Sığır Meme Epitel Hücreleri ve Meme Dokularından Lipid Damlacıklarının Boyut Temelli Zenginleştirilmesi İçin Bir Protokol

Özet

Bu protokol, lipid damlacıklarının boyut bazlı ayrılmasını ve zenginleşmesini ardışık santrifüjleme yoluyla sağlamayı amaçlar; böylece lipid metabolizma mekanizmalarının ve lipid damlalarıyla ilişkili biyolojik süreçlerin doğru, tekrarlanabilir şekilde incelenmesini mümkün kılar.

Özet

Bu protokol, sığır meme epitel hücrelerinden (BMEC) ve meme dokularından farklı boyutlarda lipid damlacıklarını (LD) zenginleştirmek için ardışık diferansiyel santrifüj yaklaşımını tanımlar; böylece geleneksel toplu LD izolasyon yöntemlerinin ötesinde boyut çözümlü analizler mümkün olur. Hücre içi lipid metabolizmasının dinamik düzenleyici merkezleri olarak, LD'ler nötr lipidleri (trigliseridler ve kolesteril esterler gibi) depolayarak ve bunların sentezini, hidrolizini ve taşınmasını koordine ederek kritik işlevler üstlenir. Enerji homeostazını sürdürmede, zar biyogenezini desteklemede ve hücresel sinyal iletimini kolaylaştırmada merkezi bir rol oynarlar. LD ekstraksiyonu, lipid metabolizmasının düzenleyici mekanizmalarını araştırmak için gereklidir. Meme bezi lipid metabolizmasının incelenmesi, bebek gelişimi, insan sağlığı, tarımsal ekonomi ve temel hücre biyolojisi için önemli sonuçlar taşır. Bu nedenle, BMEC'lerden ve meme bezi dokusundan LD'lerin çıkarılması için diferansiyel santrifüj yöntemi tanımlıyoruz. Geleneksel toplu LD izolasyon yaklaşımlarının aksine, bu protokol LD alt popülasyonlarının santrifüj kuvvetlerini ardışık olarak ayarlayarak boyut bazlı zenginleştirmesini sağlar. LD fraksiyonlarının bütünlüğü ve göreceli zenginleşmesi, BODIPY493/503 boyama kullanılarak ön olarak değerlendirilir; bu da lipid metabolizması ve LD ile ilişkili süreçlerin sonraki analizleri için pratik ve tekrarlanabilir bir yaklaşım sunar.

Giriş

Lipid damlacıkları (LD'ler), hücreler içindeki dinamik organellerdir ve nötr lipidler için birincil depolama^{alanları olarak hizmet verirler 1}. LD'lerin anormal birikimi obezitenin ötesine geçip, yağlı karaciğer^{hastalığı 2}, kardiyovasküler^{hastalıklar 3}, diyabet⁴ ve kanser⁵ gibi hastalıkları da kapsayan çok çeşitli hastalıklarla ilişkilidir. Buna karşılık, yetersiz sayıda LD de ciddi sonuçlara yol açabilir; bu da hücresel enerji rezervlerinin kaybına ve ardından işlevsel bozukluklara yol^{açabilir 6}. Tarımsal ekonomi bağlamında, ruminantlarda yetersiz LD'ler süt yağı salgısının yetersiz olmasına yol açabilir ve süt yağı depresyonuna yol açabilir, bu da süt ürünlerinin besin değerini ve pazarlanabilirliğini^{zayıflatabilir.} Şu anda, LD metabolizmasının düzenlenmesi önemli bir araştırma alanı olarak ortaya çıkmıştır.

20. yüzyıldan bu yana LD'ler için ekstraksiyon tekniklerinin geliştirilmesi, LD'leri daha yüksek miktarlarda, daha yüksek saflıkta ve daha iyi korunmuş biyolojik aktiviteyle çıkarmayı hedeflemiştir. Bu, metodolojilerin sürekli oluşturulması ve optimize edilmesini içerir. Şu anda, birçok şirket LD^{ayrımı 8} için ticari kitler tasarlamıştır. Bu kitler ayrım süresini büyük ölçüde azaltsa ve sadece geleneksel santrifüjler kullanılmasını gerektirse de, ayrışması zor örnekler için reaktif ayarlanamaz ve test adımlarını optimize etmek zordur. Ayrıca, LD'lerin çıkarılması, yağlı karaciğer⁹, kanser¹⁰ ve nörodejeneratif^{hastalıklar 11} gibi metabolik hastalıkların da dahil olmak üzere hastalık mekanizmalarının aydınlatılmasında vazgeçilmez bir rol oynar ve patolojik yolları çözmek için çok boyutlu bir prob görevi görür. Protein ve lipid bileşimleri de LD'lerin çıkarılması yoluyla parçalanabilir ve LD'lerin biyolojik fonksiyonlarının çeşitliliği^{ortaya çıkarılabilir 12}.

Süt yağının oluşumu sadece substrat bozunması süreci değildir; aksine, meme epitel hücreleri tarafından gerçekleştirilen son derece organize edilmiş bir lipid sentezi ve paketleme sürecini temsil eder. ¹³. Süt ineklerinde süt yağı üretimi, bu hücrelerin apikal membran salgılanma mekanizmasına dayanır: endoplazmik retikulumda sentezlenen trigliseridler, sitoplazmik LD'ler oluşturur; bu hücreler apikal membrana taşınır ve tomurcuklanma yoluyla salgılanır. Bu süreçte, LD'ler apikal membrandan türetilen bir süt yağı küresi zarıyla sarılır ve yapısal olarak stabil süt yağı^{globülleri 14} oluşur. Sığır meme bezi, memelilerde laktasyonun incelenmesinde klasik bir model olarak hizmet eder ve LD sentezi ve salgısını yöneten temel mekanizmalar insanlarda yüksek derecede^{korunmuştur 15}. Hem BMEC'lerden hem de meme dokusundan LD'leri çıkarma yöntemleri oluşturulması, hayvan üretimi ile insan sağlığını köprüleyebilir. Çıkarılan LD'lerin proteomik ve lipidomik analizleri, süt verimini ve kalitesini artırmak için kullanılabilir ve böylece güvenlik ve emniyet sağlanır.

Mevcut yöntem, öncelikle LD'lerin düşük yoğunluk özelliğine dayanır; bu da santrifüjleme¹⁶ sırasında gradyantın en üstüne doğru süzülmelerine neden olur. Ekstraksiyon prosedürü üç ana aşamadan oluşur: örnek toplama, LD flotasyonu için ultrasantrifüjleme ve LD yıkama. LD'leri korumak için tampona sukroz (2,5 M) eklenir, ardından santrifüj hızı deneysel gereksinimlere göre ayarlanır; genellikle, büyük LD'ler 10.000 x g'nin altındaki kuvvetlerde zenginleştirilebilirken, küçük LD'ler çıkarmak için daha yüksek hızlar (10.000 x g'nin üzeri) kullanılır, çünkü bu koşullarda daha büyük LD'ler patlayabilir. Son olarak, çıkarılan LD'ler kirlenmeyi önlemek için birden fazla yıkamadan geçer ve ekstraksiyon saflığı BODIPY493/503 boyama ile ön ölçülüğe girer.

Geleneksel LD izolasyon yöntemleri öncelikle heterojen LD popülasyonlarının toplu iyileşmesini sağlar ve boyuta bağlı yapısal ve fonksiyonel farklılıkların analizini sınırlar. Mevcut protokol, LD alt popülasyonlarının boyut bazlı zenginleştirilmesini ardışık diferansiyel santrifüjleme yoluyla mümkün kılarak standart yaklaşımları genişletir; bu da LD büyümesi, dönüş, hücre içi trafik ve lipolitik veya otofajik yollarla diferansiyel kullanımın araştırılmasını kolaylaştırmaktadır. Bu yaklaşım, mutlak saflaştırma yerine zenginleştirmeyi sağlar ve boyut fraksiyonları arasında kısmi örtüşme, sürekli boyut dağılımları ve ortak fiziksel özellikler nedeniyle meydana gelebilir.

Protokol

Zenginleştirme için hedef lipid damlacık boyutunu belirleyin (Şekil 1).

1. Reaktif kurulumu

1. PBS: Ağırlık 8 g NaCl, 0.2 g KCl, 3.58 g Na₂HPO₄·12H₂O ve 0.24 g KH₂PO₄ ile 800 mL ddH₂O. HCl ile pH 7.4'e ayarlayın, iyice karıştırın ve hacmi 1 L'ye çıkarın. Otoklavlamadan sonra 4 °C'de 1 yıla kadar saklayın.
2. Sukroz (2,5 M): 856 g sukroz tartı ve 400 mL ddH₂O içinde çöz. Sakroz tamamen çözünene kadar iyice karıştırın, ardından hacmi 1 L'ye ayarlayın. Çözeltiyi otoklavla geçirin ve 4 °C'de 3 aya kadar saklayın.
3. Tampon A: 1.79 g Trisin ağırlığını alıp 400 mL ddH₂O içinde çöz. pH seviyesini KOH ile 7.8'e ayarlayın. pH ayarından sonra, önceden hazırlanmış 2,5 M sukroz çözeltisi 50 mL ekleyin. İyice karıştırın ve hacmi 500 mL'ye ayarlayın. Otoklavlamadan sonra, tampon 4 °C'de 3 aya kadar saklanabilir.
4. Buffer B: Ağırlık 0.95 g HEPES, 1.49 g KCl ve 0.038 g MgCl₂·6H₂O ayrı ayrı 180 mL ddH₂O. pH ile KOH ile 7.4'e ayarlayın, iyice karıştırın ve hacmi 200 mL'ye çıkarın. Otoklavlama sonrası 4 °C'de 3 aya kadar saklanın.
5. PMSF (1.000x, 0.2 M): 0.175 g PMSF ağırlığı ve 5 mL DMSO'da çöz. -20 °C'de ışıktan korunaklı bir yıla kadar sakla.
   NOT: PMSF oldukça toksiktir; uygun koruyucu önlemler alınmalıdır. Hazırlık sırasında ışığa karşı tam koruma sağlanır; PMSF çözünmesi zordur ve 1.5 mL mikrosantrifüj tüplerine alikotlanabilir.

2. Hücrelerden LD'lerin çıkarılması

1. BMEC'in kültürü
   1. -80 °C buzdolabından beş tüp donmuş BMEC hücresi alın ve bunları 37 °C su banyosunda hızla çözürün. Tüpleri 250 x g ile 4 dakika 30 saniye boyunca santrifüjle yapın.
   2. Kriyokoruma ortamını pipetör ile atın, hücreleri yeniden süspansiyona almak için 1 mL %10 FBS ekleyin, karıştırın ve hücreleri nazikçe 6 mL %10 FBS içeren 100 mm hücre kültürü kabına ekleyin. Hücre dağılımını sağlamak için çanı nazikçe sallayın ve %5 CO₂ ile 37 °C'de kuluçka yapın.
   3. Hücre morfolojisini mikroskop altında izleyin ve hücreler %80–%90 birleşimine ulaştığında alt kültür işlemi gerçekleştirin.
      NOT: LD çıkarımından önce optimal hücre durumu ve yeterli hücre sayısını sağlayarak verimi ve tekrarlanabilirliği artırın.
   4. Petri kabındaki orijinal kültür ortamını pipetle atın ve her tabağın duvarına 1 mL PBS ekleyin. İki kez yıkandıktan sonra, her tabaka 1 mL tripsin ekle ve 37 °C'de 3 dakika 30 saniye kuluçka yapın.
   5. Hücrelerin mikroskop altında tamamen sindirilip sindirmediğini gözlemleyin, sindirim tamamlandıktan sonra sindirimi sonlandırmak için %10 FBS 1 mL ekleyin. Hücreleri pipetle nazikçe yeniden süsküyünüz, 2 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve 250 x g hassasiyetinde 4 dakika 30 saniye santrifüj yapın.
   6. Süpernatantı atın ve Adım 1.2'de açıklanan prosedürleri tekrarlayın.
   7. Yaklaşık 30 kültür kabı veya daha büyük kültür kabı kullanarak hücreleri genişletin veya hücre kültürü için daha büyük kültür kapları kullanın. Ekstraksiyondan önceki gece hücreleri tedavi etmek için 150 μmol/L t10,c12-CLA (DMEM ile seyreltilmiş) ekleyin. 100 mm kültür tabağı için 7 mL kültür ortamı kullanın. Kültür süresi, ayrılması gereken LD'lerin büyüklüğüne bağlıdır.
      NOT: Önceki optimizasyona dayanarak, t10,c12-CLA içeren BMEC'leri büyük LD'leri zenginleştirmek için 6 saat veya küçük LD'leri zenginleştirmek için 12–24 saat işleyin. Hücreler az sayıda LD içerdiğinden, genellikle LD'lerin birikmesini sağlamak için dışdışı yağ asitleri eklenir. Bu çalışmada, kültürlenmiş hücrelere t10,c12-CLA ekleyerek LD birikimini tetiklemektedir.
2. Örnek koleksiyonu
   1. Orijinal ortamı at, 1 mL buz gibi soğuk PBS ekle ve 3 kez yıkay. Son yıkama sırasında PBS'yi atmayın. Örneğin, her 100 mm hücreli 30 çanak kullanarak, her 10 plakadan hücreleri bir 15 mL'lik santrifüj tüpüne toplayın; her tüp yaklaşık 1x108 içerir ve toplamda 3 santrifüj tüpü oluşur.
      NOT: Ekstraksiyon süreci boyunca tüm örnekleri ≤4 °C'de tutun, böylece LD'lerde protein bozulmasını önleyin.
   2. Dengeleme işleminden sonra, 10 dakika boyunca 1.000 x g, 4 °C sıcaklıkta santrifüj yapın.
   3. PBS'yi at. Santrifüj tüpüne önceden hazırlanmış 10 mL Buffer A ve 10 μL PMSF (1.000x, 0.2 M) ekleyin. İyice karıştırın ve 20 dakika boyunca buzda kuluçka yapın.
3. Hücre lizisi ve başlangıç fraksiyonlaşması
   1. Hücreleri bozmak, 5 saniye açık ve 10 saniye KAPALI darbeli döngülerle çalışan bir prob tipi ultrasonik homojenizer kullanılarak toplam etkili sonikasyon süresi 30 dakika içinde 10 dakika olur. Cihazı, 3 mm çapında bir prob kullanarak %40 güce (yaklaşık 76 μm genliğe karşılık gelir) ayarlayın.
      NOT: İşlem boyunca aşırı ısınmayı önlemek için örnekleri buzun üzerinde tutun.
   2. Homojenatı 3.000 x g ve 4 °C sıcaklıkta 10 dakika boyunca santrifüjlenerek çekirdekleri ve hücresel kalıntıları çıkarabilirsiniz. Süpernatantı nükleer sonrası süpernatant (PNS) olarak toplayın.
4. Yüzen LD'lerin ultrasantrifüjasyonu
   1. Süpernatantı 100 μm hücre süzgeciyle filtreleyin.
   2. 10 mL PNS'yi 15 mL'lik santrifüj tüpüne pipetleyin. PNS'nin üstüne sırayla 2 mL sukroz (2,5 M) ve 2 mL Buffer B ekleyin (sukroz hacmi uygun şekilde azaltılırken LD saflığını artırmak için Buffer B hacmi artırılabilir), ardından ilk kez santrifüj yapın (5.000 x g, 4 °C, 20 dakika).
   3. Santrifüjlemeden sonra, tüpün üstündeki sütlü, krema benzeri LD tabakasını toplayın. LD'leri toplamak için, önce 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne 100 μL Tampon B ekleyin, ardından 20 μL pipetle yüzen LD tabakasını birkaç kez nazikçe aspire ederek mümkün olduğunca çok LD toplayın.
      NOT: LD'ler en üstte yüzen bir krem tabakası oluşturur; Kontaminasyonu önlemek için alttaki çözeltiyi mümkün olduğunca aspire etmekten kaçının.
   4. İkinci bir santrifüj (10.000 x g, 4 °C, 30 dakika) gerçekleştirin ve LD'leri toplayın.
   5. Çözümü, sallanan kovalı rotorla uyumlu bir ultrasantrifüj tüpüne aktarın, kaplayın ve tüpleri dengeleyin. Üçüncü santrifüjü bir ultrasantrifüjde (50.000 x g, 4 °C, 40 dakika) gerçekleştirin ve LD'leri toplayın.
      NOT: Güvenli ultrasantrifüj çalışması için tüpleri hassas denge altına alın (0.0001 g'ye).
   6. Dengeleme yaptıktan sonra, LD toplamaya devam etmek için dördüncü santrifüjü (150.000 x g, 4 °C, 50 dakika) gerçekleştirin. Hedef LD boyutuna göre hız ve süreyi optimize edin.
      NOT: Uzun süreli veya tekrarlanan yüksek hızlı santrifüjleme LD'leri bozabilir. Buna karşılık, yıkama sırasında 10.000 x g ile kısa süreli santrifüjleme öncelikle safsızlıkları giderir ve LD bütünlüğüne en az etkisi vardır. Bu yöntem uyarlanabilir; farklı hücre tipleri veya dokular için optimizasyon gerekebilir.
5. LD'leri yıkama
   1. Toplanan LD'leri soğuk Buffer B'ye tekrar askıya alın ve santrifüj sıcaklığında 10.000 x g ve 4 °C'de 5 dakika boyunca bekletin.
   2. Süpernatantı dikkatlice çıkarın ve aynı tampon hacmı, santrifüj kuvveti ve santrifüj süresiyle yıkama adımını en az dört kez tekrarlayın. Küçük LD'ler için, verimli ayrımı sağlamak için santrifüj kuvvetini gerektiği gibi artırın.
   3. Son yıkamadan sonra LD fraksiyonlarını bir havuza toplayın, nazikçe karıştırın ve −80 °C'de saklayın.
      NOT: Yıkama adımlarını atlamayın, bazı LD kaybı kaçınılmaz olsa bile. Görünür membran kalıntısı kalmayana kadar yıkamaya devam edin.

3. Dokudan LD'lerin çıkarılması

1. Örnek koleksiyonu
   1. Sıvı azottan sığır meme dokusu örnekleri alın. 5 g dokuyu tartın ve buz kristalleri kalmayana kadar buzda eritin.
   2. Dokuyu PBS veya fizyolojik salin ile durulayın.
   3. Dokuyu cerrahi makasla 1-2 mm parçalara indirin.
   4. Kıyma dokusu, 12 mL Tampon A ve 10 μL PMSF (1.000x, 0,2 M) içeren önceden soğutulmuş bir harva aktarın. Karışımı buz üzerinde yaklaşık 10 dakika öğütün.
   5. Homojenatı buz üzerinde 20 dakika kuluçka yapın.
   6. İyice öğütmeden sonra, homojenat 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne toplanın.
   7. 2.500 x g, 4 °C'de 10 dakika boyunca santrifüj yapın. Ortaya çıkan süpernatant PNS'dir.
2. Yüzen LD'lerin ultrasantrifüjasyonu
   1. Süpernatantı 100 μm hücre süzgeciyle filtreleyin.
   2. 10 mL PNS'yi 15 mL'lik santrifüj tüpüne pipetleyin. Sırayla 2 mL sukroz ve 2 mL Buffer B ekleyin. İlk santrifüjü gerçekleştirin (4.000 x g, 4 °C, 20 dakika). Sütlü, krema benzeri malzemeyi topla.
   3. İkinci bir santrifüj yapın (7.000 x g, 4 °C, 30 dakika) ve LD'leri toplayın.
   4. Üçüncü santrifüj yapın (10.000 x g, 4 °C, 40 dakika) ve LD'leri toplayın.
   5. Süpernatantı bir SW40 tüpüne aktarın ve ultrasantrifüj yapın (50.000 x g, 4 °C, 50 dakika). LD'leri topla.
   6. Beşinci santrifüj yapın (100.000 x g, 4 °C, 60 dakika). LD'leri topla.
3. LD'leri yıkama
   Hücre ekstraksiyonu LD'ler için yıkama yöntemine bakınız.

4. LD saflığının boyama ile ön doğrulanması

1. Işık korumalı koşullarda önceden 10 μg/mL nötr lipid floresan boya çözeltisi hazırlayın (BODIPY: Buffer B = 1:100, V/V).
2. Mikrosantrifüj tüpüne uygun miktarda karışık LD ve Buffer B ekleyin. Işık korumalı koşullarda, uygun miktarda nötr lipid floresan boya çözeltisi ekleyin. İyice karıştırın ve 10 dakika kuluçka yapın.
3. Temiz bir mikroskop slaytı hazırlayın. Karışımdan 2,5 μL kapağının üzerine dağıtın. Sürgü karışımın üzerine nazikçe yerleştirin, hava kabarcıklarından kaçının. Ters floresans mikroskobu altında gözlemleyin.

5. Western Blot ile LD saflığının doğrulanması

1. LD fraksiyonlarının protein konsantrasyonu BCA protein test kiti kullanılarak ölçüldü.
2. Western blot analizi için, her örnekten 20 μg proteini 5x SDS yükleme tamponu ile karıştırın ve 99 °C'de 10 dakika ısıtarak tam denaturasyon sağlanır.
3. Daha sonra, proteinleri moleküler ağırlıklarına göre %10 gradyanlı poliakrilamid jellerde SDS–PAGE ile ayırın.
4. Elektroforezden sonra, proteinler önceden aktive edilmiş PVDF zarlarına aktarılır, ardından oda sıcaklığında %5 BSA ile 1,5 saat bloklanır. Daha sonra, membranları 4 °C'de primer antikorlarla gece boyunca kuluçkaya geçirin; bunlar arasında tavşan anti-Perilipin 2 (1:500) ve tavşan anti-β-aktin (1:5000) bulunur.
5. Zarları 1x TBST ile her biri 10 dakika boyunca üç kez yıkayın, ardından HRP ile konjuge edilmiş keçi anti-tavşan ikincil antikoru (1:5000) ile oda sıcaklığında 1,5 saat kuluçka yapın.
6. TBST ile üç ek yıkamadan sonra, geliştirilmiş kemimilüminesans (ECL) kiti kullanarak protein bantlarını tespit edin ve jel görüntüleme sistemiyle görselleştirin.

6. Duraklama noktaları ve depolama rehberleri

1. PNS'yi ultrasantrifüjasyondan önce 1–2 saat buzda tutun.
2. Topladığı LD'leri yıkamadan önce 1–2 saat buzun üzerinde tutun. Kısa süreli depolama için, LD'leri 4 °C'de 24 saate kadar depolayın. Uzun vadeli depolama için, LD'leri −80 °C'de depolayın ve donma-erime döngülerini bir çevrimle sınırlayın, böylece LD bütünlüğünü koruyun.
3. Tüm deneysel duraklamalarda, örnekleri buzun üzerinde tutun, böylece kirlenmeyi en aza indirmek için tüp kapakları kapalı tutulur.

7. Sorun Giderme

1. İnce yüzen katman: tampon hacmi veya santrifüj kuvvetini ayarlayın.
2. Zayıf yüzme: santrifüj hızını artır veya süreyi uzat.
3. Kirlenme: steril işlem ve filtrelenmiş tamponlar sağlanın.
4. LD yırtılı: örnekleri buz üzerinde tutun, santrifüj kuvvetini azaltın veya nazikçe yeniden süskü ekleyin.

Sonuçlar

İş akışı ve metodolojik çerçeve
Santrifüj koşullarının deneysel hedeflere göre seçimini yönlendirmek için bir karar ağacı şematiği (Şekil 1) oluşturuldu. Özellikle, büyük LD'leri (≥2 μm) zenginleştirmek için santrifüj kuvvetleri ≤10.000 x g ) kullanılırken, küçük LD'leri zenginleştirmek için >10.000 x g kuvvetler uygulandı (<1 μm). Bu çerçeve, boyut tabanlı LD ayrımı sağlamak için pratik bir temel sağlar. BMEC'lerden ve ...

Tartışma

LD'ler, fosfolipid monotabakasıyla çevrili nötr lipid çekirdeği ile karakterize edilen benzersiz organellerdir. Endoplazmik retikulumdan tomurcuklanır ve boyutlarını ve sayılarını dinamik olarak değiştirir; böylece hücre içi taşınım ve hücresel lipid homeostazını koordine etmek için diğer hücrealtı yapılarla kapsamlı iletişim^sağlanır. 17,18,19. Bu dinamik davranış, sistemik metabolik ipuçları ta...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
0,25% tripsin-EDTA	Gibco	25200072	Reaktif
%10 PAGE Jel Hızlı Hazırlık Kitleri	Pekin BIOMAN	PG112	Reaktif
100 μ M hücre süzgeci	Beyotime	FSTR100	Reaktif
100 mm hücre kültürü çanakı	Corning	490167	Reaktif
Amersham Imager 600	GE Healthcare Yaşam Bilimleri	600	ekipman
Otoklav	Panasonic	MLS-3751L	ekipman
BCA protein test kiti	Pekin Dingguo.	BCA01	Reaktif
BODIPY 493/503	Invitrogen	D3922	Reaktif
Santrifüj	Eppendorf		ekipman
DMEM	HyClone	SH30022.01	Reaktif
DMSO	Solarbio	D8370	Reaktif
Fetal sığır serumu	Gibco	2492319	Reaktif
HEPES	MedChemExpress	HY-D0857	Reaktif
HRP ile konjuge edilmiş AffiniPure keçi anti-tavşan ikincil antikoru	Proteintech	SA00001-2	Reaktif
KCl	HUSHI	20030666	Reaktif
KH2PO4	HUSHI	10017608	Reaktif
MgCl2	HUSHI	20059028	Reaktif
Na2HPO4· 12H2O	HUSHI	S112623	Reaktif
NaCl	HUSHI	10019328	Reaktif
Omni-Easy Anında Protein Yükleme Tamponu	Şanghay Epizim Biyomedikal Teknolojisi	LT101S	Reaktif
Omni-ECL Ultra-Hassas Kemimilüminesans Algılama Kiti	Şanghay Epizim Biyomedikal Teknolojisi	SQ201	Reaktif
PBS	HyClone	SH30256.01	Reaktif
Penisilin & Streptomisin 100 kez ve	NCM Biyoteknoloji	CLOOC5	Reaktif
pH ölçer	METTLER TOLEDO	S220K	ekipman
Pipet	Eppendorf		ekipman
PMSF	Coolaber	CP8651	Reaktif
PVDF Zar Transfer Kiti	GenScript	eBlot L1	Reaktif
Tavşan anti-Perilipin 2	Abcam	15294-1-AP	Reaktif
Tavşan anti-β-aktin	Proteintech	20536-1-AP	Reaktif
Araştırma düzeyinde ters floresans mikroskop	Olympus	IX73	ekipman
Sucrose	Solarbio	S8271	Reaktif
SW 40 Ti Rotor	BECKMAN COULTER	331301	ekipman
Trans-10, cis-12 konjuge linoleik asit	CAYMAN	90145	Reaktif
Trisin	Coolaber	CT11331	Reaktif
Ultrasantrifüj	BECKMAN COULTER	Optima XE-100	ekipman
Ultrasonik hücre kırıcı	SCIENTZ	JY92-11N	ekipman