Timokinonun Bisfenol A kaynaklı nörotoksisite, Keap-1/Nrf-2 sinyalleri, oksidatif stres ve sıçanlarda davranış üzerindeki etkilerinin araştırılması

Özet

Bu çalışma, Thymoquinon'un oksidatif stres, Keap-1/Nrf-2 sinyal yolu ve bisfenol A'ya maruz kalan sıçanların plazma, beyin korteks ve hipokampustaki davranışları üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçladı.

Özet

Bisfenol A (BPA) (BPA) ile kronik düşük dozda maruz kalma, yaygın olarak kullanılan çevresel endokrin bozucu bir yapı, giderek oksidatif stres aracılı nörotoksisite ile ilişkilendirilmektedir. Nigella sativa'nın biyoaktif bileşeni olan thymoquinone (TQ) güçlü antioksidan özellikler gösterir; ancak BPA kaynaklı toksisiteye karşı nöroprotektif potansiyeli tam olarak anlaşılmamıştır. BPA'ya maruz kalmanın yaygın doğası göz önüne alındığında, etkili ve erişilebilir nöroprotektif stratejilerin belirlenmesi giderek daha önemli hale gelmektedir. Bu çalışma, BPA'ya maruz kalan sıçanlarda TQ'nun oksidatif stres, Keap-1/Nrf-2 sinyalleri, davranışları ve histopatolojik değişiklikler üzerindeki etkilerini araştırdı. Toplam 24 yetişkin erkek Wistar Albino sıçan rastgele dört gruba (n = 6/grup) ayrıldı: kontrol, BPA, BPA + 10 mg/kg TQ (BPA+TQ I) ve BPA + 20 mg/kg TQ (BPA+TQ II). BPA (50 μg/kg) ve TQ 30 gün boyunca intragastrik olarak uygulandı. BPA'ya maruz kalma, hipokampus ve beyin korteksinde belirgin histopatolojik hasar yarattı; bu durum önemli davranış bozukluklarına, oksidatif strese, Keap-1/Nrf-2 sinyallerinin bozulmasına ve hipokampus ile beyin korteksinde belirgin histopatolojik hasara yol açtı. TQ tedavisi, lokomotor aktiviteyi ve depresyon benzeri davranışları önemli ölçüde iyileştirdi, lipid peroksidasyonunu ve nitrik oksit seviyelerini azalttı, glutatyon ile ilişkili antioksidan kapasitesini geri kazandı ve Keap-1 ile Nrf-2 ekspresyonunu normalleştirdi (p < 0.001). Bu koruyucu etkiler, daha yüksek TQ dozunda daha belirgindi. Bu bulgular bir arada, timokinonun oksidatif stres ve Keap-1/Nrf-2 sinyal yolunun modülasyonu yoluyla BPA kaynaklı nörotoksisiteyi azalttığını ve çevresel olarak önemli BPA maruziyetine karşı nöroprotektif bir ajan potansiyelini ortaya koyduğunu göstermektedir.

Giriş

Bisfenol A (BPA), plastiklerde ve epoksi reçinelerde yaygın olarak kullanılan sentetik bir bileşiktir ve genellikle gıda ambalaj malzemelerinde, su sistemlerinde, tıbbi cihazlarda ve ev ürünlerinde tespit^{edilir 1}. Sürekli çevresel maruziyet, özellikle gerçek hayattaki insan maruziyetini yansıtan kronik düşük dozlu koşullarda potansiyel nörotoksik etkileri konusunda endişeleri artırmıştır.

ABD Gıda ve İlaç Dairesi ve ABD Çevre Koruma Ajansı gibi düzenleyici kurumlar, 50 μg/kg/günü gözlemlenmemiş olumsuz etki seviyesi olarak tanımlamış olsa da, ortaya çıkan deneysel ve epidemiyolojik kanıtlar daha düşük dozlarda davranışsal ve bilişsel değişikliklerin meydana gelebileceğini göstermektedir. Sonuç olarak, Avrupa'da günlük tolere edilebilir alım 4 μg/kg/güne indirildi ve çevresel olarak önemli BPA^{maruziyeti 1,2'nin} mekanik etkilerinin araştırılması gerekliliğini vurguladı.

Oksidatif stres, BPA kaynaklı nörotoksisitenin temel bir mekanizması olarak kabul edilir. BPA, glutatyon (GSH) gibi antioksidan savunmaları azaltarak ve malondialdehit (MDA) dahil lipid peroksidasyon belirteçlerini artırarak hücresel redoks dengesini ^bozur3,4. Ancak, BPA maruziyeti altında antioksidan yanıtları kontrol eden üst akış düzenleyici mekanizmalar yeterince karakterize edilmemiştir.

Kelch benzeri ECH ile ilişkili protein 1 (Keap-1)/Nükleer faktör eritroid 2-ilişkili faktör 2 (Nrf-2) yolu, başlıca endogen antioksidan savunma mekanizmasıdır. Oksidatif stres koşullarında, Nrf-2 Keap-1'den ayrılır, çekirdeğe taşınır ve antioksidan yanıt elementine bağlı gen^{ifadesini aktive eder 5}. Hücresel savunmadaki yerleşik rolüne rağmen, çevresel olarak ilgili BPA maruziyeti sırasında beyinde Keap-1/Nrf-2 sinyalinin bölgeye özgü modülasyonu, davranışsal sonuçlarla birlikte kapsamlı şekilde incelenmemiştir.

Timokinon (TQ), Nigella sativa tohum yağının ana biyoaktif bileşeni olup, kan-beyin bariyerini geçebilen lipofilik benzokinondur. TQ, kısmen Nrf-2 sinyalinin aktivasyonu ve endojen antioksidan^{kapasitesinin 5,6} artırılması yoluyla antioksidan, anti-inflamatuar ve anti-apoptotik özellikler sergiler. Önceki çalışmalar çeşitli nörotoksisite modellerinde TQ'nun koruyucu etkilerini göstermiş olsa da, aynı BPA maruziyet paradigması içinde oksidatif stres belirteçlerini, Keap-1/Nrf-2 sinyallerini ve davranışsal parametreleri değerlendiren entegre metodolojik yaklaşım ^5,6,7 eksiktir.

Burada, oksidatif stres biyobelirteçlerini, Keap-1/Nrf-2 yol ifadesini ve çevresel olarak ilgili BPA maruziyetine sahip bir sıçan modelinde davranışsal değişiklikleri değerlendirmek ve thymoquinon'un birden fazla beyin bölgesindeki nöroprotektif etkilerini değerlendirmek için tekrarlanabilir deneysel bir protokolü tanımlıyoruz.

Düşük dozlu BPA maruziyetinin, Keap-1/Nrf-2 sinyal yolunun oksidatif stres aracılı düzensizliği yoluyla davranışsal bozukluklara yol açtığını ve timokinonun redoks dengesini geri getirerek ve Nrf-2'ye bağlı antioksidan yanıtları aktive ederek bu etkileri azalttığını hipotezimiz varsaydık.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler, Kurumsal Hayvan Deneyleri Yerel Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No: 68429034/07).

Hayvanlar ve deneysel tasarım
Deneysel Hayvan Araştırma Laboratuvarı'ndan 200-250 g. ağırlığında yirmi dört yetişkin erkek Wistar Albino sıçanı alındı ve kontrollü koşullarda (12 saat ışık/karanlık döngü, 24 ± 2 °C) bireysel olarak standart yemek ve musluk suyuna imkansız erişimle tutuldu. Deneyden önce hayvanlar laboratuvar koşullarına alıştırıldı ve deney 32 gün sürdü.

Sıçanlar, seçim yanlılığını en aza indirmek için bilgisayar tarafından oluşturulmuş basit randomizasyon yöntemiyle deneysel gruplara rastgele atandı; her gruba eşit sayıda hayvan tahsis edildi (n = 6/grup): kontrol kontrol BPA, BPA + 10 mg/kg timokinon (BPA + TQ I) ve BPA + 20 mg/kg timokinon (BPA + TQ II). Örneklem büyüklüğü, G*Power yazılımı (sürüm 3.1) kullanılarak önceden yapılan bir güç analiziyle belirlendi. Önceki çalışmalarda^{bildirilen etki büyüklüklerine dayanarak, özellikle} biyokimyasal ve davranışsal sonuç ölçümleri için BPA kaynaklı nörotoksisite ve antioksidan müdahaleleri değerlendiren ^5,6,7, tek yönlü ANOVA için istatistiksel bir güç 0,80 olarak kabul edildi. Bu koşullarda, deneysel gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılıkları tespit etmek için her grup başına en az altı hayvan gerekti.

BPA (50 μg/kg) ve TQ (10 veya 20 mg/kg) 30 gün boyunca günde 1 kez gagastrik olarak verildi. Tüm tedaviler taze hazırlanmış ve toplam 1 mL/kg hacimde uygulanmıştır. Bu çalışmada kullanılan BPA dozu (50 μg/kg/gün), Amerika Birleşik Devletleri Çevre Koruma Ajansı ve ABD Gıda ve İlaç Dairesi tarafından gözlemlenmemiş olumsuz etki seviyesi ve referans dozu olarak belirlenmesine dayanarak seçilmiştir. Bu doz, çevresel olarak ilgili BPA maruziyetini modellemek ve daha önce güvenli kabul edilen maruziyet seviyelerinde meydana gelen potansiyel nörodavranışsal ve biyokimyasal değişiklikleri araştırmak için deneysel çalışmalarda yaygın olarak kullanılmıştır. Önemli olarak, biriken deneysel kanıtlar, bu dozda veya altında olumsuz nörolojik ve davranışsal etkilerin meydana gelebileceğini göstermekte, düşük doz BPA toksisitesi ^1,2 değerlendirmesinde önemini desteklemektedir. TQ dozlarının (10 ve 20 mg/kg) seçimi, toksisite oluşturmadan nöroprotektif ve antioksidan etkinliğini gösteren önceki deneysel çalışmalara ^{dayanmıştır 5,6,7}. Bu dozlar, nörotoksisite, oksidatif stres ve nöroinflamasyon gibi kemirgen modellerinde yaygın olarak kullanılmıştır ve tekrar uygulanan toksisite eşiklerinin oldukça altındadır. Pilot doz bulma çalışması yapılmadı; Doz seçimi, literatür önceliği ve hem etkinliği hem de translasyonel önemi sağlamak için belirlenmiş güvenlik profilleriyle yönlendirildi.

BPA 30 gün ardışık uygulandı. Son maruziyetin ardından 31. ve 32. günlerde davranışsal değerlendirmeler yapıldı. Tüm davranış testleri tamamlandıktan sonra, 32. gün hayvanlar kurban edildi. Bu zaman çizelgesi, akut müdahale veya prosedürel stresin sonraki biyokimyasal, moleküler ve histopatolojik analizler üzerindeki potansiyel karıştırıcı etkilerini en aza indirirken davranışsal değerlendirme için yeterli zaman tanımak üzere tasarlanmıştır. Thymoquinon, BPA'dan hemen sonra aynı intragastrik yöntemle günde 1 kez uygulandı. Son BPA ve TQ uygulamalarının ardından davranışsal testler yapıldı. Deneysel zaman çizelgesi Şekil 1'de özetlenmiştir.

Vücut ağırlığı ölçümü
Vücut ağırlıkları, kalibre edilmiş dijital hassas denge (±0.1 g hassasiyet) kullanılarak ölçüldü. Her sıçan sabah tedavi uygulamasından önce tek tek tartıldı ve ölçümler 1., 10., 20. ve 32. günlerde standart koşullarda kaydedildi, böylece değişkenlik en aza indirildi (Şekil 2).

Davranışsal değerlendirmeler
Tüm davranışsal parametreler, gözlemci yanlılığını ve gözlemciler arasındaki değişkenliği en aza indirmek için grup dağılımı kör edilmiş tek bir gözlemci tarafından puanlandı. Hayvanlar, yenilikten kaynaklanan stresi azaltmak için davranışsal testlerden önce en az 30 dakika boyunca test odasına alıştırıldı.

Açık alan testi (OFT) ve zorunlu yüzme testinin (FST) birleşik kullanımı, BPA kaynaklı nörodavranışsal toksisitenin kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlar; çünkü BPA'nın kemirgenlerde hem duygusal tepkitesini hem de lokomotor aktiviteyi değiştirdiği^{gösterilmiştir 2,3}. FST hareketsizliğinin yorumlanmasında, OFT kaynaklı lokomotor sonuçlar, değişen motor aktiviteyle ilgili olası karıştırıcı etkileri en aza indirmek için değerlendirildi.

FST: Depresyon benzeri davranış, 32. günde zorunlu yüzme testi kullanılarak değerlendirildi, bundan önce 24 saat önce yapılan 15 dakikalık ön test oturumu yapıldı. Fareler bireysel olarak silindirik tanklara (35 cm çap, 50 cm yükseklikte) yerleştirilir, su ile doldurulur (30 cm derinlik, 25 ± 1 °C) ve 5 dakika yüzmelerine izin verilirdi. Hareketsizlik, yüzme ve tırmanma davranışları bir video kamera kullanılarak kaydedildi ve çevrimdışı olarak analiz edilip davranışsal umutsuzluğu^{değerlendirildi 7}.

OFT: 31. günde açık alan testi kullanılarak anksiyete benzeri davranış ve spontan lokomotor aktivite değerlendirildi. Her sıçan tek tek beyaz bir Pleksiglas arenaya (90 cm x 35 cm) yerleştirildi; bu arena 24 eşit kareye bölündü ve 5 dakika boyunca serbestçe keşf yapıldı. Hareketler bir video kamerası kullanılarak kaydedildi. Merkezi ve çevresel bölgelerde geçirilen zaman ve dört pati ile geçiş sayısı, kaygıya bağlı davranış ve hareket göstergeleri^{olarak nicelendirildi 8}.

Örnek koleksiyonu
32. günde, fareler intramusküler ketamin (45 mg/kg) ve ksilazin (5 mg/kg) ile derin anestezi altına alındı. Pedal çekilme refleksinin olmaması yeterli derinlikteki anestezi olarak doğrulandı. Kan, steril bir şırınga kullanılarak kalp ponksiyonu yoluyla toplandı ve her hayvandan yaklaşık 3-5 ml kan alındı. Ötenazi, derin anestezi altında kan dışına çıkarma ile tamamlandı. Kan örnekleri antikoagülant içeren tüplere aktarıldı ve 3.000 x g hassasiyetinde 4 °C'de 10-15 dakika boyunca santrifüj edildi. Ayrılan plazma aliquote edilip biyokimyasal analize kadar −80 °C'de saklandı.

Hipokampus ve sol beyin yarımküresi hızla diseksiye alındı, tartıldı, sıvı azotta donduruldu ve sonraki biyokimyasal analizler için −80 °C'de saklandı; sağ beyin yarımküresi ise histopatolojik ve immünohistokimyasal değerlendirmeler için %10 nötr tamponlu formalin ile sabitlendi. Metodolojik tutarlılığı sağlamak ve örneklemler arası değişkenliği en aza indirmek için, sol yarımküre biyokimyasal ölçümler için, sağ yarımküre ise tüm hayvanlarda morfolojik analizler için sistematik olarak tahsis edilmiştir. Önemli olarak, formalin fiksasyonu kesinlikle histolojik ve immünohistokimyasal işlemler için ayrılmış dokularla sınırlıydı ve protein bazlı biyokimyasal testler için sabit doku kullanılmamış, böylece fiksasyonla ilişkili protein bozulması önlenmiştir. Biyokimyasal değerlendirmeler için, belirli miktarlarda donmuş beyin dokusu (genellikle test başına 50-100 mg) teste özgü homojenizasyon tamponları ve her biyokimyasal parametrenin gereksinimlerine göre standartlaştırılmış doku-tampon oranları kullanılarak homojenleştirildi. Tüm analizler, deneysel gruplar arasında her testte eşit doku miktarları kullanılarak gerçekleştirildi.

Doku homojenatlarındaki toplam protein konsantrasyonu, üreticinin talimatlarına göre florometrik protein testi kullanılarak belirlenmiştir. Tüm biyokimyasal parametreler, örnekler ve deneysel gruplar arasında karşılaştırılabilirliği sağlamak için her testte standartlaştırılmış ve eşit protein konsantrasyonları kullanılarak ölçüldü.

Oksidatif stres parametrelerinin değerlendirilmesi
Lipid peroksidasyonu, plazma ve doku örneklerinde tiyobarbitürik asit reaktif maddeler (TBARS) yöntemiyle MDA seviyeleri ölçülerek^{değerlendirildi 7}. Indirgenmiş tiol (RSH) ve GSH seviyeleri, 5,5′-ditiobis-(2-nitrobenzoik asit) (DTNB) tabanlı testlerle spektrofotometrik olarak^{belirlenmiştir 7}. Plazma ve doku homojenatlarındaki toplam nitrik oksit (NO) seviyeleri, nitrat indirgemesi sonrası Griess reaksiyonu kullanılarak^{ölçüldü 7}. Tüm biyokimyasal parametreler, Şekil 3 ve Şekil 4'te belirtildiği gibi nmol/g proteini veya μmol/g dokusu olarak ifade edilir. Tüm biyokimyasal testler ikili olarak yapıldı ve istatistiksel analiz için ortalama değerler kullanıldı.

Beyin dokusu analizlerine ek olarak, BPA'ya maruz kalmanın neden olduğu sistemik oksidatif durumu değerlendirmek için kan örneklerinde biyokimyasal tahminler yapıldı. Plazma lipid peroksidasyon seviyeleri TBARS yöntemiyle belirlendi ve sonuçlar MDA eşdeğerleri olarak ifade edildi. Azaltılmış sülfüdril (RSH) seviyeleri DTNB kullanılarak ölçüldü ve toplam NO seviyeleri, daha önce açıklandığı gibi nitrat indirgemesi sonrası Griess reaksiyonu kullanılarak^{değerlendirildi 7}. Soğurma değerleri spektrofotometrik olarak 532 nm (TBARS), 412 nm (RSH) ve 540 nm (NO) olarak kaydedildi. Tüm testler standart koşullarda ikili olarak gerçekleştirildi.

BPA, sistemik dolaşıma giren ve çoklu organ etkileri yapan yaygın bir çevresel toksiktir; bu nedenle, dolaşımdaki oksidatif stres belirteçleri genel redoks^{dengesizliğini yansıtan tamamlayıcı bilgi sağlar 1,2}. Kan bazlı biyokimyasal parametrelerin değerlendirilmesi, merkezi ve periferik oksidatif değişiklikler arasındaki ilişkinin değerlendirilmesini sağlar ve bulguların translasyonel önemini artırır; çünkü bu belirteçler çevresel ve klinik çalışmalarda maruziyete bağlı toksisiteyi izlemek için yaygın olarak kullanılır.

Western Blot analizi
Hipokampal dokuda Keap-1 ve Nrf-2 protein seviyelerini belirlemek için western blot analizi yapıldı. Yaklaşık 50 mg doku, proteaz inhibitörü kokteyli içeren 500 μL RIPA tamponunda homojenleştirildi. Homojenatlar 14.000 x g hassasiyetinde 4 °C'de 10 dakika boyunca santrifüjlendi ve süpernatanlar toplandı. Protein konsantrasyonları, üreticinin talimatlarına göre florometrik protein nicelik testi kullanılarak belirlendi ve konsantrasyonlar standart bir kalibrasyon eğrisinden hesaplandı. Eşit miktarda protein (30 μg) β-merkaptoetanol içeren Laemmli tamponu ile karıştırıldı, 95 °C'de 5 dakika ısıtıldı, %10 SDS-PAGE jellerinde ayrıldı ve 110 V'da PVDF membranlarına 60-90 dakika boyunca aktarıldı. Zarlar %3 BSA ile bloklandı ve 4 °C'de Keap-1 ve Nrf-2'ye (1:3000) ve β-aktine (1:1000) karşı primer antikorlarla gece boyunca kuluçka edildi, ardından HRP ile konjuge ikincil antikorlarla kuluçka yapıldı. Protein bantları kemimilüminesans ile görselleştirildi ve bant yoğunlukları densitometrik analizle nicelleştirilip β-aktine normalleştirildi.

Histopatolojik analiz
Sağ yarımküreden alınan beyin dokusu örnekleri 72 saat boyunca %10 nötr tamponlu formalinde sabitlenmiş, derecelendirilmiş etanol serileriyle kurutulmuş, ksilen içinde temizlenmiş ve standart histolojik prosedürlere göre parafine^{gömülüp 9}. Taze dokular biyokimyasal analizler için ayrıldı. Koronal kesitler (5 μm), fare beyni atlası^10'a göre hipokampal ve entorinal korteks seviyelerinde alındı. Her hayvan için ardışık dört kesit, histolojik ve immünohistokimyasal değerlendirmeler için cam slaytlara monte edilmiş, böylece kesit kalınlığı ve anatomik lokalizasyon tutarlı sağlanmıştır. Bölümler deparaffinize edildi, yeniden nemlendirildi ve rutin boyama^{protokollerine uygun} olarak hematoksilin ve eozin (H&E) ile boyandı. Histopatolojik muayene, deneysel gruplara kör edilmiş tek eğitimli bir gözlemci tarafından ışık mikroskopisi altında yapıldı; bu da yanlılığı en aza indirmek ve gözlemciler arası değişkenliği ortadan kaldırmak için gerçekleştirildi.

İmmünohistokimyasal analiz
Hipokampus ve entorinal korteks dahil ilgi alanları, BPA kaynaklı nörotoksisiteye karşı savunmasızlıkları ve bilişsel ve duygusal düzenlemedeki rolleri^{nedeniyle seçilmiştir 1,2}. Nrf-2 ve Keap-1 için immünohistokimyasal boyama, parafinle gömülü beyin kesitlerinde gerçekleştirildi. Kesitler ksilende deparafinize edildi, derecelendirilmiş etanol serileriyle yeniden hidratlandı ve sitrat tamponunda (pH 6.0) ısı kaynaklı antijen alımına maruz bırakıldı. Endojen peroksidaz aktivitesi kuluçkadan önce söndürülmüştür.

Bölümler, Nrf-2 (1:100) ve Keap-1 (1:200) ile primer antikorlarla gece boyunca 4 °C'de kuluçka edildi. Tespit, üreticinin talimatlarına göre, yaban turpu peroksidaza konjuge edilmiş türe özgü ikincil antikorlar içeren, ticari olarak kullanılabilir, kullanıma hazır polimer bazlı HRP tespit sistemi kullanılarak gerçekleştirildi. İmmünoreaktivite, kromojen olarak 3,3′-diaminobenzidin (DAB) kullanılarak görselleştirildi ve ardından hematoksilin ile karşı boyama yapıldı. Bölümler susuz bırakıldı, temizlendi ve örtü kaydırıldı.

Negatif kontrol bölümleri birincil antikor kuluçkası olmadan paralel olarak işlendi. Nicel analiz için, her hayvan başına üç bitişik olmayan bölüm değerlendirildi. Tüm gruplar için aynı pozlama ayarlarında görüntüler alındı. Her bölüm için on altı örtüşmeyen alan ImageJ yazılımı kullanılarak analiz edildi. İlgi alanları manuel olarak belirlendi, arka plan boyaması çıkarıldı ve immünoreaktivite ortalama gri değer olarak ifade edildi. Hayvan başına ortalama değer hesaplandı ve istatistiksel analiz için kullanıldı.

Histopatolojik puanlama
Histopatiksel değişiklikler, H&E boyalı kesitlerde yarı nicel olarak değerlendirildi. Her bölüm başına rastgele seçilmiş, örtüşmeyen on alan incelendi ve patolojik parametreler bağımsız olarak puanlandı. Hipokampus ve entorinal korteksteki hasar şiddeti, etkilenen hücrelerin oranına göre dört puanlık bir ölçekle derecelendirildi: puan 0 (<5%), puan 1 (≤ üçte bir), puan 2 (üçte birden üçte ikisine kadar) ve puan 3 (> üçte iki). İstatistiksel analiz için hayvan başına ortalama puanlar kullanıldı.

İstatistiksel analiz
Veriler SPSS yazılımı (sürüm 29.0) kullanılarak analiz edilmiş ve ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulmaktadır. Örneklem büyüklüğü, önceki çalışmalar ve güç analizine dayanarak belirlendi; bu da her grup başına altı hayvanın biyolojik olarak önemli farklılıkları tespit etmek için %>80 güç sağladığını gösteriyor. Veri dağılımının normalliği Shapiro-Wilk testi kullanılarak değerlendirildi. Varyansların homojenliği Levene testi kullanılarak değerlendirildi. Grup karşılaştırmaları, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak yapıldı ve ardından Tukey'nin sonradan yaptığı test yapıldı. İstatistiksel anlamlılık p < 0.05 olarak belirlendi.

Sonuçlar

Vücut ağırlığı
Çalışmanın 1. ve 32. günlerinde gruplar arasında vücut ağırlığında istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlemlenmedi (F(3,20)=2,750, p > 0,05; Şekil 2).

Davranışsal test sonuçları
Açık alan test analizi, BPA'ya maruz kalmanın lokomotor aktiviteyi önemli ölçüde azalttığını gösterdi; bu, kontrol grubuna kıyasla daha az geçiş sayısıyla gösterildi (p < 0.001). ...

Tartışma

Mevcut çalışma, USEPA tarafından 50 μg/^{kg 1,2} dozda güvenli kabul edilen polikarbonat plastiklerin yapısal bileşeni olan BPA'nın oksidatif stres, Keap-1/Nrf-2 sinyalleri, davranışları ve fare beynindeki histopatolojik değişiklikler üzerindeki etkilerini değerlendirdi. Ayrıca, iyi belgelenmiş antioksidan özelliklere sahip doğal olarak bulunan TQ'nun potansiyel nöroprotektif etkileri iki farklı dozda (10 mg/kg ve 20 mg/kg)

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)	Thermo Scientific	69-78-3
Benchtop centrifuge NF048	Nüve	43560
Beta_Actin	ThermoFisher Scientific, United States	7D2C10
Bisphenol A	Merck	239658
BSA solution	Proteintech, United States)	66201-1-Ig
Butylated hydroxytoluene	Sigma Aldrich	128-37-0
Dijital Homojenizatör	Daihan Scientific	https://www.artlaboratuvarcih azlari.com/urun/daihan-hg- 15d-dijital-homojenizator-set -a?srsltid=AfmBOorx_az06ulc HpSzKZsuP8-47Za4BkvLOM2 2Xhp00tgwWhJ-86Vc
Hematoxylin–eosin	Bio Optica	W01030708
Hydrochloric acid	Merck	7647-01-0
Image J software program	NIH; Washington, U.S.A.	https://imagej.net/ij/
Immunohistochemical staining kit	Lab VisionTM UltraVisionTM Large Volume Detection System: anti-polyvalent	HRP, TA-125-HL
Leica Autocut 14051956472	Germany	https://www.leicabiosystems. com/histology-equipment/mic rotomes/histocore-autocut/
Light microscope	Nikon, Eclipse	Ni-U, 940728
N-(1-Naphthyl)ethylenediamine	Thermo Scientific	1465-25-4
Nano Microplate Reader	BMG LABTECH	SPECTROstar Nano
phosphate-buffered saline	Merck	P4417
Primary antibodies Keap-1	Proteintech	Cat No. 10503-2-AP, 1:200
Primary antibodies Nrf-2	Proteintech	Cat No. 16396-1-AP, 1/100
Qubit Protein BR Assay Kit	ThermoFisher Scientific-INVITROGEN	Q33211
sodium citrate	Merck	03-04-6132
Sodium Dodecyl Sulfate	Thermo Scientific	151-21-3
sodium hydroxide	Merck	1310-73-2
Sodium nitrate	Merck	7631-99-4
Streptavidin Peroxidase	Thermo Scientific	SHRP248-B
sulfanilamide	Thermo Scientific	63-74-1
thiobarbituric acid	Merck	504-17-6
TQ	CAYMAN	490-91-5
Tricarballylic acid, 99%	Thermo Scientific Chemicals	139360500
Trichloroacetic acid	Thermo Scientific Chemicals	76-03-9
Tris-HCl	Thermo Scientific	1185-53-1
Vanadium(III) chloride	Sigma Aldrich	7718-98-1
West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate and the iBright 750	Thermo Fisher Scientific system	https://www.clinxsci.com/product/mini _chemiluminescence_imaging_system ?gad_source=1&gad_campaignid= 16224184202&gbraid=0AAAAAoN6 UOOtoB8UD0deumBAMD8Xi-1l-&g clid=CjwKCAjwgeLHBhBuEiwA L5gNEXtK2CNSLS1GqllMuNgkrFYD aW7yK585njQjFja485Fkwj9lRUEKD BoCgLoQAvD_BwE
Zinc sulfate solution	Merck	7733-02-0