Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnsan Rahim Organoidlerinin Üretimi ve Genetik Manipulyasyonu

731 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/69617

⸱

10 Mart 2026

 ,  ,  , 
1Department of New Biology, DGIST, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University Chilgok Hospital, 3Clinical Omics Institute, Kyungpook National University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University School of Medicine, 5New Biology Research Center, DGIST, 6Graduate Program in Biomedical Science & Engineering, DGIST

Bu makalede

Özet

İnsan servikal organoidlerini oluşturmak ve genetik olarak manipüle etmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Özet

Rahim ağzı kanseri, kadınlarda en yaygın dördüncü kanserdir ve en sık rahim ectoserviksini etkiler. Rahim ektoserviks, bazal hücreleri ve farklılaşan parabazal ile suprabazal hücrelerden oluşan tabakalı skuamöz epitelyumla kaplıdır. Rahim ağzının konizasyonundan sonra gözlemlenen yenilenme, sağlam kök hücre aktivitesinin varlığını göstermektedir. Ancak, servikal kök hücrelerin kimliği ve düzenleyici mekanizmaları ile malign dönüşüm süreci hakkındaki anlayışımız, insan servikal dokularına erişimin sınırlı olması ve rahim ektoserviksinde kök hücre aktivitesini değerlendirmek için optimal sistemlerin eksikliği nedeniyle sınırlı olmuştur. Yakın zamanda kurulan insan servikal organoidleri, bu sınırlamaların aşılmasına yardımcı olabilir ve servikal fizyolojisi ile patolojisi incelemek için yeni fırsatlar sunabilir. Ancak, insan servikal organoidlerini izole etmek ve tesis etmek için standart bir yöntem yoktur. Burada, insan ektoservikal organoidlerinin oluşturulması için bir yöntem tanımlıyoruz. Özellikle, insan ektoservikal epitelinden tek hücreleri izole etmek için bir protokol sunuyoruz. Optimize edilmiş bir enzim çözeltisiyle servikal dokuyu inkubasyon yaparak, rahim epitelini soyarak hücre verimini maksimize eder ve fibroblast kontaminasyonunu en aza indiririz. İnsan servikal organoidlerinin optimize edilmiş bir ortam formülasyonu kullanılarak kültürlenmesi koşullarını daha ayrıntılı olarak özetliyoruz. Ayrıca, servikal organoidlerin geçişi ve genetik olarak manipülasyonu prosedürlerini detaylandırıyoruz. Bu protokol, insan servikal organoidlerini oluşturmak ve bunları servikal kök hücreler ile hastalıkları incelemek için kullanmak için son derece verimli bir yaklaşım sunar.

Giriş

Rahim ectoserviks, rahim kanseri 1,2 için en yaygın bölgedir. Gelişmiş ülkelerde insan papilloma virüsü (HPV) aşısının uygulanmasından sonra rahim ağzı kanseri azalmış olsa da, dünya genelinde kadınlar arasında en yaygın dördüncü kanserolmaya devam etmektedir 3,4. Ayrıca, bazı ülkelerde rahim ağzı önkanser lezyonları sıklığı artmayadevam etmektedir 5,6. Düşük dereceli skuamöz intraepitelyal lezyon (LSIL) genellikle kendi kendine gerileşirken, yüksek dereceli skuamöz intraepitelyal lezyon (HSIL) invaziv kansere ilerleme riski taşır ve genellikle eksizyon veya konizasyon gibi cerrahi müdahale gerektirir. Bu işlemler ektoserviksi kısaltabilir ve düşük veya erken doğum riskiniartırabilir 7,8. Servikal biyolojinin daha derin bir anlaşılması ve rejeneratif terapinin geliştirilmesi, bu zorlukların üstesinden gelinmeye yardımcı olabilir ancak sağlam ve fizyolojik olarak ilgili model sistemleri gerektirir.

Hayvan modelleri, servikal homeostaz, hastalık mekanizmaları ve terapötik stratejiler konusundaki anlayışımızı önemli ölçüde geliştirmiştir. Ancak, insan biyolojisi ve patolojisinden doğasında olan farklılıkları, translasyon değerlerini sınırlar. Alternatif olarak, organoidler insan biyolojisi ve hastalıklarını modellemek için güçlü platformlar olarak ortaya çıkmıştır. Organoidler, kök hücrelerden türetilen 3 boyutlu mikroyapılardır ve köken dokularının histolojisini ve molekülerimzalarını tekrarlar; 9,10,11. Trakea, yemek borusu ve rahim ağzı 12,13,14 dahil olmak üzere birden fazla dokuda çeşitli insan dokusu kök hücrelerini tanımlamak için kullanılmıştır. Ayrıca, organoitler genetik manipülasyonu mümkün kılarak kanser ve fibroz dahil olmak üzere çeşitli hastalıkların patogenezimodellenmesine olanak tanır 15,16,17. Ayrıca, organoidler, ilaçların veya hücre tedavilerinin etkinliği ve toksisitesini taramak için etkili bir platform olarak hizmeteder (18,19,20,21).

Son zamanlarda, iki bağımsız grup insan servikal organoidsistemlerini kurdu 22,23. Bu gelişmeler üzerine inşa edilerek, servikal organoid kültürünün verimliliğini önemli ölçüde artırdık ve insan servikal kök hücrelerini tespitettik. Ayrıca, servikal epitelin soyulmasıyla, servikal epitelin altındaki fibroblastların dahil edilmesini en aza indirdik. Genetik manipülasyonla servikal organoidleri kullanarak, mikrobiyal metabolitlerin ve onların sonraki yollarının servikal homeostazı korumada ve kanser öncesi ilerlemeyi önlemede rolünü ortaya çıkardık. Böylece, servikal organoidlerin üretimi, bakımı ve genetik olarak modifiye edilmesi için standartlaştırılmış ve optimize edilmiş bir protokol, servikal biyolojisi ve patolojisini incelemek için vazgeçilmez bir araç olarak hizmet edecektir.

Bu makalede, insan servikal organoidlerinin üretimi ve geçişi için ayrıntılı ve optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz. Ayrıca elektroporasyon yoluyla genetik manipülasyon için bir protokol de açıklıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Hücre izolasyonu ve organoid kültürü, insan servikal dokuları kullanılarak DGIST, Daegu, Kore ve Chilgok Kyungpook Ulusal Üniversite Hastanesi, Gyeongsangbuk-do, Kore'nin iç inceleme kurulları tarafından tüm ilgili etik düzenlemelere uygun olarak onaylanmış ve yürütüldü (DGIST-20210401-BR-112-001 ve KNUCH-2020-020-001). İnsan ektoservikal dokuları, Chilgok Kyungpook Ulusal Üniversite Hastanesi Doğum ve Jinekoloji Bölümü tarafından sağlanmıştır. İyi huylu rahim hastalıkları için total laparoskopik histerektomi geçiren hastalardan sağlıklı servikal dokular elde edildi. Tüm hastalardan bilgilendirilmiş onay alındı.

1. Ektoservikal dokulardan tek hücreli izolasyon

NOT: Bu protokol, yaklaşık 5 mm × 5 mm × 5 mm boyutlarında bir insan ektoserviks biyopsisi örneğiyle başlar (Şekil 1).

  1. Biyopsi yapılan dokuyu 10 cm'lik bir Petri kabına yerleştirin ve bir kez buz gibi DPBS (kalsiyum ve magnezyum içermeden) ile yıkayarak kan ve kalıntıları temizleyin.
    NOT: İnsan servikal dokuları, buz gibi Advanced DMEM/F12 ile ameliyattan sonra 3 saat içinde laboratuvara taşındı ve hemen geliş işlemi yapıldı.
  2. Doku, 1 mL Dispase solüsyesi (2.4 U/mL) içeren 1,5 mL tüpe aktarın ve tüp rotatörü (20 rpm) üzerinde hafif çalkalama ile 37 °C'de 1 saat kuluçka yapın.
    NOT: Dispase çözeltisi (2.4 U/mL), kullanımdan hemen önce Dispase tozu buz gibi soğuk DPBS'de çalışma konsantrasyonuna çözülerek taze hazırlanmıştır.
  3. Örneği yeni 10 cm'lik Petri kabına aktarın. Beyaz epitel tabakasını forseps kullanarak dokudan dikkatlice ayırın.
  4. Epitel yüzeyini sağlam bir tabaka olarak nazikçe soymak için keskin forseps kullanın. İzole epitel tabakasını hemen buzda tutulan 50 mL'lik konik bir tüpe aktarın.
    NOT: Yüzey epiteli kolayca soyulmazsa, yüzeyi kör uçlu forsepsle kazıyın.
  5. Soyulmuş veya kazımış numuneye 1 mL rekombinant tripsin bazlı dissosiyasyon solüsyesi ekleyin ve tüm karışımı 50 mL'lik konik bir tüpe aktarın.
  6. Önceki adımdan kalan dokuyu diğer 50 mL konik tüpte tutun.
  7. 50 mL konik tüpü servikal epitelini içeren 37 °C'de 5 dakika boyunca tüplü rotator üzerinde hafif bir çalkalama ile (20 rpm) inkübe edin.
  8. Hücre süspansiyonuna 10 mL taze hazırlanmış buz gibi soğuk Bloklayıcı Tampon (%2 sığır buzağı serumu (BCS) ile PBS) ekleyin ve enzimatik reaksiyonu durdurun.
  9. Tüpü 450 × g ile 5 dakika boyunca 4 °C'de santrifüj yapın. Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve atın.
    NOT: Dissosiyasyon yapmış dokuda kan görsel olarak gözlemleniyorsa veya doku yapışkan görünüyorsa, aşağıdaki adıma devam edin. Aksi takdirde, 1.13. adıma geçin.
  10. Pellete 1 mL 1X RBC lizis tamponu ve 20 μL DNaz (10 U/μL stok) ekleyin. Oda sıcaklığında 5 dakika kuluçka yapın, kırmızı kan hücrelerini lizize edin ve yapışkan DNA'yı parçalayın.
  11. Enzimatik reaksiyonu durdurmak için hücre süspansiyonuna 10 mL buz soğukluğu Bloklayıcı Tampon (%2 sığır buzağı serumu (BCS) ile PBS) ekleyin.
  12. Tüpü 450 × g sıcaklığında 4 °C'de 5 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve atın.
  13. Hücre pelletini buz gibi Bloklama Tamponu (PBS, %2 sığır buzağı serumu (BCS) ile) yıkayın.
  14. Tüpü 450 × g'de 5 dakika boyunca santrifüj yapın. Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve atın.
  15. Hücre pelletini 200-500 μL organoid kültür ortamında yeniden süspansiyona alın.
  16. Hücre sayısını tripan mavi çözeltisi ile hemositometre kullanarak sayın. Beklenen hücre verimi, biyopsi örneğinde 50.000 ile 500.000 hücre arasındadır.

2. Ektoservikal organoid tohumlama ve kültür

  1. 500-2.000 canlı hücreyi, 50 μL organoid kültür ortamı (Materyal listesinde tanımlanan bileşim) son hacmde 1,5 mL mikrosantrifüj tüpünde yeniden askıya alın. Hücre canlılığı, tohumlamadan önce trypan blue dışlanması ile değerlendirildi.
  2. Hücre süspansiyonuna 50 μL bazal membran matrisi (örneğin, Matrigel) eklenin. Baloncuk oluşumunu önlemek için buz üzerinde nazikçe karıştırın ve 100 μL karışımı 24 kuyruklu bir plakaya yerleştirilen hücre kültürü insertinin içine dağıtın. Bazal zar matrisi ile ilgili tüm işlemler, aksi belirtilmedikçe erken jelleşmeyi önlemek için buz üzerinde veya 4 °C'de gerçekleştirilmiştir.
  3. Tabağı 37 °C'de 20-30 dakika kuluçka yapın, ta ki bazal membran matris-hücre karışımı katılaşına kadar.
  4. Karışım katılaştıktan sonra, insertin altındaki deliğe 400 μL organoid kültür ortamı ekleyin.
  5. Organoidleri 1-2 hafta boyunca kültürleyin, ortalama çapları 150-250 μm (maksimum çapı yaklaşık 500 μm) ulaşana kadar.
    NOT: Organoidler uygun boyuta ulaştığında ve soğan kabuğu benzeri mikroyapıların konsantrik lamellar desenini gösterdiğinde, gerekirse geçişi düşünün.

3. Organoid ayrıştırma ve yeniden tohumlama

  1. Hücre kültürü insertinin üzerine 1 mL Dispaz solüsyesi (2.4 U/mL) ekleyin ve bazaz membran matrisini pipet kullanarak nazikçe ayırın.
  2. Dispase-bazsal membran matris karışımını 15 mL'lik bir tüpe aktarın ve 37 °C'de 1 saat kuluçka yapın.
  3. Hücre süspansiyonuna 10 mL taze hazırlanmış buz gibi soğuk Bloklayıcı Tampon (%2 sığır buzağı serumu (BCS) ile PBS) ekleyin ve enzimatik reaksiyonu durdurun.
  4. Tüpü 450 × g ile 5 dakika boyunca 4 °C'de santrifüj yapın.
  5. Süpernatantı çıkarın ve pelleti 200 μL TrypLE Express ile yeniden süspansiyona alın.
  6. 37 °C'de 5 dakika kuluçka yapın.
  7. 1 mL buz soğukluğu engelleyici tampon (%2 sığır buzağı serumu (BCS) ile PBS) ekleyin ve enzimi nötralize etmek için nazikçe pipetleyin.
  8. Süspansiyonu 40 μm hücre süzgecinden filtreleyerek tek hücreler elde edin.
  9. Tüpü 450 × g sıcaklığında 4 °C'de 5 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve atın.
  10. Hücre pelletini 200-500 μL organoid kültür ortamında yeniden süspansiyona alın.
  11. Hücre sayısını tripan mavi çözeltisi ile hemositometre kullanarak sayın. Beklenen hücre verimi, 24 delikli hücre kültürü insertinin her kuyusu başına 50.000 ile 500.000 hücre arasındadır.
  12. Daha sonra 500-2.000 hücreyi 50 μL organoid kültür ortamında (Materyal listesinde tanımlanan bileşim) yeniden askıya alın. Hücre süspansiyonuna 50 μL bazaz zar matrisi ekleyin. Nazikçe karıştırın, baloncuk oluşumunu önleyin ve 100 μL'lik karışımı 24 kuyruklu bir plakaya yerleştirilen bir hücre kültürü insertinin içine dağıtın.
  13. Tabağı 37 °C'de 20-30 dakika kuluçka yapın, ta ki bazal membran matris-hücre karışımı katılaşına kadar.
  14. Karışım tamamen katılaştığında (genellikle 37 °C'de 20-30 dakika sonra), insertin altındaki deliğe 400 μL organoid kültür ortamı eklenir.
  15. Organoidler, 3D ekstrahücresel matriks-gömülü yöntemle organoid kültür ortamında (Materyal listesinde tanımlanan bileşim) 1-2 hafta boyunca kültürlenin. Nemlendirilmiş kuluçka makinesinde kültürleri 37 °C, %5 CO₂ içinde tutun. Ortamı her 2-3 günde bir değiştirin ve organoidler ortalama 150-250 μm çapa ulaşana kadar büyümeyi izleyin.
  16. Organoidler uygun boyuta ulaştıklarında bir sonraki tur için geçiş yapın ve gerekirse soğan kabuğu benzeri mikroyapıların konsantrik lameller desenini gösterin.

4. İnsan servikal organoidlerinin elektroporasyon ile genetik manipülasyonu

NOT: Bu protokol, Lonza Amaxa 4D-Nucleofector ve P4 Birincil Hücre 4D-Nükleofektor X Kiti (#V4XP-4032) kullanımına dayanmaktadır.

  1. İnsan servikal hücre süspansiyonundan izole edildikten sonra, her 1,5 mL'lik tüplere 100.000-200.000 hücre aktarılır.
  2. Tüpleri 450 × g'de 3 dakika boyunca 4 °C'de santrifüj yapın. Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve atın.
  3. Hücre pelletini, P4 Birincil Hücre 4D-Nükleofektor X Kit'inden 20 μL Nükleofektör Çözeltisi/Takviye karışımına yeniden süzülür. Karışım, tüp başına 16,4 μL Nükleofektör Çözeltisi ve 3,6 μL Takviye birleştirilerek hazırlanır.
  4. Yeniden askıya alınmış hücreleri içeren her tüpte kontrol veya hedef siRNA oligosundan 300 nM ekleyin. Nazikçe pipetle karıştırın.
    NOT: SiRNA oligosunun hacmi tüp başına 2 μL'yi aşmamalıdır.
  5. P4 Birincil Hücre 4D-Nükleofektor X Kit'inden elektroporasyon küveti damarlarına nükleofeksiyon karışımını dikkatlice aktarın (20 μL hücre Çözeltisi/Takviye karışımında yeniden süspansiyon hücreleri + 2 μL'ye kadar siRNA; toplam 20-22 μL).
  6. Nükleosut Damarlarına nazikçe dokunarak numunenin küvetin altını kapladığından emin olun.
  7. Nükleosevet Damarlarının kapağını kapatın ve onu güçlendirilmiş 4D Nükleofektor ünitesinin tutucusuna yerleştirin.
    NOT: Nükleoküvet Damarlarının retainer'deki doğru yönünü sağlayın.
  8. Nükleofeksiyon sürecini başlatın. Her küvet için EA-125 darbe kodunu P4 birincil hücre süreciyle ayarlayın.
  9. İşlem tamamlandıktan sonra, Nükleosuvette Damarları dikkatlice retainerden çıkarın.
  10. Nukleoküvet Damarlarını oda sıcaklığında 10 dakika kuluçka altına alın ki hücreler stabil hale gelsin.
  11. Nükleosut Kaplarının kapağını açın, her küvete 180 μL 37 °C önceden ısıtılmış organoid kültür ortamı ekleyin ve hücre süspansiyonunu nazikçe yeni bir 1,5 mL tüpte yeniden süspansiyon için aktarın.
  12. 500-2.000 hücre içeren bir hücre süspansiyon hacmi alın ve organoid kültür ortamında 50 μL nihai hacme kadar yeniden süspansiyona alın.
    NOT: 4.12. adımdan kalan hücreleri atmayın. 4.14. adımda kullanılacaklar.
  13. Organoidleri Yöntem 2: Ectoservvix Organoid Tohumlama ve Kültür protokolündeki protokolü takip ederek kültürleyin. SiRNA'nın etkilerini, ortaya çıkan organoidlerin sayısı, boyutu ve yapısı dahil olmak üzere çeşitli faktörleri değerlendirerek karşılaştırın.
  14. 4.12. adımdan kalan hücreleri 96 kuyruklu ultra düşük bağlantı plakasına dağıtın ve 37 °C'de 48 saat kuluçka yapın.
  15. 48 saat sonra hücreleri 1,5 mL bir tüpe aktarın ve 450 × g sıcaklığında 3 dakika boyunca santrifüj yapın. Üst yüzeyi at.
  16. Hücre pelletini gerçek zamanlı PCR deneyleri için kullanarak, hedef genlerin çöküşünü doğrulayın ve gen ifadesindeki değişiklikleri değerlendirin.
    NOT: Tüm insan servikal dokuları ve hücre süspansiyonları potansiyel olarak bulaşıcı madde olarak ele alınmalıdır. BSL-2 uygulamaları kapsamında ve kurumsal etik ve biyogüvenlik düzenlemelerine uygun olarak sertifikalı bir biyogüvenlik kabininde birincil insan örnekleriyle ilgili tüm işlemleri gerçekleştirmek. Uygun kişisel koruyucu ekipman (laboratuvar önlüğü, eldiven ve göz koruma) giyin ve kurum onaylı dezenfektan ile çalışma yüzeylerini ve ekipmanlarını dezenfekte edin. Enzimatik reaktifler (örneğin, TrypLE Express gibi dispaz ve dissosiyasyon enzimleri) cilt ve göz tahrişine neden olabilir ve pipetleme sırasında aerosol üretebilir; aerosol oluşumundan kaçının, mümkün olduğunca tüpleri kapalı tutun ve temas durumunda hemen suyla durulayarak kurumsal maruziyet prosedürleri ve üreticinin SDS rehberliğine uyun. Tüm biyolojik atıkları (matriks içeren malzemeler ve kirlenmiş plastikler dahil) kurumsal yönergelere uygun olarak bertaraf etmelidir. SiRNA elektroporasyonu için, üreticinin elektrik güvenlik talimatlarını takip edin: darbeleri başlatmadan önce küvetlerin doğru şekilde oturduğundan ve kapağın tamamen kapalı olduğundan emin olun, cihazı ıslak eldivenlerle veya dökülme yakınlarında çalıştırmaktan kaçının, cihazı ve aksesuarları hasar açısından kontrol edin ve darbe attıktan hemen sonra küvet elektrotlarıyla doğrudan temas etmeyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

3D İnsan servikal organoid kültürü

Taze izole edilmiş insan ektoservikal dokuları, yukarıda belirtilen sırayla tek hücrelere ayrılmış, ardından 24 delikli hücre kültürü insertlerinin üzerine örtülen ve bu protokolde belirtildiği gibi servikal organoidler oluşturulacak şekilde kültürlenmiştir (Şekil 1). İnsan servikal organoidleri tek hücrelerden 2 hafta içinde 500 μm çapa kadar büyür (Şekil 2A...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu el yazmasında, insan servikal organoidlerinin oluşturulması ve geçişi protokolünü anlatıyoruz. Ayrıca, onları genetik olarak manipüle etmek için bir protokol sağlıyoruz; bu da servikal biyolojisi ve patolojisi çalışmalarını önemli ölçüde ilerletiyor. Protokolü özellikle insan rahim servikal organoidleri için optimize etmiş olsak da, protokolümüz diğer organoid sistemlere de küçük değişikliklerle uygulanabilir.

Organoid kültürünü oluşturmak ve optimize etmek...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Hiçbiri yok

Teşekkürler

Bu çalışma, Sağlık ve Refah Bakanlığı'ndan (Y. Jeong için RS-2024-00439434) bir hibe ile desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
P4 Birincil Hücre 4D-Nükleofektör X KitiLonzaV4XP-4032
96 kuyuyla ultra düşük bağlantı plakasıSPL39796
Hücre süzcü 40 & mikro; mSPL93040
50 mL konik tüp 500/kutuSLPSPL50050
15 ml Konik tüpSarstedt62.554.502
CryoPure Tube 1.8 mL -beyazSarstedt72.379P
37 ve derece; C, %5 CO2  kuluçka makinesiEppendorf9734IQ905476
Hücre kültürü girişiSPL37024
Amaxa 4D-NükleofektörüLonzaAAF-1003X
Engelleme tamponu (DPBS'de %2 BCS)Gibco / WelgeneBCS: 26010074; DPBS: LB001-02
Dispase II tozuGibco17105041
DNAse IEnzimomiklerM059L
MatrigelCorning356231
RBC lizis tamponuBiosesangR2015
TrypLE ExpressGibco12605
Yıkama tamponu (HBSS)JBIBL003-1
İleri DMEM/F12Gibco12634028
GlutaMAX takviyesiGibco35050-061
Penisilin ve dash; StreptomisinBiowestL0022-100
HEPESGibco15630-080
B27 takviyesiGibco17504044
NogginPeproTech118214
N-asetil-l-sisteinSigmaA9165
Y-27632STEMCELL Teknolojileri72307
FGF2PeproTech100-18B-50UG
FGF7PeproTechAF-100-19-250UG
A83-01SelleckchemS7692 
ForskolinSigmaF6886
Neuregulin 1PeproTech100-03-50UG
NGFPeproTechAF-450-01-100UG
R-spondinSinobiyolojik11083-HNAS
HGFPeprotech100-39H-250ug
FGF10Peprotech100-26
Petridsimsi 35 mm SPL10035
organoid medya tarifi
İsimŞirketKatalog Numarasıkonsantrasyon
İleri DMEM/F12Gibco12634028
GlutaMAX takviyesiGibco35050-0611x
Penisilin ve dash; StreptomisinBiowestL0022-1001x
HEPESGibco15630-08010 mM
B27 takviyesiGibco175040441x
vitamini A olmadan
NogginPeproTech118214100 ng/ml
N-asetil-l-sisteinSigmaA91651 mM
Y-27632STEMCELL Teknolojileri7230710 uM
FGF2PeproTech100-18B-50UG50 ng/ml
FGF7PeproTechAF-100-19-250UG25 ng/ml
FGF10Peprotech100-26100 ng/ml
A83-01SelleckchemS7692 500 nM
ForskolinSigmaF688610 μ M
Neuregulin 1PeproTech100-03-50UG50 ng/ml
NGFPeproTechAF-450-01-100UG20 ng/ml
R-spondinSinobiyolojik11083-HNAS100 ng/ml
HGFPeprotech100-39H-250ug25 ng/ml

Kaynaklar

  1. Singh, D., et al. Global estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2020:a baseline analysis of the WHO Global Cervical Cancer Elimination Initiative. Lancet Glob Health. 11 (2), e197-e206 (2023).
  2. Worldwide cancer data. , World Cancer Research Fund International. https://www.wcrf.org/cancer-trends/worldwide-cancer-data/ (2022).
  3. Cohen, P. A., Jhingran, A., Oaknin, A., Denny, L. Cervical cancer. Lancet. 393 (10167), 169-182 (2019).
  4. Kwak, K., Hwang, S. S. Predicted cervical cancer prevention: impact of National HPV Vaccination Program on young women in South Korea. Cancer Res Treat. 56 (3), 898-908 (2024).
  5. Kim, J., Lee, D., Son, K. B., Bae, S. The burden of cervical cancer in Korea:a population-based study. Int J Environ Res Public Health. 17 (17), 6308(2020).
  6. Chang, H. K., Seo, S. S., Myong, J. P., Yu, Y. L., Byun, S. W. Incidence and costs of cervical intraepithelial neoplasia in the Korean population. J Gynecol Oncol. 30 (3), e37(2019).
  7. Anwar, A., et al. Pregnancy outcome after electrosurgical cervical cone biopsy using Fischer cone biopsy excisor. J Matern Fetal Neonatal Med. 29 (3), 477-481 (2016).
  8. Pils, S., Eppel, W., Seemann, R., Natter, C., Ott, J. Sequential cervical length screening in pregnancies after loop excision of the transformation zone conisation: a retrospective analysis. BJOG. 121 (4), 457-462 (2014).
  9. Lee, C. J., Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. Advanced animal replacement testing strategies using stem cell and organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 107-125 (2025).
  10. Jeong, Y. Methods to identify epithelial stem cells. Organoid. 2, e24(2022).
  11. Dutta, D., Heo, I., Clevers, H. Disease modeling in stem cell-derived 3D organoid systems. Trends Mol Med. 23 (5), 393-410 (2017).
  12. Jeong, Y., et al. Identification and genetic manipulation of human and mouse oesophageal stem cells. Gut. 65 (7), 1077-1086 (2016).
  13. Myeong, J., et al. Microbial metabolites control self-renewal and precancerous progression of human cervical stem cells. Nat Commun. 16 (1), 2327(2025).
  14. Rock, J. R., et al. Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 12771-12775 (2009).
  15. Rajkumar, S., et al. Loss of ubiquitin-specific protease 11 mitigates pulmonary fibrosis in human pluripotent stem cell-derived alveolar organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 205-213 (2025).
  16. Ko, K. P., et al. Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion. Gastroenterol. 165 (3), 613-628 (2023).
  17. Choi, Y. J., et al. YAP1 regulates esophageal stem cells' self-renewal and differentiation. Biochem Biophys Res Commun. 726, 150280(2024).
  18. Oh, B., Kim, J., Kim, N., Jeong, Y. Lung cancer organoid system to evaluate the cytotoxicity of natural killer cells. Int J Stem Cells. 18 (1), 99-106 (2025).
  19. Han, K., et al. Synergistic drug combinations for cancer identified in a CRISPR screen for pairwise genetic interactions. Nat Biotechnol. 35 (5), 463-474 (2017).
  20. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NFE2L2 mutations in the chemotherapeutic response of patients with non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 26 (1), 274-281 (2020).
  21. Zhang, S., et al. Genetically defined, syngeneic organoid platform for developing combination therapies for ovarian cancer. Cancer Discov. 11 (2), 362-383 (2021).
  22. Lohmussaar, K., et al. Patient-derived organoids model cervical tissue dynamics and viral oncogenesis in cervical cancer. Cell Stem Cell. 28 (8), 1380-1396 (2021).
  23. Chumduri, C., et al. Opposing Wnt signals regulate cervical squamocolumnar homeostasis and emergence of metaplasia. Nat Cell Biol. 23 (2), 184-197 (2021).
  24. He, X. C., et al. PTEN-deficient intestinal stem cells initiate intestinal polyposis. Nat Genet. 39 (2), 189-198 (2007).
  25. Wang, S., et al. Pten deletion leads to the expansion of a prostatic stem/progenitor cell subpopulation and tumor initiation. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1480-1485 (2006).
  26. Yanagi, S., et al. Pten controls lung morphogenesis, bronchioalveolar stem cells, and onset of lung adenocarcinomas in mice. J Clin Invest. 117 (10), 2929-2940 (2007).
  27. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NRF2 and TP53 mutations in lung squamous cell carcinoma development and radiation resistance. Cancer Discov. 7 (1), 86-101 (2017).
  28. Liu, C., et al. Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression. Sci Adv. 9 (4), eadd8977(2023).
  29. Koster, S., et al. Modelling Chlamydia and HPV co-infection in patient-derived ectocervix organoids reveals distinct cellular reprogramming. Nat Commun. 13 (1), 1030(2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İnsan EkstorservisOrganoid KültürüTek Hücre İzolasyonuTabakalı Yassı EpitelElektroporasyonKök Hücre Aktivitesiİmmünofloresan Boyamaİlaç Tarama
İnsan Rahim Organoidlerinin Üretimi ve Genetik Manipulyasyonu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.