Bu çalışma, elektroakupunkturun (EA) yüksek tuz kaynaklı damar disfonksiyonu üzerindeki etkisini araştırdı. EA, damar hasarını ve bağırsak disbiozunu tersine çevirdi, muhtemelen belirli bağırsak mikroplarını modüle ederek.
Araştırma makalesi
* These authors contributed equally
Bu çalışma, elektroakupunkturun (EA) yüksek tuz kaynaklı damar disfonksiyonu üzerindeki etkisini araştırdı. EA, damar hasarını ve bağırsak disbiozunu tersine çevirdi, muhtemelen belirli bağırsak mikroplarını modüle ederek.
Bu çalışma, yüksek tuzlu diyetlerin neden olduğu damar işlevsizliğini hafifletmedeki elektroakupunkturun (EA) terapötik potansiyeli ve mekanizmalarını, özellikle bağırsak mikrobiyota modülasyonuna odaklanarak incelemeyi amaçlamaktadır. 21 fareyi rastgele olarak Normal Kontrol, Yüksek Tuzlu Model ve EA Müdahale gruplarına (n = grup başına 7) böldük. Wistar sıçanlarında "yüksek tuzlu kan stazis sendromu" modeli, %12 NaCl intragastrik perfüzyon ile indüklenmiştir. Tedaviler Pekin saati ile 17:00 ile 19:00 arasında gerçekleştirildi: fareler yumuşak bir bezle kısıtlandı, ardından BL23 ve KI3'te 20 dakikalık EA uyarısı uygulandı. Deneyden sonra fare kanı, kan damarları ve dışkı örnekleri alındı. Damar etkileri pıhtılaşma fonksiyonu testi, hemorheolojik analiz ve arterial histopatolojik değerlendirme ile değerlendirildi. 16S rDNA dizilemesi, bağırsak mikrobiyotasının bileşimi ve bolluk değişikliklerini analiz etmek için kullanıldı. Bulgular, kronik yüksek tuz alımının kan viskozitesini bozduğunu, damar endotel bütünlüğüne zarar verdiğini ve bağırsak mikrobiyal disbiyozuna neden olduğunu ortaya koydu. Dikkat çekici bir şekilde, EA tedavisi bu patolojik değişiklikleri etkili bir şekilde tersine çevirdi. Korelasyon analizi, değişen kan viskozitesi parametreleriyle güçlü korelasyon yapan spesifik bağırsak mikrobiyotasını (örneğin, Lachnospiraceae ve Ruminococcaceae) ayrıca tespit etti (P < 0.05). Bu nedenle, mevcut çalışma, yüksek tuzlu diyetle indüklenen vaskülopatiyin, EA tedavisiyle tersine çevrilebileceğini ve bunun EA'nın safra asit metabolizması ve kısa zincirli yağ asidi sentezinde rol alan bağırsak mikrobiyotasını düzenleme yeteneğine bağlanabileceğini ortaya koymaktadır.
Diyet tuzu, sıvı dengesini ve hücresel homeostazı korumada kritik rol oynarken, aşırı tüketim kardiyovasküler ve beyin vasküler hastalıkları için iyi bilinen bir riskfaktörüdür 1. Dünya Sağlık Örgütü, sağlıklı yetişkinler için günlük sodyum alımının 5 gramdan az olmasınıönerir 2. Araştırmalar, yüksek tuzlu diyetin (HSD) damar fonksiyonunu bozduğunu ve dünyada en yaygın hastalık olan kardiyovasküler hastalıkların (DÜB) sıklıkla vaskülopatiile birlikte geldiğini göstermiştir 3. Bu bulgular, HSD'nin neden olduğu damar endotel hasarının onarılmasının DK ilerlemesini önlemede kritik bir strateji oluşturduğunu vurgulamaktadır. "Kan stazis sendromu" (durgun kan dolaşımı ve iç kan birikimi ile karakterize edilir), modern tıptaki ölçülebilir pıhtılaşma bozukluğuyla örtüşür. Önemli doğrulama biyobelirteçleri arasında protrombin süresi (PT) ve aktif kısmalı tromboplastin süresi (APTT) ile belirgin şekilde yükselmiş fibrinojen (FIB) ve trombin süresi (TT) yer alır. Bu göstergeler, kan stazisinin patolojik özelliklerine doğrudan karşılık gelen hiperkoagulasyon durumunu yansıtır.
Gastrointestinal sistemde bulunan bağırsak mikrobiyotusu, immünometabolik süreçlerin ve bağırsak homeostazının ana düzenleyicileri olarak görev yaparken, çeşitli fizyolojik ve patolojik yolları etkiler4. Ortaya çıkan kanıtlar, aşırı tuz tüketiminin bağırsak disbiyozu ve beslenme dengesizliğine yol açtığını, bunun da lokal iltihap olarak ortaya çıkan pro-inflamatuar bağışıklık aktivasyonunu tetiklediğini ve mikro sirkülasyon hasarı, damar yeniden şekillendirilmesi ve sistemik endotel disfonksiyonunu teşvikettiğini göstermektedir 1,5. Kronik HSD'nin farelerde Bacteroides intestinalis, Aspergillus ve Prevotella türlerinin seviyelerinde göreceli bir artışa yol açtığı bildirilmiş ve hipertansiyon ile damar iltihabının gelişimine katkıdabulunmuş 6.
Geleneksel Çin Tıbbının (TCM) temel taşlarından biri olan akupunktur, klinik uygulamada kanıta dayalı tamamlayıcı ve alternatif bir tedavi olarak belirli akupunktur noktalarına hassas iğne yerleştirmesini kullanır. Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) ve Dünya Sağlık Örgütü (WHO), akupunkturu birden fazla patolojik durum için klinik olarak doğrulanmış bir müdahale olarak kabul etmektedir. Ortaya çıkan kanıtlar, akupunkturun çift terapötikmekanizmaya sahip olduğunu göstermektedir 7,8; bağırsak mikrobiyotası bileşimini modüle ederken damar inflamatuar aracıları baskılarken, böylece ilgili bozukluklarda patolojik ilerlemeyi topluca azaltmaktadır. Önemli olarak, akupunktur kan basıncını düşürmede ve hasarlı kan damarlarında endotel fonksiyonunu geri getirmedeetkilidir 9.
EA, standart ve ölçülebilir uyarım parametreleri nedeniyle manuel akupunktur yerine seçildi; bu parametreler operatöre bağlı değişkenliği azaltır ve sonuçların tekrarlanabilirliğini artırır. Bu nedenle, yüksek tuzlu kan stazis sendromu (HSBS) modeline sahip sıçanlarda EA tedavisinin bağırsak mikrobiyotası üzerindeki etkisini araştırdık ve kan reolojisi ile vasküler histopatolojik değişikliklerle EA'nın yüksek tuz kaynaklı vaskülopati üzerindeki etkinliğini değerlendirdik. EA tedavisiyle damar lezyonlarının iyileştirilmesinde bağırsak mikrobiyotasının rolünü daha iyi anlamak için, farklı bağırsak mikrobiyotası cinsleri ile tüm kan kesim oranı ve kan sedimentasyonu arasında korelasyon analizi yaptık.
Bu nedenle, EA'nın bağırsak mikrobiyotası homeostazını geri getirerek HSD kaynaklı vaskülopatiyi hafiflettiği hipotezini yürüttük. Bunu test etmek için amacımız: (i) EA'nın damar fonksiyonu ve yapısı üzerindeki koruyucu etkilerini nicelendirmek ve (ii) EA tarafından modüle edilen bu iyileşmelerle ilişkili olan spesifik bağırsak mikrobiyal taksonlarını belirlemek. Ayrıca, Pearson korelasyon analizi, özellikle farklı bol cins dalgalanmaları ile hemoreolojik anormallikler arasında önemli mikrobiyota-damar ilişkileri tespit etmiştir. Bildiğimiz kadarıyla, bu çalışma, yüksek tuzlu diyet kaynaklı vaskülopatiyi bağırsak mikrobiyotası açısından iyileştirmede EA'nın koruyucu mekanizmalarını inceleyen ilk çalışmadır. Bu çalışmanın deneysel tasarımı Şekil 1'de gösterilmiştir.

Şekil 1: Deneysel teknik diyagram. Bu şekilin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm deney, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Temel Tıp Fakültesi Deney Merkezi'nde gerçekleştirildi. Tüm hayvan refahı ve deneysel prosedürler, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Laboratuvar Hayvan Refahı Etik Komitesi (Etik No. 2024078) tarafından onaylandı. Deneyler, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ne (1986 revizyonu, Yayın 86-23) sıkı şekilde uygulaklı olarak gerçekleştirildi.
Hayvanlar ve beslenme
6-8 haftalık erkek ve dişi özgül patojensiz (SPF) Wistar fareleri 200 ± 20 g ağırlığındaydı. Tüm fareler, 12 saat açık ve karanlık döngüyle iyi havalandırılan odalarda barındırıldı ve ücretsiz yiyecek ve suya erişimi vardı.
Modeller ve gruplar
Hayvan modelleri önceki araştırma deneyimine referans olarakincelenmiştir 10. 7 günlük bir uyum sürecinden sonra, 21 Wistar sıçanı (%50 erkek/dişi dağılımı) rastgele olarak üç deneysel gruba (n = 7/grup) Excel'deki rastgele sayı üreteci kullanılarak atandı; her gruptaki erkek ve dişi sıçan sayısı cinsiyetin sonuçlar üzerindeki etkisini en aza indirmek için yaklaşık dengedetutuldu 11. Normal Kontrol (NC): Günlük mide gazajı (1 mL/100 g) arıtılmış su aldı. Yüksek Tuzlu Model (HS) ve EA Müdahalesi (EA): Günlük garaj yoluyla %12 NaCl çözeltisi (1 mL/100 g) uygulandı. Tüm müdahaleler 30 gün ardışık olarak sürdürüldü.
EA tedavisi
Tedavi, başarılı modellemeden sonraki gün başladı. EA, standart ve ölçülebilir uyarım parametreleri nedeniyle manuel akupunktur yerine seçildi; bu parametreler operatöre bağlı değişkenliği azaltır ve sonuçların tekrarlanabilirliğini artırır. BL23 (Shenshu, mesane meridyeni) ve KI3 (Taixi, böbrek meridyeni) konumları, Çin Akupunktur ve MoksibustionDerneği 12'nin fare akupunktur noktası lokalizasyon kriterlerine dayanarak belirlendi. BL23, dorsal orta hattın 6 mm yan tarafında, ikinci bel omurunun altında yer alır. KI3, medial malleolus'un en yüksek noktası ile Aşil tendonunun arka sınırı arasındaki orta nokta çökükte yer almıştır. Akümut noktalarındaki yerel saç çıkarılıp sterilize edildi. Akupunktur noktalarını dikey olarak delmek için tek kullanımlık steril akupunktur iğneleri (0,18 mm × 13 mm) kullanıldı; BL23 için 4-6 mm, KI3 için ise 3-5 mm yerleştirme derinlikleri yapıldı. Elektroakupunktur cihazının pozitif elektrot klipsi, akupunktur iğnesinin iğne sapına BL23'teki bir tarafta, negatif elektrot ise aynı taraftaki KI3'teki iğne sapına bağlanıyordu. Elektroakupunktur cihazının parametreleri: Dalga formu: Yoğun-seyrek dalga (10/50 Hz); Frekans: seyrek dalga için 5 s, yoğun dalga için 10 s; Yoğunluk: 1-2 mA, sıçanların kasılma ve ağrılı tepkilerine göre ayarlanır (çığlık, direnç davranışları); Nabız genişliği: ≤ 1 MS. Uyarı protokolü: Müdahale her gün 17:00'dan 19:00'a (Pekin saati) kadar yapıldı ve her seferinde 20 dakika sürdü. Döngü: Bir tedavi döngüsü 7 gün sürer, her döngü arasında toplam 4 döngü ve 1 gün dinlenme olurdu. Özel süreç, Şekil 2'de (BioGDP.com13 ile oluşturulmuş) gösterilmiştir.

Şekil 2: Deneysel zaman çizelgesi. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Örnek toplama ve hazırlık
Gavajdan bir ay sonra, EA müdahalesinden önce farelerden orbital venöz kan alındı. Plazma örnekleri, 1.000 × g sıcaklıkta 4 °C'de 15 dakika boyunca santrifüjle çıkarıldı. Tedavi sonunda, her fare grubundan taze dışkı toplandı. Fareler %10 emülsifiye izofluran (30 mg/kg) ile anestezi edilip ötenazilendi. Karın boşluğu açıldı ve 4 saat içinde tam kan kesme hızı viskozitesi (WBSRV) ölçülmesi için karın aortasından yaklaşık 5 mL kan alındı. Karın aort dokuları histopatolojik analiz için toplandı. Tüm örnekler daha sonra kullanılmak üzere -80 °C sıcaklıkta saklandı.
WBSRV testi
Modelleme tamamlandıktan sonra, kan toplama iğnesi kullanılarak sıçanların karın aortasından yaklaşık 4-5 ml tam kan toplandı ve heparin sodyum antikoagülan tüplere yerleştirildi. Tüpler nazikçe çalkalandı, kan örneklerinin antikoagülanla tam karışması sağlandı. 4 saat içinde, WBSRV ve eritrosit sedimentasyon hızı (ESR) tam otomatik hemorheoloji analizörü kullanılarak ölçüldü.
Damar histopatolojisi
Damar dokuları %4 paraformaldehit çözeltisiyle en az 24 saat sabitlendi ve hematoksilin-eozin (HE) boyama için 3 μm kalınlıkta kesitlendi. Görüntüler 100× ve 400× büyütmelerde çekildi.
16S rDNA dizilemesi
Genomik DNA, her grubun dışkı örneklerinden çıkarıldı. V3-V4 primer dizileri (341F: 5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'; 805R: 5'-GACTACHVGGGTATCTAATCTAC-3') toplam DNA'nın PCR amplifikasyonu için kullanıldı. PCR amplifikasyon programı şöyleydi: 98 °C'de 30 saniye boyunca ön denatürasyon, 10 saniye boyunca 98 °C'de denatürasyon, 30 saniye boyunca 54 °C'de tavlama ve 45 saniye boyunca 72 °C'de uzatma (toplam 32 döngü) ve ardından 72 °C'de 10 dakika boyunca son uzatma yapıldı. PCR ürünleri arıtıldı ve nicelendirildi. Çift uçlu dizileme (2×250 bp) NovaSeq 6000 dizileme platformunda gerçekleştirildi. Eşleştirilmiş uçlu okumalar birleştirilip filtrelenerek yüksek kaliteli veri elde edildi. QIIME 2'deki DADA2 eklentisi kullanılarak uzunluk filtreleme ve gürültü giderme işlemi gerçekleştirildi. Bu süreç, amplikon dizisi varyantları (ASV'ler) ve ASV bolluk tabloları oluşturdu, ardından tekli ASV'ler kaldırıldı. Taksonomik açıklama ve bolluk profili, SILVA veritabanı kullanılarak ASV dizisi dosyasına dayanarak örneklemler arasında tür farklılıkları ve topluluk bileşimi araştırıldı. Tür çeşitliliği ve göreceli bolluktaki değişiklikler, α çeşitlilik ve β çeşitlilik analizleriyle değerlendirildi ve veri görselleştirmesi bu web sitesinde gerçekleştirildi (https://www.omicstudio.cn/home).
İstatistiksel analizler
İstatistiksel analizler SPSS 26.0 kullanılarak gerçekleştirilmiştir. P < 0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi. Homojen varyanslara sahip veriler için, gruplar arası karşılaştırmalar için tek yönlü ANOVA kullanıldı, ardından anlamlı farklar bulunduğunda post-hoc en az anlamlı fark (LSD) testleri yapıldı. Heterojen varyanslara sahip veriler için, dereceler bazında parametrik olmayan Kruskal-Wallis tek yönlü ANOVA kullanılmıştır. Mann-Whitney U test analizi, bağırsak mikrobiyotası bileşimi ve topluluk yapısındaki değişiklikleri değerlendirmek için uygulanmıştır. Pearson rank korelasyon analizi, farklı bol bağırsak bakterileri ile diğer göstergeler arasındaki korelasyonları değerlendirmek için kullanıldı. Pearson korelasyon analizi, verilerin normallik ve doğrusal varsayımlara uyduğu için kullanıldı; bu varsayımlar Shapiro-Wilk testi ve Durbin-Watson testi ile doğrulandı. İstatistiksel grafikler ve ısı haritaları GraphPad Prism 10 kullanılarak oluşturuldu.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Hayvan modelinin doğrulanması
Dört pıhtılaşma parametresi, damar patolojik değişikliklerle yakından bağlantılı pıhtılaşma fonksiyonu anormalliklerini izleyerek damar lezyonu araştırmalarında kritik bir rol oynar. Retro-orbital venöz pleksus kanın modelleme sonrası değerlendirmesi, HS/EA grupları ile NC kontrol grupları arasında pıhtılaşma parametrelerinde (PT, APTT, FIB, TT) önemli değişiklikler gösterdi (Şekil 3). Özel test değerleri Ek Tablo 1'de verilm...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Damar lezyonları, çeşitli ÜY ve metabolik bozuklukların gelişimi ve patolojik belirtileri için kritik bir faktördür. Zararlı etkileri arasında damar fonksiyon bozukluğu, anormal kan pıhtılaşması, lipid birikimi ve plak oluşumu bulunur; bunlar yüksek tansiyon, tromboz ve arterial plak gelişimine yol açabilir ve nihayetinde çeşitli CVD 14,15,16 ile sonuçlanabilir. Bu nedenle, damar lezyonlarının i...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar çıkar çatışması belirtmemektedir.
Bu araştırma, Sichuan İl Bilim ve Teknoloji Departmanı tarafından finanse edilmiştir (Hibe No. 2024NSFSC0717). Figür hazırlığında gösterdiği destek için Figdraw'a teşekkürler.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Akupunktur iğneleri | Suzhou Tıbbi Malzemeler Fabrikası Şirketi, Ltd. | 242059 | 0.18 ve kez; 13 mm |
| Aktif Kısmi Tromboplastin Zamanı (APTT) Test Kiti (Pıhtılaştırma Yöntemi) | Pekin Successer Technology Inc. | R21D24C4 | |
| AMPure XP boncukları | Beckman Coulter Genomics | A63881 | |
| Otomatik Koagülasyon Analizörü | Pekin Successer Technology Inc. | SF-8050 | |
| Fibrinogen (FIB) Test Kiti (Pıhtılaştırma Yöntemi) | Pekin Successer Technology Inc. | R31D24D2 | |
| Tam Otomatik Kan Reoloji Testeri | Pekin Successer Technology Inc. | SA-5600 | |
| GraphPad Prism 10 | GraphPad Yazılımı, Inc. | ||
| H& E boyama çözeltisi | Wuhan Saiweier Biyoteknoloji Şirketi, Ltd | G1005 | |
| Illumina kütüphanesi nicelik kiti | Kapa Biosciences | 7960166001 | |
| İzofluran | RWD Yaşam Bilimleri | R510-22-10 | 100 mL |
| Manyetik boncuk tabanlı dışkı genomik DNA çıkarma kiti | Biotek | AU46111-96 | |
| Nikon Eclipse Ci-L dik beyaz ışık mikroskobu | Nikon | ||
| QIIME 2 | https://qiime2.org/ | ||
| SDZ-II Huatuo elektronik akupunktur cihazı | Suzhou Tıbbi Malzemeler Fabrikası Şirketi, Ltd. | SDZ-II | |
| SILVA veritabanı | Sürüm 138, https://www.arb-silva.de/ | ||
| Sodyum klorür | Chengdu Jinshan Kimyasal Reaktifler Şirketi, Ltd. | 20231008 | 500 g |
| SPF Wistar fareleri | SPF (Pekin) Biyoteknoloji Şirketi, Ltd. | SCXK (Pekin) 2024-0001 | |
| Trombin Zamanı (TT) Test Kiti (Pıhtılaştırma Yöntemi) | Pekin Successer Technology Inc. | R4D24E1 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste