Yöntem makalesi

İnsan Adipositlerinde Lipid Damlası Birikiminin Farklılaşması ve İndüksiyonu, Obeziteyi In Vitro Araştırmak İçin Bir Model Olarak

273 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/69759

⸱

20 Mart 2026

 ,  ,  , 
1Department of Cell Pathology, Faculty of Biotechnology, University of Wroclaw

Bu makalede

Özet

Sunulan protokol, insan obezitesini taklit eden bir hücresel model geliştirmeyi amaçlıyor. Bunu başarmak için, insan yağ kök hücreleri adipositlere ayrılır ve ardından seçilmiş yağ asitlerinin karışımıyla yağlanır.

Özet

Obezite kaynaklı yağ dokusunda değişiklikler, yerel sekretör profillerini değiştirir ve kanser hücreleri dahil çevredeki diğer hücrelerle etkileşimleri etkiler. Besinlerin sürekli verilmesi, yağ hücrelerinin metabolizmasını değiştirir ve onları bir lipid rezervuarı olarak görev yapar. Genellikle obezite mekanizmaları üzerine yapılan araştırmalar hayvan modellerine dayanır; ancak bu modeller hücresel düzeyde metabolik süreçlerin analizine izin vermez. Bu nedenle, obez adipositlerin işlevindeki değişiklikleri yağsız muadillerine kıyasla araştırmaya yardımcı olabilecek güvenilir bir insan obezite modeli geliştirmeye ihtiyaç vardır. Bu çalışma, insan adipositlerinin öncülerinden (yağ kök hücreleri) ayırılması için insülin, izobütil-1-metilksantin, deksametazon ve indometasin karışımı kullanılarak bir protokol sunmaktadır. Daha sonra, farklılaşmış adipositler, lipid birikimini teşvik etmek için linoleat, palmitat ve oleat gibi bir dizi yağ asitiyle kuluçka edildi. Sonuç olarak, obezite koşullarında hipertrofik hücreleri taklit eden değerli bir model elde edildi ve bu model daha ileri çalışmalar için kullanılabilir.

Giriş

Obezite, kas-iskelet hastalıkları, kardiyovasküler hastalıklar, insülin direnci, metabolik sendrom, diyabet ve seçilmiş kanser türleri gibi çok çeşitli hastalıklar için önemli bir risk faktörü olarak kabuledilir 1. Obezite, çok unsurlu nedenleri olan en belirgin ve az değerlendirilen halk sağlığı sorunlarından biridir. Kısaca, obezite, tüketilen ve harcanan kaloriler arasındaki dengesizlikle tetiklenir ve bu da artan yağdeposuna yol açar 2. Kalori fazlalığı, vücudun enerji homeostazını kontrol etmesinde kilit unsur olan yağ dokusunun (AT) patolojik genişlemesi ve işlev bozukluğuna yol açar.

Adipositler, AT3'ün ana hücresel bileşenidir. Obezite koşullarında AT'nin büyümesine başlıca katkıda bulunan unsur hücre hipertrofisidir; yani sitoplazmada depolanan yağ miktarının lipid damlacıkları (LD) şeklinde artmasıyla adipositlerin hacminin artmasıdır. Obezite karmaşık bir patolojik bozukluk olsa bile, adipositlerin biyolojik işleyişi üzerine yapılan çalışmalar, nedenlerini analiz etmek ve yeni tedavi stratejilerini keşfetmek için bir model olabilir. Bu, obezite ile ilişkili hastalıkları hedefleyen yeni terapötik stratejiler geliştirmek için adiposit fonksiyonundaki değişiklikleri tetikleyen moleküler mekanizmaların daha derin bir anlaşılmasına olan ihtiyacı vurgulamaktadır.

Hayvan modelleri, fizyolojik koşulları yansıtmaya en yakın olanlardır, bu da onları obezite üzerine in vivo çalışmalarda yaygın olarak kullanılır5. Ancak, hücresel düzeyde temel biyolojik süreçler hakkında sonuç çıkarmak, çok katmanlı bir sistemde son derece zordur; bu sistem in vitro adiposit modellerinin kullanımını destekler. In vitro araştırmalar çoğunlukla fare 3T3-L1 hücre modeline dayanır ve uygun koşullarda adiposit benzerifenotip 6 kazanır. Ancak, kökeni nedeniyle bu model insan hücreleriyle birlikte kültür koşulları gibi daha karmaşık analizler için kullanılamaz ve sonuçlar her zaman doğrudan insan adipositlerine çevrilemez. Tüm bu nedenlerle, insanlarda obeziteyi taklit eden bir model araştırılıyor ve insan yağ kök hücrelerinin (ADSC) ve ardından farklılaşan bir şekilde kullanılması mantıklı görünüyor. Bu nedenle, düşük karmaşıklığı nedeniyle insan adiposit hipertrofisinin in vitro incelenmesi için en uygun modeldir. Farklı koşullarda tek bir hücre kültür tipinin parametrelerinin karşılaştırılmasına olanak tanır; bu da yağ dokusunda birden fazla hücre tipinin varlığı nedeniyle in vivo elde edilemezdir.

İnsan preadipositleri ve AT'den izole edilen yağ kök hücreleri, bu dokunun işlev bozukluğunu incelemek için en yaygınörneklerdir. Bu hücreler, farklılaşmadan sonra, adipositlerde LD seviyelerini ek kökenlemeyle modüle etmek için cazip bir modeldir. Buna rağmen, insan hücrelerindehipertrofiyi inceleyen nispeten az çalışma vardır 7,8,9 ve çoğu LD birikimini tetiklemek için yalnızca bir yağ asidi (FA) türü kullanır.

Bu protokol, insan adipositlerinin, obezite ortamlarını taklit etmek için FA (palmitat, oleat ve linoleat) karışımıyla takviye edilmesini önermektedir. Bu, insan adipositlerinin lipidlerle aşırı yüklenmesine dayalı bir araç elde edilmesini sağlar ve bu araçlar doğrudan kontrol (naif) yağ hücreleriyle karşılaştırılabilir. Bu model, normal ve hipertrofik adipositler arasındaki fenotipik ve fonksiyonel değişiklikleri incelemek veya gerekirse ortak kültür koşullarıyla yapılan deneyler için kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Protokolün tüm adımlarını laminar akış hücresi kültür kapüşonunda yapmak için steril teknikler kullanın. Tüm reaktifler ve ekipmanlar hakkında detaylar için Malzeme Tablosu'na bakınız. Aşağıda açıklanan farklılaşma protokolü, insan yağ kök hücreleri için uygundur ve diğer hücre tipleri ile kökenleri arasında farklılık gösterebilir. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Farklılaştırma için ADSC'lerin hazırlanması

  1. ADSC büyüme ortamı (ADSCs GM) hazırlayın: 1 g/l glukoz içeren Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) ile %10 fetal sığır serumu (FBS), 2 mM glutamin ve antimikotik çözelti (100 U/mL penisilin (100 μg/mL streptomisin, 0,25 μg/mL amfoterisin B) takviye edin.
  2. ADSC'nin GM, fosfatla tamponlu tuzlu (PBS) ve tripsin/EDTA çözeltisini 37 °C'ye ısıtın.
    NOT: ADSC'ler ticari kaynaklardan elde edilir. Hücreleri erken geçişlerde kullanın. Birden fazla geçiş, ADSC10'un farklılaşma potansiyelinde azalmaya yol açar.
  3. ADSC'lerin GM'sini, hücre kültürüne ayrılmış T75 şişesinde büyüyen ADSC'lerden aseptik olarak çıkarın.
  4. Kalıntı ADSC'leri hücre kültürü kabını 5 mL PBS ile durulayarak yıkayın.
  5. PBS'nin tüm hacmini termostan çıkarın.
  6. Kültür kabına 2 mL tripsin/EDTA ekleyin ve hücreler ayrılana kadar 37 °C'de kuluçka yapın. Bu süreci ters mikroskopla izleyin.
    NOT: Kültür kabına dokunmak hücre ayrılmasını hızlandırır.
  7. Tripsin aktivitesini 6 mL taze ADSC GM eklenerek bloke edin.
  8. Kültür kabından tüm hücre süspansiyon hacmini santrifüjleme için uygun bir tüpe taşıyor.
  9. Hücreleri oda sıcaklığında (RT) 5 dakika boyunca 300 x g ile santrifüjleyin.
  10. Üst yüzeyi çıkarın.
  11. Yeni eklenen ADSC'lerin GM'sinin 2 mL'sinde hücreleri askıya alın.
  12. Hücre yoğunluğunu ve yaşamlılığını hemositometre veya otomatik hücre sayacı ile hesaplayın.
    NOT: Hücre canlılığı trypan mavisi boya boyama ile değerlendirilebilir.
  13. Hücreler, istenen sayıda kuyuyu, 15.000 hücre/kuyu, 96 kuyu plastik plakaya 100 μL ADSC büyüme ortamında tohumlanın.
    NOT: Tohum hücreleri, FA koşullarında kontrol ve kuluçka için amaçlanan adipositleri elde etmek için her zaman ikili olarak kullanılır. Deney türüne bağlı olarak, ADSC'ler farklı plastik tabak veya tabaklara ekilebilir. Önerilen tohumlama yoğunluğu cm/cm2 30.000-60.000 hücrearasındadır. Sonraki analizler veya sonraki deneyler için gereken hücre sayısına bağlı olarak, hücre kültür çanaksının formatını 6 veya 12 delikli plakalar için ayarlayın.
  14. Hücreleri %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 °C sıcaklıkta kültürleyin.
  15. Hücreler %100 birleşmeye ulaştığında (genellikle kaplamadan 24-48 saat sonra), aşağıdaki talimatlara uygun olarak adipositlere farklılaşmasını indükleyin.
    NOT: Farklılaşmanın indüklenmesinden önce yüksek bir hücre birleşme seviyesine ulaşmak önemlidir. Diğer durumlarda, farklılaştırmanın verimliliğini etkileyebilir. Eğer kaplamalı hücreler için yüksek birleşime ulaşması 48 saatten uzun sürerse, yeni ADSC büyüme ortamı için ortamı her 3-4 günde bir değiştirin.

2. Adipojenik farklılaşmanın indüksiyonu

  1. Farklılaşma ortamı (DM) hazırlayın: DMEM/F12 ortamına %10 FBS, 2 mM glutamin, antimikotik çözelti (100 U/mL penisilin (100 μg/mL streptomisin, 0,25 μg/mL amfoterisin B), 5 μg/mL insülin, 0,5 mM 3-İzobütil-1-metilksantin (IBMX), 5 μM deksametazon ve 200 μM indometasin takviye edin.
    NOT: DM'yi sadece doğrudan kullanım için gerekli hacimde hazırlayın. Uzun süre saklama ve her zaman taze hazırlanmış DM kullan. Kullanımdan önce, DM'yi su banyosunda 37 °C'ye ısıtın. IBMX ve indometasin, ortama 37 °C'nin altında eklenirse çökelebilir. Çözücü hale getirmek için, sıvıyı su banyosunda 37 °C'ye ısıtın.
  2. Birleşen ADSC'lerden tüm ortam hacmini aseptik olarak çıkarıp atabilir.
    NOT: ADSC'nin büyüme ortamı DM eklenmeden önce tamamen çıkarılmalıdır.
  3. 96 kuyu bir plakada büyüyen hücrelere dikkatlice 100 μL/well DM ekleyin.
    NOT: Ortam değiştirirken hücrelerin kurumasına izin vermeyin.
  4. Hücreleri 7 gün boyunca 37 °C sıcaklıkta, %5CO2 sıcaklıkta kuluçka içinde.
  5. ADSC'lerden tüm DM hacmini çıkarıp at.
  6. 96 kuyu bir plakada büyüyen hücrelere dikkatlice 100 μL/well taze DM ekleyin.
  7. Hücreleri kuluçka makinesindeki 37 °C sıcaklıkta, %5CO2 sıcaklıkta, önümüzdeki 7 gün boyunca kuluçka içinde.
    NOT: Adipojenik farklılaşmanın ilerlemesi, indüklenen hücrelerde oluşan lipid vakuollarının parlak alan gözlemiyle tespit edilebilir.

3. Adipositlerin kökenlenmesi

  1. FA takviyesi içeren adiosit kültür ortamı hazırlayın: %10 FBS, 2 mM glutamin, antimikotik çözelti (100 U/mL penisilin (100 μg/mL streptomisin, 0,25 μg/mL amfoterisin B), 0,33 mM linoleat, 0,17 mM palmitat ve 0,17 mM oleat içeren antimikotik çözelti takviye edin.
  2. Kontrol adiosit kültür ortamı hazırlayın: %10 FBS, 2 mM glutamin, antimikotik çözelti içeren DMEM/F12 ortamı takviye edin (100 U/mL penisilin penisilin, 100 μg/mL streptomisin, 0,25 μg/mL amfoterisin B), %0,44 sığır serum albümini (BSA) ve %0,26 etanol (son iki bileşik ayrıca FA çözücüsü olarak kullanılmıştır).
    NOT: Kontrol ve takviye ile FA'nın adiposit kültür ortamını yalnızca doğrudan kullanım için gerekli hacimde ekleyin. Uzun süre saklanmayın ve her zaman taze hazırlanmış malzeme kullanın. Kullanmadan önce, ortamı su banyosunda 37 °C'ye kadar ısıtın.
  3. Toplam 14 gün türevlenme süresinden sonra, 96 delikli bir plakada farklılaşmış adipositlerden oluşan DM ortamının tamamını dikkatlice çıkarıp atabilirsiniz.
  4. 96 kuyu içinde hücrelerin büyüyen yarısına dikkatlice 100 μL/well adiposit kültür ortamı ve FA ile takviye olun.
  5. 96 kuyu plakasında hücreler büyüyen kuyunun ikinci yarısına dikkatlice 100 μL/kuyu kontrollü adiposit kültür ortamı ekleyin.
    NOT: Ortam değiştirirken hücrelerin kurumasına izin vermeyin.
  6. Hücreleri sonraki 48 saat boyunca %5CO2 içeren nemli bir atmosferde 37 °C'de kuluçka yapın.
  7. 48 saat sonra, sonraki deneyler için kontrol hücreleri ve FA ile inkübe edilmiş hücreleri kullanın.
    NOT: Bu aşamada, elde edilen yağlanmış adipositler hücre boyama, hücre metabolizmasının analizi veya diğer hücre tipleriyle ortak kültür gibi birçok deneysel amaçla kullanılabilir.

4. Lipid damlası lekeleri

  1. Adiposit kültür ortamı hazırlayın: DMEM/F12 ortamına %10 FBS, 2 mM glutamin ve antimikotik çözelti (100 U/mL penisilin (100 μg/mL streptomisin, 0,25 μg/mL amfoterisin B) takviye edin.
  2. Floresan boya ile adedisit kültür ortamında LD'leri 1:1000 suyultuyla boya.
  3. 96 kuyu bir plakada büyüyen hücrelerden gelen kontrol adiposit kültür ortamı ve adiposit kültür ortamının tamamını çıkarıp atın.
  4. Dikkatlice 50 μL/well adiosit kültür ortamını floresan boya ile ekleyin.
    NOT: Ortam değiştirirken hücrelerin kurumasına izin vermeyin.
  5. Hücreleri %5CO2 içeren nemli atmosferde 37 °C'de 15 dakika kuluçka yapın.
  6. Flüoresans boyasını 100 μL/well adiposit kültür ortamı ile değiştirerek yıkayın.
  7. Yeşil floresan tespit kanalında (Ex 427 nm/Em 585 nm) floresan mikroskopla görüntü alınması.
    NOT: Bu, canlı hücre boyama protokolüdür. Boyama, hücrelerin formaldehit fiksasyonundan sonra da yapılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Burada açıklanan yöntem, insan ADSC'lerinin olgun adipositlere ayırılmasına ve ardından obezite koşullarında gözlemlenen hipertrofik hücreleri taklit eden lipid birikiminin artmasına olanak tanır. İnsan ADSC'lerinin farklılaşma zaman süreci Şekil 1'de gösterilmiştir. 0. günde, hücreler %100 birleşime ulaştığında (Şekil 1A), ADSC'ler uzun, iğne benzeri morfoloji gösterir. Bu noktada, farklılaşma protokolü adipojenik indüktörler i...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut protokol, ADSC'lerin farklılaşması için tekrarlanabilir iki aşamalı bir prosedürdür ve ardından obeziteyi taklit eden hücresel bir model elde etmek için FA'larla kuluçka uygulanır. Etkinliğini belirleyen kritik adım, izolasyondan sonra ADSC'lerin kaç geçiş sayısıdır. Birden fazla geçiş, bu hücrelerin farklılaşma potansiyelinde azalmaya yolaçar 10.

Adiposit farklılaşması sırasında, ADSC'ler bölünen hücrelerden büyüme durdurulmuş a...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, bu makalede bildirilen çalışmayı etkileyebilecek bilinen hiçbir rekabet eden finansal çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını belirtmektedir.

Teşekkürler

Makale, Polonya Ulusal Bilim Merkezi tarafından finanse edildi; Dorota Nowak (OPUS 22, No. 2021/43/B/NZ3/01458) ve Aleksandra Simiczyjew (SONATA, 2020/39/D/NZ5/02330) tarafından alınan hibeler alındı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3-İzobütil-1-metilksantin (IBMX)MerckI5879
%0,25 tripsin/%0,05 EDTA pH 7,2IITD PAN, Wrocfigure-materials-1aw, Polonya20-500
96 kuyu plakasıTermo130188
Antibiyotik-antimikotik çözeltiSigma-AldrichA5955
Sığır Serum Albümini (BSA)Sigma-AldrichA3294
Hücre sayacıYokYok
SantrifüjYokYok
DeksametazonSigma-AldrichD4902
Dulbecco'nun Modifiye Kartal Aracı (DMEM)IITD PAN, Wrocfigure-materials-2aw, Polonya10-5001 g/L glukoz içerir
Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı: Besin Karışımı F12Gibco11320-033
EtanolChempur113964200#1L
Fetal sığır serumu (FBS)GibcoA5256701
hADSC İnsan Yağ Kök HücreleriLonzaPT-5006
Kuluçka makinesiYokYok
IndometasinSigma-AldrichI8280-5G
İnsülinSigma-AldrichI9278
Ters mikroskopYokYok
L-glutaminSigma-Aldrich25030-024
Linoleik asit sodyum tuzuSigma-AldrichL8134
LipidSpot floresanBiyotyum70065
Fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS)Termo10010023
Soduim oleateSigma-AldrichO7501
Soduim palmitateSigma-AldrichP9767
T75 hücre kültürü şişesiTermo130190
Trypan mavisiSigma-Aldrich95896HJ

Kaynaklar

  1. Lin, X., Li, H. Obesity: Epidemiology, pathophysiology, and therapeutics. Front Endocrinol. 12, 706978(2021).
  2. Wen, X., et al. Signaling pathways in obesity: Mechanisms and therapeutic interventions. Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 298(2022).
  3. Sharma, S., Muthu, S., Jeyaraman, M., Ranjan, R., Jha, S. K. Translational products of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells: bench to bedside applications. World J Stem Cells. 13 (10), 1360-1381 (2021).
  4. Guerreiro, V. A., Carvalho, D., Freitas, P. Obesity, adipose tissue, and inflammation answered in questions. J Obes. 2022, 2252516(2022).
  5. Kleinert, M., et al. Animal models of obesity and diabetes mellitus. Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 140-162 (2018).
  6. Ruiz-Ojeda, F. J., Rupérez, A. I., Gomez-Llorente, C., Gil, A., Aguilera, C. M. Cell models and their application for studying adipogenic differentiation in relation to obesity: A review. Int J Mol Sci. 17 (7), 1040(2016).
  7. Małodobra-Mazur, M., et al. Metabolic differences between subcutaneous and visceral adipocytes differentiated with an excess of saturated and monounsaturated fatty acids. Genes. 11 (9), 1-16 (2020).
  8. Ishaq, A., Tchkonia, T., Kirkland, J. L., Siervo, M., Saretzki, G. Palmitate induces DNA damage and senescence in human adipocytes in vitro that can be alleviated by oleic acid but not inorganic nitrate. Exp Gerontol. 163, 111798(2022).
  9. Berger, E., Géloën, A. Insulin prevents fatty acid induced increase of adipocyte size. Adipocyte. 11 (1), 510-528 (2022).
  10. Eom, J., et al. Visualization and quantification of mesenchymal cell adipogenic differentiation potential with a lineage specific marker. J Vis Exp. (133), e57153(2018).
  11. Pietraszek-Gremplewicz, K., et al. Response of primary human adipocytes to fatty acid treatment. J Cell Mol Med. 29 (10), e70622(2025).
  12. Zhu, D., Shi, S., Wang, H., Liao, K. Growth arrest induces primary-cilium formation and sensitizes IGF-1-receptor signaling during differentiation induction of 3T3-L1 preadipocytes. J Cell Sci. 122 (15), 2760-2768 (2009).
  13. Rosen, E. D., et al. PPARγ is required for the differentiation of adipose tissue in vivo and in vitro. Mol Cell. 4 (4), 611-617 (1999).
  14. Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 20 (10), 1793-1804 (2011).
  15. Styner, M., Sen, B., Xie, Z., Case, N., Rubin, J. Indomethacin promotes adipogenesis of mesenchymal stem cells through a cyclooxygenase independent mechanism. J Cell Biochem. 111 (4), 1042-1050 (2010).
  16. Klemm, D. J., et al. Insulin-induced adipocyte differentiation: activation of CREB rescues adipogenesis from the arrest caused by inhibition of prenylation. J Biol Chem. 276 (30), 28430-28435 (2001).
  17. Inthanon, K., Sririwichitchai, R., Davies, N. M. Rapid screening of adipogenic responses to EGCG in non-induced L929 adipocytes using image-based analysis compared to the conventional 3T3-L1 method. J Appl Pharm Sci. 15 (5), 138-148 (2025).
  18. Abbasi, K., Mehdizadeh, A., Hamishehkar, H., Nouri, M., Darabi, M. Fatty acid composition of lipid fractions in white- and brown-like adipocytes derived from human mesenchymal stem cells. Adipocyte. 14 (1), 2566481(2025).
  19. Pieters, V. M., et al. A three-dimensional human adipocyte model of fatty acid-induced obesity. Biofabrication. 14 (4), 045009(2022).
  20. Watt, M. J., Hoy, A. J., Muoio, D. M., Coleman, R. A. Distinct roles of specific fatty acids in cellular processes: implications for interpreting and reporting experiments. Am J Physiol Endocrinol Metab. 302, 1-3 (2012).
  21. Alsabeeh, N., Chausse, B., Kakimoto, P. A., Kowaltowski, A. J., Shirihai, O. Cell culture models of fatty acid overload: problems and solutions. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1863 (2), 143-150 (2018).
  22. Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. Obesity-induced changes in adipose tissue microenvironment and their impact on cardiovascular disease. Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Adiposit DiferansiyasyonuObezite ModeliIn Vitro ObeziteAdipoz DokuYa Asidi nk basyonuAdipoz Kaynakl K k H crelerLipid RezervuarHipertrofik Adipositler

İlgili makaleler