Method Article

Anjiyotensin II Kullanarak Hipertansif Miyokard Fibrozisinin Fare Modelini Oluşturmak İçin Bir Protokol

DOI:

10.3791/69409

⸱

November 14th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, Southwest Medical University, 2Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital, 3Guangdong-Macao In-Depth Cooperation Zone in Hengqin, Chinese Medicine Guangdong Laboratory (Hengqin Laboratory), 4State Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Syndrome, Guangdong Provincial Hospital of Chinese Medicine, Guangdong Provincial Academy of Chinese Medical Sciences, The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine, 5School of Pharmacy, Southwest Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anjiyotensin II'nin (Ang II) ozmotik pompalar yoluyla sürekli infüzyonu, hipertansif miyokardiyal fibrozun hayvan modellerini oluşturmak için klasik yöntemlerden biridir. Bu protokol, bu modeli oluşturma sürecini sistematik olarak optimize etti ve ozmotik pompa implantasyonu, konumlandırma ve Ang II konsantrasyon ayarının kilit noktalarını detaylandırdı.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anjiyotensin II'nin (Ang II) ozmotik pompalar yoluyla sürekli infüzyonu, hipertansif miyokardiyal fibrozun hayvan modellerini oluşturmak için yaygın olarak kullanılan bir yaklaşımdır. Bununla birlikte, bu teknik mevcut raporlarda Ang II'nin kararsızlığı, yanlış pompa yerleşimi ve standart bir prosedürün olmaması gibi bazı sınırlamalar sergilemektedir. Kuruluş metodolojisine ilişkin mevcut raporlar nispeten sınırlı kalmaktadır. Bu protokol, Ang II çözeltisinin standartlaştırılmış hazırlanması, dozajın kalibrasyonu, ozmotik pompaların hassas deri altı implantasyonu ve model değerlendirme göstergeleri için nicel standartlar dahil olmak üzere farelerde Ang II ozmotik pompa kaynaklı hipertansif miyokardiyal fibroz modellerinin oluşturulmasını sistematik olarak optimize etmiştir. Deneysel sonuçlar, yüksek sağkalım oranlarına sahip farelerde Ang II ozmotik pompa kaynaklı hipertansif miyokardiyal fibrozun olduğunu göstermiştir. Sistolik kan basıncı (SBP) seviyeleri, yedi günlük deri altı implantasyondan sonra 160 mmHg'de sabitlendi. Model fareler, sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonlarını önemli ölçüde azaltmış ve sol ventrikülün diyastol sonu boyutlarını artırmıştır. Sham cerrahi grubu ile karşılaştırıldığında, hipertansif miyokardiyal interstisyel doku ve perivasküler bölgelerde kollajen birikimi arttı. Küçük bir örneklem büyüklüğüne (n = 6) dayanan bu çalışma, ozmotik bir pompa ile birleştirilmiş Ang II kullanılarak hipertansif miyokardiyal fibrozun bir fare modelinin oluşturulmasının fizibilitesini ön olarak doğruladı ve nicel bir fenotip doğrulama sistemi kurdu.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hipertansiyonun önemli bir patolojik sonucu olan miyokardiyal fibrozis (MF), hasarlı veya sıkışmış miyokard içinde aşırı kollajen lif birikimi ile karakterizedir. Hipertansiyon aracılı hedef organ hasarının en önemli biçimlerinden birini temsil eder ve ilerleyici kalp fonksiyon bozukluğuna katkıda bulunur 1,2. Mekanik araştırmaları ilerletmek ve hipertansif miyokardiyal fibroz için yeni terapötik stratejiler geliştirmek için uygun hayvan modellerinin oluşturulması esastır. Renin-anjiyotensin sisteminin merkezi bir efektörü olan anjiyotensin II (Ang II), hipertansiyon patogenezinde çok önemli bir rol oynar3. Ang II tabanlı indüksiyon bu nedenle farelerde hipertansiyon modelleri oluşturmak için yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım haline gelmiştir.

Hipertansiyon hayvan modelleri oluşturmak için mevcut yöntemler öncelikle cerrahi indüksiyon, farmakolojik indüksiyon ve transgenik spontan modelleri içerir. Cerrahi indüksiyon tipik olarak kan akış direncini yapay olarak artırmak için renal arter daralması, çıkan aort daralması veya aort arkı daralması gibi teknikleri kullanır ve böylece yüksek kan basıncına neden olur4. Bu yöntemler, stres yüküne bağlı kardiyak yeniden şekillenme süreçlerini incelemek için uygun hipertansiyon durumlarını hızlı bir şekilde oluşturabilirken, çok sayıda postoperatif komplikasyonu olan karmaşık prosedürleri içerir. Farmakolojik indüksiyon, deney hayvanlarında kan basıncını yükseltmek için genellikle intraperitoneal enjeksiyon veya oral uygulama kullanır5. Teknoloji nispeten basit olsa da, model stabilitesi ilaç dozajı, uygulama sıklığı ve hayvan stres tepkilerinden kaynaklanan müdahalelere karşı duyarlı olmaya devam ediyor. Stabil hipertansiyon fenotipleri sergileyen spontan hipertansif sıçanlar ve BPH/2J hipertansif fareler gibi transgenik modeller, kalıtsal hipertansiyon araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, tekil patojenik mekanizmaları, çok faktörlü klinik hipertansiyonu simüle etme kapasitelerini sınırlar.

Daha yakın zamanlarda, deri altı ozmotik pompalar yoluyla sürekli Ang II infüzyonuna dayanan hipertansiyon modelleri popülerlik kazanmıştır. Bu yöntem, patolojik süreçleri yakından taklit etmek ve fare hipertansif miyokardiyal fibrozunu 6,7,8 çoğaltmak için uzun süreler boyunca stabil kan konsantrasyonlarını koruyarak Ang II'nin sabit bir oranda sürekli salınımını sağlar. Bununla birlikte, özellikle protokolün standardizasyonu ve pompa implantasyon tekniği ve hayvana özgü yanıtlar gibi faktörlerden etkilenebilen tutarsız fibrotik sonuçlarla ilgili önemli sınırlamalar devam etmektedir9. Bu boşlukları gidermek için bu çalışma, Ang II ozmotik pompa tabanlı modeli geliştiriyor, temel adımları standartlaştırıyor ve görselleştirilmiş bir protokol sağlıyor. Bu gelişmeler tekrarlanabilirliği ve pratik uygulanabilirliği artırarak hipertansif miyokardiyal fibrozis üzerine gelecekteki çalışmalar için değerli bir referans sunmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneysel prosedürler, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Yönergelerine göre gerçekleştirildi ve deneysel protokoller Southwest Tıp Üniversitesi Hayvan Araştırma Komitesi tarafından onaylandı (onay numarası SWMU2020317).

1. Ang II çözeltisinin hazırlanması ve ozmotik pompanın doldurulması

  1. Yaşa bağlı karıştırıcıları kontrol etmek için gelişimsel tekdüzelikleri için 8 haftalık hayvanları seçerek 20 ± 1 g ağırlığındaki 12 SPF dereceli erkek C57BL / 6J faresi seçin ( Malzeme Tablosuna bakınız). Fareleri, her grupta 6 fare olacak şekilde basit bir randomizasyon yöntemi kullanarak sahte cerrahi grubuna ve model grubuna ayırın.
  2. Farenin ilk vücut ağırlığını ölçün ve Ang II dozunu belirleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız) 1.46 mg / kg / gün olarak.
    NOT: Ön deneye göre, 1.46 mg / kg / gün optimal Ang II dozudur. Bu doz, sistolik kan basıncını yaklaşık 160 mmHg'de güvenilir bir şekilde korur ve 4 haftalık çalışma boyunca hayvanın hayatta kalmasını sağlarken patolojik miyokardiyal fibrozu etkili bir şekilde indükler.
  3. 10 mg Ang II liyofilize toza önceden 4 °C'ye soğutulmuş 2.45 mL %0.9 steril salin ekleyin. Çözeltiyi iyice karıştırın ve hemen kullanmak üzere buz üzerinde tutun.
  4. Ang II çözeltisini çekmek için bir şırınga kullanarak prosedürü buz üzerinde gerçekleştirin, ardından altı ozmotik pompa odasının her birine sırayla 200 μL (3.91 mmol/L konsantrasyon) enjekte edin ( Malzeme Tablosuna bakınız).
  5. Pompayı 48 saat boyunca 37 °C steril salin içine daldırarak ozmotik basınç tahrikini etkinleştirin.
    NOT: Sahte cerrahi grubu için ozmotik pompaları eşit hacimde salinle doldurun. Ang II ışığa duyarlı olduğundan, prosedür baştan sona tam ışık koruması altında gerçekleştirilmelidir.

2. Ozmotik pompaların implantasyonu ve model 6'nın yapımı

  1. Hayvan hazırlama ve anestezi
    1. Suya serbest erişim ile fareleri 4 saat hızlı tutun. Ardından, her fareyi tartın ve uygun anestezik dozu (80 mg/kg pentobarbital sodyum) hesaplayın10.
    2. Hesaplanan pentobarbital sodyum dozunun intraperitoneal enjeksiyonu yoluyla fareleri uyuşturun.
      NOT: Pentobarbitalin kullanılması, yönetmeliklere uyulmasını, çeker ocakta çalıştırılmasını, koruyucu ekipman giyilmesini ve kalan sıvının ayrı olarak bertaraf edilmek üzere etiketlenmesini gerektirir.
  2. Bir jilet veya tüy dökücü krem kullanarak kuyruk tabanından orta sırt bölgesine uzanan bölgedeki sırt derisindeki tüyleri alın.
  3. Tıraş edilen bölgeyi üç kez %70 etanol11 ile iyice dezenfekte edin.
  4. Bir neşter kullanarak, dezenfekte edilen alan içinde 0,5 cm'lik bir deri altı kesi yapın.
  5. Kesi yoluyla, deri altı dokuyu arka boyuna doğru küt bir şekilde ayırmak için forseps kullanın ve bir cep oluşturun.
  6. Pompa gövdesini, kateter ucu farenin kafasına bakacak şekilde yönlendirin. Ardından, ucu hemostatik forseps ile sıkıştırın ve pompayı deri altından bu yönde yerleştirin.
  7. Pompa implantasyonunu takiben deri altı dokuyu kesikli 6-0 emilebilir dikişlerle dikin ve cilt kesisini cerrahi dikişlerle kapatın. Ardından, fareyi anesteziden tamamen kurtulana kadar (yaklaşık 5-10 dakika) önceden ısıtılmış 37 °C termal matın içine yerleştirin.
  8. Hazırlanan Ang II çözeltisini ozmotik pompalar aracılığıyla önceden belirlenmiş dozda (1.46 mg / kg / gün) 28 gün boyunca sürekli olarak infüze edin.
  9. 28 günlük infüzyon süresinin tamamlanmasının ardından tüm deneysel verileri toplayın. Ardından, fareleri önceki anestezitizasyonlarda olduğu gibi, yani 2.1.1-2.1.2 adımlarında açıklanan prosedürleri izleyerek uyuşturun ve servikal çıkık ile ötenazi yapın.

3. Kan basıncı ölçümü

  1. Ekipman ( Malzeme Tablosuna bakınız) ön ısıtma: Fare kuyruğu kan damarlarında vazodilatasyonu sağlamak için ısıtma platformunu 37-38 °C'ye ayarlayın.
  2. Fareyi yavaşça kavrayın ve kuyruğun arka delikten serbestçe dışarı çıkmasını sağlayacak şekilde koruma tutucusuna yerleştirin. Ardından, açıkta kalan kuyruğu alkolle ıslatılmış bir pamukla iyice temizleyin.
  3. Kuyruğun tabanına şişirilebilir bir manşet yerleştirin. Nabız sensörünü manşetin yaklaşık 5-10 mm distalinde, orta-alt kuyruk bölümüne yerleştirin.
  4. Cihazı etkinleştirin ve devam etmeden önce darbe dalga formunun dengelenmesini bekleyin.
  5. Ölçüm döngüsünü başlatın. Sistem, kan akışını tıkamak için manşeti otomatik olarak 200 mmHg'yi aşan bir basınca şişirecek, ardından saniyede 2-3 mmHg'de yavaşça söndürecektir. Sensör, akış devam ederken nabız dalgasının yeniden ortaya çıktığını algılayarak sistolik basıncı belirler.
  6. Modellemeden sonra sistolik kan basıncını (SBP) 7 günlük aralıklarla toplam beş ölçüm için ölçün. Her zaman noktasındaki her fare için, ardışık ölçümler arasında 2 dakikalık bir dinlenme süresine izin vererek üç ardışık okuma kaydedin.
  7. Ölçümlerden sonra fareyi yiyecek ve su ile kafesine geri koyun. Çapraz kontaminasyonu önlemek için tutucuyu ve kuyruk manşonunu temizleyin.

4. Kardiyak fonksiyon ölçümü

  1. Modellemenin 28. gününde, tüm deney farelerini sodyum pentobarbital (80 mg / kg pentobarbital sodyum) ile uyuşturun.
  2. Fareyi sabit sıcaklıktaki bir platform üzerinde sırtüstü pozisyonda konumlandırın.
  3. Bir ultrason sistemi kullanarak transtorasik ekokardiyografi yapın ( bkz. Elektrokardiyogram (EKG) sinyallerini izlemek için farenin uzuvlarını platformdaki elektrotlara bağlayın.
  4. Kalbi görselleştirmek ve kalp fonksiyonunu analiz etmek için M-mod ultrason ile meme kası seviyesinde kısa eksenli görüntüleme elde edin. Fare başına üç görüntü yakalayın ve sol ventrikül iç diyastolik boyutunun (LVIDd), sol ventrikül iç çapı sistolik (LVID'ler), sol ventrikül fraksiyonel kısalması (LVFS) ve sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonunun (LVEF) sonraki analizi için verilerin ortalamasını alın.
    NOT: Göğüs boşluğunu sıkıştırmadan göğüs duvarı ile prob temasını sürdürün; ventriküler septuma dik M-modu örnekleme çizgisi sağlamak; Ortalama değerleri elde etmek için ≥ 3 kardiyak döngü boyunca sürekli ölçümler yapın.

5. Masson boyama

  1. Kardiyak örnekleme ve fiksasyon
    1. Fareyi sodyum pentobarbital (80 mg/kg pentobarbital sodyum) ile uyuşturun. Ardından, makas kullanarak göğüs boşluğunda yaklaşık 1,5 cm'lik uzunlamasına bir kesi yapın, ana kalp damarlarını bağlayın ve traksiyon yaralanmasını önlemek için kalbi hızla çıkarın12.
    2. Kanı çıkarmak için eksize edilen kalbi hemen önceden soğutulmuş PBS ile durulayın ve temiz filtre kağıdı kullanarak fazla nemi nazikçe alın. Daha sonra, 3 mm kalınlığında bir doku dilimi elde etmek için papiller kas boyunca enine bir kesit yapın.
    3. Fiksasyon için, kalp örneklerini 48 saatten fazla bir süre boyunca %4 paraformaldehite batırın ve minimum doku-fiksatif hacim oranının 1:10 olmasını sağlayın.
  2. Kalp dokusunu %4 paraformaldehit fiksatiften çıkarın. Daha sonra, bir çeker ocak altında, dokuyu cerrahi bir bıçakla 4 μm kalınlığında ince bir şekilde dilimleyin ve dilimleri bir dehidrasyon kasetine13 aktarın.
  3. Doku kesitlerini kurutucuya yükleyin ve aşağıdaki adımları gerçekleştirin: her biri 1 saat boyunca %70 etanol, %80 etanol, %95 etanol; Her biri 45 dakika boyunca %100 etanol I & II; xylene I & II her biri 30 dakika boyunca.
  4. Dokuyu parafine gömün ve ardından blokları önceden soğutulmuş -20 °C soğuk bir plaka üzerinde katılaştırın.
  5. Parafine gömülü doku bloklarından 4 μm kalınlığında uzunlamasına kesitler elde etmek için bir parafin mikrotomu kullanın. Ardından, bölümleri deparafinize etmek ve yeniden sulandırmak için her biri 5 dakika boyunca aşağıdaki çözeltilere sırayla daldırın: ksilen I, ksilen II, mutlak etanol, %95 etanol, %80 etanol, %70 etanol ve son olarak damıtılmış su.
  6. Dokuyu hazırlanan Weigert'in demir hematoksilen boyama çözeltisine 8 dakika daldırın. Ardından, fazla lekelenme solüsyonunu çıkarmak için damıtılmış suyla tekrar tekrar durulayın. Asidik etanol farklılaştırma çözeltisinde 5 saniye farklılaştırın, ardından Masson'un mavileştirme çözeltisinde 5 dakika mavileştirme yapın. Son olarak damıtılmış su14 ile durulayın.
  7. Dokunun tam ve düzgün bir şekilde kaplanmasını sağlamak için slayt başına yaklaşık 200-300 μL uygulayarak bölümleri 10 dakika boyunca karmin kırmızısı ile boyayın. Daha sonra kesitleri %0,2 buzlu asetik asitte 1 dakika durulayın.
  8. Bölümleri yaklaşık 5 dakika veya kas lifleri kırmızıya dönene kadar fosfomolibdik asit çözeltisi ile tedavi edin. Daha sonra, kesitleri dokuyu tamamen kaplayacak şekilde (tipik olarak slayt başına 200-300 μL) yeterli hacimde anilin mavisi çözeltisiyle 5 dakika boyunca boyayın. Son olarak, bölümleri %0,2 buzlu asetik asit çözeltisi15 ile durulayın.
  9. Bölümleri kademeli bir etanol serisi ile kurutun. Her biri 1-2 dakikalık üç daldırma kullanarak dokuları ksilen ile temizlemeye devam edin.
  10. Az miktarda nötr reçine uygulayarak ve bir lamel ile kaplayarak bölümleri monte edin.
  11. Mikroskobik ( bkz. Malzeme Tablosu) inceleme: Masson boyalı dokuları ×40, ×20 ve ×10 büyütmede gözlemleyin. Temsili görüntüleri korumak için her slaydın fotoğrafını çekin.
    NOT: Tüm atıkları kurumsal güvenlik protokollerine uygun olarak bertaraf edin. Asidik farklılaşma solüsyonunu ve buzlu asetik asidi korozyona dayanıklı varillerde toplayın, yüksek konsantrasyonlu atıkları pH 6-8'e kadar nötralize edin ve alkali solüsyonlarla karıştırmayın. Etanolü patlamaya dayanıklı varillerde, serin bir yerde, ateş kaynaklarından uzakta saklayın. Ksileni kahverengi fıçılarda tutun, koruyucu ekipman giyilmiş olarak çeker ocakta çalıştırın ve asitleri (maddeleri) etanolle karıştırmayın. Hayvan mendillerini etiketli kaplara koyun, kapatın ve donma koşullarında saklayın16. Son olarak, tüm atıkları bertaraf edilmek üzere nitelikli meslek kuruluşlarına aktarın; Atıkların karıştırılmasını veya gelişigüzel atılmasını kesinlikle yasaklayın.

6. İstatistiksel analiz

  1. Tüm sayısal verileri toplayın ve GraphPad Prism 9.0'ı kullanarak analiz edin.
  2. Gruplar arasındaki farkları analiz etmek için bağımsız örneklem t-testini kullanın.
  3. İstatistiksel anlamlılığı çok anlamlı için **P < 0,01 ve anlamlı için *P < 0,05 olarak ayarlayın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

On iki fareye ozmotik pompalarla deri altına implante edildi ve hayatta kaldı. Model grubunun hepsinde hipertansiyon gelişti (n = 6). İmplantasyondan yedi gün sonra, model grubundaki ortalama SBP 160 mmHg'yi aştı (Şekil 1A). 14, 21 ve 28. günlerde, model grubundaki SBP sürekli olarak 160 mmHg'nin üzerinde kaldı. Buna karşılık, sahte cerrahi grubu, deney boyunca önemli bir yükselme olmaksızın normal SBP seviyelerini (yaklaşık 90-110 mmHg) korudu.

Ozmotik pompanın i...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, ozmotik bir pompa kullanarak hipertansif miyokardiyal fibrozu indüklemek için Ang II'nin sürekli infüzyonunda yer alan temel adımları optimize etti ve ozmotik pompanın implantasyon konumlandırması ve Ang II konsantrasyonunun ayarlanması gibi kritik hususları detaylandırdı. Model 2004 pompası, 4 haftalık süresi için seçildi ve Ang II dozu, minimum partiler arası değişkenliği hesaba katarak nominal infüzyon hızına göre hesaplandı. Bu modelin etkinliği SBP izleme, kardiyak renk...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yazarlar bu makalenin herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82074378), Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Departmanı Projesi (2022YFS0618), Luzhou Bilim ve Teknoloji Ofisi Projesi ve yetenek çalışması (2023JYJ029), 2024 Geleneksel Çin Tıbbı Guangdong İl Laboratuvarı Projesi (HQCML-C-2024005), Shenzhen Bilim ve Teknoloji Programı (JCYJ20230807094603007, JCYJ20240813152440051), Shenzhen Tıbbi Araştırma Fonu (A2403028), Sichuan Tabipler Birliği Projesi (Q2025014) ve Güneybatı Tıp Üniversitesi Projesi (2024ZKZ007, 2024ZKY073, 2023ZYYQ04). Fon sağlayıcının çalışma tasarımında, veri analizinde veya yayınlama kararında hiçbir rolü yoktu.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ang IISigma-Aldrich ŞirketiSigma, A9525
Hayvan anestezi makinesiShenzhen Ödül Yaşam Bilimleri Şirketi, LtdR530
Hayvan ventilatörüShenzhen Ödül Yaşam Bilimleri Şirketi, LtdR415
GraphPad Prism GraphPad Software Inc.Sürüm 9.0
Zeki, invaziv olmayan kan basıncı monitörüNippon Soft Dragon Co., LtdSoftron, BP-98A
Işık mikroskobuYijingtong Optik Teknolojisi (Şanghay) Şirketi, LtdOLYMPUS, SZ61TR
Masson Tricolor Boyama Çözeltisi ve KitiPekin Soleibao Teknoloji Şirketi, LtdSolarbio, G1340
FareChengdu Dossy Exprimental Animals CO., LtdC57BL/6J
Osmotik pompalarALZA ŞirketiAlzet, Model 2004
Ultrason görüntüleme sistemleriFUJIFILM VisualSonics Şirketi, KanadaFUJIFILM, Vevo 3100

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhao, D., Liu, J., Wang, M., Zhang, X., Zhou, M. Epidemiology of cardiovascular disease in China: current features and implications. Nat Rev Cardiol. 16 (4), 203-212 (2019).
  2. Czubryt, M. P., Hale, T. M. Cardiac fibrosis: pathobiology and therapeutic targets. Cell Signal. 85, 110066(2021).
  3. Young, C. N., Davisson, R. L. Angiotensin-II, the brain, and hypertension: an update. Hypertension. 66 (5), 920-926 (2015).
  4. Goldblatt, H., Lynch, J., Hanzal, R. F., Summerville, W. W. Studies on experimental hypertension: I. the production of persistent elevation of systolic blood pressure by means of renal ischemia. J Exp Med. 59 (3), 347-379 (1934).
  5. Mezzano, S. A., Ruiz-Ortega, M., Egido, J. Angiotensin II and renal fibrosis. Hypertension. 38 (3), 635-638 (2001).
  6. Liu, Q., et al. Zhilong Huoxue Tongyu capsule inhibits hypertensive myocardial fibrosis via balancing TGF-β1/Smad3/Erbb4-IR/miR-29b pathway. Sci Rep. 15 (1), 25127(2025).
  7. Han, Y. J., Hu, W. Y., Piano, M., De Lanerolle, P. Regulation of myosin light chain kinase expression by angiotensin II in hypertension. Am J Hypertens. 21 (8), 860-865 (2008).
  8. Dikalova, A., et al. Nox1 overexpression potentiates angiotensin II-induced hypertension and vascular smooth muscle hypertrophy in transgenic mice. Circulation. 112 (17), 2668-2676 (2005).
  9. Zheng, H. Q., et al. Induction of thoracic aortic dissection: a mini-review of β-aminopropionitrile-related mouse models. J Zhejiang Univ Sci B. 21 (8), 603-610 (2020).
  10. Taiji, S., et al. Changes in breathing pattern during severe hypothermia and autoresuscitation from hypothermic respiratory arrest in anesthetized mice. Physiol Rep. 9 (23), e15139(2021).
  11. Lu, H., et al. Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice. J Vis Exp. (103), e53191(2015).
  12. Gao, E., et al. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ Res. 107 (12), 1445-1453 (2010).
  13. Liu, M., et al. Zhilong Huoxue Tongyu capsule inhibits rabbit model of hyperlipidemia and atherosclerosis through NF-κB/NLRP3 signaling pathway. Heliyon. 9 (11), e20026(2023).
  14. Foot, N. C. The Masson trichrome staining methods in routine laboratory use. Stain Technol. 8 (3), 101-110 (1933).
  15. Van De Vlekkert, D., Machado, E., D'azzo, A. Analysis of generalized fibrosis in mouse tissue sections with Masson's trichrome staining. Bio Protoc. 10 (10), e3629(2020).
  16. Bansod, H. S., Deshmukh, P. Biomedical waste management and its importance: a systematic review. Cureus. 15 (2), e34589(2023).
  17. Li, X., et al. Epigenetics-based therapeutics for myocardial fibrosis. Life Sci. 271, 119186(2021).
  18. Villalobos, E., et al. Fibroblast primary cilia are required for cardiac fibrosis. Circulation. 139 (20), 2342-2357 (2019).
  19. Percie Du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. Br J Pharmacol. 177 (16), 3617-3624 (2020).
  20. Kawada, N., et al. A mouse model of angiotensin II slow pressor response: role of oxidative stress. J Am Soc Nephrol. 13 (12), 2860-2868 (2002).
  21. Tamplin, M. R., et al. Longitudinal testing of retinal blood flow in a mouse model of hypertension by laser speckle flowgraphy. Transl Vis Sci Technol. 10 (2), 16(2021).
  22. Lever, A. F., Lyall, F., Morton, J. J., Folkow, B. Angiotensin II, vascular structure and blood pressure. Kidney Int Suppl. 37, S51-S55 (1992).
  23. Kuwahara, F., et al. Hypertensive myocardial fibrosis and diastolic dysfunction: another model of inflammation. Hypertension. 43 (4), 739-745 (2004).
  24. Schultz, J. E. L., et al. TGF-β1 mediates the hypertrophic cardiomyocyte growth induced by angiotensin II. J Clin Invest. 109 (6), 787-796 (2002).
  25. Ye, S., et al. Celastrol attenuates angiotensin II-induced cardiac remodeling by targeting STAT3. Circ Res. 126 (8), 1007-1023 (2020).
  26. González, A., et al. Myocardial interstitial fibrosis in hypertensive heart disease: from mechanisms to clinical management. Hypertension. 81 (2), 218-228 (2024).
  27. Ock, S., et al. IGF-1 protects against angiotensin II-induced cardiac fibrosis by targeting αSMA. Cell Death Dis. 12 (7), 688(2021).
  28. Li, R., Frangogiannis, N. G. Integrins in cardiac fibrosis. J Mol Cell Cardiol. 172, 1-13 (2022).
  29. Wang, M. Y., et al. OTUD1 promotes hypertensive kidney fibrosis and injury by deubiquitinating CDK9 in renal epithelial cells. Acta Pharmacol Sin. 45 (4), 765-776 (2024).
  30. Ravanetti, F., et al. Modeling pulmonary fibrosis through bleomycin delivered by osmotic minipump: a new histomorphometric method of evaluation. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (2), L376-L385 (2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hypertensive Myocardial FibrosisAngiotensin IIOsmotic PumpMouse ModelCollagen DepositionSubcutaneous ImplantationSystolic Blood PressureLeft Ventricular FunctionPhenotype VerificationModel Evaluation
Video Coming Soon

Related Articles