Research Article
Bu klinik çalışma, rifaximin tedavisi sırasında ve 4 hafta sonrasında bir plasebo jeliyle karşılaştırıldığında, 1 haftalık rifaximin tedavisi ve Lactobacillus acidophilus NCFM ile Bifidobacterium lactis Bi07 ile agave inulin içeren Sinbiyotik Jel ile birlikte bifidobakteri ve laktobasil sayılarını değerlendirerek, Synbiotic Jel'in laktobasiller ve bifidobakterilerin korunmasına yardımcı olabileceğini gösterdi.
Bağırsak mikrobiyotası genellikle stabil olsa da, antibiyotik tedavisinden etkilenebilir. Gastrointestinal bozuklukların tedavisinde kullanılan rifaximin, disbiyoz riskini azaltmak için sık sık probiyotiklerle birlikte uygulanır. Lactobacillus acidophilus , bağırsak hücreleriyle etkileşime girer ve prebiyotik bileşikler kullanır. Bifidobakteriler, özellikle Bifidobacterium infantis ssp. lactis Bi07, bağırsakta faydalı etkilerle ilişkilendirilen bir probiyotiktir. In vitro çalışmalar, agave fruktanlarının sikori inülininden üstünlüğünü göstermiştir. Rifaximin ve sinbiyotikin eşzamanlı uygulanmasından sonra fekal laktobasil ve bifidobakteri sayılarında değişiklikler belgelenmiş hiçbir çalışma bulunmamıştır. Amacımız, Lactobacillus acidophilus NCFM, Bifidobacterium lactis Bi07 ve agave inulin içeren Synbiotic Jel tüketiminden sonra, sağlıklı gönüllülerde bağırsak bifidobakteri ve laktobasil sayılarındaki CFU sayılarındaki değişiklikleri değerlendirmekti; bu jel Lactobacillus acidophilus NCFM, Bifidobacterium lactis Bi07 ve agave inulin prebiyotik olarak kullanıldıktan sonra, rifaximin tedavisinin 1 haftası boyunca ve sonrasında 4 hafta boyunca gerçekleşti. Randomize, plasebo kontrollü, çift kör bir klinik çalışmada, önceki ay antimikrobiyal tedavi görmeyen sağlıklı katılımcılar iki grupta 1:1 oranında (her grup başına 10 katılımcı) randomize edildi. Synbiotic Gel grubu, prebiyotik olarak 10,32 g agave inulin, 4 × 109 CFU/g Lactobacillus acidophilus NCFM ve 4 × 109 CFU/g Bifidobacterium lactis Bi07 aldı, ilk hafta boyunca günde iki kez 200 mg rifaksimin aldı. Plasebo Jel grubu 5 hafta boyunca plasebo jel ve ilk hafta boyunca günde iki kez 200 mg rifaksimin aldı. Bakteriyel değişiklikler, dışkı mikrobiyolojik değerlendirmesiyle CFU'nun nicelendirilmesiyle tahmin edildi. Beş hafta sonra, laktobasil ve bifidobakteri popülasyonları değişmedi. Bazı dışkı örneklerinde Lactobacillus acidophilus NCFM ve Bifidobacterium lactis Bi07'nin tespit edilmesi, geçici ve kısmi kolonizasyonu göstermekte olup, bu senbiyotik ürünle doz-yanıt çalışmalarına olan ihtiyacı vurgulamaktadır.
İnsan bağırsak mikrobiyotası, kalıcı olarak var olan yerli türleri ve diğer geçici mikroorganizmaları içeren yoğun nüfuslu bir topluluktur. Bileşimi bireylerden birine göre değişse de, genellikle istikrarlı kabul edilir. Ancak, yaş, enfeksiyon ve antibiyotik tedavisi 1,2,3 tarafından etkilenebilir. Düşük bağırsak emilimine sahip geniş spektrumlu bir antibiyotik olan rifaximin, bağırsak hastalıklarının tedavisinde kullanılır ve mikrobiyotayı değiştirebilir. Bu etkileri azaltmak için Lactobacillus ve Bifidobacterium cinslerinden probiyotik bakterilerkullanılır 2.
Bifidobacterium türlerinin rifaksiminedirençli 2 olduğu bildirilmiştir; bu durum, faydalı probiyotik etkiler için yeterli sayıda Bifidobacterium türleri içeren bağırsak biyotasını teşvik etme açısından ilginç bir etkiye sahiptir.
Ayrıca, Lactobacillus acidophilus, gastrointestinalepitelyum 4 ile etkileşime girme yeteneği ve polisakkaridler, oligosakkaridler ve fruktooligosakkaridler gibi prebiyotikleri kullanma kapasitesiyle geniş çapta tanınmıştır. Ancak, Lactobacillus acidophilus North Carolina Food Microbiology (NCFM) suşu gibi sadece birkaç probiyotik suş tanımlanmıştır. Bu nedenle, bu etkilerin in vivo incelenmesi ve Bifidobacterium lactis Bi07'nin sindirim sistemindeki varlığı da önemlidir; bu durum çeşitli sağlık destekleyici faydalarlailişkilendirilmiştir 2,5. Bu probiyotiklerin optimal şekilde büyümesi için prebiyotik gereklidir, bu yüzden hem probiyotik hem de prebiyotik içeren bir sinbiyotik sinerjik şekilde çalışır; yani, olumlu etkisi sadece probiyotikten daha yüksektir. Probiyotikler için substrat olarak hizmet veren prebiyotiklerle birlikte, bu simbiyozun gastrointestinal sistemde probiyotik mikroorganizmaların hayatta kalma süresini artırması ve mikrobiyotanın daha fazla restorasyonuna yolaçması beklenmektedir6.
Prebiyotiklerin önemli bir kaynağı, agave fruktanlarıdır; bu fruktanların, mikrobiyota üzerinde chicory köküne (Cichorium intybus L.) göre daha iyi in vitro etkileri olduğu bildirilmiştir.7. Çalışmalar probiyotik tüketiminin etkilerini bildirmiştir; örneğin, Engelbrektson ve ark. antibiyotik kullanımı sırasında ve sonrasında probiyotik tüketiminin antibiyotiklerin mikrobiyotadaki değişiklikleri azaltıp azaltmayacağınıdeğerlendirmiştir 8. Probiyotik karışımını alan grubun, probiyotik karışımı olmayanlara göre normal mikrobiyotanın daha hızlı iyileşmegösterdiğini tespit ettiler 8. Ayrıca, Koning ve ark. günde iki kez 500 mg amoksisilin ile tedavi edilen 40 sağlıklı gönüllünün bağırsak mikrobiyotasında disbiyozy ve probiyotik karışımı tüketiminin ardından mikrobiyotanın iyileşme olasılığını incelemiştir. Sonuçlar, amoksisilin tedavisinin doğal mikrobiyotanın bileşimini etkilediğini gösterdi. Probiyotik karışımı uygulandığında, mikrobiyota iki ay tüketimden sonra önemli ölçüdetoparlandı 9.
Ancak literatür, antibiyotik kullanımı sırasında ve sonrasında sinbiyotik tüketiminin (prebiyotik olarak agave fruktanları ile) bağırsak mikrobiyotası üzerindeki etkisini araştırmadığını belirtmektedir; örneğin rifaksimin; Sadece probiyotiklerle ilgili çalışmalar bulduk. Bu nedenle, bu çalışma, sağlıklı gönüllülerde bağırsak bifidobakteri ve laktobasil sayılarındaki CFU sayılarındaki değişiklikleri değerlendirdi; Lactobacillus acidophilus NCFM, Bifidobacterium lactis Bi07 ve agave inulin içeren Lactobacillus acidophilus NCFM, Bifidobacterium lactis Bi07 ve agave inulin içeren prebiyotik olarak, 1 haftalık rifaximin tedavisi süresince ve sonrasında 4 hafta boyunca gerçekleşti.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Protokol, Salvador Zubiran Ulusal Bilim Mühendisliği ve Nutrición Enstitüsü'nün (INCMNSZ) İnsan Biyomedikal Araştırmaları Kurumsal Komitesi (CIIBH) tarafından onaylandı (REFERANS 1734). Tüm katılımcılar bu çalışmaya dahil edilmeden önce bilgilendirilmiş rıza sundular.
Çalışma tasarımı ve nüfus
Bu, 5 haftalık takip süresiyle randomize, plasebo kontrollü, çift kör bir klinik çalışmaydı. INCMNSZ çalışanları çalışmaya davet edildi ve 2011-2012 yılları arasında antimikrobiyal tedavi görmeyen 20–50 yaş arası sağlıklı gönüllüler de bilgilendirilmiş onay formunu kabul edip imzaladı. Çalışma denekleri, 10,32 g agave inulin prebiyotik olarak ve 4 × 10 9 CFU/g Lactobacillus acidophilus NCFM ile 4 × 10 9 CFU/g Bifidobacterium lactis Bi07 ile 109 CFU/g ile 5 hafta boyunca 4 pakette ve ilk hafta boyunca günde iki kez 200 mg rifaximin ile randomize edildi. Plasebo Jel grubu, 5 hafta boyunca Sinbiyotik Jel ile aynı sunum ve duyusal özelliklere sahip 15 g plasebo jel paketi ve ilk hafta boyunca günde iki kez 200 mg rifaksimin aldı (Şekil 1).
Klinik değerlendirme
Her iki çalışma grubunda da semptomlar ve dışkı görünümü Bristol Ölçeği kullanılarak değerlendirildi. Kilo, boy ve vücut kitle indeksi (BMI) de ölçüldü. Bir günlük kullanılarak sinbiyotik jel, plasebo jel ve rifaksimin tüketimi değerlendirildi ve jel alımıyla ilgili yan etkilerin varlığı veya yokluğu kaydedildi.
Fiber tüketimi
Her iki grupta da lif alımı, her iki grupta da gıda günlüğü ve haftalık 24 saatlik geri çağırma ile değerlendirildi.
Tedavi Uyumu
Rifaximin ve jel tüketimine bağlılık, katılımcı başına tüketilen rifaximin doz sayısı ve tüketilen sinbiyotik ve plasebo jel poşe sayısı sayılırken değerlendirildi. Lactobacillus acidophilus ve Bifidobacterium lactis'in varlığı, Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) kullanılarak tespit edilmiştir.
Dışkı Mikrobiyolojik Değerlendirmesi
0. ziyarette ve haftada 5 ziyaret (6 ziyaret) her grupta, 120 dışkı örneğinde Laktobasil, Bifidobakteri ve Enterobakteri sayıları plaka sayım yöntemiyle değerlendirildi. Bu yöntem, seyreltilmiş örnekleri özel katıortam 10 üzerine yerleştirerek koloni oluşum birimlerini (CFU) ölçür. Her ziyaretin başında dışkı örnekleri alındı.
Mikroorganizmaları tespit etmek için dışkı örnekleri toplanıp BBL tüplerinde saklandı. PBG şişesi anaerobik bakteriler için kullanıldı ve dışkı örnekleri, laboratuvarda işlemeden önce düşük sıcaklıkta tutulması için dondurulmuş jel paketleri içeren strafor soğutucuda taşındı. Koprokültür için PBG şişesinin kapağı çıkarıldı ve dışkı örneği bir tambukla alınarak sürüntü numuneyle emdirildi. Uygulayıcı, daha sonra katı bir kültür ortamı içeren bir tüpün içine yerleştirildi.
Anaerobik bakteriler için şişeler tartıldı ve bir kaşık kullanılarak 5–10 g dışkı toplandı. Takı, şişenin içeriğiyle karıştırıldı ve sıkıca kapatıldı. Numune işleme için, örnekleri içeren şişeler ve steril Stomacher poşetleri tartıldı. Örnek bir torbaya boşaldıldı, 60 saniye santrifüj edildi ve ardından 4,5 ml %0,1 pepton suyu eklendi. Daha sonra, 500 μL örnek bir şişeye aktarıldı ve karışımı homojenleştirmek için vorteks edildi. Örnekten 100 μL sonra, belirli seçici ortamın her plakasında çift olarak aşılandıktan sonra, laktobasillər için Man Rogosa Sharpe (MRS) ortamı ve bifidobakteriler için istenmeyen florayı ortadan kaldırmak için sistein + sikloheksimid ile DP Beerens ortamı, 8 seyreltme faktörüne (0,1 mL seyreltme faktörü) kadar inokule edildi. Enterobakteriler için, bakteriyel kolonileri ayrılıp11 numaralandırıldığı 5–8 seyreltme faktörü (0.1 mL) seyreltilerinde MacConkey ortamı kullanılmıştır. Her ortam tozu saflaştırılmış damıtılmış suda çözünür, çözelti kaynatılır ve tam çözünürlüğü sağlanır, ayrıca 121 °C'de otoklavda 15 dakika sterilize edilirdi. Karışım, dökme plakası tekniği için 46,5 °C'ye soğutuldu; her tabak başına 1 mL çift olarak 15–20 mL kültür ortamı içeren steril Petri kablarına döküldü ve plakalar katılaştı. Aşılanan örnekler, anaerobik GasPak sistemlerindeCO2 ile zenginleştirilmiş atmosferde 37 °C sıcaklıkta, 24–48 saat boyunca anaerobik koşulların korunması için kuluçka yapıldı. Koloni kuran birimler (CFU) bir kalemle işaretlendi ve12 kişi sayıldı. Aşağıdaki formül uygulandı:
CFU/mL = (koloni sayısı × toplam seyrelme faktörü)/kaplama kültür hacmi (mL)
Laktobasil ve bifidobakterilerin morfolojik özelliklerinin tanımlanması
Gram Boyama örneği örneğin morfolojik özelliklerini belirlemek için kullanıldı. Her suştan bakteri kolonilerinden oluşan bir örnek mikroskop slaytına yerleştirildi, 1 dakika boyunca kristal menekşe ile boyandı ve ardından damıtılmış suyla durulandı. İyot çözeltisi 1 dakika uygulandı ve ardından damıtılmış suyla durulandı. Alkol-aseton çözeltisi 10 saniye boyunca renk giderici olarak kullanıldı ve damıtılmış suyla durulandı. Son olarak, safranin karşı leke olarak 1 dakika sürüldü ve damıtılmış suyla durulandı. Mikroskop slaytları, 100x amaçlı daldırma yağı kullanılarak optik mikroskop altında gözlemlendi.
Toplam nicel hesaplama, her grup başına beş denek rastgele seçilmiş dışkı örneklerinde geleneksel polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak gerçekleştirildi ve 5 hafta içinde toplam 60 örnek alındı. Kültür ortamından alınan izolatlar, genetik materyal çıkarımı için işlendi. PCR, 16S rRNA geni13'ün bir parçasını amplifikasyon etmek için evrensel bakteriyel primerler kullanılarak gerçekleştirildi. PCR ürünleri arındırıldı ve sıralandı. Diziler doğrulandı ve dışkı örneklerinden izole edilen laktobasillus ve bifidobakteriyel suşların varlığını doğrulamak için GenBank veritabanına gönderildi.
İstatistiksel analiz
Veriler mutlak ve göreli frekanslar veya medyan (p25-P75) olarak sunulur. Semptomların kümülatif şiddeti, her takipte Likert skoru (hafif 1; orta 2; şiddetli, 3) kullanılarak belirlendi. Gruplar arası karşılaştırmalar Wilcoxon sıra-toplamı testi ve ki-kare veya Fisher'ın tam testi kullanılarak yapıldı. 0. ve 5. haftalar arasında grup içi karşılaştırmalar Friedman testi ve Durbin-Conover ile çoklu karşılaştırmalar kullanılarak yapıldı. İstatistiksel anlamlılık P < 0.05 olarak belirlendi.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Yirmi sağlıklı gönüllü, rastgele olarak Sinbiyotik Jel grubu (n = 10) ve Plasebo Jel grubu (n = 10) olarak bölündü (Şekil 2 ve Tablo 1). Senbiyotik Jel grubunda yedi kişi erkek, üçü kadındı ve medyan yaş 31 idi (aralık aralığı 27–35 idi); Plasebo Jel grubunda ise üç kişi erkek, yedi kişi kadındı ve medyan yaş 33 idi (28–38 yaş aralığı). Gruplar yaş, cinsiyet, kilo ve BMI açısından benzerdi. Tedaviye uyum oranı Sinbiyotik Jel...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Mevcut çalışmada, plasebo grubundaki deneklerin dışkı örneklerinde müdahalenin ilk haftasında ve Synbiotic Gel grubundaki deneklerde ilk ve ikinci haftalarda enterobakteriyel sayılarında anlamlı bir azalma tespit ettik. Bu değişim, patojenik bakteri aşırı büyümesini hafiflettiği belirtilen rifaximinkullanılarak açıklanabilir. Çalışmamızda, rifaksimin takip eden Synbiotic Gel grubu olumlu bir etki gösterdi: Lactobacillus suşunun medyan popülasyonu müdahale süresi b...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.
Kurago-Biotek'in sinbiyotik ve plasebo jeli sağladığı için minnettarlığımızı bildiriyoruz. Sponsorun çalışma tasarımı, toplanması, analizi ve verilerin yorumlanmasında, raporun yazılmasında ve makalenin yayımlanmasına sunulma kararında herhangi bir rolü bulunmamıştır.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| BBL tüpü | NA | NA | Her marka kullanılabilir |
| DP ortamı | NA | NA | Her marka kullanılabilir |
| Dondurulmuş jel paketleri | |||
| MacConkey ortamı | NA | NA | |
| MRS ortamı | NA | NA | Her marka kullanılabilir |
| PBG şişesi | Fosfat tamponu, jelatin, tuzlar %0,05 sistein indirgeme maddesi olarak kullanılır02 | ||
| Petri tabakları | |||
| Plasebo Karışımı | KuragoBiotek-BabyCat. | NA | Sym iotik jel ile aynı fiziksel ve duyusal özelliklere sahip, ancak aktif bileşenler içermiyor |
| Strafor kontiner | |||
| Simbiyotik karışım | KuragoBiotek-BabyCat. | NA | Lactobacillus acidophilus NCMF ve Bifidobacterium infantis Bi-07 (2 x 109 CFU/g) ve 15 g pakette prebiyotik olarak 17,2 g agave inülini |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission