$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Bu çalışma, Eylül 2021 ile Mart 2022 arasında Kosova Üniversite Diş Hekimliği Klinik Merkezi, Diş Protezi Kliniği'nde protez bakımı arayan kısmen dişsiz hastayı içeren 30 hastayı içerdi. Kurumsal inceleme kurulundan etik onay alındı (Onay No. 378/19) ve tüm prosedürler Helsinki Bildirgesi'nin ilkelerine uydu. Tüm katılımcılardan yazılı bilgilendirilmiş onay alındı.
Örneklem büyüklüğü, önceki araştırmalara dayanarak belirlenmiştir; bu araştırmalar, RPD kullanıcıları arasında mikrobiyal ve periodontal parametrelerde önemli sonuçlar elde etmek için 11 ila 30 katılımcınınyeterli olduğunu göstermektedir 21,23. Alfa seviyesi 0.05 olan iki kuyruklu çift t-testi varsayarsak, güç analizi 28 katılımcıdan oluşan bir örneklem büyüklüğünün bu büyüklükte istatistiksel olarak anlamlı bir farkı tespit etmek için %80 güç sağlayacağını gösterdi. Potansiyel ayrılmaları hesaba katmak için 30 katılımcı kaydettik. Ayrıca, bu hastalarda bakteri yükünde artış gözlemlemek için üç aylık bir takip süresiyeterliydi 24.
Uygun hastalar, hem bitişik hem de antagonistik doğal dişler ile ilk kez protez cihazı kullananlardı. Dışlama kriterleri şunları içeriyordu: probing derinlikleri >4mm, bağışıklık zayıflığı durumu (örneğin kemoterapi), son 90 gün içinde antibiyotik kullanımı, yoğun sigara içme (günde >25 sigara) ve RPD prosedürlerinin anlaşılmasını engelleyen bilişsel bozukluk.
Tüm katılımcılar, kobalt-krom metal çerçeve ve akrilik reçine (polimetil metakrilat) ile üretilen tokalı tutucu RPD'ler aldı. Her RPD'nin tasarımı, edentulizm sınıflandırması, kalıntı çıkıntı kalitesi ve biyomekanik hususlara göre özelleştirildi.
Örnek toplama prosedürü
Örnek toplama, T0 ve T3 zaman noktaları arasında çıkarılabilir kısmi protezlerin (RPD) abutment dişlerinde yalnızca gerçekleştirilmiştir. Katılımcılardan önce kalan yiyecek kalıntılarını temizlemek için suyla iyice gargaralamaları istendi. Örnek toplamadan önce, seçilen abutment dişi kuru çalışma ortamı sağlamak için pamuk rulolar kullanılarak izole edildi. İki steril kağıt ucu (no. 35; 04 konik) dişin bukkal yüzeyinin mesial ve distal kısımlarındaki diş sulkusuna yerleştirildi ve 1 dakika boyunca yerinde bırakıldı. Kağıt noktaları daha sonra 1,5 mL normal tuzlu çözelti içeren steril bir mikrotüpe aktarılır ve belirlenmiş bir mikrobiyolojik laboratuvara taşınırdı. Örnekler, DNA izolasyonu sürecine kadar -20°C sıcaklıkta saklandı.
Bakteriyel DNA hazırlama ve amplifikasyonu:
Parodontoscreen testi (Materyal Tablosu), RT-PCR26 kullanılarak T. denticola, T. forsythia ve P. gingivalis'i tanımlamak için kullanıldı. Test şunlardan oluşur: DNA hazırlığı; özel reaktiflerle gerçek zamanlı PCR amplifikasyonu (evrensel bakteriyel amplifikasyon için bir karışım, fırsatçı bakteriyel amplifikasyon için bir karışım ve insan genomik DNA amplifikasyonu için bir karışım); ve amplifikasyon sonuçlarının kaydı ve yorumlanması.
DNA çıkarımı, üreticinin yönergelerine uygun olarak DNA çıkarma kiti (Materyal Tablosu) kullanılarak gerçekleştirilmiştir; böylece en iyi DNA kalitesi sağlanmıştır. Test, parafinle kapalı PCR karışımı ile gerçek zamanlı PCR nitelikli analizini kullanır. Bu karışım, PCR çalışmasının geçerliliğini doğrulamak için İç Kontrol ve çıkarma kalitesini değerlendirmek ve doğru amplifikasyon için yeterli DNA'yı doğrulamak için Örnek Alım Kontrolü (SIC) içerir.
PCR amplifikasyonu, Taq-polimeraz çözeltisi, parafin tabakası altında ana karışım, DNA örneği ve mineral yağ dahil olmak üzere reaktiflerle özel şeritler ve kapaklar kullanılarak gerçekleştirildi. PCR programı şöyledir: (i) 80 °C'de 30 saniye boyunca ilk denatürasyon, (ii) 94 °C'de 1 dakika 30 saniye denatürasyon, (iii) 94 °C'de 30 saniyelik 5 döngü (denatürasyon), 64 °C'de 15 saniye (primer bağlanması ve uzatma, floresans tespiti), (iv) 94 °C'de 10 saniyelik 45 döngü (denatürasyon), 64°C'de 15 saniye (primer bağlanması ve uzaması, floresans tespiti), (v) 5 saniye 94 °C'de (nihai denatürasyon).
Floresans tespiti, Fam ve Hex tespit kanallarında gerçekleştirildi, ancak belirteçiyi içeren No5 tüpü hariç (floresans Fam ve Rox kanallarında tespit edildi). Amplifikasyon süreci, gerçek zamanlı termal döngüleyiciler (Materyal Tablosu) kullanılarak gerçekleştirildi. Cihaz için Yazılım RealTime (sürüm 7.9), PCR amplifikasyon verilerinin otomatik kaydı, yorumlanması ve nicel analizi için kullanıldı ve böylece hassas patojen yükü tahmini yapıldı.
Mikrobiyal yükler "Lg (genom eşdeğerleri/örnek)" olarak temsil edildi. Sonuçlar, her hasta için Parodontoscreen test raporunda bakteriyel yük seviyelerine göre üç aralıkta sunuldu: P. gingivalis (normal <5.0; orta ≥5.0; şiddetli >6.0); T. forsythia (normal <5.0; orta ≥5.0; şiddetli >5.5); ve T. denticola (normal <3.5; orta ≥3.5; şiddetli >5.0).
Klinik muayene
Klinik muayene, T0 ve T3'te abutment ve abutment olmayan dişlerin periodontal durumunun ayrıntılı incelenmesini içermiştir. Plak indeksi (PI), Silness-Loe kriterleri (0-3)27 doğrultusunda bir diş probu kullanılarak değerlendirildi. Diş eti durumu, diş yüzeyinde diş eti indeksi (GI) kullanılarak altı noktada aşağıdaki kriterlere göre değerlendirildi: 0, iltihap yok; 1, hafif iltihap; 2, probing sırasında diş eti kanaması ile iltihaplanma; 3, şiddetli iltihap ve olası spontan diş kanaması28.
Prob derinliği (PD), diş eti kenarından klinik cepderinliği 29'un sonuna kadar Williams probu kullanılarak ölçüldü. Diş hareketliliği (TM), Miller'ınkriterleri 30'a göre yatay ve dikey yönlerde bimanual palpasyonla belirlendi.
Tüm katılımcılar, klinik muayeneden önce yeterli cerrahi olmayan periodontal tedavi aldı; diş plak ve diş taşının ultrasonik ölçeklendirme ile alınması da dahil. Katılımcılara diş fırçalama ve protez temizleme gibi ağız hijyeni prosedürleri de öğretildi ve gece protez çıkarma konusunda tavsiyeler verildi.
İstatistiksel analiz
Veriler Microsoft Excel ve IBM SPSS Statistics for Windows kullanılarak analiz edildi. Yaş, mikrobiyal yükler ve periodontal endeksler (PI, G, PD ve TM dahil) için tanımlayıcı istatistikler (ortalama, standart sapma ve aralık) hesaplandı. Klinik ve mikrobiyolojik parametrelerdeki değişiklikler, (T0) öncesi ile yerleştirme sonrası (T3) 3 ay arasındaki değişiklikler, eşleştirilmiş parametrik olmayan veriler için Wilcoxon imzalı sıralama testi kullanılarak değerlendirildi. Fisher'ın kesin testi (Monte Carlo simülasyonu, iki taraflı), mikrobiyal yük sınıflandırmasıyla ilgili kategorik verilerin değerlendirilmesini sağladı. Spearman'ın rütbe korelasyon katsayısı (ρ), mikrobiyal yükler ile periodontal parametreler arasındaki ilişkileri değerlendirmek için kullanıldı. Tüm analizler için 0,05 < p-değeri istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.