Stria vascularis'in Primer Marjinal Hücrelerinin Yenidoğan Farelerden İzolyasyonu ve Kültürü

Yutong Bai; Qingyan Zhou; Qingquan Hua; Yuanyuan Zhang

doi:10.3791/69916

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Stria vascularis'in Primer Marjinal Hücrelerinin Yenidoğan Farelerden İzolyasyonu ve Kültürü

330 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/69916

⸱

20 Mart 2026

Yutong Bai^*¹^,²^,³ , Qingyan Zhou^*¹^,²^,³ , Qingquan Hua¹^,² , Yuanyuan Zhang¹^,²

¹Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Renmin Hospital of Wuhan University, ²Research Institute of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Renmin Hospital of Wuhan University, ³The First Clinical School of Wuhan University

^* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, fare stria vascularis'ten birincil marjinal hücrelerin izolasyonu, saflaştırılması ve kültürü için bir protokol sunuyoruz ve koklear yan duvar bozukluklarını incelemek için oksidatif stres ve hücresel yaşlanma için in vitro modeller oluşturulmuştur.

Özet

Stria vascularis, iç kulakta endokoklear potansiyeli (EP) üreten ve sürdüren kilit bir yapıdır ve işlev bozukluğu çeşitli işitme kaybı türleriyle yakından ilişkilidir. Stria vascularis, marjinal hücreler, ara hücreler ve bazal hücrelerden oluşur; bunlar arasında marjinal hücreler EP'nin oluşumu ve korunmasında merkezi bir rol oynar. Bu nedenle, marjinal hücrelerin in vitro primer kültür modeli oluşturulması, stria vascularis'in biyolojik özellikleri ve işitme kaybı ile ilişkili bozukluklardaki rolüyle ilgilenmesi için gereklidir.

Bu çalışmada, neonatal farelerin stria vaskülaris'inden primer marjinal hücreleri başarıyla izole edip kültürledik. Strial dokuları mikrodiseksiyon yoluyla elde edildi, tip II kollajenazla sindirildi ve çoğu fibroblast çıkarılmak için diferansiyel kaplama ile saflaştırıldı; kültürlenen hücreler 7. güne kadar %80'in üzerine birleşti. İmmünoflüoresans boyama, sitokeratin 18 (CK18) ve potasyum voltaj kapılı kanal alt ailesi Q üyesi 1'in (KCNQ1) stabil ekspresyonunu göstererek, marjinal hücrelerin başarılı izolasyonunu, yüksek saflığını ve korunmuş fizyolojik fonksiyonunu doğruladı.

Bu modele dayanarak, in vitro oksidatif stres ve hücresel yaşlanma modelleri sırasıyla hidrojen peroksit (H₂O₂) ve D-galaktoz kullanılarak oluşturulmuştur. Tedavi edilen hücrelerde, hücre içi reaktif oksijen türleri (ROS) seviyeleri ve yaşlanma ile ilişkili β-galaktosidaz (SA-β-gal) pozitifliği önemli ölçüde arttı; bu da birincil marjinal hücrelerin oksidatif stres ve yaşlanma tetikleyici uyaranlara karşı yüksek hassasiyetini gösterdi. Bu çalışma, fare birincil marjinal hücrelerinin kültürü ve modellenmesi için kararlı ve tekrarlanabilir bir sistem kurarak, stria vasküler disfonksiyon ve ilgili mekanizmaların incelenmesi için güvenilir bir in vitro platform sağlamaktadır.

Giriş

İşitsel sistemde, koklea içindeki çeşitli dokular birlikte çalışarak karmaşık ses dalgalarını elektriksel sinyallere^{dönüştürür 1}. Stria vascularis, endolimfin iyon bileşimini düzenler ve Endo-koklear Potansiyeli (EP) oluşturur; böylece koklear homeostazı korur ve iç ile dış saç hücrelerinin normal işlevini sağlar. Üç farklı hücre tipinden oluşur: marjinal hücreler, ara hücreler ve bazal hücreler. Marjinal hücreler, doğrudan endolimfe bakan ve sıkı birleşimlerle kapalı olan polarize epitel monotabakası oluşturur. Marjinal hücrelerin bazolateral zarı, stria vaskülaris içinde sodyum ve potasyum iyonu taşınımını dü....