Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Burada, insan derisindeki lenfatik damar yapısının üç boyutlu görselleştirilmesi, üç farklı doku temizleme tekniği uygulandıktan sonra konfokal veya ışık tabakası mikroskopisi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bu yöntemlerin immünohistokimyasal boyama ile birleşmesi, lenfödemin ilerlemesi sırasında lenfatik damarlarda fonksiyonel değişikliklere dair içgörü sağlar.
Cilt lenfatik damarları, kapillyarlar ve toplayıcı damarlardan oluşan, atık uzaklaştırma ve bağışıklık tepkilerinde önemli rollere sahiptir ve doku homeostazının korunması için gereklidir. Ancak, insan derisi, epidermis, dermis ve deri altı yağ gibi üç katmanıyla birlikte yoğun bir ekstrahücre matriks içerir; bu nedenle lenfatik ağları üç boyutta görselleştirmek zordur. Bu sınırlamayı gidermek için, bu makale, insan derisi lenfatiklerinin doku temizleme reaktifleri ile konfokal veya ışık tabakası mikroskopisi kombinasyonuyla üç boyutlu görselleştirmesi için her biri ilgi duyulan belirli moleküllere ve deneysel hedeflere özel olarak uyarlanmış üç farklı yöntem tanıtmaktadır. İmmöhistokimya yoluyla lenfatik endotel hücrelerindeki adherens bağlantı moleküllerini hedefleyerek, özellikle kapiller bağlantıların karakteristik düğmeden fermuara benzeri yeniden yapılanmasına, ikincil lenfödem hastalarından elde edilen cilt dokularında belirgin fonksiyonel etkileri olan yapısal değişiklikler değerlendirildi. Bu üç boyutlu görselleştirme tekniği, geleneksel histolojik doku kesiti analiziyle fark edilemeyen damar yapılarını ortaya koyar, böylece lenfatik damar yapısı ve fonksiyonunun anlaşılmasını artırır.
Lenfatik damarların işlevine, kanser metastazındaki köklü rolüne rağmen, deri homeostazını korumadaki rollerinin tanınmasından sonraartan ilgi vardır 1,2. Lenfatik damarlar, yapısal olarak kapiller ve toplama damarlara ayrılır ve her biri kendine özgü özelliklere sahiptir. Lenfatik kapillyarlar, lenfatik endotel hücrelerinden oluşan tek katmanlı bir yapıdan oluşur ve interstisiel sıvı, atık ürünler ve bağışıklık hücreleri için ilk toplama noktaları olarak hizmet verir. Buna karşılık, toplayan lenfatik damarlar iki katmanlı bir yapıya sahiptir ve lenfatik endotel tabakasını çev....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
İnsan denek deri örnekleri Chiba Üniversitesi Hastanesi'nden (Chiba, Japonya) alındı. İnsan deneklerle ilgili tüm prosedürler Chiba Üniversitesi Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulu ve Shiseido Küresel İnovasyon Merkezi tarafından onaylanmış ve tüm denekler yazılı bilgilendirilmiş onay vermiştir. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
1. İnsan derisi örneklerinin ön tedavisi
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Epidermisli ve epidermissiz temizlenmiş insan derisi dokusunun ışık geçirimliliğindeki fark
Şekil 1, epidermisi olan ve olmayan insan derisi örneklerinin Rapiclear 1.52 reaktifi ile permeabilizasyon ve temizlenme sonrası temsil eden fotoğraflarını göstermektedir. Epidermal çıkarma, etkili bir ışık emici olan melanini ortadan kaldırarak doku şeffaflığını artırır; bu, örneklerin altındaki siyah çizginin daha fazla görünürlüğüyle doğrulanır.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Biyolojik dokularda lenfatik ağların üç boyutlu görselleştirilmesi, yapısal özelliklerini, fizyolojik işlevlerini ve patolojik değişiklikleri anlamak için kritik öneme sahiptir. Bu protokol, insan cilt dokusu için optimize edilmiş üç farklı doku temizleme yöntemi sunar ve her biri belirli gözlemsel amaçlara göre uyarlanmıştır.
Epidermal çıkarma, melaninin ortadan kaldırılmasında kritik bir adım olarak kabul edilir; bu da doku şeffaflığını azaltır ve histolojik.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
K.T., E.G., N.I. ve K.K., Shiseido Co., Ltd.'nin çalışanlarıdır.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anti-CD31 antikor | R& D Sistemleri | AF806 | 1:200'de seyrelme |
| Anti-Podoplanin antikor | Dako | M3619 | 1:100'de seyrelme |
| Anti-VE-kadherin antikoru | Hücre Sinyal Teknolojisi | #2500 | 1:100'de seyrelme |
| CUBIC-L | Tokyo Kimya Endüstrisi | T3740 | |
| KÜBIK-R+(M) | Tokyo Kimya Endüstrisi | T3741 | |
| DMEM, düşük glikoz, piruvat | Thermo Fisher SCIENTIFIC | 11885084 | |
| Eşek Anti-Fare IgG (H+L) Yüksek Çapraz Adsorbe İkincil Antikor, Alexa Fluor 647 | Thermo Fisher SCIENTIFIC | A-31571 | 1:1000'de seyrelme |
| Eşek Anti-Tavşan IgG (H+L) Yüksek Çapraz Adsorbe İkincil Antikor, Alexa Fluor 568 | Thermo Fisher SCIENTIFIC | A10042 | 1:1000'de seyrelme |
| Eşek Anti-Koyun IgG (H+L) Çapraz Adsorbe İkincil Antikor, Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher SCIENTIFIC | A-11015 | 1:1000'de seyrelme |
| Rapiclear 1.52 | Sunjin Laboratuvarı | RC152001 | |
| ZEISS Lightsheet Z.1 Mikroskobu | Carl Zeiss | ||
| ZEISS LSM 880 Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu | Carl Zeiss |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.