25 (6), 1168-1179 (2025).
  11. Chen, J., et al. A review of various techniques of mouse liver transplantation. Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).
  12. Hori, T., et al. Comprehensive and innovative techniques for liver transplantation in rats: A surgical guide. World J Gastroenterol. 16 (25), 3120-3132 (2010).
  13. Tanaka, K., et al. Vascular reconstruction with the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation. J Vis Exp. (202), e66215(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Fare Karaci er TransplantasyonuVena Cava InferiorPortal VenAnhepatik FazCuff Tekni iKaraci er Rejenerasyonuskemi Reperf zyon Hasar
Video yakında

İlgili makaleler