Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Ultraviyole A-indüklenen cilt fotoyaşlanma modellerinde dönüşümlü büyüme faktörü beta 1/smad sinyalinin Honokiol düzenlenmesini inceleme protokolü

208 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70099

⸱

8 Mayıs 2026

 ,  ,  , 
1Plastic Surgery Center, the 988th Hospital of Joint Logistic Support Force of Chinese People's Liberation Army

Bu makalede

Özet

Bu protokol, honokiol'ün insan dermal fibroblastlarında ve fare derisinde UVA kaynaklı foto-yaşlanmayı, TGF-β1/Smad yolunu aktive ederek MMP ekspresyonunu azaltıp azaltmadığını araştırır.

Özet

Magnolia officinalis'ten türetilen önemli bir bileşen olan Honokiol (HNK), cilt hastalıklarını tedavi etme potansiyeline sahiptir. Şu anda, HNK'nin Ultraviyole A (UVA) kaynaklı ciltteki fotohasar üzerindeki etkisi ve etki mekanizması belirsizdir. UVA indüksiyonuyla HDF hücreleri ve tüysüz fare derisi için foto-yaşlanma hasar modeli oluşturuldu. HNK'nin normal HDF hücrelerinin ve UVA kaynaklı HDF hücrelerinin yaşamlılığı üzerindeki etkisi, Hücre yaşamlılık testi ile incelendi. HDF hücrelerindeki SOD, GSH, CAT ve MDA seviyeleri farklı kitlerle ölçüldü, ROS seviyeleri ise DCFH-DA ve Dihydroethidium kullanılarak ölçüldü. SA-β-galaktosidaz ve TUNEL boyama, HDF hücrelerinde yaşlanma ve apoptozu tespit etti ve akış sitometrisi hücre döngüsünün ilerlemesini değerlendirdi. Ciltteki histopatolojik hasar, patolojik boyama yoluyla değerlendirildi. Ayrıca, immünoflüoresans ve Western blot, Ki67, kollagen, matriks metalloproteinaz (MMP) ve TGF-β1/Smad yolu ilişkili protein seviyelerini değerlendirmek için kullanıldı. HNK (2,5-10 μM) tedavisi, normal HDF hücre canlılığı üzerinde olumsuz bir etki yaratmadı ancak UVA kaynaklı HDF hücre hasarını azaltarak oksidatif stresi ve apoptozu azalttı. UVA, HDF hücrelerinin yaşlanmasını tetikledi, S-faz durmasını indükledi, Ki67'yi azalttı, kolajen içeriğini azalttı ve MMP ekspresyonunu artırdı; HNK ise bu UVA kaynaklı anormallikleri etkili bir şekilde azalttı. Ayrıca, UVA fare derisinde daha derin kırışıklıklara, su ve kolajen içeriğinin azalmasına ve epitel kalınlığının artmasına neden olurken, HNK'nin deri altı enjeksiyonu cilt dokusundaki patolojik hasarı azaltmış ve su ile kolajen içeriğini artırmıştır. Ayrıca, HNK TGF-β1/Smad yolunu aktive etti ve TGF-β1 inhibitörü SB431542 HDF hücrelerinde foto-yaşlanma hasarına karşı HNK'nin koruyucu etkisini zayıflattı. Sonuç olarak, HNK, TGF-β1/Smad yolunun aktivasyonu yoluyla MMP ekspresyonunu azaltarak foto-yaşlanma hasarını azaltma potansiyeline sahiptir; böylece HDF hücrelerinde ve fare derisinde UVA kaynaklı foto-yaşlanmanı inhibe eder.

Giriş

Cilt yaşlanma süreci karmaşıktır ve iki ana forma ayrılır: doğal yaşlanma vefoto-yaşlanma 1. Çalışmalar, cilt yaşlanmasının %80 ila %90'ının çevredeki dışsal faktörlerden (örneğin, ultraviyole ışınları, hava kirliliği) kaynaklandığını göstermektedir; bunların arasında uzun süreli ultraviyole radyasyonu kaynaklı foto-yaşlanma en ciddietkilere sahiptir 2,3. Ultraviyole radyasyon UVC, UVB ve UVA olarak ikiye ayrılır. UVC ozon tabakasını nüfuz edemediğinden, foto-yaşlanma üzerine yapılan güncel araştırmalar UVA (320-400 nm) ve UVB (280-320 nm)4,5,6 üzerine odaklanmaktadır. UVB ile karşılaştırıldığında, UVA daha düşük enerjiye sahiptir, ancak daha nüfuz eder, epidermisten geçer ve dermisin derinlerine kadar ilerler; bu da ciddi cilt yaşlanmasının önemli birnedenidir. Önceki çalışmalar, HaCaT hücrelerine 57 mJ/cm 2 UVB ve 20 J/cm 2 UVA ışınının neden olduğu hasarın karşılaştırılabilirolduğunu göstermiştir 8. Cilt foto-yaşlanması, cildin fonksiyonu ve yapısında değişikliklere yol açar; özellikle cilt yüzeyi dokusunun sarkması, kırışıklıkların derinleşmesi, kollajen kaybı ve çıplak gözle görülebilen gri cilt renginin ortaya çıkması şeklinde ortaya çıkar; Ağır vakalarda, çeşitli iyi huylu ve kanser önleyici lezyonlar ve tümörler meydanagelebilir 9,10. Yaşlanma ve anti-aging üzerine yapılan araştırmaların artmasıyla birlikte, fotoyaşlanmanın sağlık riskleri dünya çapında en önemli sağlık sorunlarından biri haline gelmiştir. Bu nedenle, UVA kaynaklı foto-yaşlanma hasarının altında yatan patofizyolojik süreçlerin araştırılması ve tedavisi için yeni terapötik seçenekler geliştirilmesi çok önemlidir.

Magnolia officinalis'ten, geleneksel Çin tıbbi bitkisinden çıkarılan Honokiol (HNK), kimyasal formülü C18H18O 211 olan önemli bir biyoaktif bileşiktir. HNK çeşitli farmakolojik aktiviteler gösterir ve fenolik hidroksil grubu oksidasyona karşı yüksek hassastır; güçlü antioksidan ve serbest radikal toplama etkilerine sahiptir12. Buna ek olarak, HNK'nin antibakteriyel, anti-inflamatuar, antiviral, antitümör, antidepresan, nöroprotektif ve anti-prematur yumurtalık yetmezliği farmakolojiketkileri vardır 13,14,15,16. Oral HNK'nın hayvan çalışmaları ve klinik çalışmalarda esasen güvenli olduğu belirlenmiş ve herhangi bir belirgin yan etki tespitedilmemiştir 17,18,19. Son çalışmalar, HNK'nin UVB kaynaklı ciltkanserini önlediğini ve UVB kaynaklı cilt inflamatuar yanıtını ve DNA hipermetilasyonunuinhibe ettiğini ortaya koymuştur; bu da cilt hastalıklarının tedavisinde potansiyel kullanımını önermektedir. Vitamin C ve resveratrol gibi yaygın kullanılan foto-yaşlanma karşıtı ajanlarla karşılaştırıldığında, HNK kendine özgü ve üstün özelliklere sahiptir: lipofil yapısı, hidrofilik Cvitamini 22'den daha iyi deri geçirgenliği sağlar; ve resveratrol23'e göre daha yüksek fotostabilite ve in vivo biyoyararlanılım sergiler. Bu preklinik bulgular, HNK'nin ultraviyole kaynaklı cilt fotohasarına karşı cilt bakım ürünleri ve klinik müdahaleler için güvenli ve etkili bir translasyon potansiyeline sahip olduğu fikrini desteklemektedir. Ancak, HNK tedavisinin UVA'nın neden olduğu cilt foto-yaşlanma hasarı üzerindeki etkisi henüz bildirilmemiştir.

Dönüşüm büyüme faktörü-β1 (TGF-β1), hücre büyümesi ve gelişimi, doku onarımı ve yenilenmesi ile hücrelerin, dokuların ve organların büyümesi ve gelişimi için hayati öneme sahip çok fonksiyonlu birsitokindir 24,25. TGF-β1'in hücreye öncelikle Smad protein ailesinin üyeleri aracılığıyla sinyal verdiği ve bu da aşağı akış hedef genlerin transkripsiyonunun özel düzenlenmesine yol açtığı gösterilmiştir. TGF-β1 sinyalizasyonu aktive olduğunda, Smad2 ve Smad3 26,27'nin fosforilasyonuna yol açar. Son çalışmalar, TGF-β1/Smad yolu ile cilt fibrozisi ile foto-yaşlanma arasında güçlü bir bağlantı olduğunugöstermiştir 28,29. Memelilerde hedef olan rapamisinin, sıçan deri dokularında TGF-β1/Smad yolunu aktive ettiği ve bunun da deri nemini korumak ve deri bariyerini korumak için önemli olan seramidlerin senteziniteşvik ettiği bildirilmiştir. Özellikle, HNK'nin karaciğer yıldız hücrelerinde TGF-β1/Smad yolunu modüle ettiği ve bunun da karaciğerfibrozisi 31'i iyileştirdiği bildirilmiştir. Bu nedenle, UVA kaynaklı foto-yaşlanma yaralanmasının hücresel ve fare modelleri oluşturuldu; HDF hücrelerinde 2,5–10 μM HNK tedavisi ve tüysüz farelerde 5 mg/kg veya 10 mg/kg HNK müdahalesi yapıldı; böylece HNK'nin foto-yaşlanma hasarı üzerindeki etkileri ve TGF-β1/Smad yolunun modülasyonunda potansiyel rolü araştırıldı. Bu çalışma, UVA kaynaklı cilt fotohasarı için yeni terapötik stratejiler geliştirmeyi amaçladı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hücre kültürü deneyleri, kurumsal biyogüvenlik yönergelerine uygun olarak ve Biyogüvenlik Seviye 2 (BSL-2) laboratuvar koşullarında gerçekleştirilmiştir. Hayvan deneyleri, Çin Halk Kurtuluş Ordusu Ortak Lojistik Destek Gücü 988. Hastanesi Hayvan Etik Komitesi'nin onayından sonra gerçekleştirildi (onay numarası: 2023-089).

Tüm deneysel prosedürler, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için kurumsal ve ulusal yönergelere sıkı şekilde uyarak gerçekleştirilmiştir. Deneyin sonunda, fareler sodyum pentobarbital aşırı dozuyla (100 mg/kg, intraperitoneal enjeksiyon) ötenazi edildi. Tüm çabalar barınma, tedavi ve örnekleme işlemlerinde hayvanların acısını en aza indirmek için gösterildi. Protokolde kullanılan reaktifler, kimyasallar, ekipman ve yazılımlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Hücre kültürü ve işleme

  1. Fibroblast kültür ortamında insan dermal fibroblastları (HDF) kültürlendirin. Kültürleri %5CO2 içeren doygun nem ortamında 37 °C'de tutun.
  2. Kültür ortamını her 3 günde bir değiştirin ve birleştiğinde HDF'yi 1:3 oranında geçiş yapın.
  3. HDF'yi UVA lambalarıyla (emisyon spektrumu: 320-400 nm) 5 J/cm2 dozda ışınlayın.
  4. 30 dakikalık UVA ışınından hemen sonra taze ortamla yenileyin. UVA ışınlamasını günde bir kez 8 gün ardışık32 tekrarlayın.
  5. HDF'yi 2.5, 5, 10, 20 veya 40 μM HNK ile 24 saat veya 48 saat boyunca doz taramadeneylerinde tedavi edin 33. HDF'yi 24 saat boyunca 2.5, 5 veya 10 μM HNK ile tedavi edin, ardından sonraki deneylerde UVA ışını (5 J/cm 2) uygulanır.
  6. HDF'yi 4 saat boyunca 10 μM HNK'ye maruz bırakın, ardından 10 μM TGF-β1 inhibitörü SB431542 ile 24 saat kuluçka yapın ve son olarak HNK+SB431542 grubundaki UVA (5 J/cm 2) ile ışınlanın.

2. Hücre yaşamlılık değerlendirmesi

  1. HDF'yi 96 kuyu hücre kültür plakalarına 1×104 hücre/kuyu yoğunluğunda aşılayın.
  2. Farklı işlemlerden sonra, her kuyuya 10 μL suda çözünürken tetrazolyum tuzu reaktifi eklenerek her kuyu başına 100 μL nihai hacme ulaşır ve hücreleri 37°C'de karanlıkta 1,5 saat kuluçka altına alın.
  3. Hücrelerin OD450 değerlerini mikroplaka okuyucu ile ölçün.

3. Süperoksit dismutaz (SOD), malondialdehit (MDA), katalaz (CAT) ve glutatyon (GSH) seviyelerinin belirlenmesi

  1. HDF'yi 1 mL önceden soğutmalı PBS (0.01 M, pH 7.4) ile yıkayıp 200 μL SOD numune hazırlama çözeltisi (SOD Test Kit'inden) ekleyip hücreleri buzda 15 dakika boyunca lizleyin.
  2. Lizat 8000 × g ile 5 dakika boyunca 4 °C'de santrifüj edilir ve üst düzey analiz örneği olarak toplanır.
  3. Süpernatantın protein konsantrasyonunu belirlemek için bir BCA (Bicinchoninic Acid) protein test kiti kullanın ve örneği 50 μL hacimde toplam 50 μg proteine ayarlayın.
  4. 50 μg protein örneğini SOD test tamponu ile karıştırarak son reaksiyon hacmi 200 μL'ye ulaşın, karışımı 37 °C'de 30 dakika karanlıkta inkübe yapın ve ardından OD450 değerini ölçün.
  5. SOD testinde kullanılan aynı hücre lizatat süpernatantını alın, ilgili test kitleriyle CAT, GSH ve MDA seviyelerini ölçün.

4. Hücresel ROS seviyelerinin ölçümü

  1. HDF hücrelerini farklı koşullarda tedavi edin, 500 μL PBS ile iki kez durulayın ve 500 μL 10 μM reaktif oksijen türü floresan probuyla iyi karıştırın ve ışıktan 20 dakika uzakta 37 °C'de kuluçka yapın.
  2. Oda sıcaklığında 1000 × g sıcaklıkta hücreleri toplamak için santrifüj yapın, ardından 500 μL PBS ile iki kez durulayın.
  3. Hücreleri 500 μL hücre kültür ortamında yeniden askıya alın ve ardından boyama akış sitometrisiyle analiz edilir.
  4. Akış sitometrisi analiz yazılımı kullanarak floresans yoğunluğunu kaydedin ve ardından daha yüksek ROS'un daha güçlü yeşil floresansla eşleştiği floresans yoğunluğuna göre ROS seviyelerini hesaplayın.

5. Yaşlanma ile ilişkili β-galaktosidaz (SA-β-galaktosidaz) boyama

  1. HDF'yi 1×106 hücre/ kuyu yoğunluğunda 6 kuyu hücre kültür plakalarına tohum ekin ve yapışma noktasına kadar kültürleyin. Farklı tedavilerden sonra HDF'yi bir kez 2 mL PBS ile yıkayın.
  2. Her kuyuya 1 mL β-galaktosidaz boyama sabitleyicisi ekleyin ve hücreleri oda sıcaklığında fiksatif ile 15 dakika kuluçka yapın.
  3. Hücreleri 2 mL PBS ile 3 kez yıkayın, her kuyuya 1 mL boyama çalışma çözeltisi ekleyin ve ardından gece boyunca karanlıkta 37°C'de kuluçka yapın.
  4. Hücreleri ışık mikroskobu ile gözlemleyin ve fotoğraflayın (yaşlanan hücreler mavi görünür).

6. Hücre döngüsü testi

  1. HDF'yi 1×10 6 hücre/kuyu ile 6 kuyu plakalarına tohumlayın; farklı tedavilerden sonra hücreleri 2 mL PBS ile iki kez durulayın.
  2. Oda sıcaklığında 1000 × g sıcaklıkta hücreleri toplamak için 5 dakika santrifüj yapın, 1 mL %70 etanol (hücre fiksator) ekleyin ve pipetle nazikçe karıştırın. Sabit hücreleri 4°C bir buzdolabına 12 saat koyun.
  3. Hücre boyama çözeltisi için her numune için 500 μL propidium iyodid (PI, nihai konsantrasyon 50 μg/mL) ve RNaseA (nihai konsantrasyon 200 μg/mL) PBS ile karıştırılır. Hücreleri 500 μL boyama çözeltisine maruz bırakın, 37°C'de 30 dakika boyunca karanlıkta kuluçka yapın.
  4. Akış sitometrisi kullanarak floresans yoğunluğunu değerlendirin. Akış sitometresi kullanarak hücre döngüsü analizi yapın.

7. TUNEL boyama

  1. Farklı tedavi gruplarından HDF hücrelerini %4 paraformaldehit içeren 1 mL ile maruz bırakın ve oda sıcaklığında 30 dakika kuluçka yapın.
  2. Hücrelere %0,3 Triton X-100 içeren 1 mL PBS ekleyin ve oda sıcaklığında 5 dakika kuluçka yapın.
  3. Hücreleri PBS ile iki kez yıkayın, ardından 500 μL TUNEL testi çözeltisi damla olarak ekleyin ve hücreleri eşit şekilde kaplayın. Karanlıkta 37°C'de 1,5 saat kuluçka yapın.
  4. Hücreleri kapatmak için 200 μL DAPI boyama çözeltisi ekleyin ve 25 °C'de ışıktan uzakta 10 dakika kuluçka yapın.
  5. Hücreleri floresans sinyal koruma montaj ortamıyla mühürleyin, ardından floresans mikroskopuyla gözlemleyin ve fotoğraflayın (TUNEL-pozitif hücreler yeşil floresans gösterir).

8. İmmünofluoresans boyama

  1. Farklı tedavi gruplarından HDF hücrelerini 12 kuyu plakalarına tohumlayın. Hücre yoğunluğu %50-60'a ulaştığında, hücreleri %4 paraformaldehit 1 mL ile maruz bırakın ve oda sıcaklığında 25 dakika kuluçka yapın.
  2. Hücre yüzeyini engellemek için 1 mL %5 sığır serum albümini (BSA) damla olarak ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika kuluçka yapın.
  3. 500 μL primer antikor Ki67 (1:300), kollajen I (1:100), matriks metalloproteinaz (MMP)-1 (1:50) veya MMP-3 (1:100) damlalı olarak eklenin ve gece boyunca 4°C'de kuluçka yapın.
  4. Ertesi gün, hücreleri ışıktan 37°C uzakta 500 μL floressein izotiosiyanat (FITC) etiketli ikincil antikor (1:100) ile 1 saat boyunca kuluçka edin.
  5. Hücreleri kapatmak için 200 μL DAPI boyama çözeltisi ekleyin, 10 dakika boyunca ışıktan uzak kuluçka yapın, floresan mikroskobu ile gözlemleyin ve görüntü analiz yazılımıyla analiz edin (kollajen I ve MMP-1 pozitif hücreler kırmızı floresans, Ki67 ve MMP-3 pozitif hücreler yeşil floresans gösterir).

9. ELISA

  1. MMP-1 veya MMP-3 ELISA kit plakalarının kuyularına 100 μL HDF hücre kültürü süpernatantı eklenin ve 37°C'de 2 saat kuluçka yapın.
  2. Kuyular 200 μL PBS ile 3 kez yıkan, ardından her kuyuya 100 μL ilgili antikor eklenip 37 °C sıcaklıkta 1 saat karanlıkta kuluçka yapın.
  3. Kuyuyu, 200 μL yıkama tamponu ile (kit içinde sağlanmıştır) 3 kez durulayın, fazla çözeltiyi silkeledin ve örnekleri 100 μL streptavidin-HRP ile 30 dakika boyunca 37°C'de karanlıkta kuluçka yapın.
  4. PBS ile durulama yaptıktan sonra, kit talimatlarına göre 100 μL substratlar A ve B ekleyin ve 37°C'de karanlıkta 10 dakika kuluçka yapın.
  5. 50 μL sonlandırma çözeltisi ekleyin, iyi karıştırın, mikroplaka okuyucu kullanarakOD 450 değerini değerlendirin ve konsantrasyonu hesaplayın.

10. Foto-yaşlanma hasarı fare model yapımında

  1. SPF sınıfı dişi SKH1 tüysüz fareleri (15-20 g, 4-5 haftalık) 22 °C'de, %55-60 nemle ve özerk yiyecek ile suya erişim sağlar. Yiyecek kapları, su şişeleri ve içme pompaları dahil olmak üzere tesisleri düzenli olarak dezenfekte edin.
  2. Kontrol grubuna (n=6) ve model grubuna (n=18) fareleri rastgele atanır. Model grup farelerinde UVA 0.35 J/cm 2 ile 8 hafta34; UVA ışını olmadan aynı ortamda kontrol grubu fareleri ile aynı yerde kullan.
  3. Model grup farelerini eşit olarak 3 alt gruba (n=6 tane) böl.
  4. UVA ışınlanması sırasında (sırasıyla 5 mg/kg HNK grubu ve 10 mg/kg grupları olarak kayıt olarak, sırasıyla 5 mg/kg ve 10 mg/kg HNK grubu olarak kayıt olarak, haftada iki kez 100 μL hacimde 5 mg/kg veya 10 mg/kg HNK enjeksiyonları uygulanır). UVA ışınlaması sırasında üçüncü alt gruba haftada iki kez 100 μL salin enjeksiyonu uygulanır (UVA grubu olarak kayıt).
  5. Başarılı modellemeden sonra cilt kırışıklığı oluşumunu ve su içeriğinideğerlendirin 35.
  6. Fareleri intraperitonel olarak sodyum pentobarbital (100 mg/kg) ile ötenazi yapın ve ardından daha ileri deneyler için dorsal cilt dokuları toplayın.

11. Cilt kollajen I içeriğinin ölçümü

  1. 50 mg fare sırt derisi dokusu toplayın, sıvı azotla iyice öğütün ve 500 μL önceden soğutulmuş RIPA liz tamponu ile 30 dakika buz üzerinde lizize edin.
  2. Lizat 8000 × g ile 4 °C'de 5 dakika boyunca santrifüj yapın, süpernatı toplayın ve üreticinin talimatlarına göre pro-kollajen I C peptid test kiti kullanarak kolajen içeriğini ölçün.

12. Hematoksilin ve eozin (HE) boyama

  1. Fare derisi dokularını oda sıcaklığında 10 mL 4% paraformaldehit ile 24 saat sabitleyin, gradyanlı etanolde (%50%, %75, %95%100) kurtulun, parafine gömülüp 4 μm dilimlere kesin.
  2. Dilimleri 65°C'de 8 saat pişirin, ksilende iki kez 10 dakika deparaffinize edin ve oda sıcaklığında gradyanlı etanolde yeniden nemlendirin.
  3. Dilimleri hematoksilin çözeltisiyle 8 dakika boyay, 1 dakika akan musluk suyla durulayın, 30 saniye farklılaştırma çözeltisiyle fark ettirin ve oda sıcaklığında 1 dakika boyunca eosin ile boyanın.
  4. Lekeli dilimleri ksilen olarak şeffaf olan gradyan etanolde kurutun, montaj ortamıyla kapatın ve mikroskop altında gözlemleyin (Hücre çekirdeği mavi-mor görünürken, sitoplazma, kolajen lifleri ve eritrositler farklı derecelerde pembe görünür).

13. Masson boyama

  1. Fare derisi dokularının parafinli kesitlerini Masson trikrom boyama kiti36 ile boyamak. Parafin kesitlerini ksilenle iki kez, her biri 10 dakika boyunca deparafinize edin, Weigert demir hematoksilin boyama çözeltisi ekleyin ve 10 dakika boya.
  2. Asit etanol farklılaştırma çözeltisiyle 30 saniye ayırt edin, akan musluk suyla 5 dakika durulayın, ardından oda sıcaklığında damla damla Ponceau-fuchsin boyama çözeltisiyle 10 dakika boyayın. Masson'ın mavi çözeltisiyle ters mavilik yapın ve ardından 1 dakika boyunca damıtılmış suyla durulayın.
  3. Zayıf bir asit çalışma çözeltisi damıtılmış su oranında hazırlanın: zayıf asit çözeltisi (kitte verilmiştir) = 2:1; 1 mL zayıf asit çalışma çözeltisini damla olarak ekleyin ve oda sıcaklığında 30 saniye yıkayın.
  4. Fazla sıvıyı dök, 1 mL fosfomolibdik asit çözeltisi damla olarak ekleyin ve oda sıcaklığında 2 dakika boyunca tedavi edin. Zayıf asit çalışma çözeltisinden 1 mL damla olarak ekleyin, sonra 30 saniye yıkayın.
  5. Fazla sıvıyı dökün, 1 mL anilin mavisi boyama çözeltisi damla ekleyin ve 1 dakika boyayın. 1 mL zayıf asit çalışma çözeltisini damla olarak ekleyin ve 30 saniye yıka.
  6. %95 etanolde 2 saniye hızlıca kurut. Mutlak etanolde iki kez, her seferinde 10 saniye kurut.
  7. Kuruduktan sonra bölümleri ksilenle temizleyin ve nötr sakızla monte edin. Her gruptaki kolajen liflerinin dağılımını mikroskop altında gözlemleyin (Kolajen lifleri mavi görünürken, kas lifleri, sitoplazma ve eritrositler parlak kırmızı, hücre çekirdekleri ise belirgin şekilde mavi-siyah görünür).

14. Cilt dokusu ROS seviyelerinin ölçümü

  1. Fare derisi dokusunun donmuş bölümlerini (eksizyondan 1 saat içinde hazırlanmış) alın, 1 mL temizlik solüsyonunu tüm bölüm yüzeyine damla olarak yayın ve oda sıcaklığında 10 dakika bekletin.
  2. Yıkama çözeltisini silkele, ardından 1 mL 10 μM Reaktif oksijen türü probu damla olarak ekle, böylece bölümler eşit şekilde kaplanır; 37 °C sıcaklıkta ışıktan uzakta 30 dakika kuluçka yapın.
  3. Bölümleri PBS ile iki kez durulayın, kapak kıvılcımları ekleyin ve floresans mikroskobu ile gözlemleyin (ROS pozitif alanlarda kırmızı floresans bulunur; ROS seviyesi ne kadar düşükse, kırmızı floresans sinyali o kadar zayıftır).

15. Biyokimyasal gösterge testi

  1. Fare serumu toplayın ve ilgili test setlerinin talimatlarına göre tespit reaktifleri hazırlayın.
  2. Fare serumunda aspartat transaminaz (AST) ve alanin transaminazın (ALT) aktivitelerini ilgili kitlerle ölçün.
  3. Fare serumundaki kan üre azotu (BUN) ve kreatinin (CRE) seviyelerini ilgili kitlerle belirleyin.

16. Western Blot

  1. 50 mg doku veya 1×106 hücre toplayın, örnekleri 200 μL RIPA liz tamponu kullanarak 30 dakika boyunca buzda lizleyin ve proteinler elde edin.
  2. 8000 × g sıcaklığında 4 °C'de 5 dakika boyunca santrifüj yapın ve süpernatantı toplayın. BCA protein konsantrasyon test kiti kullanarak hücreler ve dokularda protein içeriğini değerlendirin.
  3. %12 SDS-PAGE jelinde örnek proteinlerin elektroforezi yapılması ve ayrılmış proteinlerin PVDF membranlarına 4 °C sıcaklıkta aktarılması.
  4. PVDF membranlarını oda sıcaklığında %5 BSA ile 3 saat bloklayın. Zarları TBST ile (20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl ve %0.1 Tween-20 içerir) 3 kez durulayın, ardından 4°C'de gece boyunca primer antikorlarla kuluçka yapın: P53 (1:1000), P21 (1:1000), P16 (1:100), kollajen I (1:1000), Cyclin A2 (1:500), Cyclin-dependent kinaz 2 (CDK2, 1:1000), MMP-1 (1:500), MMP-3 (1:1000), TGF-β1 (1:1000), Smad2 (1:1000), Smad3 (1:1000), p-Smad2 (1:1000) veya p-Smad3 (1:1000).
  5. İkinci gün zarları TBST ile 3 kez yıkayın, ardından 1 mL keçi anti-tavşan IgG (1:10000) ile oda sıcaklığında 2 saat kuluçka yapın. Geliştirilmiş kemilyüminsans (ECL) reaktifinden 500 μL zarlara eşit şekilde uygulayın, ardından jel görüntüleme sistemiyle taran.
  6. Görüntü analiz yazılımı kullanarak gri değer analizi yapın. Göreli ifade seviyesini, gri değerinin GAPDH'nin oranı olarak ifade edin.

17. İstatistiksel analiz

  1. In vitro hücre tabanlı testlerde tüm deneyler bağımsız olarak üç kez tekrarlanır (n=3, biyolojik çoğaltmalar).
  2. In vivo hayvan deneylerinde, her grup başına 6 fare dahil edilir (n=6), bu da laboratuvar hayvan refahı ve etik için 3R ilkelerine uygundur.
  3. Tüm sonuçlar ortalama ± standart sapma olarak ifade edilir. İstatistiksel analiz yazılımı kullanarak istatistiksel analiz yapın. Veri normalliği Shapiro-Wilk testi kullanılarak test edildi.
  4. Normal dağılımlı veriler için, çoklu grup karşılaştırması için tek yönlü ANOVA kullanın, ardından gruplar arasında çiftli karşılaştırmalar için Tukey'nin post-hoc testi uygulanır. Normal dağılım olmayan veriler için, parametrik olmayan Kruskal-Wallis testini uygulayın. P< 0.05 önemli bir farkı gösterir.
  5. Grafik yazılımı kullanarak grafikler oluşturun.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

HNK, UVA nedeniyle HDF hücrelerinde oksidatif stres hasarını hafifleter
24 saat veya 48 saat boyunca çeşitli HNK tedavisinin HDF hücrelerinin canlılığı üzerindeki etkileri, uygun konsantrasyon ve tedavi süresi için Hücre canlılığı testi ile incelendi. Sonuçlar, 2,5, 5 ve 10 μM HNK'nin 24 saat veya 48 saat tedaviden sonra normal HDF hücrelerinin canlılığını anlamlı şekilde etkilemediğini gösterdi ve bu dozlarda HNK'nin normal hücrelere toksik olmadığını gösterdi. Özell...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Ultraviyole ışık, hücrelere ve organizmalara zarar veren çevresel faktörlerden biridir. Önceki çalışmalar, UVA'nın yüksek nüfuz gücüne sahip olup, Dünya yüzeyine ulaşan ana ultraviyole ışığı türüolduğunu bildirmiştir 38. Fibroblastlar dermiste önemli fonksiyonel hücrelerdir ve yaşlanmaları doğrudan veya dolaylı olarak cildin yaşlanmasına nedenolabilir 39. HDF hücre modelinde ve tüysüz fare modelinde UVA kaynaklı foto-yaşlanma hasarı, cilt f...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, finansal çıkar çatışmaları olmadığını doğrular.

Teşekkürler

Hiçbiri yok

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ALT aktivite test kitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinP2711MAlanin transaminaz aktivite tespit kiti
Amplex Red CRE test kitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0291Skreatinin tespit kiti
AntiFade montaj ortamıBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinP0126floresans sinyal koruma montaj ortamı
AST aktivite test kitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinP2715SAspartat transaminaz aktivite tespit kiti
BCA protein test kitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinP0012Protein konsantrasyonu belirleme kiti
BSASigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDV900933özgül olmayan bağlanma için bloklama reaktifiyle
BUN Analiz KitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0574SKan üresi azotu tespit kiti
CAT Test KitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0051Katalaz Aktivite Tespit Kiti
CCK-8 reaktifiSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD96992Hücre canlılık testi çözeltisi suda çözünürken tetrazolyum tuzudur
CDK2 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDPA5-79024CDK2 tespiti için birincil antikor
Kemimilüminesans ajan ECLMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, ABDHY-K1005Geliştirilmiş kemilyüminesans tespit reaktüsü
Kolajen I antikorInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDPA1-26204kollajen I tespiti için birincil antikor
Siklin A2 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDPA5-34682Cyclin A2 tespiti için birincil antikor
DAPI boyama çözeltisiSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDD9542Nükleer boyama boyası
DCFH-DA floresan probMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, ABDHY-D0940Reaktif oksijen türleri floresan prob
Farklılaştırma çözümüBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinC0161'lerHematoksilin farklılaşma aşaması için reaktif
Dihidroethidyum probuBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0063Reaktif oksijen türü probu
Fibroblast kültür ortamıSunncell Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, Hubei, ÇinSNPM-H342Fibroblast büyümesi için tam kültür ortamı
FITC etiketli keçi anti-tavşan IgGInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDF-2765Floressein izotiosiyanat (FITC) ile işaretlenmiş ikincil antikor
Akış sitometrisiBD biyobilim, San Jose, CA, ABDBD FACSCaliburTMAkış sitometresi
FlowJo yazılımıBD biyobilim, San Jose, CA, ABDv10.8Akış Sitometrisi Analiz Yazılımı
Flüoresans mikroskobuLeica, Heidelberg, AlmanyaDM IL LIDERLIK ETTIFloresans görüntüleme için mikroskop
GAPDH antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDPA1-987Protein normalizasyonu için iç kontrol antikoru
Jel görüntüleme sistemiInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDiBright CL1500Protein tespiti için görüntüleme sistemi
keçi karşıtı tavşan IgGInvitrogen, Carlsbad, CA, ABD31460İmmünodetectivasyon için ikincil antikor
Graphpad Prism 9.0 yazılımıGraphPad Software, San Diego, CA, ABDPrism 9.0Grafik yazılımı
GSH Test KitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0053Glutatyon İçerik Tespit Kiti
HE boyama kitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinC0105Sdoku morfoloji analizi için histolojik boyama kiti
HNKMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, ABDHY-N0003Honokiol, biyoaktif bileşik
İnsan dermal fibroblastlarıSunncell Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, Hubei, ÇinSNP-H342birincil insan cilt fibroblast hücreleri
IBM SPSS Statistics 26.0 yazılımıIBM Corporation, Armonk, NY, ABDIBM SPSS İstatistikleri 26.0İstatistiksel analiz yazılımı
ImageJ yazılımıWayne Rasband, ABD Ulusal Ruh Sağlığı EnstitüsüSürüm 1.54HGörüntü analiz yazılımı
Ki67 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDMA5-14520Hücre proliferasyon belirteci tespiti için birincil antikor
Işık mikroskobuLeica, Heidelberg, AlmanyaDM3000Parlak alan görüntüleme için optik mikroskop
Masson trikrom boyama kitiSolarbio, Pekin, ÇinG1340Kolajen ve bağ dokusu boyama kiti
MDA Test KitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0131SMalondialdehit seviye tespit kiti (lipid peroksidasyon belirteci)
Microplate ReaderThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD1410101Hücre tabanlı testler için soğurma ölçüm cihazı
MMP-1 antikorInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDPA5-27210Matriks metalloproteinaz-1 tespit için birincil antikor
MMP-1 ELISA kitiEnzimle Bağlantılı Biyoteknoloji, Şanghay, Çinml038199MMP-1'in biyolojik örneklerde nicel tespiti
MMP-3 antikorAbcam, Cambridge, MA, ABDAB52915matriks metalloproteinaz-3 algısı için birincil antikor
MMP-3 ELISA kitiEnzimle Bağlantılı Biyoteknoloji, Şanghay, Çinml105322MMP-3'ün biyolojik örneklerde nicel tespiti
Nötr sakızBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinC0173montaj ortamı
P16 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDPA5-20379P16 proteini tespiti için birincil antikor
P21 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDMA5-14949P21 proteini tespiti için birincil antikor
P53 antikoruAbcam, Cambridge, MA, ABDAB131442P53 proteini tespiti için birincil antikor
paraformaldehitSolarbio, Pekin, ÇinP1110hücre ve doku fiksasyon reaktifi
PIBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinST512Hücre döngüsü analizinde DNA boyama için propidium iyodid
Pro-kollajen I C peptid test kitiTAKARA, Tokyo, JaponyaMK101Kolajen Sentezi Tespit Kiti
p-Smad2 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABD44-244Gfosforile Smad2 tespiti için birincil antikor
p-Smad3 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABD44-246Gfosforile Smad3 tespiti için birincil antikor
PVDF zarlarıInvitrogen, Carlsbad, CA, ABD88520Western blotting için protein transfer zarı
RIPA liz tamponuBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinP0013BHücre ve doku lizatları için protein ekstraksiyon tamponu
RNaseABeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinST579DNA boyama sırasında RNA çıkarılması için ribonükleaz
SA-β-galaktosidaz boyama kitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinC0602Hücresel Yaşlanma Tespit Kiti
SB431542MedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, ABDHY-10431TGF-β 1 Sinyal Yolu Engelleyicisi
SDS-PAGE jelleriInvitrogen, Carlsbad, CA, ABDWG1403BX10Protein elektroforezi için poliakrilamid jeller
SKH1 tüysüz farelerVitalriver, Pekin, ÇinCilt foto-yaşlanma çalışmaları için hayvan modeli
Smad2 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABD51-1300Smad2 tespiti için birincil antikor
Smad3 antikoruInvitrogen, Carlsbad, CA, ABD51-1500Smad3 tespiti için birincil antikor
SOD Analiz KitiBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinS0101SSüperoksit dismutaz aktivite tespit kiti
TGF-β 1 antikorAbcam, Cambridge, MA, ABDAB215715TGF-&beta için birincil antikor; 1 Tespit
Triton X-100Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDX-100Hücre zarı geçirimliliği için iyonik olmayan deterjan
TUNEL testi çözümüBeyotime Biotechnology, Şanghay, ÇinC1086DNA parçalanması için apoptoz tespit reaktifi
KsilenSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD247642doku deparafinizasyonu için organik çözücü

Kaynaklar

  1. Gu, Y., Han, J., Jiang, C., Zhang, Y. Biomarkers, oxidative stress and autophagy in skin aging. Ageing Res Rev. 59, 101036 (2020).
  2. Chaudhary, M., Khan, A., Gupta, M. Skin ageing: pathophysiology and current market treatment approaches. Curr Aging Sci. 13 (1), 22-30 (2020).
  3. Lephart, E. D. Equol’s anti-aging effects protect against environmental assaults by increasing skin antioxidant defense and ECM proteins while decreasing oxidative stress and inflammation. Cosmetics. 5 (1), 16 (2018).
  4. Gromkowska-Kępka, K. J., Puścion-Jakubik, A., Markiewicz-Żukowska, R., Socha, K. The impact of ultraviolet radiation on skin photoaging—review of in vitro. studies. J Cosmet Dermatol. 20 (11), 3427-3431 (2021).
  5. Tsai, T. Y., et al. Djulis supplementation against oxidative stress and ultraviolet radiation-induced cell damage: the influence of antioxidant status and aging of skin in healthy subjects. J Cosmet Dermatol. 21 (7), 2945-2953 (2022).
  6. McCormick, E., et al. Topical nanoencapsulated cannabidiol cream as an innovative strategy combating UV-A-induced nuclear and mitochondrial DNA injury: a pilot randomized clinical study. J Am Acad Dermatol. 91 (5), 855-862 (2024).
  7. Ansary, T. M., Hossain, M. R., Kamiya, K., Komine, M., Ohtsuki, M. Inflammatory molecules associated with ultraviolet radiation-mediated skin aging. Int J Mol Sci. 22 (8), 3974 (2021).
  8. Deng, H., et al. Pterostilbene's protective effects against photodamage caused by UVA/UVB irradiation. Pharmazie. 73 (11), 651-658 (2018).
  9. Ho, C. Y., Dreesen, O. Faces of cellular senescence in skin aging. Mech Ageing Dev. 198, 111525 (2021).
  10. Bocheva, G., et al. Protective role of melatonin and its metabolites in skin aging. Int J Mol Sci. 23 (3), 1238 (2022).
  11. Rauf, A., et al. Honokiol: a review of its pharmacological potential and therapeutic insights. Phytomedicine. 90, 153647 (2021).
  12. Cardullo, N., Monti, F., Muccilli, V., Amorati, R., Baschieri, A. Reaction with ROO• and HOO• radicals of honokiol-related neolignan antioxidants. Molecules. 28 (2), (2023).
  13. Prasher, P., et al. Honokiol and its analogues as anticancer compounds: current mechanistic insights and structure-activity relationship. Chem Biol Interact. 386, 110747 (2023).
  14. Xin, L., et al. Honokiol alleviates radiation-induced premature ovarian failure via enhancing Nrf2. Am J Reprod Immunol. 90 (4), e13769 (2023).
  15. Faysal, M., et al. Neuropharmacological potential of honokiol and its derivatives from Chinese herb Magnolia species: understandings from therapeutic viewpoint. Chin Med. 18 (1), 154 (2023).
  16. Fan, X. X., et al. Honokiol improves depression-like behaviors in rats by HIF-1α-VEGF signaling pathway activation. Front Pharmacol. 13, 968124 (2022).
  17. Du, E., et al. Dietary honokiol supplementation improves antioxidant capacity, enhances intestinal health, and modulates cecal microbial composition and function of broiler chickens. Poult Sci. 103 (7), 103798 (2024).
  18. Sarrica, A., Kirika, N., Romeo, M., Salmona, M., Diomede, L. Safety and toxicology of magnolol and honokiol. Planta Med. 84 (16), 1151-1164 (2018).
  19. Zhuang, Q., et al. A validated ultra-HPLC-MS/MS method for determination of honokiol in human plasma and its application to a clinical pharmacokinetic study. Bioanalysis. 11 (11), 1085-1098 (2019).
  20. Guillermo, R. F., et al. Time- and dose-response effects of honokiol on UVB-induced skin cancer development. Drug Discov Ther. 6 (3), 140-146 (2012).
  21. Prasad, R., Singh, T., Katiyar, S. K. Honokiol inhibits ultraviolet radiation-induced immunosuppression through inhibition of ultraviolet-induced inflammation and DNA hypermethylation in mouse skin. Sci Rep. 7 (1), 1657 (2017).
  22. Dikalov, S., Losik, T., Arbiser, J. L. Honokiol is a potent scavenger of superoxide and peroxyl radicals. Biochem Pharmacol. 76 (5), 589-596 (2008).
  23. Shen, C. Y., Jiang, J. G., Yang, L., Wang, D. W., Zhu, W. Anti-ageing active ingredients from herbs and nutraceuticals used in traditional Chinese medicine: pharmacological mechanisms and implications for drug discovery. Br J Pharmacol. 174 (11), 1395-1425 (2017).
  24. Kim, K. K., Sheppard, D., Chapman, H. A. TGF-β1 signaling and tissue fibrosis. Cold Spring Harb Perspect Biol. 10 (4), (2018).
  25. Lodyga, M., Hinz, B. TGF-β1—a truly transforming growth factor in fibrosis and immunity. Semin Cell Dev Biol. 101, 123-139 (2020).
  26. Liu, H., et al. TGF-β/Smads signaling pathway, Hippo-YAP/TAZ signaling pathway, and VEGF: their mechanisms and roles in vascular remodeling-related diseases. Immun Inflamm Dis. 11 (11), e1060 (2023).
  27. Huang, Y., et al. HIF-1α switches the functionality of TGF-β signaling via changing the partners of Smads to drive glucose metabolic reprogramming in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 398 (2021).
  28. Xie, X., et al. Iguratimod inhibits skin fibrosis by regulating TGF-β1/Smad signalling pathway in systemic sclerosis. Eur J Clin Invest. 52 (8), e13791 (2022).
  29. Guo, K., et al. Compound collagen peptide powder improves skin photoaging by reducing oxidative stress and activating TGF-β1/Smad pathway. Photochem Photobiol. 100 (6), 1874-1893 (2024).
  30. Yamane, T., et al. mTOR inhibition by rapamycin increases ceramide synthesis by promoting transforming growth factor-β1/Smad signaling in the skin. FEBS Open Bio. 6 (4), 317-325 (2016).
  31. Kataoka, S., et al. Honokiol acts as a potent anti-fibrotic agent in the liver through inhibition of TGF-β1/SMAD signaling and autophagy in hepatic stellate cells. Int J Mol Sci. 22 (24), 13678 (2021).
  32. Jang, H. Y., et al. Fisetin inhibits UVA-induced expression of MMP-1 and MMP-3 through the NOX/ROS/MAPK pathway in human dermal fibroblasts and human epidermal keratinocytes. Int J Mol Sci. 24 (24), 16212 (2023).
  33. Zheng, X., et al. Honokiol attenuates mitochondrial fission and cell apoptosis by activating Sirt3 in intracerebral hemorrhage. Chin Med J (Engl). 136 (6), 719-731 (2023).
  34. Xia, Y., Zhang, H., Wu, X., Xu, Y., Tan, Q. Resveratrol activates autophagy and protects from UVA-induced photoaging in human skin fibroblasts and the skin of male mice by regulating the AMPK pathway. Biogerontology. 25 (4), 649-664 (2024).
  35. Kim, J., Lee, N., Chun, Y. S., Lee, S. H., Ku, S. K. Krill oil's protective benefits against ultraviolet B-induced skin photoaging in hairless mice and in vitro. experiments. Mar Drugs. 21 (9), (2023).
  36. Zhang, C., et al. Combination of lyophilized adipose-derived stem cell concentrated conditioned medium and polysaccharide hydrogel in the inhibition of hypertrophic scarring. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 23 (2021).
  37. Sun, G., et al. Panax ginseng Meyer cv. Silvatica phenolic acids protect DNA from oxidative damage by activating Nrf2 to protect HFF-1 cells from UVA-induced photoaging. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115883 (2023).
  38. Fadadu, R. P., Wei, M. L. Ultraviolet A radiation exposure and melanoma: a review. Melanoma Res. 32 (6), 405-410 (2022).
  39. Wlaschek, M., Maity, P., Makrantonaki, E., Scharffetter-Kochanek, K. Connective tissue and fibroblast senescence in skin aging. J Invest Dermatol. 141 (4 Suppl), 985-992 (2021).
  40. Duan, Y., et al. Handelin reduces ultraviolet A-induced photoaging by inhibiting reactive oxygen species generation and enhancing autophagy. Tohoku J Exp Med. 259 (3), 189-198 (2023).
  41. Liu, S., et al. Oral supplementation of sea cucumber and its hydrolysate mitigates ultraviolet A-induced photoaging in hairless mice. J Sci Food Agric. 102 (5), 1987-1994 (2022).
  42. Liu, S., et al. Gly-Pro protects normal human dermal fibroblasts from UVA-induced damages via MAPK-NF-κB signaling pathway. J Photochem Photobiol B. 237, 112601 (2022).
  43. Lu, Z., et al. Hesperetin attenuates UVA-induced photodamage in human dermal fibroblast cells. J Cosmet Dermatol. 21 (11), 6261-6269 (2022).
  44. Michel, P., et al. Anti-inflammatory, antioxidant and photoprotective activity of standardised Gaultheria procumbens L. leaf, stem, and fruit extracts in UVA-irradiated human dermal fibroblasts. J Ethnopharmacol. 319 (Pt 2), 117219 (2024).
  45. Fu, H., et al. Tremella fuciformis polysaccharides inhibit UVA-induced photodamage of human dermal fibroblast cells by activating and up-regulating Nrf2/Keap1 pathways. J Cosmet Dermatol. 20 (12), 4052-4059 (2021).
  46. Park, C., et al. Honokiol ameliorates oxidative stress-induced DNA damage and apoptosis of C2C12 myoblasts by regulating ROS generation and the mitochondrial pathway. Anim Cells Syst. 24 (1), 60-68 (2020).
  47. Chen, Q., et al. Metformin attenuates UVA-induced skin photoaging by suppressing mitophagy and the PI3K/AKT/mTOR pathway. Int J Mol Sci. 23 (13), 6969 (2022).
  48. Wang, M., Guo, Y., Wan, M., Chen, Z., Zhong, J. L. TAZ reduces UVA-mediated photoaging through regulation of cell proliferation in skin fibroblasts. Photochem Photobiol. 99 (1), 153-159 (2023).
  49. Han, S., et al. Inhibitory effect of seawater pearl hydrolysate on UVA-induced photoaging of human skin fibroblasts. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1558288 (2022).
  50. Alam, A., et al. Computational development of new inhibitors for apoptosis stimulating protein of p53 (iASPP) using pharmacophore modeling, docking, and MD simulation approaches. J Cancer Biomol Ther. 1 (2), 1-9 (2024).
  51. Bai, G. L., et al. Rapamycin protects skin fibroblasts from UVA-induced photoaging by inhibition of p53 and phosphorylated HSP27. Front Cell Dev Biol. 9, 633331 (2021).
  52. Zhang, J., Yu, H., Man, M. Q., Hu, L. Aging in the dermis: fibroblast senescence and its significance. Aging Cell. 23 (2), e14054 (2024).
  53. Liu, H., Dong, J., Du, R., Gao, Y., Zhao, P. Collagen study advances for photoaging skin. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 40 (1), e12931 (2024).
  54. Fisher, G. J., et al. Skin aging from the perspective of dermal fibroblasts: the interplay between adaptation to the extracellular matrix microenvironment and cell autonomous processes. J Cell Commun Signal. 17 (3), 523-529 (2023).
  55. Li, F., et al. Discovery of matrix metalloproteinase inhibitors as anti-skin photoaging agents. Eur J Med Chem. 267, 116152 (2024).
  56. Song, M. J., et al. Downregulation of carnitine acetyltransferase by promoter hypermethylation regulates ultraviolet-induced matrix metalloproteinase-1 expression in human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 116 (2), 70-77 (2024).
  57. Choi, S. I., et al. Eisenia bicyclis extract repairs UVB-induced skin photoaging in vitro and in vivo.: photoprotective effects. Mar Drugs. 19 (12), (2021).
  58. Kim, M. K., et al. Dual role of enhancer of zeste homolog 2 in the regulation of ultraviolet radiation-induced matrix metalloproteinase-1 and type I procollagen expression in human dermal fibroblasts. Matrix Biol. 119, 112-124 (2023).
  59. Xue, N., Liu, Y., Jin, J., Ji, M., Chen, X. Chlorogenic acid prevents UVA-induced skin photoaging through regulating collagen metabolism and apoptosis in human dermal fibroblasts. Int J Mol Sci. 23 (13), (2022).
  60. Meng, L., et al. NPRC deletion attenuates cardiac fibrosis in diabetic mice by activating PKA/PKG and inhibiting TGF-β1/Smad pathways. Sci Adv. 9 (31), eadd4222 (2023).
  61. Li, W., et al. Echinacoside exerts anti-tumor activity via the miR-503-3p/TGF-β1/Smad axis in liver cancer. Cancer Cell Int. 21 (1), 304 (2021).
  62. Xiang, D., et al. Physalin D attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis by blocking TGF-β/Smad and YAP signaling. Phytomedicine. 78, 153294 (2020).
  63. Jiang, H., Zhou, X., Chen, L. Asiaticoside delays senescence and attenuates ROS generation in UV-exposed cells through regulation of the TGF-β1/Smad pathway. Exp Ther Med. 24 (5), 667 (2022).
  64. Tong, T., Park, J., Moon, Y., Kang, W., Park, T. α-Ionone protects against UVB-induced photoaging in human dermal fibroblasts. Molecules. 24 (9), 1688 (2019).
  65. Liu, X. Y., Hwang, E., Park, B., Xiao, Y. K., Yi, T. H. Photoprotective and anti-inflammatory properties of vina-ginsenoside R7 ameliorate ultraviolet B-induced photodamage in normal human dermal fibroblasts. Appl Biochem Biotechnol. 189 (3), 729-744 (2019).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

TGF Beta SinyalizasyonuSmad YolağıHDF HücreleriOksidatif StresHücre Canlılığı AnaliziWestern BlotAkış Sitometrisi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.