Yöntem makalesi

Modifiye Ferrik Klorür Kaynaklı Superior Sagittal Sinüs Trombozunun Kurulması

379 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/69563

⸱

30 Aralık 2025

 ,  ,  , 
1Department of Neurology, Xuanwu Hospital Capital Medical University, 2Department of Neurosurgery, Xuanwu Hospital Capital Medical University

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, ferrik klorür ile indüklenen superior sagital sinüs trombozunun tekrarlanabilir, minimal invaziv bir fare modeli oluşturmak için bir protokol sunmaktadır; bu yöntem, lazer benek kontrast görüntüleme ve yüksek çözünürlüklü ultrasonla birlikte ipek-dikiş yöntemi kullanılarak değerlendirilmektedir.

Özet

Serebral venöz tromboz (CVT), nadir görülen ancak potansiyel olarak hayatı tehdit eden bir nörolojik bozukluktur. Hayvan modelleri, patofizyolojilerini araştırmak ve potansiyel tedavileri değerlendirmek için kritik platformlar sunar. Bu çalışmada, FeCl₃ ile ıslatılmış dikiş tekniği kullanılarak superior sagital sinüs (SSS) trombozunun modifiye edilmiş bir fare modelini sunuyoruz. Erkek Sprague-Dawley fareleri (220-250 g) paramedian saç derisi kesiti ve SSS üzerinde 1 cm kranial kemik penceresi oluşturuldu. Geleneksel orta hat kesimine kıyasla, bu yaklaşım kesilmiş deri, kemik penceresi ve alttaki dura mater arasında yapışmayı önler. Ayrıca, SSS üzerinde bulunan dikiş düğümlerinin yarattığı paraziti önlerek ultrason görüntüleme kalitesini artırır. %40 FeCl3'e batırılmış 2-0 ipek dikiş, üst üste iki aralık boyunca açık sinüse iki ardışık 5 dakikalık aralık boyunca uygulandı. Geleneksel FeCl 3-filtreli kağıt yöntemine kısyasla, bu teknik parasagital kortekse doğrudan kimyasal hasarı en aza indirir. FeCl3 uygulamasından önce ve sonra serebral venöz perfüzyonun değerlendirilmesi için lazer benek kontrast görüntüleme kullanıldı. Kan akışında önemli bir azalma başarılı trombozun gerçekleştiğini doğruladı. Ameliyattan yedi gün sonra, trombus oluşumu ve hemodinamik değişiklikler yüksek çözünürlüklü ultrasonla değerlendirildi ve trombüsün hacimsel ve hemodinamik verilerini sağlayan Vevo LAB yazılımı kullanılarak analiz edildi. Bu modifiye edilmiş model, preklinik CVT araştırmaları için tekrarlanabilir, minimal invaziv ve görüntüleme uyumlu bir yaklaşım sunar.

Giriş

Beyin venöz trombozu (CVT), tüm felçlerin %0,5-3'ünü oluşturan ve genç yetişkinlerde inme nedenlerinden biri olan özel bir serebrovasküler hastalıktürüdür 1. Bu hastalığın temel patolojik değişimi, dural venöz sinüslerde ve/veya beyin venlerinde trombozdur; bu da beyin venöz drenajının bozulmasına ve ardından kraniyal basıncın artmasına, beyin ödemine, venöz enfarktüsye veya kanamayayol açar. 2. Altta yatan mekanizmalarını daha iyi anlamak ve yeni terapötik müdahaleleri değerlendirmek için güvenilir ve tekrarlanabilir hayvan modelleri vazgeçilmezdir. Üst sagital sinüs (SSS) en sık etkilenen bölge olduğu ve yüzeysel konumunun operasyonel işlemlerikolaylaştırdığı göz önüne alındığında, mevcut hayvan deneyleri öncelikle superior sagital sinüs trombozu (SSST) modelini kullanır.

Çeşitli modelleme yöntemleri arasında, ferrik klorür (FeCl3) indüksiyon yöntemi, operasyonel sadeliği ve maliyet etkinliği nedeniyle en yaygın kullanılan tekniklerden birihaline gelmiştir 4. Bu modelde, FeCl3 çözeltinin topikal uygulaması doğrudan venöz sinüs endotelini zarar verir ve güçlü oksidatif özellikleri sayesinde subendotel matrisini açığa çıkarır. Bu maruziyet, trombosit agregasyonunu ve pıhtılaşma kaskadını aktive eder ve nihayetinde venöz sinüstrombozunu tetikler 5. Ancak, diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, geleneksel FeCl3-filtreli kağıt modelinin birkaç dezavantajı da vardır. En kritik sorun, FeCl3'ün paramanyetik özellikleri ve yüksek manyetik duyarlılığının, manyetik rezonans görüntüleme sırasında önemli artefaktlar yaratmasıdır; bu da tromb değerlendirmesinin doğruluğunu ve venöz sinüs rekanalizasyongözlemini ciddi şekilde zayıflatmaktadır 6. Ayrıca, filtre kağıdının şekli SSS ile iyi uyum sağlamaz, bu da sinüs çevresindeki beyin parenximasına zarar vermeye yatkın hale getirir. Bu nedenle, SSS çevresindeki parenximal hasarın trombozun kendisinden mi yoksa FeCl3 tarafından neden olduğu doğrudan kimyasal yaralanmadan mı kaynaklandığını belirlemek zordur.

Bu çalışmanın genel amacı, FeCl3 tarafından neden olduğu doğrudan kortikal hasarı azaltan ve SSS içindeki kan akışı ile trombus boyutunun değerlendirilmesine olanak tanıyan modifiye edilmiş bir FeCl 3-indüklenmiş SSST fare modeli oluşturmaktır. Bu çalışma, FeCl3 tarafından neden olduğu doğrudan kortikal kimyasal hasarı en aza indiren ve yüksek çözünürlüklü ultrason kullanılarak venöz sinüs kan akışı ile trombus oluşumunun gerçek zamanlı, invaziv olmayan ve nicel olarak izlenmesini sağlayan bir paramedian yaklaşımını tanıtmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu protokol, Capital Medical University Hayvan Deneyleri ve Deneysel Hayvan Refahı Komitesi tarafından Onay No. AEEI-2025-138. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Modifiye edilmişFeCl 3-indüklenmiş sıçan SSST modelinin oluşturulması

  1. Deney için 6-7 haftalık ve 220-250 g ağırlığında erkek Sprague-Dawley (SD) fareleri kullanın. Ameliyat öncesi fareleri 1 hafta boyunca alıştırın ve 12 saat yem vermeyin.
  2. Aşağıdaki reaktifler, aletler ve ekipmanları hazırlayın: %2 pentobarbital çözeltisi, %40 FeCl3 çözeltisi, %5 povidon-iyot, normal salin, oftalmik merhem, tek kullanımlık jilet bıçakları, bistürler, cerrahi makas, pensler, 2-0 ve 4-0 ipek dikişler, ters kesim iğneleri, iğne tutucuları, 1-mL ve 5-mL şırıngalar, tıbbi bantlar, kemirgen ameliyat platformu, rektal sıcaklık problu ısıtma pedi ve mikro el kafa tatma matkapı.
  3. Tartıldıktan sonra, sıçan %2 pentobarbital (50 mg/kg) intraperitoneal enjeksiyonla anestezi edilir (kurumsal onaylı protokollere uygun olarak). Sonra, geri uzuv derisini pensle sıkarak yoksunluk ve ağrı tepkilerinin olmadığını doğrulayın.
  4. Oftalmik merhem uygulayın ve farenin saç derisi tüylerini tek kullanımlık jiletle tıraş edin.
  5. Fareyi kemirgen ameliyat platformunda yatağa yatarak tıbbi bantlarla sabitleyin, vücut sıcaklığını ısıtıcı pedle 37 ± 0,2 °C arasında tutun ve rektal probla çekirdek sıcaklığını sürekli izleyin.
  6. Saç derisini %5 povidon-iyot ile dezenfekte edin.
  7. Saç derisinde 15 mm paramedian deri kesisi yapın, ardından alttaki fasya ve periostumu keserek kafatasını tamamen açığa çıkarın.
  8. Kafatasını kranial matkap ile SSS açıkça ortaya çıkana kadar inceltin; lambdadan başlayıp sagittal dikiş boyunca öne doğru 10 mm uzanır. Alttaki dura maddesine ve SSS'ye zarar vermemek için aralıklı bir sondaj tekniği kullanın ve kortekste termal hasarı önlemek için sondaj ucunu normal tuzlu suyla tekrar tekrar sulanın.
  9. %40 FeCl3 çözeltisi ile ıslatılmış 10 mm uzunluğunda 2-0 ipek dikiş segmentini açıkta duran SSS yüzeyine 5 dakika boyunca uygulayın, ardından dikişi yeni ıslatılmış bir segmentle değiştirerek 5 dakika daha uygulayın.
  10. Cerrahi alanı 0.5 mL normal salin ile üç kez durulayarak kalan FeCl3'ü çıkarın.
  11. Deri, 4-0 ipek dikiş kullanarak kesintili dikişlerle kapatın, ardından povidon-iyot dezenfeksiyonu uygulanır.
  12. Fareyi tamamen uyanana kadar gözlemleyin, sonra onu kafese geri götürün.

2. Başarılı model oluşturmanın değerlendirilmesi

NOT: Cerrahi işlem sırasında, LSCI kranial pencere oluşturulduktan sonra ve FeCl3 uygulamasından önce, sonra ise FeCl3 uygulaması ve cerrahi alanın durulanması sonrası ancak cilt kapanmasından önce SSS'deki venöz kan akışını ölçmek için kullanıldı. Model, SSS'deki venöz kan akışında önemli bir azalma gösterdiğinde başarılı bir şekilde kurulmuş sayılır.

  1. LSCI ve ilgili yazılımı (RFLSI v5.0) açın, ardından çevrimiçi mod düğmesine basın.
  2. Gösterge lazeri görüş alanında ortalanana kadar aletin yüksekliğini ve konumunu ayarlayın.
  3. Fareyi köpük bir platforma yerleştirin ve SSS gösterge lazeriyle hizalanana kadar konumunu ayarlayın.
  4. Görüntü net görünene kadar büyütme ve odaklama ayarlar. Pseudocolor eşiğinin alt ve üst sınırlarını 10 ve 200 olarak ayarlayarak psödorenk görselin görsel görünümünü optimize edin.
  5. Yatırım Getirisi Ayarla' butonuna basın, dairesel aracı seçin ve SSS bölgesini belirleyin.
  6. Kayıt butonuna basarak venöz kan akışını elde edin ve hem orijinal hem de sahte renkli görüntüler yakalayın.

3. Tromb alanı/hacmi ve hemodinamik değişikliklerin değerlendirilmesi

NOT: İşlemden birkaç gün ila hafta sonra, trombus değişikliklerini ve damar rekanalizasyonunu değerlendirmek için yüksek çözünürlüklü ultrason kullanın.

  1. Aşağıdaki ilaçlar, aletler ve ekipmanları hazırlayın: izoflüran, ultrason jeli, tek kullanımlık jilet bıçakları, tıbbi bantlar, küçük hayvan anestezi makinesi, yüksek çözünürlüklü küçük hayvan ultrason ve fotoakustik görüntüleme sistemi, 70 MHz ultra yüksek frekanslı UHF57x lineer dizi dönüştürücü ve 3D alma motoru.
  2. 3D alma motorunu ve UHF57x dönüştürücüsünü takın. Sonra, motoru başlatın.
  3. Fareyi %3 izofluran ile 1 L/dakika oksijen karışımı olan bir indüksiyon odasında anestezi edin.
  4. Fareyi 37 °C'lik termostatik görüntüleme plakasında yatağa yerleştirin, başı ve uzuvları tıbbi bantlarla nazikçe sabitlenecek şekilde yerleştirilin ve burun konisinden %1,5-2 isofluran ile anestezi uygulanmasını sağlayın.
  5. Saç derisi saçlarını tek kullanımlık jilet ile tıraş edin ve tespit alanını açığa çıkarın, ardından ultrason jeli uygulayın.
  6. SSS ve intraluminal trombüs net şekilde görselleştirilene kadar sıçanın konumunu ve yönünü dönüştürücüye göre ayarlayın.
  7. B modunda 0,04 mm adım boyutlu 3D görüntüleme kullanarak hem sagital hem de koronal düzlemlerde SSS'nin ardışık tomografik görüntüleri alın.
  8. SSS'de kan akışını gözlemlemek için Renk Doppler modunu kullanın, ardından kan akışı hızını ölçmek için Puls-Dalga (PW) Doppler modunu uygulayın.
  9. Anestezi bırakın ve sıçan tamamen uyandıktan sonra kafese geri götürün.
  10. Görüntüleri dışa aktarın ve Vevo LAB yazılımı kullanarak analiz edin. SSS'deki trombüsün maksimum sagital ve koronal kesitsel alanlarını, hacmini ve sinüsün maksimum kan akış hızını kaydedin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Değiştirilmiş FeCl 3-indüklenmiş SSST modelinin şematik diyagramı Şekil 1'de gösterilmiştir. Deneysel sonuçlar, FeCl 3-doygun ipek sütürünün SSS'ye uygulanmasından sonra LSCI'nin yerel kan akışında anlamlı bir azalma tespit ettiğini, bunun venöz sinüsün başarılı bir şekilde tıkandığını ve LSCI'nin dinamik perfüzyon değişikliklerini tespit etme hassasiyetini doğruladığını gösterdi (Şekil 2). Ameliyat sonrası...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

CVT, nadir görülen ancak potansiyel olarak hayati tehlike oluşturan spesifik bir serebrovasküler hastalıktürüdür 1. Patolojik mekanizmalarını daha iyi incelemek ve etkili müdahale stratejileri geliştirmek için, araştırmacılar SSST'nin çeşitli hayvan modellerini oluşturmuşlardır; bunlar arasında SSS ligasyonu veya tıkanması 7,8,9, protrombotik maddeenjeks...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82401527) tarafından desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 mL ŞırıngeShenzhen Huayon Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.21-3020
2-0 ipek dikişlerŞanghay Pudong Jinhuan Tıbbi Ürünler A., LtdA224
3D edinim motoruFujifilm Görsel Sonicshttps://www.visualsonics.com/gallery/extended-3d-motor
4-0 ipek dikişlerŞanghay Pudong Jinhuan Tıbbi Ürünler A., LtdA222
%5 povidon-iyotShandong Lircon Tıbbi Teknoloji Şirketi, Ltd.https://www.lircon.cn/products_details/100.html
5 mL ŞırıngeShenzhen Huayon Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.21-3023
Tek kullanımlık jilet bıçağıDongyang Jinmin Ticaret Şirketi, Ltd.ST300
FeCl3MacklinI811935
Isıtma pediShenzhen Huayon Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.36-0001
İzofluranRWD Yaşam BilimleriR510-22-10
Lazer benekli görüntüleme sistemiRWD Yaşam BilimleriRFLSI III
Lineer dizi dönüştürücüFujifilm Görsel SonicsUHF57x
Tıbbi bantSuzhou Konlida Tıbbi Malzemeler Şirketi, Ltd.B02
Mikro el taşınabilir kafata matkap makinesiRWD Yaşam Bilimleri78001
İğne tutacağıRWD Yaşam BilimleriF31025-13
Normal salinŞanghay Beyotime Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.ST341-500ml
Oftalmik merhemShenzhen Huayon Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.19-7223
Ters kesim iğneleriŞanghay Pudong Jinhuan Tıbbi Ürünler A., LtdTJ-3-514
Kemirgen çalışma platformuŞanghay Yuyan Bilimsel Enstrümanlar A., Ltd.30150
Bistüri bıçağıRWD Yaşam BilimleriS31015-01
Smalı sapıRWD Yaşam BilimleriS32003-12
Küçük hayvan anestezi makinesiRWD Yaşam BilimleriR500
Küçük hayvan ultrasonu ve fotoakustik görüntüleme sistemiFujifilm Görsel SonicsVevo F2
Düzgün PensepsRWD Yaşam BilimleriF12013-10
Sodyum PentobarbitalSigma-Aldrich (Şanghay) Ticaret Şirketi, Ltd.P3761
Cerrahi MakasRWD Yaşam BilimleriS14014-10
Dişli PensetlerRWD Yaşam BilimleriF12011-13
Ultrason jeliShandong Lircon Tıbbi Teknoloji Şirketi, Ltd.https://www.lircon.cn/products_details/230.html

Kaynaklar

  1. Saposnik, G., et al. Diagnosis and management of cerebral venous thrombosis: a scientific statement from the American Heart Association. Stroke. 55 (3), e77-e90 (2024).
  2. Cohen, O., Pegoraro, S., Ageno, W. Cerebral venous thrombosis. Minerva Med. 112 (6), 755-766 (2021).
  3. Li, M., Chen, J., Meng, R., Ji, X. Rhythmic deep-brain magnetic stimulation promotes angiogenesis and inhibits apoptosis by regulating the JAK2/STAT3 pathway in rats with superior sagittal sinus thrombosis. Brain Res. 1852, 149509(2025).
  4. Röttger, C., et al. A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes. Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).
  5. Schoenwaelder, S. M., Jackson, S. P. Ferric chloride thrombosis model: unraveling the vascular effects of a highly corrosive oxidant. Blood. 126 (24), 2652-2653 (2015).
  6. Hachenberger, M., et al. Aluminium chloride instead of ferric chloride for inducing superior sagittal sinus thrombosis to reduce ferromagnetic artifacts on MRI imaging in experimental models. Sci Rep. 14 (1), 10998(2024).
  7. Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion. Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).
  8. Mu, S., et al. A novel rat model for cerebral venous sinus thrombosis: verification of similarity to human disease via clinical analysis and experimental validation. J Transl Med. 20 (1), 174(2022).
  9. Fries, G., et al. Occlusion of the pig superior sagittal sinus, bridging and cortical veins: multistep evolution of sinus-vein thrombosis. J Neurosurg. 77 (1), 127-133 (1992).
  10. Wang, J., Ji, X., Ling, F., He, X. Comparison of anticoagulation and thrombolysis treatments in a rat model of superior sagittal sinus thrombosis. Int J Neurosci. 124 (7), 532-541 (2014).
  11. Ye, Y., et al. Impacts on thrombus and chordae Willisii during mechanical thrombectomy in the superior sagittal sinus. Front Neurol. 12, 639018(2021).
  12. Chen, C., et al. Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis. Neuroscience. 306, 39-49 (2015).
  13. Rahal, J. P., Malek, A. M., Heilman, C. B. Toward a better model of cerebral venous sinus thrombosis. World Neurosurg. 82 (1-2), 50-53 (2014).
  14. Kim, D. E., Schellingerhout, D., Jaffer, F. A., Weissleder, R., Tung, C. H. Near-infrared fluorescent imaging of cerebral thrombi and blood-brain barrier disruption in a mouse model of cerebral venous sinus thrombosis. J Cereb Blood Flow Metab. 25 (2), 226-233 (2005).
  15. Srivastava, A. K., Kalita, J., Haris, M., Gupta, R. K., Misra, U. K. Radiological and histological changes following cerebral venous sinus thrombosis in a rat model. Neurosci Res. 65 (4), 343-346 (2009).
  16. Wang, W., et al. Establishment of a rat model of superior sagittal-sinus occlusion and recanalization via a thread-embolism method. Neuroscience. 416, 41-49 (2019).
  17. Hachenberger, M., et al. Comparison of edoxaban and enoxaparin in a rat model of AlCl3-induced thrombosis of the superior sagittal sinus. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 396 (12), 3887-3892 (2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ferrik Klor r TrombozuSerebral Ven z TrombozS an Tromboz ModeliLazer Spekle G r nt lemeY ksek z n rl kl UltrasonTrombus Olu umuKan Ak l mBoyutlu G r nt lemeAt ml Dalga Doppler

İlgili makaleler