Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Tip 2 Diyabet ve Diyabetli Böbrek Hastalığında LINC00426'nin Tanısal Değeri ve Böbrek Hücreleri Üzerindeki Düzenleyici Etkileri

69 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70109

⸱

26 Haziran 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Nephrology, Tianyou Hospital, Wuhan University of Science and Technology, 2Department of Endocrinology, Changsha Central Hospital, 3Nephrology Department, Shanghai Putuo District People's Hospital, 4Cardiology Department, The Third Xiangya Hospital of Central South University, 5Health Clinic, General Office of Nanning Municipal People's Government

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

LINC00426 aşağı regülasyonu, böbrek hücrelerinde apoptozu tetikleyerek ve iltihabı artırarak diyabetik böbrek hastalığının (DKD) ilerlemesini teşvik eder.

Özet

Çalışma, tip 2 diyabet (T2DM) ve diyabetik böbrek hastalığında (DKD) LINC00426'nin tanısal değerini ve böbrek hücreleri üzerindeki düzenleyici etkilerini araştırmaktadır. Çalışmada 280 T2DM hastası (146 DKD vakası) ve aynı dönemde ziyaret eden 186 sağlıklı kontrol kontrol grubu yer aldı. Ters transkripsiyon nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR), T2DM ve DKD hastalarında serum LINC00426'in aşağı regülasyona uğradığını doğruladı. Alıcı çalışma karakteristikleri (ROC) analizi, LINC00426'nin T2DM ve DKD için tanısal değerini değerlendirdi. Çok değişkenli lojistik regresyon, bağımsız DKD risk faktörlerini belirledi. LINC00426 her iki hastalık için tanı değeri gösterdi ve idrar albümin-kreatinin oranı (UACR) ile negatif korelasyon gösterdi. Aşağı regülasyonu DKD gelişimini bağımsız olarak öngördü. Yüksek glikozlu (HG) ortam, HK-2 ve HGMC hücrelerinde LINC00426 ekspresyonunu inhibe eder. CCK8 testi, akış sitometrisi ve enzimle bağlantılı immünosor testleri, HG'nin proliferasyonu bastırdığını ve apoptoz ile iltihabı teşvik ettiğini doğruladı. Buna karşılık, LINC00426 aşırı ekspresyonu HK-2 ve HGMC hücrelerinin proliferatif kapasitesini artırır, apoptozu engeller ve inflamatuar yanıtları azaltır. LINC00426 regülasyonu, böbrek hücrelerinin (HK-2 ve HGMC) çoğalmasını engelleyerek DKD ilerlemesini artırabilir ve apoptoz ile inflamatuar yanıtları teşvik edebilir.

Giriş

Tip 2 diyabet (T2DM), kronik bir metabolikbozukluktur 1. Raporlar, T2DM ve komplikasyonlarının önemli bir küresel halk sağlığıendişesi haline geldiğini ve insan sağlığı ile toplumsal gelişim için tehdit oluşturduğunu göstermektedir. Zamanla edinilen sağlıksız yaşam tarzı alışkanlıklarınedeniyle, T2DM yaygınlığı her yılartmaktadır 5. Diyabetik nefropati (DN), 2007 yılında diyabetik böbrek hastalığı (DKD) olarak yeniden adlandırılmıştır 6,7. T2DM8'in yaygın bir komplikasyonu olarak, diyabet hastaları arasında sisidans ve ölüm oranları her yılartmaya devam etmektedir 9. DKD genellikle uzun süredir devam eden diyabet10 hastalarında gizli kalır veya aniden11 olarak ortaya çıkar. DKD böbrek işlev bozukluğuna ve endotel hasarına nedenolabilir 12,13. DKD esas olarak böbrek filtrasyon sistemi hasarı sonrası proteinler gibi büyük moleküllerin idrar kaybı olarak ortaya çıkar 14. Ancak hastalar için kan biyokimyasal belirteçleri (açlık glikozu, insülin) T2DM teşhisinde altın standart olarak hizmet eder, ancak DKD'nin tespit edilmesi hâlâ zordur. Geleneksel tedavi yaklaşımları DKD ilerlemesini hemen tespit etmekte veyadeğerlendirmekte başarısız 15. Bu nedenle, hastalığın farkındalığını artırmak ve yeni tanısal biyobelirteçlerin belirlenmesi, hem T2DM hem de DKD'nin önlenmesi ve tedavisi için hayati öneme sahiptir.

Son yıllarda, uzun kodlamayan RNA'nın (lncRNA) bağışıklık16, kanser düzenlemesi ve metabolizma gibi çeşitli işlevlerde yer alması giderek daha fazla kabul edilmektedir17. Toplanan kanıtlar, özellikle DKD18,19 gibi karmaşık kronik hastalıkların patogenezinde lncRNA ekspresyonunun düzensiz olduğunu gösteriyor. Örneğin, Zhang ve ark.20, yüksek verimlilikli dizileme yoluyla lncRNA evf-2'nin hnRNP ile etkileşime girdiğini, hücre döngüsüyle ilgili genlerin ve iltihap faktörlerin ifadesini artırarak DKD gelişimini teşvik ettiğini tespit etmiştir. Bir DKD fare modelinde, lncRNA USR0000B2476D bağışıklık regülasyonu21'de rol aldığı tespit edilmiştir. LINC00426, inflamatuar faktörlerin düzenlenmesinde önemli rol oynayan yeni keşfedilen birlncRNA'dır 22. Son karşılaştırmalı mikroarray çalışmaları, LINC00426 T2DM gelişimi için bir biyobelirteç potansiyeliolabileceğini göstermektedir 23. Ayrıca, biyoinformatik stratejiler LINC00426'nin böbrek hücreli karsinom24'te bağışıklık düzenlemesindeki rolünü yakalamıştır. Birçok çalışma ayrıca diyabette iltihapın ve diyabet ileDKD'de DKD 25'in kritik rol oynadığını vurgulamıştır. Mevcut çalışmalar, T2DM26 ve metabolik sendrom28, obezite29 ve kardiyovasküler metabolik kalp hastalığı(30) dahil olmak üzere prediyabetle ilişkilidurumların hepsinin yüksek inflamatuar yükle ilişkili olduğunu göstermiştir. Ayrıca, nöropati31, nefropati32 veretinopati 33 gibi diyabetik mikrovasküler komplikasyonlar ile makrovaskülerkomplikasyonlar (34) kronik inflamatuar yanıtlardır. Bu nedenle, LINC00426 ile T2DM ve DKD arasındaki ilişkiyi incelemek, yeni tanı belirteçlerinin keşfedilmesi ve DKD mekanizmalarının ortaya çıkması için çok önemlidir. Buna rağmen, TD2M ve DKD'deki LINC00426'nin rolüne dair güncel literatür sınırlı kalmaktadır; DKD hastalarında ifade modelini, bağımsız risk değerini ve tanısal etkinliğini netleştiren klinik kanıt yoktur.

Bu araştırma boşluğunu doldurmak için, mevcut çalışma 466 katılımcıyı kaydetti, RT-qPCR ile serum LINC00426 ekspresyonunu tespit etti, lojistik regresyon kullanarak DKD için bağımsız risk faktörlerini belirledi ve ROC analiziyle T2DM ve DKD için LINC00426'nin tanısal potansiyelini daha da değerlendirdi. Bulgularımız, DKD'de LINC00426'nin ifade özelliklerini ve klinik önemini ön planda netleştirerek, mevcut bilgi boşluğunu dolduruyor ve DKD patogenezi ile biyobelirteç araştırması hakkında yeni bilgiler sağlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Central South Üniversitesi'nin Üçüncü Xiangya Hastanesi Tıbbi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Tüm hastalar ve aileleri destek ifade etti ve yazılı bilgilendirilmiş onay formlarını imzaladı.

Örnek Koleksiyonu
Örneklem büyüklüğü G*Power yazılımı kullanılarak hesaplandı. Anlamlılık seviyesi (α) 0,05, istatistiksel güç (1-β) 0,8, etki boyutu (f) 0,25 olarak belirlendi ve %10 terk oranı değerlendirildi. Hesaplama sonuçları, kontrol grubu, T2DM ve DKD popülasyonları incelenirken her grup başına en az 123 katılımcının gerekeceğini gösterdi. Gerçek çalışmada, kontrol grubuna 186 katılımcı, T2DM grubuna 134 hasta ve DKD grubuna 146 hasta dahil edildi. Hepsi Temmuz 2022'den Haziran 2023'e kadar Central South Üniversitesi'nin Üçüncü Xiangya Hastanesi'nde tedavi gören gönüllülerdi. Bu hastalardan 72'sinde komplikasyon bulunmamış, 208 hastada ise bir veya daha fazla komplikasyon bulunmuştur. Komplikasyonlar arasında öncelikle diyabetik nöropati, diyabetik retinopati ve diyabetik böbrek hastalığı (DKD) yer almakta olup, 146 hastaya DKD teşhisi kondu. Diyabet sınıflandırması, açlık insülin ve açlık kan şekeri seviyelerine göre belirlendi; Tip 1 diyabetli hastalar, tanı belirsizliğini önlemek için dışlandı. Gebelik diyabeti ve özel diyabet durumları hariç tutuldu.

Dahil etme kriterleri şu şekildeydi: Yaş ≥ 18; Tam tıbbi kayıtlar ve belgeler mevcut; 2020 Çin Tip 2 Diyabetin Önleme ve TedavisiYönergeleri'ne uyum sağladı. Dışlama kriterleri arasında eşzamanlı psikiyatrik bozukluklar, bilişsel bozukluk veya çalışmaya işbirliği yapamama; akut bulaşıcı durumlar; organ yetmezliği; ve kötü huylu tümörler.

Aynı dönemde rutin tıbbi muayenelerden geçen 186 sağlıklı bireyden oluşan bir kontrol grubu seçildi. Kontrol grubu katılımcılarının aşağıdaki kriterleri karşılaması gerekir: diyabet veya diğer metabolik bozukluk öyküsü yok; normal açlık kan şekeri (<6,1 mmol/L), 2 saat sonrakı glukoz (<7,8 mmol/L) ve glikize hemoglobin (%<%5,7); ve böbrek hastalığı veya komplikasyon öyküsü olmamış, normal böbrek fonksiyonu göstergeleri (glomerulyar filtrasyon oranı, idrar alümin/kreatinin oranı) vardır.

Diyabetle İlgili Gösterge Testi
Her çalışma katılımcısı için temel demografik bilgiler kaydedildi. Ertesi sabah, biyokimyasal göstergeleri test etmek için her bir denek oruçta 5 mL venöz kan alındı. Açlık kan şekeri (FBG) seviyeleri, bir kan şekeriölçer 35 kullanılarak analiz edildi. Glikasyonlu hemoglobin (HbA1c), tam otomatik HbA1canalizörü 36 ile ölçüldü. Çalışmanın katılımından sonraki 24 saat içinde idrar örnekleri alındı. İdrar albümin konsantrasyonu, immun-türbidimetrikyöntem 38 ile protein analizörü37 kullanılarak ölçüldü. DKD hastalarında böbrek yetmezliği derecesi, DKD 3,39'da erken böbrek yaralanması ve hastalık ilerlemesini değerlendirmek için iyi kurulmuş bir endeks olan idrar albümin-kreatinin oranı (UACR) ile değerlendirildi.

Hücre Kültürü ve İşleme
İnsan böbrek epitel hücreleri HK-2 ve glomerüler mezangial hücreler HGMC satın alındı. Özellikle, HK-2 hücreleri, %10 fetal sığır serumu içeren K-SFM ortamında kültürlendi ve %1 antibiyotik çözeltisi ile takviye edildi. HGMC hücreleri primer hücre tam ortamında kültürlendi. Hücreler 37 °C, %5CO2 inkubatörde tutuldu. Pas ve transfeksiyon, birleşme %70'i aştığında gerçekleştirildi. Yüksek glikozlu (HG) indüksiyon için, hücreler 6 delikli plakalara tohumlanarak her kuyu başına 2 mL kültür ortamında 30 mM D-glikoza 48 saat boyunca maruz bırakıldı (HK-240 ve HGMChücreleri 41). Düşük glikozlu kontrol grubuna 5,5 mM D-glikoz + 24,5 mM mannitol uygulandı.

LINC00426'in tam uzunluktaki dizisi, pcDNA3.1 LINC00426 aşırı ekspresyon plazmidi oluşturmak için ökaryot ekspresyon plazmidi pcDNA3.1'e klonlandı. Boş pcDNA3.1 vektörü negatif kontrol olarak kullanıldı. Hücre transfeksiyonu, üreticinin talimatlarına göre Lipofectamine 3000 reaktüsü kullanılarak gerçekleştirildi. Kısa bir süreliğine, HG kaynaklı HK-2 ve HGMC hücreleri 6 kuyu plakalarına tohumlanarak %70–%80 birleşimde transfekte edildi. Her kuyu için, 2.5 μg plazmid DNA'sı (pcDNA 3.1 veya pcDNA3.1 LINC00426) ile 5 μL Lipofectamine 3000 reaktifi, 250 μL Opti-MEM ile oda sıcaklığında 15 dakika karıştırıldı10. Transfeksiyon kompleksi daha sonra tam kültür ortamında hücrelere damla olarak eklendi. 37 °C'de 6 saat kuluçka yaptıktan sonra, ortam taze ortamla değiştirildi ve hücreler sonraki deneylerden önce ek 42 saat kültürlendi.

Toplam RNA Çıkarımı ve Ters Transkripsiyon
Kalan kan tekrar 3000 x g ile 15 dakika boyunca santrifüj edildi ve süpernatant -80 °C'de toplanıp saklandı. Öncekiaraştırmalara göre 42, Trizol-fenol-kloroform yöntemiyle serum ve hücre örneklerinden toplam RNA çıkarılmıştır. RNA konsantrasyonu ve saflığı UV spektrofotometre kullanılarak değerlendirildi. Toplam cDNA, RT reaktif karışımı kullanılarak bir gen PCR amplifikasyonu aracılığıyla örneklerden sentezlendi. Reaksiyon koşulları 15 dakika 42 °C, ardından 5 saniye 85 °C idi. Örnekler kısa bir süre 4 °C'de saklandı.

Ters transkripsiyon nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR)
RT-QPCR, SYBR QPCR MASTER MIX KULLANıLARAK GERÇEKLEŞTIRILDI. Serum LINC00426 ekspresyonu, nicel PCR cihazı ile nicelendirildi. Veriler, 2−ΔΔCt yöntemiyle hesaplanan β-tubulin olarak dahili referans geni kullanılarak normalleştirildi. β-tubulinin ortalama CT değeri yaklaşık 25 olup, tüm serum örneklerinde 23 ile 27 arasında değişiyordu. KT varyasyon katsayısı (CV) %2,5 idi. Tek yönlü ANOVA, kontrol, T2DM ve DKD grupları arasında β-tubulin CT değerlerinde anlamlı bir fark göstermedi; bu da stabil ifadesini ve serum LINC00426 normalizasyonu için dahili referans olarak uygunluğunu doğruladı. Reaksiyona dahil olan primerler, Ek Tablo 1'de listelenmiştir. Reaksiyon koşulları: 95 °C'de 10 dakika boyunca denatürasyon öncesi; 40 döngü, 10 saniye için 95 °C ve 30 saniye için 60 °C; son uzatma 60 °C'de 15 saniye boyunca.

Western Blot analizi
Western blot analizi, yerleşik deneysel protokollerimize uygun olarak gerçekleştirildi. Kısa süreliğine, hücreler %1 proteaz inhibitörü kokteyli ile takviye edilmiş RIPA lizin tamponu ile lizize edildi. Oda sıcaklığında 30 dakika kuluçkadan sonra protein niceliği yapıldı. Protein örnekleri 95 °C'de denatüre edildi ve eşit miktarda 30 μg protein SDS-PAGE ile ayrıldı, ardından 0,45 μm PVDF membranlara elektrotransfer yapıldı. Zarlar yağsız sütle oda sıcaklığında 2 saat boyunca tıkandı. Bax, Bcl-2, Caspase-3, IκBα ve p-P65'e karşı birincil antikorlar 1:1000 TBST ile seyreltilmiş, β-aktin ise 1:3000 ile seyreltilmiştir. Membranlar 4 °C'de gece boyunca primer antikorlarla kuluçka edildi. Daha sonra, membranlar karşılık gelen yaban turpu peroksidaz ile konjuge ikincil antikorlarla oda sıcaklığında 1 saat kuluçka edildi. Protein bantları, jel görüntüleme sisteminde bir ECL substratı kullanılarak görselleştirildi. Bant gri değerleri ImageJ yazılımıyla nicel olarak hesaplandı.

Hücre Sayma Kiti-8 (CCK8)
Transfekte edilen hücreleri %0,25 tripsin (EDTA-sız) ile yaklaşık 3 dakika sindirin, ardından 800 x g ile 5 dakika santrifüj yapın. Pelleti topla ve hücre kültürü ortamında yeniden bekle. 100 μL hücre süspansiyonu (2 x 103 hücre) 96 kuyu tabakasına tohumlayın. Hücre yapışmasını sağlamak için %5CO2 ile 37 °C'de 24 saat kuluçka yaptıktan sonra 10 μL CCK8 çözeltisi eklenin. CCK8 çözümünün ilk eklemesi 0 h olarak adlandırılır. 450 nm'de absorbans, 0, 24, 48 ve 72 saatlerde mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçülür.

Akış Sitometrisi
Transfeksiyonun hücre apoptozu üzerindeki etkisi, Annexin V-floressein izotiyosiyanet (FITC)/propidium iyodid (PI) boyama çözeltisi kullanılarak değerlendirildi. Transfeksiyondan sonra, hücreler yukarıda tarif edilen aynı tripsin sindirim prosedürü kullanılarak sindirildi. Hücreler fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS) yıkanıp yeniden süzüldü. Hücre pelletleri 800 x g ile 5 dakika boyunca santrifüjle toplandı. 100 μL (yaklaşık 1 x 105 hücre) akış sitometri tüpüne aktarın, 800 x g hassasiyetinde oda sıcaklığında 5 dakika boyunca santrifüj yapın ve süpernatantı atın. Hücreleri 195 μL Annexin V-FITC bağlanma tamponunda yeniden süspansiyona alın. Karışıma 5 μL Annexin V-FITC ve 10 μL PI boyama çözeltisi ekleyin, ardından iyice karıştırın. Oda sıcaklığında karanlıkta 20 dakika kuluçka yapın. Daha sonra, işlenmiş akış sitometri tüpünü geçici depolama için buz banyosuna yerleştirin. Analiz öncesi, hücre süspansiyonunu 200 mikronluk bir mesh filtreden geçirin ve yeniden süspansiyon yapın. Akış sitometri sistemi kullanılarak 488 nm/636 nm uyarımda hücre sinyalleri toplayın.

Enzimle bağlantılı immünosorbent testi (ELISA)
Hücre inflamatuar sitokinleri, tümör nekroz faktörü alfa (TNF-α), interlökin-6 (IL-6) IL-1 beta (IL-1β) için ticari olarak mevcut ELISA kitleri kullanılarak ölçüldü. Özel tespit prosedürü şöyledir: Standart kuyulara uygun şekilde seyreltilmiş standardın 100 μL eklenmesi. Tüm boş kuyruklara 100 μL hücre bazal ortamı ekleyin. Örnek kuyularına 50 μL hücre süpernatantı ve 50 μL 1 x tespit tamponu ekleyin. Daha sonra, uygun kuyulara 50 μL tespit antikor çözeltisi eklenir. Mikroplakayı kapatın ve oda sıcaklığında 2 saat kuluçka yapın. Kuyulardan sıvıyı atın ve yıkama tamponuyla 6 kez yıkayın. En iyi sonuçları elde etmek için kuyrukların iyice kurutulduğundan emin olun. Her kuyuya tekrar 100 μL streptavidin çalışma çözeltisi ekleyin, plakayı mühürleyin ve oda sıcaklığında 45 dakika kuluçka yapın. Son olarak, 100 μL kromojenik substrat ekleyin, ardından karanlıkta 20 dakika kuluçka yapın. Sonra 100 μL stop çözeltisi ekleyip nazikçe karıştırın. Çözelti artık farklı yoğunlukta berrak, sarımsı bir sıvı olarak görünecektir. Mikroplaka okuyucu ile çözeltinin optik yoğunluğunu (OD) 450 nm ve 630 nm seviyelerinde ölçün. Bu iki değer arasındaki fark, örnekteki inflamatuar faktörün konsantrasyonuna karşılık gelir.

İstatistiksel Analiz
Veriler, ticari olarak mevcut istatistiksel yazılımlar kullanılarak işlenip analiz edildi. Tüm deneysel sonuçlar üç geçerli replikadan oluşuyordu. Gruplar arası karşılaştırmalarda bağımsız örnekler t-testleri ve varyans analizi (ANOVA) kullanıldı. Tukey yöntemiyle birden fazla karşılaştırma yapıldı. ROC eğrisi, T2DM ve DKD için LINC00426 tanı değerini değerlendirmek için kullanıldı. Lojistik regresyon analizi, DKD için risk faktörlerini değerlendirdi. P < 0.05 , ilgili veri sonuçları için istatistiksel anlamlılık gösterdi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sağlıklı bireyler ile T2DM hastaları arasındaki başlangıç özelliklerinin karşılaştırılması
Çalışmaya 280 T2DM hastası ve 186 sağlıklı birey kontrol olarak dahil edildi. Katılımcıların tıbbi kayıtlarının analizi ( bkz. Tablo 1), kontrol grubunun ortalama yaşının 17,63 yıl ± 58,91 olduğunu, T2DM hastalarının ise 59,50 ± 17,14 yıl olduğunu ortaya koydu. Ancak, iki hasta grubu arasında cinsiyet veya obezite açısından anlamlı bir fark bulunmamıştır. Daha f...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

DKD, T2DM'de ciddi bir mikrovasküler komplikasyonu temsil eder. En erken tezahüreti mikroalbuminüri varlığıdır; bunu erken aşamalarda tespit etmek, DKD ilerlemesini geciktirebilir. Ancak, mikroalbüminüri rutin idrar analizinde duyarlılıktan yoksundur ve bu nedenle sıklıkla göz ardıedilir 43. Bu çalışma, LINC00426'nin T2DM hastalarında aşağı regülasyonda olduğunu ve hem T2DM hem de DKD için tanısal değere sahip olduğunu ortaya koydu. Ayrıca, LINC00426 HG böbrek epi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Bu çalışmada çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Uygulanamaz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.25% trypsinGibco25200056
Annexin V-FITC Apoptosis Detection KitBeyotimeC1062S
Antibiotics for cell cultureGibcoR-015-10
Aristo specific protein detectorGOLDSITEGPP-100
Bax AntibodyCell signaling Technology2772
BCA protein assay kitBeyotimeP0013B
Bcl-2 (124) Mouse Monoclonal AntibodyCell signaling Technology15071
beta-Actin (13E5) Rabbit Monoclonal AntibodyCell signaling Technology4970
Blood glucose monitorYuwell710
Caspase-3 AntibodyCell signaling Technology9662
CCK-8 reagentSigma96992
ChamQ Universal SYBR qPCR Master MixVazymeQ711
ChloroformSigma-AldrichC2432
Clarity Western ECL SubstrateBio-Rad1705061
Constant-temperature cell incubatorSaiLunDHP-9032
D-GlucoseMedChemExpressHY-B0389
Flow cytometerBeckman coultedCytoFLEXKloroform
Fluorescent quantitative PCR instrumentRocheLight Cycler 96
Foetal bovine serumSigma-AldrichF0193
Fully automated glycated haemoglobin analyserHanyu medicalHLC-723G11Fenol
Gene PCR amplifierBio RadS1000
Glomerular mesangial cells, HGMCSunncell Biotechnology Co., Ltd.SNP-H252
Human Basic IL-1 beta ELISA KitInvitrogenECH002
Human IL-6 ELISA KitInvitrogenEH2IL6
Human kidney epithelial cells, HK-2Sunncell Biotechnology Co., Ltd.SNL-165
Human TNF alpha ELISA KitInvitrogenKAC1751
IkappaB alpha (L35A5) Mouse Monoclonal AntibodyCell signaling Technology4814
K-SFM mediumInvitrogen17005-042
Lipofectamine 3000 InvitrogenL3000015
MannitolSigma-AldrichM9647
Multifunctional enzyme-linked immunosorbent assay readerTECANGENios Plus
NF-kappaB p65 (D14E12) Rabbit Monoclonal AntibodyCell signaling Technology8242
non-fat milkBiosharpBS102-500g
Opti-MEM™ I Reduced Serum MediumInvitrogen31985062
P3000 ReagentInvitrogenL3000-015
PBS bufferSangon BiotechE607080
PhenolSigma-AldrichP1037
Phospho-NF-kappaB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit Monoclonal AntibodyCell signaling Technology3033
Primary cell complete mediumSunncell Biotechnology Co., Ltd.SNPM-H252
Prime Script RT reagent KitTakaraRR037A
PVDF membranesMerck Millipore SE1M003M00
rotease and phosphatase inhibitor cocktailBeyotimeP1045
TrizolInvitrogen15596026CN
Ultraviolet spectrophotometerThermoNanodrop 2000

Kaynaklar

  1. Amerkamp, J., Benli, S., Isenmann, E., Brinkmann, C. Optimizing the lifestyle of patients with type 2 diabetes mellitus - systematic review on the effects of combined diet-and-exercise interventions. Nutr Metab Cardiovasc Dis. 35 (5), 103746(2025).
  2. Mousavi, F. S., et al. Assessing renal function as a predictor of adverse outcomes in diabetic patients undergoing percutaneous coronary intervention. Acta Cardiol. 79 (7), 824-832 (2024).
  3. He, Y., et al. Predictive efficacy assessment of serum beta(2)-microglobulin combined with urinary albumin-to-creatinine ratio for renal function deterioration in type 2 diabetic patients with kidney disease. Am J Transl Res. 17 (12), 9982-9995 (2025).
  4. Wang, M., et al. Association of dietary live microbe intake with diabetic kidney disease in patients with type 2 diabetes mellitus in us adults: A cross-sectional study of nhanes 1999-2018. Acta Diabetol. 61 (6), 705-714 (2024).
  5. Saeedi, P., et al. Global and regional diabetes prevalence estimates for 2019 and projections for 2030 and 2045: Results from the international diabetes federation diabetes atlas, 9(th) edition. Diabetes Res Clin Pract. 157, 107843(2019).
  6. National Kidney Foundation. Kdoqi clinical practice guideline for diabetes and ckd: 2012 update. Am J Kidney Dis. 60 (5), 850-886 (2012).
  7. Tuttle, K. R., et al. Diabetic kidney disease: A report from an ada consensus conference. Am J Kidney Dis. 64 (4), 510-533 (2014).
  8. Du, N., Zhang, X., He, C., Zhang, Z. Mir-423-5p mediates linc00886 regulation of ovarian cancer aggressiveness and immune evasion via the tlr4/myd88/nf-kappab/pd-l1 pathway. Hereditas. 162 (1), 184(2025).
  9. Joshi, S. R., et al. Therapeutic potential of alpha-glucosidase inhibitors in type 2 diabetes mellitus: An evidence-based review. Expert Opin Pharmacother. 16 (13), 1959-1981 (2015).
  10. Chen, S., et al. Predicting and validating the regulation of podocyte injury and treatment of diabetic kidney disease by yinhuo tang. J Vis Exp. (220), e67939(2025).
  11. Zahra, S., et al. Prevalence of nephropathy among diabetic patients in north american region: A systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 103 (38), e39759(2024).
  12. Wang, Y., Liu, T., Liu, W., Zhao, H., Li, P. Research hotspots and future trends in lipid metabolism in chronic kidney disease: A bibliometric and visualization analysis from 2004 to 2023. Front Pharmacol. 15, 1401939(2024).
  13. Shi, M., et al. Integrated transcriptomic and secretome proteomic analysis of hyperglycemia-stimulated endothelial cells and screening of target compounds. J Vis Exp. (226), e69578(2025).
  14. Sagoo, M. K., Gnudi, L. Diabetic nephropathy: An overview. Methods Mol Biol. 2067, 3-7 (2020).
  15. Kopel, J., Pena-Hernandez, C., Nugent, K. Evolving spectrum of diabetic nephropathy. World J Diabetes. 10 (5), 269-279 (2019).
  16. Chen, Y., Li, Z., Chen, X., Zhang, S. Long non-coding rnas: From disease code to drug role. Acta Pharm Sin B. 11 (2), 340-354 (2021).
  17. Yao, D., Zhang, B., Zhan, X., Zhang, B., Li, X. K. Predicting lncrna-disease associations based on a dual-path feature extraction network with multiple sources of information integration. ACS Omega. 9 (32), 35100-35112 (2024).
  18. Wang, Z., et al. Lncrna meg3 alleviates diabetic cognitive impairments by reducing mitochondrial-derived apoptosis through promotion of fundc1-related mitophagy via rac1-ros axis. ACS Chem Neurosci. 12 (13), 2280-2307 (2021).
  19. Ting, K. H., Yang, P. J., Tsai, P. Y., Lee, C. Y., Yang, S. F. Correlations between the long noncoding rna meg3 and clinical characteristics for diabetic kidney disease in type 2 diabetes mellitus. Diabetol Metab Syndr. 16 (1), 260(2024).
  20. Zhang, C., et al. Lncrna evf-2 exacerbates podocyte injury in diabetic nephropathy by inducing cell cycle re-entry and inflammation through distinct mechanisms triggered by hnrnpu. Adv Sci (Weinh). 11 (47), e2406532(2024).
  21. Lan, F., Zhao, J., Liang, D., Mo, C., Shi, W. Comprehensive analysis of cuproptosis-related cerna network and immune infiltration in diabetic kidney disease. Heliyon. 10 (16), e35700(2024).
  22. Zhou, B., et al. Linc00426 promotes the progression of atherosclerosis by regulating mir-873-5p/srrm2 axis. Cytokine. 191, 156938(2025).
  23. Ma, Q., et al. Long non-coding rna screening and identification of potential biomarkers for type 2 diabetes. J Clin Lab Anal. 36 (4), e24280(2022).
  24. Xiang, Z., et al. Potential prognostic biomarkers related to immunity in clear cell renal cell carcinoma using bioinformatic strategy. Bioengineered. 12 (1), 1773-1790 (2021).
  25. Mobeen, A., et al. Nf-kappab signaling is the major inflammatory pathway for inducing insulin resistance. 3 Biotech. 15 (2), 47(2025).
  26. Aktas, G. Exploring the link: Hemogram-derived markers in type 2 diabetes mellitus and its complications. World J Diabetes. 16 (7), 105233(2025).
  27. Balci, S. B., Atak, B. M., Duman, T., Ozkul, F. N., Aktas, G. A novel marker for prediabetic conditions: Uric acid-to-hdl cholesterol ratio. Bratisl Lek Listy. 125 (3), 145-148 (2024).
  28. Basaran, E., Aktas, G. J. O. E., Diseases, M. Waist-to-height ratio as a novel marker of metabolic syndrome in patients with type 2 diabetes mellitus. Exploration of Endocrine and Metabolic Diseases. , (2025).
  29. Duman, T. T., Tel, B. M. A., Bilgin, S., Dervisevic, A., Aktas, G. Evaluation of the effects of intermittent fasting on clinical and laboratory parameters in metabolic syndrome. Experimental Biomedical Research. 8 (2), (2025).
  30. Cosgun, M., Cosgun, Z., Kalfaoglu, M. E., Aktas, G. Systemic inflammatory markers and epicardial fat volume as predictors of cardiometabolic risk in type 2 diabetes. Postgrad Med J. , (2025).
  31. Aktas, G. Serum c-reactive protein to albumin ratio as a reliable marker of diabetic neuropathy in type 2 diabetes mellitus. Biomol Biomed. 24 (5), 1380-1386 (2024).
  32. Aktas, G., Duman, T. T., Atak Tel, B. Controlling nutritional status (conut) score is a novel marker of type 2 diabetes mellitus and diabetic microvascular complications. Postgrad Med. 136 (5), 496-503 (2024).
  33. Aktas, G. Association between the prognostic nutritional index and chronic microvascular complications in patients with type 2 diabetes mellitus. J Clin Med. 12 (18), (2023).
  34. Aktas, G. An overview of the role of serum uric acid to high-density lipoprotein cholesterol ratio in type 2 diabetes mellitus and in other inflammatory and metabolic conditions. Minerva Med. 116 (5), 405-415 (2025).
  35. Ohuche, I. O., Chikani, U. N., Oyenusi, E. E., Onu, J. U., Oduwole, A. Correlates of fasting blood glucose among children living with hiv in a nigerian tertiary hospital: A cross-sectional study. BMC Pediatr. 20 (1), 458(2020).
  36. Girlescu, N., et al. Thanatochemical study of glycated hemoglobin in diabetic status assessment. Medicina (Kaunas). 57 (4), (2021).
  37. Yu, G. Z., et al. Persistent hematuria and kidney disease progression in iga nephropathy: A cohort study. Am J Kidney Dis. 76 (1), 90-99 (2020).
  38. Zhao, H., et al. Branched-chain amino acids contribute to diabetic kidney disease progression via pkm2-mediated podocyte metabolic reprogramming and apoptosis. Nat Commun. 16 (1), 7846(2025).
  39. Mao, L., Yin, R., Yang, L., Zhao, D. Elucidating the function of clusterin in the progression of diabetic kidney disease. Front Pharmacol. 16, 1573654(2025).
  40. Cheng, D., et al. Moringa isothiocyanate activates nrf2: Potential role in diabetic nephropathy. AAPS J. 21 (2), 31(2019).
  41. Geng, Z., et al. Lncrna zfas1 regulates the proliferation, oxidative stress, fibrosis, and inflammation of high glucose-induced human mesangial cells via the mir-588/rock1 axis. Diabetol Metab Syndr. 14 (1), 21(2022).
  42. Dalmadi, A., Miloro, F., Abdu, A., Kis, A., Havelda, Z. Remote precursor elements can modulate rna induced silencing complex-loading efficiency of mir168 in arabidopsis. Plant J. 122 (3), e70195(2025).
  43. Vigersky, R. A. An overview of management issues in adult patients with type 2 diabetes mellitus. J Diabetes Sci Technol. 5 (2), 245-250 (2011).
  44. Zou, L. X., Hou, Z. L., Qian, C. H., Wang, X., Sun, L. Performance of novel biomarkers for prediction of diabetic kidney disease in patients with diabetes mellitus. Ann Med. 57 (1), 2562996(2025).
  45. Liu, T., et al. Serum high mobility group box 1 as a potential biomarker for the progression of kidney disease in patients with type 2 diabetes. Front Immunol. 15, 1334109(2024).
  46. Oshima, M., et al. Trajectories of kidney function in diabetes: A clinicopathological update. Nat Rev Nephrol. 17 (11), 740-750 (2021).
  47. Wang, S., et al. Grk2 protein mediates the anril, a lncrna, to affect the proliferation and apoptosis of kasumi-1 cells. Front Biosci (Landmark Ed). 29 (10), 362(2024).
  48. Yang, P. J., Ting, K. H., Tsai, P. Y., Su, S. C., Yang, S. F. Association of long noncoding rna gas5 gene polymorphism with progression of diabetic kidney disease. Int J Med Sci. 21 (11), 2201-2207 (2024).
  49. Li, B., Wu, Z., Xu, H., Ye, H., Yang, X. Downregulation of lncrna xloc_032768 in diabetic patients predicts the occurrence of diabetic nephropathy. Open Med (Wars). 19 (1), 20240903(2024).
  50. Liu, H., et al. A panel of four-lncrna signature as a potential biomarker for predicting survival in clear cell renal cell carcinoma. J Cancer. 11 (14), 4274-4283 (2020).
  51. Zhu, H., et al. Functional long noncoding rnas (lncrnas) in clear cell kidney carcinoma revealed by reconstruction and comprehensive analysis of the lncrna-mirna-mrna regulatory network. Med Sci Monit. 24, 8250-8263 (2018).
  52. Lu, X., et al. Glycemic status affects the severity of coronavirus disease 2019 in patients with diabetes mellitus: An observational study of ct radiological manifestations using an artificial intelligence algorithm. Acta Diabetol. 58 (5), 575-586 (2021).
  53. Wang, M. H., Liu, Z. H., Zhang, H. X., Liu, H. C., Ma, L. H. Hsa_circrna_000166 accelerates breast cancer progression via the regulation of the mir-326/elk1 and mir-330-5p/elk1 axes. Ann Med. 56 (1), 2424515(2024).
  54. Barutta, F., Bellini, S., Canepa, S., Durazzo, M., Gruden, G. Novel biomarkers of diabetic kidney disease: Current status and potential clinical application. Acta Diabetol. 58 (7), 819-830 (2021).
  55. Casagrande, V., Federici, M., Menghini, R. Timp3 involvement and potentiality in the diagnosis, prognosis and treatment of diabetic nephropathy. Acta Diabetol. 58 (12), 1587-1594 (2021).
  56. Ye, S., et al. Lipidomics profiling reveals serum phospholipids associated with albuminuria in early type 2 diabetic kidney disease. ACS Omega. 8 (39), 36543-36552 (2023).
  57. Thipsawat, S. Early detection of diabetic nephropathy in patient with type 2 diabetes mellitus: A review of the literature. Diab Vasc Dis Res. 18 (6), 14791641211058856(2021).
  58. Zhang, Z., et al. Association of estimated glomerular filtration rate from serum creatinine and cystatin c with new-onset diabetes: A nationwide cohort study in china. Acta Diabetol. 58 (9), 1269-1276 (2021).
  59. Yan, P., et al. Association of remnant cholesterol with chronic kidney disease in middle-aged and elderly chinese: A population-based study. Acta Diabetol. 58 (12), 1615-1625 (2021).
  60. Fonseca-Montano, M. A., Cisneros-Villanueva, M., Coales, I., Hidalgo-Miranda, A. Linc00426 is a potential immune phenotype-related biomarker and an overall survival predictor in pam50 luminal b breast cancer. Front Genet. 14, 1034569(2023).
  61. Li, H., et al. Author correction: Linc00426 accelerates lung adenocarcinoma progression by regulating mir-455-5p as a molecular sponge. Cell Death Dis. 15 (8), 564(2024).
  62. Wu, K., et al. Nf-kappab p65 mediated lnc-traf3ip2 exacerbates renal fibrosis in diabetic kidney disease. Acta Diabetol. 62 (11), 1915-1927 (2025).
  63. Wu, K., et al. Cytosolic hmgb1 accumulation in mesangial cells aggravates diabetic kidney disease progression via nfkappab signaling pathway. Cell Mol Life Sci. 81 (1), 408(2024).
  64. Hao, J., Li, H., Yu, W. Xanthohumol ameliorates diabetic kidney disease through suppression of renal fibrosis by regulating snhg10/mir-378b. Front Pharmacol. 16, 1532517(2025).
  65. Rodriguez, F., et al. Real-world diagnosis and treatment of diabetic kidney disease. Adv Ther. 38 (8), 4425-4441 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

TıpSayı 232Sayı 232Bu Ay JoVE'deSayıTip 2 diyabet mellitustanı
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.