Method Article

Trombus Profilleme Testi: Biyomekanik Trombogenezin Kapsamlı Karakterizasyonu İçin Mikrofluidik Tabanlı Bir Platform

DOI:

10.3791/69555

⸱

January 9th, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology and Department of Pathology, University of Texas Medical Branch

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, kanda trombus oluşumunu tetiklemek için kesme stresi kullanan ve trombü birden fazla boyutlu okuma ile karakterize eden bir mikrofluidik testi tanımlar. Bu test, kan örneklerinin protrombotik eğilimini ölçebilir ve bu nedenle hastalık teşhisi, ilaç keşfi ve trombozla ilgili temel mekanik çalışmalarda faydalıdır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tromboz, bir kan damarında trombositlerin ve pıhtı faktörlerinin anormal şekilde birikmesini belirten patolojik bir durumdur. Birçok çalışma, trombozun temel mekanizması olarak çözünür agonistlerin trombosit aktivasyonuna odaklansa da, kan akışının trombus oluşumunu da kolaylaştırdığı sıklıkla göz ardı edilmiştir. Özellikle arterlerde tromboz genellikle arterial stenozla ilişkilidir; bu da kan akışındaki kesme stresini artırır ve biyomekanik trombogenez olarak adlandırılan trombogenez sürecini kolaylaştırır. Uzun süre boyunca, biyomekanik trombogenez sürecine dair kapsamlı ve ayrıntılı bilgiler sunacak bir biyoanaliz mevcut değildi. Bunu çözmek için, mikrofluidikler ile çok renkli floresan görüntüleme birleştirilerek bir trombus profilleme testi geliştirilmiştir; bu test, trombüsün boyutu ve bileşimi ile trombosit aktivasyon seviyesini kapsayan yedi okuma ile biyomekanik trombogenezin kapsamlı karakterizasyonunu sağlar. Bu trombos profilleme testi, insanlardaki protrombotik eğilimi ve anti-trombotik ajanların etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilir ve arterial trombozun altında yatan mekanizmaların daha iyi anlaşılması için de faydalıdır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tromboz, her yıl dünya çapında milyonlarca ölümden sorumlu olan kardiyovasküler hastalıkların başlıcanedenidir. 1. Şu anda, tromboz risklerinin değerlendirilmesi için standart klinik ortamlarda biyoanaliz mevcut değildir. Ticarileştirilmiş laboratuvar ve tedavi noktası hematolojik fonksiyon testleri arasında, geleneksel koagulasyon testleri ve agregometri, tromboz veya büyük yan kardiyovasküler olayları tahmin etmede güvenilir olmadığıkanıtlanmış 2,3,4. Küresel tromboztesti 5, PFA-100/200

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, Teksas Üniversitesi Tıp Şubesi İnsan Araştırmaları Etik Komitesi'nin yönergelerini takip etmekte ve onaylanmıştır. Deneysel donanım sistemi, mikrofluidik cihaz, perfüzyon bileşenleri (konnektörler, borular, şırınge ve şırınge pompası) ve parlak alan ile çok renkli floresans görüntüleme imkanı sağlayan optik bileşenlere sahip ters bir mikroskoptan oluşur. Mikroskopta, 4 floresan kanalı en az karşılıklı kanama ile ayırmak için çok LED ışık ve çoklu geçişli filtre küpü kullanılır: uyarılma: 391/32, 479/33, 554/24, 638/31 ve emisyon: 435/30, 519/25, 594/32, 695/58. Tüm deneysel işlemler için eldiven, göz koruma ve laboratuvar....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Trombus profilleme testi, kanı stenotik kanaldan perfüze ederek kesme kaynaklı trombus oluşumunu sağlar ve oluşan trombus hakkında çok boyutlu bilgi toplamak için gerçek zamanlı çok renkli floresan görüntüleme yapar. Hem Set 1 hem de Set 2 sensörleri kullanılarak yapılan deneyler, trombü boyut, çapraz bağlama proteinlerinin zenginlenmesi (von Willebrand faktörü, fibrinogen) ve trombosit aktivasyon seviyesi (P-seçilme ekspresyonu, PS maruziyeti ve integrin αIIbβ3 akt.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikrofluidik stenoz testini çok renkli floresan görüntüleme ile birleştirerek, trombus profilleme testi biyomekanik trombogenez ve trombosit mekanobiyolojisini incelemek için kullanışlı ve güçlü bir yaklaşım sunar. Bu arada, test çok çeşitli uygulamalarda faydalıdır. Örneğin, moleküler hedef ve etki mekanizmasının etki barkodu21'den çıkarılabildiği biyomekanik trombosit toplanması özellikle inhibe eden anti-trombotik ajanların ekranında kullanılabilir. Ayrıca, bel.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklamak zorunda kalacak bir çıkar çatışması yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makaleyle ilgili araştırmalar ve Chen laboratuvarında trombus profilleme testinin geliştirilmesi, Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü hibe R00HL153678 (Y.C.), Ulusal Yaşlanma Enstitüsü, Claude D. Pepper Yaşlı Amerikalılar Bağımsızlık Merkezi Ödülü #P30-AG024832 (Y.C.), UTMB Takım Bilim Pilot Araştırma Ödülü (Y.C.), Amerikan Kalp Derneği Doktora Sonrası Bursu 20POST35080023 (Y.C.) tarafından desteklendi, ve Amerikan Kalp Derneği Dönüşüm Projesi Ödülü 25TPA1471420 (Y.C.). Bu çalışma, kısmen Ulusal Bilim Vakfı (Grant ECCS-2025752) tarafından desteklenen Ulusal Nanoteknoloji Koordineli Altyapısı'nın bir üyesi olan UCSD'nin San Diego....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
10 mL ŞırıngalarHenke Sasss Kurt5100-X00V0Kan örneği toplama
15 mL şahin tüpleriGenesee Scientific28-101Kan örneği depolama
1 mL gaz geçirmez cam şırıngaHamilton81331Donanım montajı
2.2.9MERU VasImmuneTromb boyama
20 X1/2 Prob İğneleriMcMaster-CarrM919PDMS cihazlarının üretimi
20-mL ŞırıngalarHenke Sasss Kurt5200-X00V0Kan örneği toplama
%70 etanolSigma-AldrichEX0281-1Gaz geçirmez şırıngaların dezenfekte edilmesi ve cam sürgülerin temizlenmesi
AK4-Alexa Fluor 647BioLegend304918Tromb boyama
Alexa Fluor 405 NHS EsterInvitrogenA30000Fibrinojen etiketleme
Alexa fluor 555 antikor etiketleme kitiInvitrogenA88065MBC 370.2 ve 2.2.9 etiketleme
Annexin V-Pacific BlueInvitrogen501121505Tromb boyama
Temizlik TozuOfis Deposu911245PDMS cihazlarının üretimi
Ahşap Kutulu El Işi Hobi Bıçağı SetiExcel Blades44282PDMS cihazlarının üretimi
Deionize su ThermoFisher Scientific 751-628Gaz geçirmez şırıngaların yıkanması
KurutucuBel ArtF420270000PDMS'nin Gazı Parçalanması
Tek Kullanımlık Çok Amaçlı Laboratuvar SpatulasıLevGo17211Silikon elastomer baz ve kürleme maddesini karıştırıyor 
Boya ve Biotin Çıkarma Spin KolonuZebaA44296SFibrinojen etiketleme
FibrinogenYenilikçi AraştırmaIHUFBG25MGTromb boyama
Fusion 200-X şırınga pompasıChemyx Inc.0720XDonanım montajı
Heparin Sigma-AldrichH3149Kan örneği antikoagülasyonu
Yüksek Frekanslı JeneratörElectro-technic product Inc.BD-20PDMS cihazlarının üretimi
İnsan VWF monomeriSino Biyolojik A.Ş.10973-H08CMikrofuidik cihaz kaplaması
Image J v1.53 yazılımıFiji, Ulusal Sağlık EnstitüsüVeri analizi
Ters mikroskopLeicaDM IL LIDERLIK ETTI; filtre küpü: Leica DFT51010; Deniz feneri: LED5Donanım montajı
KimwipeKimberly- Clark Profesyonel34120Cam slaytların temizlenmesi
Luer kilit kapaklarıUluslararası Tıp Endüstrileri, Inc.57100BKan örneği toplama
MBC 370.2KerafastEBW104Tromb boyama
Mikroskop kapak gözlükleriPaul Marienfeld GmbH & Şirket KGES0107222PDMS cihazlarının üretimi
Mini Jilet Bıçak KazıyıcıStanley28-100PDMS cihazlarının üretimi
NanoDrop 2000 UV-Vis SpektrofotometresiTermo BilimselND-2000Protein konsantrasyonu ve F/P oranı ölçümü
FırınLaboratuvar Hattı Aletleri3512PDMS cihazlarının üretimi
PAC-1-Alexa Fluor 647BioLegend362806Tromb boyama
Plastik bardakThermoFisher Scientific S04589Silikon elastomer baz ve kürleme maddesini karıştırıyor 
SU-8 fotorezist master  KalıpUC San Diego Nano3 Nanofabrika Temiz Odası TesisiPDMS cihazlarının üretimi
Sylgard 184 Silikon Elastomer KitiKrayden DowDC4019862PDMS
SZ22-FITC Beckman CoulterIM 1756UTromb boyama
Boru SistemiCole - Palmer Enstrüman Şirketi.06422-01Donanım montajı

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lindstrom, M., et al. Global burden of cardiovascular diseases and risks collaboration, 1990-2021. J Am Coll Cardiol. 80 (25), 2372-2425 (2022).
  2. Lim, H. Y., O'malley, C., Donnan, G., Nandurkar, H., Ho, P. A review of global coagulation assays ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Thrombus ProfilingBiomechanical ThrombogenesisMicrofluidic DevicesPlatelet ActivationFluorescence ImagingArterial ThrombosisVon Willebrand FactorProthrombotic TendencySyringe PumpImageJ Analysis

Related Articles