Yöntem makalesi

Bakterilerin Burun İçinden İnstasyonu Yoluyla Fare Sepsisiyle İmmünosupresyon Modelinin Oluşturulması

119 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/70150

⸱

12 Haziran 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Trauma Medical Center, Daping Hospital, State Key Laboratory of Trauma and Chemical Poisoning, Burns and Combined Injury, Army Medical University, 2Department of Critical Care Medicine, Daping Hospital, Army Medical University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, Klebsiella pneumoniae'nin burun içi instasyonu yoluyla fare sepsis immünosupresyon modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz ve modeli çeşitli göstergelerle doğruluyoruz.

Özet

Sepsis, konakçının enfeksiyona uygunsuz yanıt vermesi nedeniyle hayatı tehdit eden bir organ yetmezliğidir. Sepsisin birincil nedeni zatürredir. Hayvan modelleri, sepsisin patogenezini incelemek ve yeni tedavi stratejilerini değerlendirmek için önemli araçlardır. Önceki sepsis hayvan modellerinde doğal enfeksiyon yolları yoktu, bu da klinik enfeksiyon sürecini doğru yansıtmayı zorlaştırıyordu.

Bu çalışma, doğal solunum yolu enfeksiyonu yolunu simüle etmek için Klebsiella pneumoniae (KP)'nin burun içi instasyonu ile oluşturulan fare sepsis immünosupresyon modelini tanıttı. Farklı KP konsantrasyonlarıyla modelleme yapıldıktan sonra, modelin iltihabı 12 saat içinde sitokin interleukin-6 (IL-6) seviyeleri için değerlendirildi ve organ hasarı 24 saat içinde alanin aminotransferaz (ALT), aspartat aminotransferaz (AST), kreatin kinaz (CK) ve kan üre azotu (BUN) seviyeleri için değerlendirildi. Modelin hayatta kalma oranı 7 gün sonra analiz edildi. Lenfositlerin ve beyaz kan hücrelerinin yüzdesi, monositlerdeki ana histokompatibilite kompleksi sınıf II (MHC-II) ekspresyonun oranı ve CD4+ T hücrelerinde IL-10 ve TGF-β1'in ortalama floresans yoğunluğu (MFI) farelerde bağışıklık baskısını değerlendirmek için gözlemlendi. 7 günlük modellemeden sonra, Pseudomonas aeruginosa (PA)'nın burun içi instasyonu ile ikincil enfeksiyon gerçekleştirildi. İkincil enfeksiyondan 24 saat sonra bronkoalveolar lavaj sıvısındaki bakteriyel yük ve 14 gün içindeki ölüm oranı, modelin bağışıklık baskısını daha iyi değerlendirmek için değerlendirildi.

Yüksek konsantrasyonlu Klebsiella pneumoniae'nin burun instillasyonu, bağışıklık baskısını etkili bir şekilde tetikleyebilir. Amacı, doğal bir solunum yolu enfeksiyonu yoluyla indüklenen sepsisi simüle etmek ve hayvanlarda sepsis araştırmaları için standart bir model sağlamaktır.

Giriş

Sepsis, konakçının enfeksiyona uygunsuz yanıt vermesinden kaynaklanan hayati tehlike doğuran bir organ yetmezliğidir 1,2,3. Yoğun bakım ünitelerinde (yoğun bakım) ölüm nedenlerinden başlıca yer alır. Küresel olarak, yıllık 48,9 milyon sepsis vakası var ve 11 milyon ilişkili ölüm4. Anti-enfeksiyon tedavi ve organ destek teknolojilerindeki son gelişmelere rağmen, sepsisin patogenezi hâlâ tam olarak anlaşılmamış ve spesifik tedavi seçenekleri eksiktir. Bu nedenle, sepsis klinik tıbbi araştırmalarda kilit bir odak ve zorluk halinegelmiştir 4.

Hayvan modelleri, sepsis patogenezini araştırmak ve yeni tedavi stratejilerini değerlendirmek için temel araçlar olarak temel ve translasyonel tıbbi araştırmalarda vazgeçilmez bir rol oynar. İnsan sepsisinin patofizyolojik süreçlerini simüle ederek, bu modeller sadece bağışıklık bozuklukları ve organ işlev bozukluğu gibi temel mekanizmaların keşfini kolaylaştırmakla kalmaz, aynı zamanda ilaç taraması ve müdahale stratejilerinin geliştirilmesi için deneysel bir platform sağlar. Çeşitli hayvan modelleri arasında, fareler sepsis araştırmalarında en yaygın kullanılan kişilerdir; çünkü iyi tanımlanmış genetik geçmişleri, bağışıklık sistemleri üzerine kapsamlı araştırmaları ve manipülasyon kolaylığı vardır.

Şu anda, endotoksin modelleri, bakteriyel infüzyon modelleri, çekal ligasyon ve ponksiyon (CLP) modelleri ile kolon yükselmesi stent peritoniti (CASP) modelleri dahil olmak üzere farklı paradigmalara dayalı birkaç sepsis hayvanmodeli mevcuttur 5. Ancak, bu modellerde doğal enfeksiyon yolları yoktur, bu da klinik enfeksiyon sürecini gerçekten yansıtmayı zorlaştırır. Çalışmalar, Amerika Birleşik Devletleri'nde sepsisin başlıca nedeninin zatürre olduğunubildirmiştir 6. Bu nedenle, doğal enfeksiyon yollarını taklit eden, immünosupresif özellikler gösteren ve kullanımı kolay yüksek tekrarlanabilirlikle birlikte kullanılabilen bir fare sepsis modeli oluşturmak, sepsisin bağışıklık mekanizmalarının derinlemesine araştırılması ve potansiyel müdahale stratejilerinin değerlendirilmesi için büyük öneme sahiptir.

Klebsiella pneumoniae (KP), hastanede edinilen tüm bakteriyel enfeksiyonların %3 ila %8'ini oluşturur 7,8,9. Bu bakteri, solunum, gastrointestinal ve idrar yolları ile cilt gibi çeşitli portallardan vücuda girebilir ve KP'nin neden olduğu enfeksiyonların prognozu özellikle bağışıklık sistemi zayıfhastalarda 7,10. Zatürrenin sepsisin başlıca nedeni olduğu ve KP'nin kötü sonuçlarla ilişkilendirilen yaygın bir solunum yolu patojeni olduğu göz önüne alındığında, KP klinik açıdan önemli bir sepsis modeli oluşturmak için ideal bir adaydır.

KP enfeksiyonunun çeşitli hayvan modelleri, burun içi yöntem dahil11 daha önce kurulmuş olsa da, sadece birkaç çalışma sepsis ilişkili immünsupresyonu indüklemek veya model oluşturmak için optimal KP konsantrasyonunu belirlemek için modeli optimize etmeye odaklanmıştır. Bu boşluk, sepsis kaynaklı bağışıklık fonksiyonunun incelenmesinde mevcut KP modellerinin faydasını sınırlamaktadır.

Bu ihtiyacı karşılamak için, KP'nin burun içi instasyonu yoluyla farelerde sepsis kaynaklı bir immünosupresyon modeli oluşturduk. Mevcut modellerle karşılaştırıldığında, bu model solunum yolu enfeksiyonlarının doğal yollarını simüle etmektedir. Model, sonraki araştırmalar için bir yöntem sağlamak amacıyla daha da doğrulandı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu makalede açıklanan tüm deneysel prosedürler, Üçüncü Askeri Tıp Üniversitesi (SCXK(PLA)20120031) Laboratuvar Hayvan Refahı ve Etik Komitesi tarafından onaylandı.

1. Deneysel hayvanlar

  1. C57BL/6 fare, erkek, 8–10 haftalık, 23–28 g ağırlığında (Hayvan Lisans No.: SCXK (Xiang) 2019-0004) kullanın. Fareleri, serbest yiyecek ve suya erişimi olan belirli bir patojensiz (SPF) ortamda barındırın. Konut koşullarını şu şekilde koruyun: oda sıcaklığı (24 ± 2ºC), nem %50–%55 ve 12 saat/12 saat ışık-karanlık döngüsü.

2. Bakteriyel hazırlık

  1. Uygun bir suş kullanın. Burada, Klebsiella pneumoniae Amerikan Tip Kültürü Koleksiyonu (ATCC) 43816 suşunu kullanın.
  2. Uygun bir kültür ortamı (Luria-Bertani [LB] çorbası) hazırlayın.
  3. Tohumları aşılama için hazırlayın.
    1. Tek bir koloni seçin ve 5 mL LB çorbasına aşılayın, ardından gece boyunca (12 saat) 37 °C ve 220 rpm'de bir shaker'da kuluçka yapın.
    2. Gece boyunca bakteriyel kültürü taze LB çorbasına aktarın ve yüksek yoğunluklu büyüme aşamasına (optik yoğunluk 600 nm [OD600] ≈ 0.8) ulaşana kadar 3–4 saat kültür yapın.
    3. Bakteriyel çözeltiyi seyreldikten sonra, 100 μL alın ve katı kültür ortamı içeren kültür kabının altına ekleyin. 12 saat boyunca 37 °C'lik kuluçka makinesine yerleştirin, koloni sayısını sayın ve KP konsantrasyonunu 2 × 109 CFU/mL olarak elde edin, yani OD600 ≈ 0.8.
    4. Bakteri konsantrasyonunu %0,9 NaCl çözeltisi kullanarak ayarlayın. Daha sonraki kullanım için 1 × 1010 8 CFU/mL, 1 × 106 CFU/mL ve 1 × 104 CFU/mL konsantrasyonlu üç bakteriyel süspansiyon hazırlayın.

3. Burun içi intilasyon enfeksiyonu (Şekil 1)

  1. Fareyi %2 sodyum pentobarbital intraperitoneal enjeksiyonla 2 μL/g dozda anestezi altına alın (Şekil 1A,B).
  2. Fare bilinç azalması gösterip yutma refleksini koruduksa, mikropipet kullanarak bakteriyel süspansiyondan 50 μL (veya kontrol olarak %0,9 NaCl çözeltisi) aspire edilir.
  3. Başparmağını boynunun önüne koyarak farenin boynunu nazikçe tutun ve diğer parmaklarla farenin vücudunu nazikçe kavrayın. Farenin başını geriye doğru eğin (Şekil 1C).
  4. Bakteriyel süspansiyonu pipet kullanarak (yaklaşık 5–10 μL her damla) farenin burun deliklerine yavaşça yerleştirin. Bir damlayı bir burun deliğine birer yerleştirin (Şekil 1D).
  5. Farenin süspansiyonu soluduğunu gözlemledikten sonra, fareyi hızla yukarı kaldırın ve ardından yavaşça aşağı indirerek süspansiyonun bronşlara solunmasını teşvik edin (Şekil 1E,F).
  6. Yukarıdaki adımları tekrarlayın; fare 50 μL bakteri süspansiyonunu tamamen soluyana kadar diğer burun deliğine dönüşümlü yerleştirin.
  7. Eğer fare öksürür, iç çeker veya ameliyat sırasında bakteriyel çözeltiyi soluyamıyorsa, farenin dinlenmesine ve gözlemlenmesine izin verin. Durum stabilleştikten sonra, farenin tüm bakteriyel çözeltiyi (veya %0,9 NaCl) soluduğundan emin olmak için soluma adımına devam edin.
  8. Fareyi 60° eğik bir fare tahtası üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitleyin. Oda sıcaklığı düşükse, farenin toparlanmasına yardımcı olmak için bir ısıtıcı kullanın. Faresi tamamen anesteziden iyileşene kadar izleyin, ardından kafese en uygun sıcaklık koşulları, yeterli su ve yiyecek ile geri döndürün.

4. Model değerlendirmesi

NOT: Yukarıda bahsedilen intranazal instasyon yöntemiyle dört fare modeli grubu oluşturuldu: kontrol grubu (grup A, PBS ile injeksiyonlanmış), 1 × 104 KP konsantrasyon grubu (grup B), 1 × 106 KP konsantrasyon grubu (C grubu) ve 1 × 108 KP konsantrasyon grubu (grup D). Model aşağıdaki yöntemlerle değerlendirildi:

  1. 12 saatlik iltihap göstergelerini değerlendirin.
    1. KP'nin burun içi intilasyonundan 12 saat sonra, kalp ponksiyonu yoluyla kan (≥ 300 μL) alın (n = grup başına 5). Serumu santrifüjle ayırın (1000 × g, 10 dakika) ve sitokin interleukin-6 (IL-6) tespit etmek için kullanın.
  2. 24 saatlik organ hasarı değerlendirmesi
    1. KP'nin burun içi instasyonundan 24 saat sonra, biyokimyasal gösterge tespiti için serum kullanın (grup başına n = 5). Bu göstergeler arasında, karaciğer hasarını değerlendirmek için alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST), kas hasarı için kreatin kinaz (CK) ve böbrek hasarı için kan üre azotu (BUN) kullanılır.
  3. Semptom değerlendirmesi
    1. Farenin vücut ağırlığını günlük olarak izleyin ve saç durumunu, aktivite seviyesini ve diğer parametreleri gözlemleyin.
  4. 7 günlük sitokinler ve bağışıklık hücreleri
    1. Modellemeden 7 gün sonra (n = 10 [A/B], n = 15 [C], n = 40 [D]), CD4+ T hücrelerinde lenfositlerin yüzdelerini, monositlerdeki ana histokompatibilite kompleksi sınıfı II (MHC-II) ekspresyonunun oranını, ortalama floresans yoğunluğu MFI) oranını değerlendirmek amacıyla kalp ponksiyonu yoluyla periferik kan toplanır.
    2. Doku işleme
      1. Kan örnekleri (100 μL) kırmızı kan hücresi lüzisi tamponu (300 μL) ile 1:3 hacim oranında karıştırın. Oda sıcaklığında 15 dakika eritrosit lizisinden sonra, karışımı 400 × g ile 5 dakika santrifüjle yapın ve süpernatantı atın.
      2. Pelleti 200 μL kırmızı kan hücresi lizis tamponunda (hacim oranı = 1:2) yeniden süzülün ve ikincil liz için 10 dakika kuluçka yapın.
      3. 400 × g ile 5 dakika boyunca başka bir santrifüjlemeden sonra süpernatant çıkarılır ve pelleti 100 μL hücre boyama tamponunda yeniden süspana bırakır.
      4. Her akış sitometri antikorundan 1 μL örneklere ekleyin. Kısaca, lenfosit boyama için CD45 ekleyin; MHC-II tespiti için CD45, CD116, Ly6G, Ly6C ve MHC-II antikorları; IL-10 ve TGF-β1 ölçümü için CD45, CD3, CD4, CD8 ve CD25 antikorları. Yukarıda listelenen her antikor için seyreltme oranı 1:100'dür.
      5. Tüm örnekleri 4 °C'de karanlıkta 30 dakika boyunca kuluçka edin. Sonrasında 1 mL hücre boyama tamponu eklenin, ardından 400 × g seviyesinde 5 dakika santrifüj yapın; Süpernatantı at.
      6. Lenfositlerin ve MHC-II'nin tespiti için, akış sitometrisi analizinden önce 400 μL hücre boyama tamponunda yeniden süzülür.
      7. Daha sonra, IL-10 ve TGF-β1'in tespiti için 4.4.2.8–4.4.2.12 adımlarına uygun prosedürler uygulanır:
      8. 1 mL fiksasyon tamponu ekleyin ve örnekleri 4ºC'de karanlıkta 60 dakika kuluçka edin.
      9. 1 mL perm tampon eklendikten sonra, karışımı 400 × g ile 5 dakika boyunca santrifüjle edin ve üst tamponu atın.
      10. Hücre pelletini 100 μL perm tamponunda yeniden süzülür, ardından 1 μL Foxp3, IL-10 ve TGF-β1 antikorları eklenir. Örnekleri 4 °C'de 30 dakika karanlıkta kuluçka edin.
      11. Sonra, 1 mL perm tampon ekleyin ve 400 × g'de 5 dakika boyunca santrifüj yapın, ardından süpernatı çıkarın.
      12. Son olarak, hücreleri 400 μL hücre boyama tamponunda yeniden süzülerek akış sitometrisiyle tespit edin.
    3. Kapı stratejisi
      1. Lenfositleri tespit etmek için, FSC-A/FSC-H grafikinde enkaz ve dubletleri hariç tutun. Toplam lökositleri CD45⁺ olayları olarak tanımlayın. CD45⁺ popülasyonunda düşük FSC/SSC oranına göre lenfositleri kapatırın.
      2. MHC-II'yi tespit etmek için, önce FSC-A/SSC-A üzerindeki kapı lökositleri döküntüleri dışlamak için kullanılır, ardından CD45⁺ hücrelerinin seçimi yapılır. Miyeloid hücreleri CD11b⁺ olarak tanımlayın, nötrofiller Ly6G negatifliği nedeniyle dışlanır. Klasik monositleri Ly6G⁻ Ly6Chi hücreleri olarak tanımlayın ve bu popülasyonda MHC-II ekspresyonunu değerlendirin.
      3. IL-10 ve TGF-β1'i tespit etmek için, FSC-A/SSC-A ve FSC-A/FSC-H ile enkaz ve çift topları hariç tutun. Toplam T hücrelerini CD45⁺CD3⁺ olayları olarak tanımlayın. CD4⁺CD8⁻ popülasyonu içinde, Tregleri CD25⁺FOXP3⁺ hücreleri olarak tanımlayın. Treg alt kümesindeki TGF-β⁺ hücrelerini nicelikle ölçür ve tüm CD4⁺ T hücrelerinde IL-10 ekspresyonunu değerlendirir. Tüm pozitif kapıları FMO kontrolleri kullanarak ayarlayın.
  5. İkincil enfeksiyondan 24 saat sonra bronkoalveolar lavaj sıvısında (BALF) bakteri sayısı
    1. Model kurulduktan sonraki 7. gün (n = 5 [A/B], n = 10 [C], n = 40 [D]), fareyi yukarıda bahsedilen intranazal instasyon yöntemiyle 50 μL Pseudomonas aeruginosa (PA) (6.8 ×10 10 CFU/mL konsantrasyonda) intranazal instilasyona maruz bırakın.
    2. PA ile ikincil enfeksiyondan 24 saat sonra, 1,5 mL bronkoalveolar lavaj sıvısı (BALF) alın. BALF'i seri olarak seyreltirin, LB sıvı ortamına tabaklayın ve koloni sayımı başlamadan önce 37 °C'de sabit sıcaklıkta bir kuluçka makinesinde 24 saat kuluçka yapın.
    3. BALF tahsilatı için bu adımları takip edin.
      1. Fareyi derinlemesine anestezi edin (2,5 μL/g %2 sodyum pentobarbital) veya ötenanize edin (7,5 μL/g %2 sodyum pentobarbital) insancıl bir şekilde, boyun aşırı gerilmiş şekilde sırtüstü pozisyona yerleştirin.
      2. Trakeayı ortaya çıkarmak için orta çizgide bir servikal kesi yapın. Trakeyaya hemen karinanın hemen ötesinde bir 24-G kateter yerleştirin ve dikişle sabitleyin.
      3. 1 mL şırınga kullanarak steril, buz gibi soğuk PBS (aliquot başına 0,5 mL) yavaşça aşılayın ve nazikçe alın. Bu yıkama döngüsünü 3–5 kez tekrarlayın. Bu işlemi 3 kez yapın, toplam lavaj hacmi 1,5 mL olur.
  6. Hayatta kalma analizi
    1. Hayatta kalma analizi için ayrı bir fare kohortu kullanın (n = 10 [A/B/C], n = 40 [D]).
    2. Farelerin enfeksiyondan sonraki 7 gün içinde hayatta kalma durumunu kaydedin.
    3. PA ile ikincil enfeksiyondan sonra, farelerin 7. günden 14. güne kadar ölüm oranını gözlemleyin.
    4. Gözlemden sonra, fareleri izofloran (%5) ile derinlemesine anestezi edin ve aşırı doz pentobarbital sodyum (150 mg/kg) intraperitoneal enjeksiyonla ötenazi yapın; ölüm servikal dislokasyon ile doğrulanmaktadır.
  7. İstatistiksel analiz
    1. Nicel veriler üzerinde normallik testleri ve varyans homojenliği testleri yapın.
    2. Gruplar arasındaki karşılaştırmalar için, veriler normal dağılımlıysa ve homojen varyans gösteriyorsa tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanın; aksi takdirde, parametrik olmayan testler kullanın.
    3. Kaplan-Meier yöntemiyle hayatta kalma analizi yapın. Karma etki modellerini kullanarak gruplar arasında farklı zaman noktalarında vücut ağırlığı değişimlerindeki farkları test edin. İstatistiksel olarak anlamlı ≤ bir p-değeri düşünün.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Burun içi intilasyondan 12 saat sonra, 1 × 108 KP grubundaki serum IL-6 seviyesi anlamlı şekilde arttı (p < 0.0001, n = 5) (Şekil 2A). Burun içi intilasyondan 24 saat sonra, serum seviyeleri kontrol grubundaki ALT (p < 0.01, n = 5) (Şekil 2B), AST (p < 0.01, n = 5) (Şekil 2C), CK (p < 0.01, n = 5) (Şekil 2D) ve BUN (p < 0.001, n = 5) (Şek...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Sepsis karmaşık bir klinik sendromdur ve geç evresinde karakteristik immünosupresif durum, hasta ölümüne yol açan önemli bir faktördür12,13. Bu nedenle, sepsis kaynaklı immünosupresyonun patofizyolojisini doğru şekilde simüle eden preklinik modeller, mekanizmalarının derinlemesine incelenmesi ve yeni tedavilerin geliştirilmesi için hayati öneme sahiptir. Bu çalışmada, KP'nin burun içi instasyonuyla indüklenen fare sepsis modelini...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını belirtmektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82222038 ve 81970259), Ulusal Savunma Biyoteknolojisinin Üstün Genç Yetenekleri (2023-JCJQ-ZQ-001 ve 01-SWKJYCJJ06) ve Chongqing Seçkin Genç Bilim Fonu (CSTB2022NSCQ-JQX0017) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Biyokimyasal inkübatörYSEISHH-150LBakteri inkübasyonu
C57BL/6J fareleriVital River Laboratories8-10 hafta, erkek
CD116bBioLegend101257Akış Antikorları (Anti-Mouse)
CD25BD bioscience740447Akış Antikorları (Anti-Mouse)
CD3BioLegend100203Akış Antikorları (Anti-Mouse)
CD4BioLegend100544Akış Antikorları (Anti-Mouse)
CD45BioLegend103116Akış Antikorları (Anti-Mouse)
CD8BioLegend100752Akış Antikorları (Anti-Mouse)
Hücre boyama tamponu BioLegend420201
Sabit sıcaklıklı çalkalayiciHonourHNY-100BBakteri kültürü
Akış sitometri cihazıBeckman CoulterCytoFLEXAkış sitometri analizi
Yüksek hızlı santrifüjBeckman CoulterAIIEGRA
IDEXX katalizör birIDEXXCatalyst OneBiyokimyasal analiz
IL-10BioLegend505026Akış Antikorları (Anti-Mouse)
İnsülin şırıngası WEGO1mLKan alma
Klebsiella pneumoniae ATCC 43816biobw.orgbio-81659
LB Broth (toz)SolarbioL1010LB sıvı kültür ortamı
LB Broth (toz)SolarbioL1015LB agar plakası
LY6CBioLegend128010Akış Antikorları (Anti-Mouse)
Ly6GBioLegend127606Akış Antikorları (Anti-Mouse)
MHC-IIBioLegend107622Akış Antikorları (Anti-Mouse)
MikropipetEppendorfP100
Kırmızı kan hücre lizisi tamponuSolarbioR1010
SpektrofotometreEppendorfEppendorf6131Optik yoğunluk ölçümü
İstatistiksel yazılımGraphPad SoftwareGraphpad Prism10.0
Steril ve enzimsiz pipet uçlarıBiosharp200μL
TF seyreltici tamponuBD Pharmingen51-90008101
TF fiks/perm tamponuBD Pharmingen51-90008100
TF perm/yıkama tamponuBD Pharmingen51-90008102
TGF-β1BioLegend141406Akış Antikorları (Anti-Mouse)
Varioskan LUX multimodemikroplaka okuyucuThermo ScientificVarioskan LUX 

Kaynaklar

  1. Singer, M., et al. The third international consensus definitions for sepsis and septic shock (sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
  2. Shankar-Hari, M., et al. Developing a new definition and assessing new clinical criteria for septic shock: for the third international consensus definitions for sepsis and septic shock (sepsis-3). JAMA. 315 (8), 775-787 (2016).
  3. Seymour, C. W., et al. Assessment of clinical criteria for sepsis: for the third international consensus definitions for sepsis and septic shock (sepsis-3). JAMA. 315 (8), 762-774 (2016).
  4. Meyer, N. J., Prescott, H. C. Sepsis and septic shock. N Engl J Med. 391 (22), 2133-2146 (2024).
  5. Kingsley, S. M., Bhat, B. V. Differential paradigms in animal models of sepsis. Curr Infect Dis Rep. 18 (9), 26(2016).
  6. Hansen, V., Oren, E., Dennis, L. K., Brown, H. E. Infectious disease mortality trends in the United States, 1980-2014. JAMA. 316 (20), 2149-2151 (2016).
  7. Ashurst, J. V., Dawson, A. Klebsiella pneumonia. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2025).
  8. Jondle, C. N., Gupta, K., Mishra, B. B., Sharma, J. Klebsiella pneumoniae infection of murine neutrophils impairs their efferocytic clearance by modulating cell death machinery. PLoS Pathog. 14 (10), e1007338(2018).
  9. Aghamohammad, S., et al. First report of extended-spectrum betalactamase-producing Klebsiella pneumoniae among fecal carriage in Iran: high diversity of clonal relatedness and virulence factor profiles. Microb Drug Resist. 26 (3), 261-269 (2020).
  10. Bengoechea, J. A., Sa Pessoa, J. Klebsiella pneumoniae infection biology: living to counteract host defenses. FEMS Microbiol Rev. 43 (2), 123-144 (2019).
  11. Assoni, L., et al. Animal models of Klebsiella pneumoniae mucosal infections. Front Microbiol. 15, 1367422(2024).
  12. Hotchkiss, R. S., Monneret, G., Payen, D. Sepsis-induced immunosuppression: from cellular dysfunctions to immunotherapy. Nat Rev Immunol. 13 (12), 862-874 (2013).
  13. Van Der Poll, T., Van De Veerdonk, F. L., Scicluna, B. P., Netea, M. G. The immunopathology of sepsis and potential therapeutic targets. Nat Rev Immunol. 17 (7), 407-420 (2017).
  14. Diboue Betote, P. H., et al. Sex-dependent vulnerability for Wistar rats model following intranasal instillation with Klebsiella pneumoniae ATCC 43816 causing lobar pneumonia. Pneumonia. 16 (1), 5(2024).
  15. Leus, I. V., Zgurskaya, H. I. No two are alike: on the role of Klebsiella pneumoniae permeability barriers in antibiotic susceptibility and persistence. Antimicrob Agents Chemother. 69 (8), e0008525(2025).
  16. Siempos, I. I., et al. Cecal ligation and puncture-induced sepsis as a model to study autophagy in mice. J Vis Exp. (84), e51066(2014).
  17. Vincent, J. L., et al. International study of the prevalence and outcomes of infection in intensive care units. JAMA. 302 (21), 2323-2329 (2009).
  18. Prescott, H. C., Angus, D. C. Enhancing recovery from sepsis: a review. JAMA. 319 (1), 62-75 (2018).
  19. Barichello, T., Generoso, J. S., Singer, M., Dal-Pizzol, F. Biomarkers for sepsis: more than just fever and leukocytosis-a narrative review. Crit Care. 26 (1), 14(2022).
  20. Vulliamy, P. E., Perkins, Z. B., Brohi, K., Manson, J. Persistent lymphopenia is an independent predictor of mortality in critically ill emergency general surgical patients. Eur J Trauma Emerg Surg. 42 (6), 755-760 (2016).
  21. Pei, F., et al. Expert consensus on the monitoring and treatment of sepsis-induced immunosuppression. Mil Med Res. 9 (1), 74(2022).
  22. Lang, J. D., Matute-Bello, G. Lymphocytes, apoptosis and sepsis: making the jump from mice to humans. Crit Care. 13 (1), 109(2009).
  23. Wu, H., et al. Predictive value of the neutrophil-to-lymphocyte ratio in the prognosis and risk of death for adult sepsis patients: a meta-analysis. Front Immunol. 15, 1336456(2024).
  24. Siegler, B. H., et al. Postoperative abdominal sepsis induces selective and persistent changes in CTCF binding within the MHC-II region of human monocytes. PLoS One. 16 (5), e0250818(2021).
  25. Pachot, A., et al. Messenger RNA expression of major histocompatibility complex class II genes in whole blood from septic shock patients. Crit Care Med. 33 (1), 31-38 (2005).
  26. Padovani, C. M., Yin, K. Immunosuppression in sepsis: biomarkers and specialized pro-resolving mediators. Biomedicines. 12 (1), 175(2024).
  27. Misra, A. K., Levy, M. M., Ward, N. S. Biomarkers of immunosuppression. Crit Care Clin. 36 (1), 167-176 (2020).
  28. Monneret, G., et al. The anti-inflammatory response dominates after septic shock: association of low monocyte HLA-DR expression and high interleukin-10 concentration. Immunol Lett. 95 (2), 193-198 (2004).
  29. Bergmann, C. B., et al. Potential targets to mitigate trauma- or sepsis-induced immune suppression. Front Immunol. 12, 622601(2021).
  30. Van Vught, L. A., et al. Incidence, risk factors, and attributable mortality of secondary infections in the intensive care unit after admission for sepsis. JAMA. 315 (14), 1469-1479 (2016).
  31. Jones-Nelson, O., et al. The neutrophilic response to Pseudomonas damages the airway barrier, promoting infection by Klebsiella pneumoniae. Am J Respir Cell Mol Biol. 59 (6), 745-756 (2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Fare Sepsis ModeliKlebsiella pneumoniaeSolunum Yolu Enfeksiyonu ModeliSitokin De erlendirmesiOrgan Hasar AnaliziSekonder EnfeksiyonLenfosit Y zdesiMHC II Ekspresyonu
Video yakında

İlgili makaleler