Yöntem makalesi

Farelerde hem kısmi karotis ligasyonu hem de PCSK9'un aşırı ekspresyonuyla indüklenen ateroskleroz modeli

548 görüntüleme

DOI:

10.3791/69862

27 Şubat 2026

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Tekrarlanabilir bir fare modeli, PCSK9 adeno-ilişkili virüsü (PCSK9-AAV) - yüksek yağlı diyet aracılı hiperkolesterolemi ve kısmi sol karotis ligasyonu (PCL) ile insan patofizyolojisini birleştirerek karotis aterosklerozu indükler ve insan patofizyolojisini yeniden ortaya koyar. Bu yöntem, genomik düzenleme olmadan vahşi tip farelerde insan benzeri karotis aterosklerotik lezyonların hızlı bir şekilde indüklenmesini sağlar ve karotis ateroskleroz araştırmalarını kolaylaştıran standart bir araç sağlar.

Özet

Vahşi tip farelerde hızlı ve tekrarlanabilir karotis spesifik ateroskleroz modellerinin eksikliği, plak biyolojisi ve tedavilerinin translasyonel çalışmalarını sınırlar. Bu protokol, adeno-ilişkili virüs (AAV) aracılı PCSK9 aşırı ekspresyonu, aterojenik yüksek yağlı diyet ve sol kısmi karotis ligasyonu (PCL) kombinasyonuyla C57BL/6 farelerinde tekrarlanabilir karotis aterosklerozu indüklemek için genomik olarak düzenlenmemiş, zaman verimli bir yöntemi tanımlar. Amaç, genetik olarak değiştirilmiş hayvanlara ihtiyaç duymadan insan karotis hastalığının temel patofizyolojik özelliklerini - hiperlipidemi ve bozuk akışı - yeniden üreten standartlaştırılmış bir iş akışı sağlamaktır. Yöntemler arasında PCSK9-AAV dozlama ve uygulaması, perioperatif hazırlık, sol karotis bölgesinin adım adım cerrahi ligasyonu, ameliyat sonrası bakım, diyet rejimi, doku toplama ve Yağlı Kırmızı O ile Verhoeff-Van Gieson boyama dahil histolojik değerlendirme yer alır. Sonuçlar, referans değerlere kıyasla dolaşımdaki kolesterol ve düşük yoğunluklu lipoprotein seviyelerinin yükseldiğini göstermektedir. Sol ligated karotis arterde belirgin aterosklerotik plaklar gelişir; sağ ligasyonsuz kontrol arterine göre belirgin şekilde artan lipid birikimi ve önemli arterial intima-media kalınlaşması görülür. Bu standartlaştırılmış protokol, karotis plak oluşumu, ilerlemesi, müdahale stratejileri üzerinde çalışan araştırmacılar için tekrarlanabilirliği ve erişilebilirliği artırır ve deneysel tedavilerin laboratuvarlar arası karşılaştırmalarını kolaylaştırır.

Giriş

Kardiyovasküler hastalıklar (KARDI-DV) küresel ölümlerin başlıca nedeni olmaya devam eder; ateroskleroz bunların ortak patolojik temelinioluşturur 1. Karotis arteri, aterosklerotik lezyonlar için kritik bir yerdir; Karotis aterosklerozun incelenmesi, YÖĞÜ-SÜĞ hastalıklarının patogenezini anlamak ve terapötik stratejiler geliştirmek için gereklidir2. Hayvan modelleri, in vivo ateroskleroz araştırmaları için vazgeçilmez araçlardır, ancak mevcut modellerin kolaylık ve insan patofizyolojik özelliklerini yeniden yansıtma yeteneği açısından sınırlamaları sıklıkla vardır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm prosedürler, Pekin Birliği Tıp Fakültesi Hayvan Etik Komitesi'nin Hayvan Etik Komitesi (ACUC-A02-2024-006) tarafından onaylanmış ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ne uygundur.

1. Deneysel hayvan hazırlığı

  1. 6-8 haftalık erkek C57BL/6 fareleri satın alın (vücut ağırlığı: 22-25 g).
  2. Sıçrayı, belirli bir patojensiz (SPF) ortamda, sıkı kontrollü koşullarda ev sahipliği yapar: sıcaklık (23 ± 1°C), nem (%50 ± 5) ve 12 saat ışık/karanlık döngü (aydınlatma: 07:00-19:00).
  3. Deneyden önce, farelere standart bir yemek diyeti (%10 yağ enerji oranı) ve steril su, ücr....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Yağ Kırmızı O boyama sonuçları, bağlanmış arterlerde şiddetli aterosklerotik plak oluşumu, belirgin lipid çekirdekleri ve nekrotik alanlar göstermiştir. Sol karotis arteride lipid bölgelerinin oranı, sağ karotis arter kontrolüne göre anlamlı derecede yüksekti (p < 0.001) (Şekil 2A). VVG boyama, intimada elastik liflerin yok olması veya yok olması, plak intimasında önemli ölçüde kalınlaşma ortaya çıkardı. Sol karotis arter kontrolüne kıyasla hem intima-media .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, PCSK9-AAV kaynaklı hiperkolesterolemi, yüksek yağlı diyet (HFD) ve ortak karotis arterinin kısmi ligasyonu (PCL) birleştirilerek C57BL/6 farelerinde karotis ateroskleroz modeli oluşturmak için standartlaştırılmış bir yöntemi tanımlar.

ApoE -/- veya LDLR-/- gibi geleneksel modellerle veya WT fare5 kullanan PCL modelleriyle karşılaştırıldığında, bu model ateroskleroz araştırmalarında benzersiz avantajlar sunar. İlk o.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82470516, 8227022021), Merkezi Üniversiteler için Özel Araştırma Fonu, Pekin Birliği Tıp Fakültesi (3332025111), Ulusal Yüksek Düzey Hastane Klinik Araştırma Fonu (2025-PUMCH-A-181, 2025-PUMCH-D-001) ve Sichuan Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2024NSFC0715) tarafından finanse edilmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
6-0 steril naylon dikişJinhuan TıpF602NA
C57BL/6 fareleriŞanghay Model Organizmalar Merkezi, Inc. (SMOC)SM-001NA
Yemeklik deitXietong BiyografisiHayır. XT93GNA
Cryostat Leica CM1950NA
Yıkıcı kremVeetRB Health LLCNA
Yüksek yağlı diyetXietong BiyografisiXT108cNA
EKIM'DENSakura4582NA
Yağlı Kırmızı O Çözeltisiservicebio G1017-100mLNA
Optik mikroskopLeicaDM4BNA
Paraformaldehit Servicebio G1101-500mLNA
PCSK9-AAVWZBioscience AV208001-AV8NA
Poli-L-lizin kaplamalı kaydıraklarSigmaP0425NA
Kaydırma tarayıcı3DHISTECHPannoramik TARAMANA
SülfametoksazolSelleckS1915 NA
Doku yapıştırıcısı3M Vetbond1469SBNA
Damar görselleştirme fare kuyruğu enjeksiyon tutucusu Jinan Yiyan Bilim & Teknoloji Geliştirme Şirketi, LtdYLS-Q9GNA

Kaynaklar

  1. Vaduganathan, M., Mensah, G. A., Turco, J. V., Fuster, V., Roth, G. A. The global burden of cardiovascular diseases and risk: A compass for future health. J Am Coll Cardiol. 80 (25), 2361-2371 (2022).
  2. Saba, L., et al. Carotid artery at....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

PCSK9 A r fadesiY ksek Ya l DiyetC57BL 6 FareleriAdeno li kili Vir sPlak Olu umuOil Red O BoyamaVerhoeff Van Gieson BoyamaHiperlipidemi

İlgili makaleler