Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

In Vivo'da Fare saç folikül döngüsü sırasında saç sapı, melanin ve kollajende dinamik değişikliklerin invaziv olmayan gözlemi

142 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70144

⸱

28 Temmuz 2026

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

† These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, iki foton ve ikinci harmonik nesil mikroskopisi kullanarak, saç sapı morfolojisini, melanin dinamiklerini ve dermal kollajen yoğunluğunu uzun ölçümle izleyen invaziv olmayan, in vivo bir yöntem sunar ve bu yöntem saç dökülmesi tedavi araştırmaları için sağlam bir metodolojik çerçeve sağlar.

Özet

Saç folikül döngüsünün geleneksel değerlendirmeleri, invaziv histolojik yöntemlere dayanır ve sürekli boylamasına gözlemi sınırlar. Özellikle iki foton uyarılmış floresans (TPEF) ve ikinci harmonik üretim (SHG) gibi invaziv olmayan optik görüntülemenin, çoklu saç folikül döngüleri boyunca saç şaftları, melanin ve kollajen dinamik değişikliklerini doğru şekilde takip edip niceleştirebileceği öne sürülmüştür. C57BL/6 farelerinin saç sapları, anajen, katajen ve telojen aşamalarında dermoskopi, fotoğrafçılık ve elektron mikroskopisi kullanılarak in vivo izlendi. Özellikle, 800 nm uyarılma ve görüntüleme altında TPEF melanin dinamiklerini nicelendirmek için kullanılırken, 950 nm uyarılma altında SHG interfoliküler kollajen değişikliklerini gözlemlemek için kullanıldı. Doğruluk sağlamak için in vivo optik ölçümler çapraz doğrulandı: melanin dinamikleri cilt fotoğrafçılığı ile genel doku görünümü ve saç ampulleri ifadesi için hematoksilin ve eozin (HE) boyama ile doğrulandı; kollajen değişiklikleri ise Sirius Red-boyalı bölümlerde sıvı kristal polarizasyon görüntüleme sistemi kullanılarak lif yoğunluğu ve yönelimi değerlendirilerek doğrulandı. Bulgular gözlemleri, anajen aşamasında saç sapı çapı ve melanin üretiminin kademeli olarak arttığını, ayrıca interfoliküler kollajen yoğunluğunda önemli bir azalma ile birlikte gerçekleştiğini gösterdi. Katajen ve telogen aşamalarında melanin seviyeleri kademeli olarak azaldı ve kolajen yoğunluğu yavaş yavaş başlangıç seviyelerine geri döndü. Bu proje, saç foliküllerinin kapsamlı dinamiklerini değerlendirmek için doğrulanmış, invaziv olmayan bir in vivo metodolojisi kurmakta ve saç dökülmesi tedavileri için aktif ajanların preklinik değerlendirmesi için sağlam bir deneysel çerçeve sunmaktadır.

Giriş

C57BL/6 farelerinin saç folikülleri senkronizasyon ve düzenlilik sergiler; bu da deneysel kolaylık sunar ve onları cilt hastalıklarının incelenmesinde yaygın bir hayvanmodeli haline getirir 1,2. Saç folikülleri, C57BL/6faresi 3'ün doğumundan sonraki yedinci haftada ikinci telojen aşamasına girer. Yapay müdahale olmadığında, bu telojen evresi doğumdan sonraki on ikincihaftaya kadar sürdürülür 4. Bu uzun telogen dönemi, saç folikül büyümedöngüsünü senkronize etmek için araştırmalarda yaygın kullanılan bir za....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Omurgalı deneklerin kullanılmasını içeren tüm yöntemler kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm hayvan deney prosedürleri, Çin Çin Tıp Bilimleri Akademisi Deneysel Araştırma Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (Protokol Kodu: ERCCACMS11-2210-03). Bu çalışmada kullanılan tüm materyaller Materyaller Tablosu'nda listelenmiştir.

Hayvan hazırlığı ve makroskopik gözlem
6–7 haftalık ve 20 ± 2 g ağırlığında erkek C57BL/6 fareleri ticari bir tedarikçiden temin edildi. Fareler, histolojik analiz kohortu (n = 39) ve sürek....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Fare tüyleri gözlemi
Fare tüylerinin büyümesinin fotoğrafik gözlemleri Şekil 1A'da sunulmaktadır. Cilt yüzeyinden tüylerin çıkışı 10. günde başladı, gelişim ise 12. gün ile 16. gün arasında devam etti (< 0.05). Saç örtüsü daha sonra 18. günden 26. güne kadar durdu (> 0.05) (Şekil 1B). Ayrıca, dermoskopi saç büyüme dinamiklerinin invaziv olmayan in vivo gözlemini kolaylaştırmıştır. 2.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

C57BL/6 fare modeli, ikinci telojen evresinin 7. haftadan 12. haftaya kadar istikrarlı şekilde sürmesi nedeniyle seçildi. 26 günlük gözlem penceresi tamamen bu statik aşama içinde olduğundan, gözlemlenen derin dinamik değişiklikler açıkça depilasyondan kaynaklanan döngü ilerleyişiyle yönlendirilir ve doğal yaşa bağlı dalgalanmalar tamamen hariç tutulur. Telojen aşamasında depilasyon yapıldığında, saç folikülleri hemen anajen evresine girer. Yazarın bildiği kadarıyla, bu çalışma, iki foto.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, bu makalede yer alan çalışmayı etkileyebilecek bilinen hiçbir rekabet eden finansal çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını belirtmektedir. Bu makalenin ön baskısı BioRxiv kamu deposunda aşağıdakireferans 42'de mevcuttur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Tıp Bilimleri Akademisi İnovasyon Fonu (ID: CI2025C001), Çin Çin Tıp Bilimleri Akademisi'nin Bilimsel ve Teknolojik İnovasyon Projesi (Hibe No. NLTS2025004) ve merkezi kamu refahı araştırma enstitüleri için temel araştırma fonları (Hibe No. JJPY2025002).

Yazar Katkıları: kavramsallaştırma, Gaiying He ve Yi Wang; soruşturma, Menghua Liu, Xiaoyu Wang ve Fenglong Wang; veri küratörlüğü Menghua Liu; yazı—orijinal taslak hazırlığı, Menghua Liu; finansman satın alma, Yi Wang. Tüm yazarlar makalenin yayımlanmış versiyonunu okuyup kabul etti.<....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
C57BL/6 fareleri,Beijing Vital River Laboratory Animal TechnologySCXK (Jing) 2021-0006Hayvan modelleri için kullanılır
Dijital DSLR KameraCanonEOS 80DFare arkalarının fotoğraflarını çekmek için kullanılır
H&E Boyama KitiLtdSolarbio Science & Technology Co.G1120Dokun bölümlerini boyamak için kullanılır
Ters MikroskopOlympusBX51Fotoğraf çekmek için kullanılır
lsofluranRWD Life Science Co.R510-22-16Hayvanları anestezi altına almak için kullanılır
Mai Tai DeepSeeSpectraPhysicsMai Tai HPTPEF ve SHG için in vivo görüntülemede kullanılır
Medikal Elektronik DermatoskopChina Chuanghong Medical Technology Co.CH-DSIS-2000Cilt renginin in vivo görüntülemesinde kullanılır
Polarize Işık MikroskobuOlympusBX51-PSirius Red boyama görüntülemesinde kullanılır
Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM)Hitachi High-Tech CorporationSU8010Kıl şaftı ultra yapı gözlemi için
Sirius Red boyama kitiSolarbioG1472Kollajen lifi boyama için
Küçük Hayvan Anestezi CihazıRWD Life Science Co.R500Hayvanları anestezi altına almak için kullanılır

Kaynaklar

  1. Müller-Röver S, et al. A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages. J Invest Dermatol. 2001;117(1):3-15.
  2. Lin X, Zhu L, He J. Morphogenesis, Growth Cycle and Molecular Regulation of Hair Follicles. Front Cell Dev Biol. 2022;10:899095.
  3. Wang WH, et al. Studying Hair Growth Cycle and Its Effects on Mouse Skin. J Invest Dermatol. 2023;143(9):1638-1645.
  4. Stenn KS, Paus R. Controls of hair follicle cycling. Physiol Rev. 2001;81(1):449-494.
  5. Paus R, Cotsarelis G. The biology of hair follicles. N Engl J Med. 1999;341(7):491-7.
  6. Pineda CM, et al. Intravital imaging of hai....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

BiyolojiSayı 233Sayı 233Boş DeğerSayıİkinci harmonik üretimianajen fazC57BL/6 fareleralopesi