Method Article

Chikungunya, Dengue ve Zika Virüsü Enfeksiyonlarının Eşzamanlı Triplex PCR Tespiti İçin Bakım Noktası Platformu

DOI:

10.3791/69580

⸱

December 30th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1the Fourth People's Hospital of Nanning, 2The Fangchenggang Hospital of the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region - The First People's Hospital of Fangchenggang City, 3Department of Clinical Laboratory, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, Chikungunya, Dengue ve Zika virüsünün eş enfeksiyonlarını tek bir örnekle aynı anda teşhis etmek için üçlü PCR teknolojisi kullanan tam otomatik entegre bir sistemi öneriyor; böylece klinik ve birinci basamak laboratuvarlarında test verimliliğini optimize ediyor.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sivrisineklerle bulaşan ve ilk olarak 1952'de Tanzanya'da keşfedilen akut bir viral hastalık olan Chikungunya ateşi (CHIKF), Çin'de aralıklı yayılma göstermiş ve yerel salgınlar artmıştır. Temmuz 2025'e itibarıyla, şu anda salgının merkezi olan Guangdong Eyaleti, sadece bir haftada yaklaşık 3.000 yeni enfeksiyon dahil olmak üzere 4.824 yerel vaka rapor etmişti. Bu hızlı artış, ileri tanı teknolojilerine acil bir ihtiyaç yaratıyor. Bu tür araçlar, ön cephedeki kontrol çabalarını desteklemek için kritiktir. Denge (DENV), chikungunya (CHIKV) ve Zika virüsü (ZIKV) enfeksiyonlarının eşzamanlı hızlı tespiti için erken salgın önleme ve kontrol yeteneklerini artırmak için bir çözüm öneriyoruz. Bu yaklaşım, sınır kontrol noktaları ve birincil sağlık hizmetleri için özelleştirilmiş test protokollerinin geliştirilmesini içerir.

CHIKV ve DENV için geleneksel tanı yöntemleri, koenfeksiyon vakalarında genellikle duyarlılık/özgüllükten yoksun olur. CHIKV, DENV ve ZIKV benzer bulaşma kalıpları ve semptomları paylaştığı için, eşzamanlı izleme çok önemlidir. Bu protokol, bu arbovirüsleri tek bir tüpte 90 dakika içinde tespit etmek için TaqMan problarını kullanan bir tripleks qPCR yöntemi sunar. Viral kültür ve serolojik testlerle karşılaştırıldığında, bu yöntem aktif enfeksiyonları ve eşenfeksiyonları yüksek özgüllükle tespit ederek verimliliği artırır, iş akışını basitleştirir ve özel ekipman gereksinimlerini ortadan kaldırır.

Klinik ve Dış Kalite Değerlendirmesi (EQA) örnekleriyle doğrulama, altın standartlı singleplex testleriyle %100 uyumluluk doğruladı. Bu yöntem, özellikle hızlı salgınların kontrol altına alınmasının kritik olduğu kaynaklar sınırlı ortamlarda, endemik bölgelerde ateşli hastalıkların izlenmesinde etkili bir araç olarak hizmet vermektedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chikungunya ateşi (CHIKF), öncelikle sivrisinek vektörleri Aedes aegypti ve Aedes albopictus tarafından bulaşan giderek yaygınlaşan bir arboviral hastalıktır. Tropikal bölgelerde tekrarlayan salgınlarla karakterize edilen bu hastalık, klinik olarak şiddetli eklem ağrısı ve kalıcı artrit ile birlikte eşlik eden akut ateşli hastalıkolarak kendini gösterir 1. 26 Temmuz itibarıyla, Foshan Şehri'nde laboratuvarda doğrulanmış chikungunya vakalarının toplam sayısı 4.824'e ulaşmış olup, bu vakaların dikkat çekici %87,2'si Shunde Bölgesi'nde gerçekleşmiştir. Bu belirgin coğrafi yoğunlaşma, bölgesel halk sağlığı altyapısına önemli bir yük getirir ve önemli sağlık maliyetlerine, ayrıca daha geniş makroekonomik zorluklara yolaçar 2.

CHIKV, DENV ve ZIKV virüslerinin giderek örtüşen dolaşımı bağlamında, mevcut tanı yöntemleri üç ana sınırlamayla karşılaşmaktadır. Birincisi, serolojik testler, viralklirens 1 sonrası antikorların uzun süreli kalıcılığı nedeniyle akut enfeksiyonları ayırt edemez. İkinci olarak, viral kültür teknikleri düşük hassasiyet oranları gösterir ve birkaç gün sürer, bu da zamanında klinik karar almayı engeller. Üçüncüsü, nicel PCR testleri yüksek spesifiklik gösterse de (%95'in üzerinde), tek bir reaksiyonda eş-enfeksiyonları tespit edemezler; bu, Hindistan'da bildirilen %12,8 CHIKV-DENV ortak enfeksiyon oranı göz önüne alındığında önemli birdezavantajdır 3. Filogenetik izleme bir paradigma değişimini gösterir. Hindistan'ın 2019-2022 salgını sırasında baskın olan ECSA soyunu, zarf proteinlerinde yakınsak mutasyonlar edinmiştir: E1-A226V (sivrisinek enfeksiyonunu artıran) ve E2-K252Q (bağışıklık kaçışıyla ilişkili). Bu mutasyonlar, Kerala ve Maharashtra 3'teki son gözetim çalışmalarında bildirildiği gibi, belgelenmiş daha yüksek virülanslı bir genotipe yolaçmıştır. Aynı zamanda, Çin, Yunnan salgınında belgelenen ECSA genotipinin ithalatı ve Yunnan4 dahil olmak üzere birçok eyalette otoxton bulaşma rapor edilen diğer genotipler nedeniyle zorluklarla karşı karşıya.

Bu gerçekler, (i) örtüşen klinik belirtilere rağmen ayırıcı tanı5, (ii) geleneksel gerçek zamanlı nicel PCR (qPCR) için genellikle gereken enstrümantasyon karmaşıklığını ortadan kaldıran tanı testleri6 ve (iii) RT-LAMP ve CRISPR tabanlı yöntemler dahil olmak üzere yeni bakım noktası teknolojilerinin kapsamlı doğrulaması 5 için acil ve kaynak sınırlı ihtiyaçlaryaratmaktadır. Bu tanı zorluklarını gidermek için, tam otomatik entegre sistem kullanan hızlı bir üçlü PCR testi öneriyoruz; böylece CHIKV, DENV ve ZIKV'nin tek bir reaksiyonda eşzamanlı olarak tespit edilmesini sağlamaktadır. Triplex qPCR testimizin performansını, referans standardı olarak hizmet veren yerleşik singleplextestler 5 ile doğrudan karşılaştırarak doğruladık. Aşağıdaki bölümler, hem üçlü analiz hem de referans tekli testler için prosedürleri ayrıntılı olarak belirtir. Her iki yöntemin sonuçları karşılaştırmalı analizi Temsilci Sonuçlar bölümünde sunulmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin'in Guangzhou kentindeki Southern Medical University Southern Medical University Guangdong İl Halk Hastanesi Etik Komitesi tarafından belirlenen etik kurallara (onay no: KY2025-510-01) uyguludur. Bu araştırmada kullanılan malzemelerle ilgili ayrıntılı bilgiler (reaktifler, kimyasallar, ekipman ve yazılımlar) Malzemeler Tablosu'nda bulunabilir.

1. Katılımcı seçimi

  1. 18 ila 60 yaş aralığındaki katılımcıları seçin.
  2. Belirti başlandıktan sonraki 12 gün içinde akut ateşli hastalık (aksiller T ≥ 38 °C) ile başvuran, ayrıca döküntü, artralji veya servikal lenfadenopati ile birlikte chikungunya-endemik bölgelere yakın zamanda seyahat eden katılımcıları seçin; veya aynı seyahat geçmişine sahip semptomatsız bireyler.
  3. Dışlama: 7 gün içinde antimikrobiyal/antiviral kullanım veya HIV veya malignite doğrulanmasına bağlı ateş hastalığı.

2. Örnek toplama ve işleme

  1. Örnekleme kutusunun dış ambalajının zarar görmediğini ve süresi dolmadığını kontrol edin, ardından iç malzemeleri çıkarın.
  2. Kolunu uzatarak konuyu konumlandırın. Median kubital ven tespit edilsin, turnike uygulanın ve venipunktur bölgesini %70 alkollü sürüntüyle dezenfekte edin.
  3. Antikoagülantsız kan toplama tüpü kullanarak konunun antekubital damarından 1~3 mL kan toplayın.
  4. Tüpü nazikçe 5-8 kez ters çevirin ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca pıhtılaşmasına izin verin.
  5. Kan örneğini 4 °C'de, 1000 x g bir santrifüjde 10 dakika boyunca santrifüj yapın. Santrifüjlemeden sonra elde edilen serum örneği hemen test edilebilir.
  6. Süpernatan serumu dikkatlice steril mikrosantrifüj tüplerine aliquot yapın. Serumu hemen test için kullanın veya alikotları -80 °C'de saklayarak patojen nüklein asitlerinin qPCR ile daha fazla analizine kadar saklanın.

3. CHIKV, DENV ve ZIKV'nin Otomatik Triplex qPCR Tespiti

  1. Reaktif ve tüp hazırlığı
    1. Gerekli tüm reaktifleri depodan alın ve oda sıcaklığında eritin.
    2. Her mühürlü TD tespit tüpünü hasar veya sızdırmazlık açısından görsel olarak inceleyin. Zararlanmış tüpleri at.
    3. Homojenliği sağlamak için TD nüklein asit ekstraksiyon tamponunu 5 saniye kısa bir süre girdabla vurun.
    4. Homojenleştirilmiş tampondan 500 μL aseptik olarak TD ekstraksiyon reaktif tüpüne (mor dondurulmuş manyetik boncuklar içeren) dağıtılır.
    5. Karışımı 30 saniye boyunca güçlü bir şekilde vortex edin, ta ki tüm bileşenler tamamen çözünene ve boncuklar tamamen yeniden askıya alınana kadar.
    6. Tüm yeniden oluşturulmuş çözeltiyi önceden etiketlenmiş bir TD tespit tüpüne aktarın.
  2. Örnek yüklemesi
    1. 200 μL şeffaf, hemolizsiz ve lipemik olmayan serumu hazırlanmış TD tespit tüpüne pipet yapın.
    2. Tüpü sıkıca kapatın ve homojen karıştırmak için on kez ters çevirin.
      NOT: Ters çevirme sırasında, parafin tabakasının tüp içinde kısa bir süre süzülmesine izin verin. Bu sürecin normal bir parçasıdır.
  3. Enstrüman çalışması ve veri toplama
    1. Mühürlü algılama tüplerini analizörün belirlenmiş yuvalarına yerleştirin.
    2. Dokunmatik ekran arayüzünde örnek tanımlama bilgilerini girin.
    3. Tam otomatik, kapalı tüp iş akışını başlatmak için Start Detection tuşuna basın.
      NOT: Sistem, daha fazla kullanıcı müdahalesi olmadan otomatik olarak barkod tarama , manyetik boncuk yakalama ile nüklein asit çıkarımı ve floresans PCR amplifikasyonu gerçekleştirecektir. Standart program, 3 dakika boyunca 95 °C'de denatürasyon adımı ve ardından 40 döngü amplifikasyon içerir.
  4. Sonuç yorumu
    1. Çalışma tamamlandıktan sonra, tüm üç hedefin (CHIKV, DENV, ZIKV) amplifikasyon sonuçlarını ve dahili kontrolü aynı ekranda izleyin.
    2. Her hedef patojen için otomatik olarak oluşturulan "Pozitif", "Omuz" veya "Geçersiz" okumasını ilgili floresan kanalında kaydedin.
      NOT: Sistemin dahili yazılımı otomatik yorumlama için 37.0 çevrim eşiği (Ct) kullanır. Manuel veri analizine gerek yoktur.

4. Metod karşılaştırması için Singleplex qPCR testlerine referans verin

  1. Nüklein asit ekstraksiyon reaktiflerinin hazırlanması
    1. Setten önceden paketlenmiş 96 kuyu tabağı çıkarın. 96 kuyu plakaya nazikçe dokunarak reaktifler ve manyetik boncuklar 96 kuyu plakanın altına yoğunlaşır. Alüminyum folyo kaplama filmini dikkatlice koparın, 96 kuyu plakanın titreşimini önleyerek sıvının dışarı sıçramasını önleyin.
    2. 96 kuyuklu bir plakanın 1. ve 7. sütunlarında, önce 20 μL proteinaz K eklenir, ardından çıkarılacak örnekten 200~300 μL gelir.
    3. Otomatik Nükleik Asit Ekstraksiyonu (Manyetik Boncuk Tabanlı Yöntem)
      1. Önceden paketlenmiş 96 kuyuyla plakalar (örneklerle) otomatik nükleik asit çıkarıcı sisteminin ilgili yuvalarına yerleştirilir.
      2. Nükleik asit çıkarma süreci şöyledir: Laboratuvar odasının içindeki manyetik çubukla nükleik asite bağlı manyetik boncukları adsorbe etmek. Boncuk kompleksini bir sonraki belirlenmiş reaktif deliğine aktarın. Karıştırma cihazını aktive ederek sıvıyı manyetik boncuklarla iyice karıştırarak hızlı ve tekrar tekrar karıştırın. Otomatik nükleik asit çıkarıcısının aşağıdaki adımları otomatik olarak gerçekleştirmesine izin verin: i) Hücre Lizisi: 25 °C'de 10 dakika. ii) Nükleik Asit Adsorpsiyonu: 70 °C'de 15 dakika, manyetik adsorpsiyon 3 kez gerçekleştirilir. iii) Yıkama: 2 dakika karıştırın (3 kez tekrarlanarak), ardından manyetik adsorpsiyon iki kez (her biri 15 saniye) uygulanır. iv) Elusyon: İki kez (her biri 5 dakika) gerçekleştirilir, manyetik adsorpsiyon 3 kez gerçekleştirilir. Sonunda, yüksek saflıkta nüklein asitler elde edilir.
    4. Hemen tespit için, 6. ve 12. sütunlardan nüklein asit içeren eluatı doğrudan aspire edin. Uzun süreli depolama için, kalan nüklein asit örnekleri -20°C'ye aktarılır.
  2. Amplifikasyon reaktiflerinin hazırlanması
    NOT: Singleplex PCR reaksiyonu için, üç farklı enzim ve üç karşılık gelen reaksiyon karışımı kullanılarak üç ayrı PCR tüpü hazırlanın. Reaktif hazırlığını üç ayrı adımda tamamla. Hazırlık adımları benzer olduğundan, aşağıda sadece CHIKV tespit reaktifinin hazırlık adımlarını göstereceğiz.
    1. Kitten nükleik asit amplifikasyon reaksiyon çözeltisi ve CHIKV reaksiyon çözeltisi (CHIKV'ye özgü primerler/problar) çıkarılır. Çözüldükten sonra, 22~25 °C ortamına yerleştirin, sertçe çalkalayarak iyice karıştırın ve ardından kısa bir santrifüj (1000 x g, 15 s, 22~25 °C) gerçekleştirin.
    2. Toplam reaksiyon sayısını N + 2 olarak hesaplayın (burada N = test örnekleri sayısı, +2 = bir negatif ve bir pozitif kalite kontrolü). Her reaksiyon için şunları birleştirerek uygun boyutta bir mikrosantrifüj tüpünde Ana Karışımı hazırlayın: 17 μL Nüklein Asit Amplifikasyon Reaksiyon Çözeltisi (Tampon, dNTP, DNA Polimeraz, UDG Enzimi içerir), 3 μL CHIKV Reaksiyon Çözeltisi (primerler, CHIKV hedef genleri için problar ve IC içerir). Master Mix'i iyice vortex ile karıştırarak tam bir karışım sağlanır. Tüpü 10.000 x g ile 15 saniye boyunca oda sıcaklığında (22~25 °C) kısa bir süreliğine santrifüjle ederek dipten gelen çözeltiyi toplayın. Her PCR reaksiyon tüpüne 20 μL Master Mix verin.
    3. Nüklein asit ve kalite kontrol örnekleri ekleyin: Yukarıda hazırlanan PCR reaksiyon tüplerine (20 μL) sırasıyla test edilen örneklerden, pozitif kontrol ve negatif kontrol örneklerinden 5 μL nükleik asit eklenerek tüp başına 25 μL nihai hacmi elde edilir; tüpleri sıkıca kapatıp anında santrifüj (1000 x g, 15 s, 22 ~25 °C) gerçekleştirin ve ardından tüpleri PCR cihazına yerleştirin.
  3. PCR amplifikasyonu
    1. Bisiklet programını şu şekilde ayarlayın: Önceden denatürasyon: 50 °C 15 dakika, ardından 95 °C 15 dakika (her iki adım birlikte 1 döngü oluşturur); 40 döngü için aşağıdaki 2 adım: 15 saniye için 94 °C denatürasyon ve 45 saniye için 55 °C tavlama.
    2. Floresans sinyal algılama parametrelerini şu şekilde ayarlayın: CHIKV genlerinin FAM floresan etiketlenmesi; IC geninin VIC floresan etiketlemesi kitin iç kontrolü olarak kullanıldı. 55 °C'de veri toplayın. Reaksiyon tamamlandıktan sonra, verilerin gelecekteki analizler için saklandığından emin olun.
    3. qPCR'ye özgü yazılım kullanarak verileri analiz etmek
      1. Örnek bilgileri: Yazılımın kuyu plakası düzen diyagramında, örnek yükleme pozisyonlarına karşılık gelen örnek türlerini (örneğin, pozitif kontrol, negatif kontrol, bilinmeyen örnek, iç referans gen vb.) etiketleyin.
      2. Reaksiyon tüplerinin yerleştirilmesi: Cihazın ısıtma modülünün kapağını açın, mühürlenmiş PCR plakasını/tüplerini sağlam şekilde içine yerleştirin, ısıtma modülüyle yakından oturduğundan emin olun ve modül kapağını sıkıca kapatın (sıcaklık dengesizliğini önlemek için)
      3. Tepkinin başlatılması: Yazılımdaki program ayarlarının doğru olduğundan emin olduktan sonra, Başlat Çalıştır tuşuna tıklayın ve deney kimliğini gelecekte kullanmak üzere kaydedin.
      4. Çalışmayı durdurmak ve tüpleri çıkarmak: Program tamamlandıktan sonra, ısıtma modülünün sıcaklığı 50 °C'nin altına düşene kadar bekleyin. Sonra kapağı açın ve PCR plakasını veya tüplerini dikkatlice çıkarın. Gerekirse aşağı akış analizi veya örnek depolama işlemlerine devam edin.
      5. Veri Analizi Analize geçmeden önce, şu doğrulamaları doğrulayın: i) Tüm örnekler ve iç kontrol için amplifikasyon eğrileri karakteristik olarak S-şeklinde olur; ii) Flüoresans eşiği üstel faz içinde belirlenir ve 38 döngü ≤ Ct değerleri verir (CV %5< kadar); iii) Kontrol sonuçları geçerli, bu da kontaminasyon olmadığını gösterir. Herhangi bir koşul karşılanmazsa veya bir örnek anormal amplifikasyon gösterirse (örneğin, atipik bir eğri veya kritik aralık Ct), tüm parti veya özel numune buna göre tekrar kontrol edilir.
      6. Ham veriyi yazılımla işleyerek otomatik seçilen eşik kullanarak Ct değerlerini belirlemek; bir örnek, Ct < 38 ve amplifikasyon eğrisi sigmoidal bir şekil sergiliyorsa pozitif kabul edilir.

5. Biyogüvenlik ve atık bertaraf

  1. Tüm malzemeleri belirlenmiş, delinmeye dayanıklı bir biyotehlike konteynerine aktarın ve nihai bertaraftan önce kurumsal tıbbi atık sistemiyle otoklavlama ile dezinasyon yapın. Bu malzemeleri hemen yüksek riskli atık için etiketlenmiş sızdırmaz, delinmeye dayanıklı bir biyolojik tehlike konteynerine aktarın. Kurumsal yönergelere uygun olarak, amplifikasyon ürünü içeren tüm atıkları otoklavlama yoluyla (örneğin, 30 dakika boyunca 121 °C) dezinfekte ederek patojenleri etkisiz hale getirin ve nükleik asitler parçalanın. Son olarak, sterilize edilmiş atıkları belirlenmiş tıbbi atık yönetim sistemi aracılığıyla bertaraf edin.
    NOT: Tüm adımları Biyogüvenlik Seviye 2 (BSL-2) uygulamalarına uygun şekilde gerçekleştirin, maruziyet risklerini en aza indirmek için uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Üçlü PCR tespit sisteminin stabilitesini ve doğruluğunu doğrulamak için, dahili laboratuvarımızdan beş klinik temsilci örnek ve doğrulama için on harici EQA kör örnek seçtik. Bu beş temsil klinik örnek, testin klinik uygulanabilirliğini göstermek ve test performansının iç doğrulanmasını desteklemek için seçilen CHIKV ve DENV için pozitif örnekler dahil olmak üzere hem negatif hem de pozitif vakaları (S1-S5) içerir (Tablo 1). 2025 EQA kör numune paneli, yeni sivrisinek kaynaklı patojenler için 10 inaktive...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CHIKV, Togaviridaeailesinin alfavirüs cinsi içinde sınıflandırılan pozitif anlamlı, tek zincirli bir RNA virüsüdür 7. Hızlandırılmış küresel ısınma, yoğunlaşan uluslararası ticaret ve genişleyen turizm ağları, insanın arboviral tehditlere maruz kalma riskini toplucaartırmıştır 8. Son on yılda, moleküler tanının hızlı evrimi, enfeksiyon hastalıkları yönetimi alanını kökten değiştirdi. Bu teknolojiler arasında, qPCR Çin genelinde klinik labor...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını belirtirler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Guangdong Tıbbi Araştırma Vakfı (A2025034) tarafından finanse edilmiştir. Fon sağlayıcıların çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlama kararı veya makalenin hazırlanmasında hiçbir rolü yoktu.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Otomatik nükleik asit çıkarıcıDAANSmart 32DNA çıkarımı için
BECKMAN X-12BECKMANALA04H01For  serum santrifüjasyonu 
BSC-1500IIA2-XBIYOBAZSEDA 20143222263Biyogüvenlik kabini
E-SantrifüjWEALTECGeriye kalan sıvıyı tüpün duvarından santrifüjle yapın
Tam otomatik tıbbi PCR analizörüBioustar‌  UP0102Fluoresan nicel PCR amplifikasyonu
Chikungunya virüsü için nükleik asit tespit kiti (PCR-floresan prob yöntemi)DAAN 20250804Tespit/nbsp; Chikungunya Virüsü Genleri
Dengue virüsü için nükleik asit tespit kiti (PCR-floresan prob yöntemi)DAAN 202504003Tespit/nbsp; Dengue virüsü genleri
Dengue virüsü, Zika virüsü ve chikungunya virüsü için nüklein asit tespit kiti (PCR-floresan prob yöntemi)Bioustar‌  20250724Tespit/nbsp; Deng virüsü, Zika virüsü ve chikungunya virüsü genleri
Zika virüsü için nükleik asit tespit kiti (PCR-floresan prob yöntemi)DAAN 202508041Zika virüsü tespiti  Genler
Nüklein asit ekstraksiyon kitiDAANNüklein asit çıkar
SLAN Tam otomatik tıbbi PCR analiz sistemiHONGSHIVeri Analizi
SLAN-96S Gerçek Zamanlı PCR makinesiHONGSHISLAN-96SFluoresan nicel PCR amplifikasyonu
Ultra düşük sıcaklıklı dondurucular (DW-YL450)MELINGSEDA 20172220091-20 derece ve derece; Reaktifleri depolamak için C
Vortex-5Kylin-bellKarıştırma reaktifi için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chikungunya epidemiology update - June 2025. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/m/item/chikungunya-epidemiology-update-june-2025 (2025).
  2. Li, Y., Chen, H., Wang, J., Zhang, X., Liu, B. Notes from the field: An outbreak of chikungunya fever in China - Foshan City, Guangdong Province, China, July 2025. Curr Med Sci. 7, 1064-1065 (2025).
  3. Naren Babu, N., et al. Clinical and molecular epidemiology of chikungunya outbreaks during 2019-2022 in India. Sci Rep. 15, 27280(2025).
  4. Liu, L. B., et al. Epidemiological and clinical characteristics of the chikungunya outbreak in Ruili City, Yunnan Province, China. J Med Virol. 94, 499-506 (2021).
  5. Cardona-Trujillo, J. D., Ocampo-Cárdenas, T., Tabares-Villa, F. A., Zuluaga-Vélez, A., Sepúlveda-Arias, J. C. Recent molecular techniques for the diagnosis of Zika and chikungunya infections: A systematic review. Heliyon. 8, e10225(2022).
  6. Hauner, A., et al. Technical validation of a multiplex real-time PCR for combined detection of Rift Valley fever, chikungunya, Zika and dengue viruses. J Virol Methods. 337, 115174(2025).
  7. Burt, F. J., et al. Chikungunya virus: An update on the biology and pathogenesis of this emerging pathogen. Lancet Infect Dis. 17, e107-e117 (2017).
  8. de Souza, W. M., et al. Chikungunya: A decade of burden in the Americas. Lancet Reg Health Am. 30, 100673(2024).
  9. Laurent, P., et al. Development of a sensitive real-time reverse transcriptase PCR assay with an internal control to detect and quantify chikungunya virus. Clin Chem. 53, 1408-1414 (2007).
  10. Pongsiri, P., Praianantathavorn, K., Theamboonlers, A., Payungporn, S., Poovorawan, Y. Multiplex real-time RT-PCR for detecting chikungunya virus and dengue virus. J Trop Med. 5, 342-346 (2012).
  11. Santiago, G. A., et al. Performance of the Trioplex real-time RT-PCR assay for detection of Zika, dengue, and chikungunya viruses. Nat Commun. 9, 1391(2018).
  12. Kanti, D., et al. Simultaneous detection of Zika, chikungunya and dengue viruses by a multiplex real-time RT-PCR assay. J Clin Virol. 83, 66-71 (2016).
  13. Waggoner, J. J., et al. Single-reaction multiplex reverse transcription PCR for detection of Zika, chikungunya, and dengue viruses. Emerg Infect Dis. 22 (7), 1295-1297 (2016).
  14. Souza, J. V. C., et al. Viral metagenomics for the identification of emerging infections in clinical samples with inconclusive dengue, Zika, and chikungunya viral amplification. Viruses. 14, 1933(2022).
  15. Berrueta, M., et al. Safety, immunogenicity, and effectiveness of chikungunya vaccines in pregnant persons, children, and adolescents: A protocol for a living systematic review and meta-analysis. Reprod Health. 22, 56(2025).
  16. Lura, T., et al. A validated triplex RT-qPCR protocol to simultaneously detect chikungunya, dengue and Zika viruses in mosquitoes. J Vector Borne Dis. 59, 198-205 (2022).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Triplex PCRPoint Of Care TestingChikungunya DetectionDengue DetectionZika Virus DetectionTaqMan ProbesArbovirus CoinfectionqPCR MethodFebrile Illness MonitoringRapid Virus Detection
Video Coming Soon

Related Articles