Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Araştırma makalesi
* These authors contributed equally
Bu çalışma, transkateter böbrek arter embolizasyonu ve hızlı atriyal pace yoluyla kronik orta dereceli böbrek yetmezliği ile birleşen yeni bir in vivo beagle modeli oluşturdu ve bu kombinasyonun sol atriyal endotel fonksiyonunu, prokoagülan aktivitenin arttığını ve inflamatuar ile RAAS aracılı yollar yoluyla tromboz riskini artırdığını gösterdi.
Atriyal fibrilasyon (AF) ve böbrek yetmezliğinin (RI) birlikte görülmesi, yüksek prevalansa sahip klinik olarak karmaşık bir olgudur. Bu çalışma, beagle'larda kronik orta dereceli RI ile AF'nin sol atriyal endotel fonksiyonu üzerindeki etkisini araştırdı. Kronik RI, sol böbrek arterinin ana dalının jelatin sünger granülleri kullanılarak transkateter embolizasyonu ile indüklendi; kronik böbrek parenkimal hasarının gelişmesi için hayvanlar 3 ay boyunca tutuldu. AF, daha sonra sürekli hızlı atriyal pace ile (temel döngü uzunluğu, 60 ms; voltaj, diyastolik pace eşiğinin 4 katı; 180 dakika) tarafından indüklenmiştir. Histolojik değişiklikler hematoksilin ve eozin boyama kullanılarak değerlendirildi. Plazma ve kalp dokularında endotel fonksiyonu, pıhtılaşma, fibrinoliz, iltihap ve renin–anjiyotensin–aldosteron sistemi (RAAS) aktivitesi ile ilişkili parametreler, enzimle bağlantılı immünosorbent testi, nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ve western blotlama kullanılarak incelendi. Sonuçlar, plazma kreatinin belirgin şekilde yükseldiği, üre azotu ve azalan kreatinin klirensi ile desteklenen orta dereceli RI ile kronik böbrek hasarı modelinin başarılı kurulduğunu gösterdi. Sol atriyal endotel fonksiyonu, RI ve AF kombinasyonlu beagle'larda anlamlı şekilde bozulmuş, prokoagülan etkilerin artması ve fibrinolizi azalmıştı. RI prosedürü veya AF indüksiyonu sonrası inflamatuar belirteçler yükseldi ve birleşik RI+AF grubunda daha da arttı. Ayrıca, RI'dan sonra yükselen renin ve aldosteron seviyeleriyle gösterilen RAAS aktivitesi, AF ile kombinasyonda daha da arttı. Özetle, bu çalışma beagle'larda anatomik orta dereceli RI ile AF kombinasyonunu in vivo hayvan modeli başarıyla kurdu ve bu kombinasyonun sol atriyal endotel fonksiyonunu önemli ölçüde bozduğunu ve trombotik riski artırdığını gösterdi.
Sürekli kardiyak aritmin en yaygın formu olan atriyal fibrilasyon (AF), olumsuz klinik sonuçlarla yakından ilişkilidir. AF'nin sistemik patofizyolojik özellikleri nedeniyle, bu aritmi, bilişsel gerileme, depresyon ve sistemik emboli gibi çeşitli eşlik hastalıklarla karmaşık patofizyolojik çapraz konuşma ilesıkça ilişkilidir 1. Kronik böbrek hastalığı (KBB), hem AF gelişimi hem de tromboembolik olayların meydana gelmesi için bağımsız bir risk faktörü olarak tanımlanmıştır. KBD tanısı konan hastaların yaklaşık %15 ila %20'si AF ile etkilenirken, böbrek restatezi tedavisi alan hastalarda AF gelişen oran oranı %15 ile %40 arasında değişmektedir. Bu arada, AF tanısı konan hastaların yaklaşık %30 ila %60'ı aynı anda hafif ve orta dereceli böbrek yetmezliği (RI)3 ile de aynı anda göstermektedir. Bu nedenle, AF ve RI'nin birlikte ortaya çıkması, hasta popülasyonlarında yüksek yaygınlığa sahip karmaşık bir klinik olgu haline gelmiştir. AF ile RI arasındaki çift yönlü ilişki, AF insidans riskini ciddi şekilde artırır ve ayrıca böbrek yetmezliğinin ilerlemesini zorlaştırır, bu da sonunda klinik sonuçların kötüleşmesine katkıdabulunur 4.
Önceki çalışmalarda, sıçanlar genellikle RI modelleri oluşturmak için kullanılmıştır; ancak küçük kalp boyutları nedeniyle kardiyak elektrofizyolojik deneyler için uygun olmamalıdır. Buna karşılık, köpekler ise orta ve büyük hayvan böbrek yetmezliği modellerinde sıkça kullanılır; nefrektomi ise birincil modellemeyöntemi olarak kullanılır 5. Buna rağmen, bu yaklaşım sınırlı bir modelleme başarı oranıyla ilişkilidir. Daha da önemlisi, nefrektomi doğrudan böbrek parenkimal hasarını indükte etmediği için, böbrek yetmezliğinin patolojik süreçlerini etkili bir şekilde simüle edemez. Bu nedenle, RI ve AF ile uygun bir hayvan modeli oluşturmak çok önemlidir. Dikkat çekici bir nokta, Liang Z ve ark., sol böbrekteki böbrek arterinin küçük dallarının iki hafta boyunca jelatin sünger granülleri kullanılarak embolizasyonu yaparak hafif bir RI modeli kurmuşlardır; bu da AF6 ile ilişkilidir; ancak, klinik KBH simülasyonu için genellikle iki haftalık gözlem süresi yetersiz kabul edilir; çünkü kronik nefropatinin tipik özellikleri, o cümləden glomeruloskleroz ve tubulointerstisial fibroz, hayvan modellerinde tam gelişmek için uzun süreli böbrek parenkimal hasarı gerektirir 7,8. Bu, klinik KBD'nin ilerleyici doğasını daha sadık şekilde özetleyen daha uzun gözlem süresine sahip kronik bir modele olan ihtiyacı vurgular.
Bu nedenle mevcut çalışma, beagle'larda sol böbrek arterinin ana gövdesinin transkateter embolizasyonu yapılarak ve hayvanları 3 ay boyunca koruyarak kronik orta dereceli RI ile AF kombinasyonu hayvan modeli oluşturmayı amaçladı; böylece yerleşik kronik böbrek patolojisinin gelişimine izin verildi. Ayrıca, bu patolojik koşullar altında sol atriyal endotel disfonksiyonunun patogenezini inceledik ve kronik orta dereceli RI ile AF kombinasyonunun sol atriyal endotel fonksiyonunu artırılmış iltihap ve RAAS aktivasyonu yoluyla sinerjik olarak bozacağı hipotezini test ettik; böylece her iki durumun ötesine kadar tromboz riskini artıracak. Bu bulgular, kronik RI ile AF birleşimini daha iyi anlama sağlayabilir ve AF ile RI hastalarında antikoagülan tedavinin faydalarına dair daha fazla araştırma için temel oluşturabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ndeki tavsiyelere sıkı sıkıya uygun olarak yürütülmüştür (Yayın No. 85-23, revize 1996). Çalışma protokolü, Pekin Anzhen Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. 81700293). Çalışma protokolü, kurumumuzun Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından incelenip onaylanmıştır. Tüm çabalar hayvan acısını en aza indirmek ve çalışmada kullanılan hayvan sayısını azaltmak için gösterildi. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
1. Hayvan modeli ve deneysel tasarım
2. Kronik orta dereceli RI indüksiyonu için böbrek arter embolizasyonu
5F çok amaçlı kateter arterial kılıftan geçirildi ve C-kol floroskopik rehberliğiyle karın aortasına ilerletildi. Seçici sol böbrek arter kanülasyonu yapıldı ve başlangıç renal arter anjiyografisi, 3 mL/s hızla 5–8 mL iyonsuz iyotlu kontrast madde enjekte edilerek tam böbrek arter ağacını görselleştirerek yapıldı. Kateter pozisyonunun başarılı olması, sol böbrek arteri ve dallarının anjiyografik görüntülerde gösterilmesiyle doğrulandı.
Daha sonra, RI, sol böbrek arterinin ana dalının emilebilir jelatin sünger granülleri (50 mg çapı) kullanılarak transkateter embolizasyonu yoluyla indüklendi. Jelatin sünger granülleri, yaklaşık 50 mg granül, kontrast madde ve normal tuzlu su karışımı ile 1:1 oranında karıştırılarak yaklaşık 2–3 mL toplam hacmde bir çamur olarak hazırlandı. Embolizasyon bulamacı, sürekli floroskopik izleme altında yaklaşık 2–3 dakika boyunca kateter üzerinden manuel enjeksiyonla yavaşça enjekte edildi. Başarılı embolizasyon, embolize edilmiş dallarda distal arterial opacifikasyonun olmadığını gösteren tekrar sol böbrek arter anjiyografisiyle doğrulandı. Anjiyografik doğrulamanın ardından kateter ve kılıf çıkarıldı ve femoral arter 6-0 polipropilen dikiş ile onarıldı. Cerrahi yara katmanlar halinde kapatıldı ve hayvanların yakından izlendiği şekilde iyileşmelerine izin verildi.
Kontrol grubu ve AF grubu (sahte prosedür) için aynı kateterizasyon işlemi yapıldı ve böbrek arteri anjiyografisi sonrası çok amaçlı kateter aracılığıyla sol böbrek arterine eşit hacimde (2–3 mL) normal salin enjekte edildi.
3. Hızlı atriyal hızlama ile AF indüksiyonu
RI prosedüründen (veya sahte prosedürden) üç ay sonra, AF grubunda ve RI+AF grubunda AF indüklendi. AF toplamda 12 beagle'da indüklenmiştir (AF grubunda n = 6, RI+AF grubunda n = 6). Yukarıda açıklandığı gibi yeniden anestezi ve damar erişimi sonrası, sağ femoral ven kateter takılması için kanülasyon yapıldı. 6F kuadripolar elektrot kateteri (bkz. Materyal Tablosu) floroskopik rehberlikle öne çıkarılarak sağ atriumun yan duvarına yerleştirildi. Kateter konumlanması, intrakardiyak kanalda karakteristik atriyal elektrogramların kaydedilmesiyle doğrulandı; bu kayıtlar net ve keskin atriyal sapmalar gösterdi. Diyastolik hızlama eşiği, stimulatör çıkış voltajının 5 V'dan 0.1 V'luk azalmalarla kademeli olarak düşürülerek atriyal yakalama kaybı gözlemlenene kadar belirlendi; Tutarlı 1:1 atriyal yakalama sağlayan en düşük voltaj, diyastolik tempo eşiği olarak kaydedildi. Hızlı atriyal pace (temel döngü uzunluğu, 60 ms, dakikada 1000 vuruş hızına karşılık; çıkış darbe genişliği, 2 ms; voltaj, diyastolik hız eşiğinin 4 katı, genellikle 2–4 V'a karşılık gelir) daha önce açıklandığı gibi, AF indüklemek için Kardiyak Stimülatör kullanılarak 180 dakika boyunca kesintisizsağlanmıştır. Başarılı AF indüksiyonu, yüzey EKG'sinde sürekli düzensiz R-R aralıklarının ortaya çıkması ve tempo kısa süreli durmadan sonra intrakardiyak elektrogramda hızlı, düzensiz atriyal potansiyellerin en az 1 dakika boyunca devam etmesiyle doğrulandı. Tüm 12 beagle (%100) tempo protokolü tamamlandıktan sonra sürekli AF (AF) sağladı. Tempo durduktan sonra süren AF'nin ortalama süresi, spontan kardiversiyondan sinüs ritmine geçmeden önce 3–8 dakika arasında değişmiştir.
AF hassasiyetini değerlendirmek için kullanılan patlama temposu protokollerinin (genellikle 3–10 saniyelik patlamalar) aksine, bu çalışmada kullanılan sürekli 180 dakikalık hızlı atriyal pace yaklaşımının özellikle sürekli AF modeli ve erken moleküler yeniden modelleme için tasarlandığını belirtmek önemlidir. Bu protokol iyi kurulmuş ve köpek AFaraştırmalarında kapsamlı şekilde doğrulanmıştır 9,10.
4. Deneysel tasarım ve grup atanması
Deneysel hayvanlar rastgele dört gruba (n = 6 grup başına ayrıldı): Kontrol grubu, RI grubu, AF grubu ve RI ile AF (RI+AF) grubu. RI grubundaki ve RI+AF grubundaki beagle'lar başlangıçta RI embolizasyon prosedüründen geçti, Kontrol grubu ve AF grubundaki beagle'lar ise böbrek arterine sahte normal tuzlu su enjeksiyonu aldı. Üç ay sonra, yukarıda açıklandığı gibi AF ve RI+AF gruplarında AF indüklendi. Tüm deneysel tasarım ve zaman çizelgesinin şematik bir özeti Şekil 1'de sunulmaktadır.
5. Kreatinin klirens belirlemesi
Kreatinin klirensi (CCr), 30 dakikalık endojen kreatinin temizlemeyöntemi 11 kullanılarak belirlendi. Kısa bir süreliğine, anestezi sonrası bir Foley kateteri idrar mesanesine aseptik koşullarda yerleştirildi ve mesane tamamen boşaldı. Daha sonra 30 dakikalık idrar toplama dönemi başlatıldı; bu süre zarfında tüm idrar çıktısı kateter aracılığıyla kalibre edilmiş bir toplama kabına toplandı. 30 dakikalık toplama süresinin sonunda, idrarın tam toparlanması için mesane tekrar boşaldıldı. Aynı zamanda, plazma kreatinin belirlenmesi için juguler venden orta nokta kan örneği alındı. CCr standart formül kullanılarak hesaplandı: CCr (mL/min/kg) = (idrar kreatinin konsantrasyonu × idrar hacmi) / (plazma kreatinin konsantrasyonu × toplama süresi), vücut ağırlığına normalleştirildi.
6. Doku ve kan örnekleri toplaması
Kan örnekleri başlangıçta ve EDTA-antikoagülasyonlu ve düz serum ayırıcı tüplere11 kurban edilmeden önce juguler venden alındı. Sonunda, tüm beagle'lar anesteziden iyileşmeden önce 150 mg/kg dozda ölümcül dozda sodyum pentobarbital intravenöz enjeksiyonla ötenazilendi. Böbrekler histolojik inceleme için alındı. Kalp toplandı ve sol atriyal uzantı (LAA) dikkatlice diseksiye edildi, eksizyondan 5 dakika içinde sıvı azotta donduruldu ve moleküler analize kadar −80 °C'de saklandı. LAA, AF hastalarında tromb oluşumunun en yaygın yeri olduğu ve endotel fonksiyonu ile tromboz riskini değerlendirmek için klinik olarak en önemli anatomik konumu temsil ettiği doku analizi için seçilmiştir.
7. Histolojik gözlem
Böbrek dokuları 24 saat boyunca %10 nötr tamponlu paraformaldehit ile sabitlenmiş, derecelendirilmiş etanol serisi (%70, 80%, %90, %95 ve %100 etanol, her biri 1 saat) ile kurutulmuş, ksilen ile temizlenmiştir (iki değişim, her biri 30 dakika), parafine gömülür ve döner mikrotom kullanılarak 5 μm kalınlığında dilimlere kesilmiştir. Daha sonra, dilimler histopatolojik değişiklikler gözlemlemek için HE ile boyandı. Özellikle, kesitler ksilenle deparafinize edildi (iki değişiklik, her biri 10 dakika), inen etanol serisi ile yeniden hidratlandırıldı, hematoksilin çözeltisi ile 5 dakika boyandı, %1 hidroklorik asit-etanol ile 30 saniye farklandırıldı, 10 dakika akan musluk suyunda durulandı, 2 dakika boyunca eosin çözeltisi ile karşı boyandı, kurutuldu, temizlendi ve nötr balsamla monte edildi. Kesitler ışık mikroskobu altında 100× ve 400× büyütmelerle incelendi.
8. Enzimle Bağlantılı İmmünosorbent Testi (ELISA)
Kan örnekleri 3000 × g'de 4 °C'de 20 dakika boyunca santrifüjlendi, ardından süpernatant (plazma) toplanıp −80 °C'de depolandı ve analiz yapılana kadar saklandı. Kreatinin, üre azotu, Von Willebrand faktörü (vWF), trombomodulin (TM), asimetrik dimetilalarjinin (ADMA), nitrik oksit (NO), plazminojen aktivatörü-1 (PAI-1), doku plazminogen aktivatörü (t-PA), tümör nekrozi faktörü-α (TNF-α), yüksek duyarlılık C-reaktif protein (hs-CRP), interlökin-6 (IL-6), renin ve aldosteron (ALD) plazma seviyeleri, üretici talimatlarına göre ticari ELISA kitleri kullanılarak incelendi. Kısaca, antikor kaplı 96 kuyu mikroplakalarına 100 μL plazma örneği veya standart eklendi, 37 °C'de 2 saat kuluçka edildi, yıkama tamponu ile dört kez yıkandı, 37 °C'de 1 saat biyotinile tespit antikoru ile inkübe edildi, tekrar yıkandı, 37 °C'de 30 dakika boyunca streptavidin-HRP konjugatı ile kuluçka edildi, ardından karanlıkta 15–20 dakika TMB alt tabakası geliştirildi. Reaksiyon, 50 μL stop çözeltisi ile durduruldu ve mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm soğurma ölçüldü. Tüm örnekler çift olarak analiz edildi.
9. Nicel Gerçek Zamanlı PCR (qRT-PCR)
LAA dokularından toplam RNA çıkarılması TRIzol reaktifi kullanılarak gerçekleştirildi, ardından RNA saflığı ve konsantrasyonu spektrofotometre ile 260/280 nm absorbans oranlarında (kabul edilebilir aralık 1.8–2.0) tespit edildi. Toplamda 1 μg RNA, PrimeScript RT reaktif kiti kullanılarak tamamlayıcı DNA'ya (cDNA) ters transkribe edildi. Ters transkripsiyon reaksiyonu 37 °C'de 15 dakika uygulandı, ardından 85 °C'de 5 saniye boyunca inaktivasyon yapıldı. Daha sonra SYBR Green Master Mix kullanılarak PCR sisteminde nicel gerçek zamanlı PCR gerçekleştirildi. Termal döngü programı, başlangıçta 95 °C'de 5 dakika denatürasyon, ardından 95 °C'de 10 saniye boyunca 40 döngü denatürasyon ve 30 saniye boyunca 60 °C'de tavlama/uzatma yapılıyordu. Floresans sinyali, her uzatma aşamasının sonunda SYBR Yeşil kanalı kullanılarak tespit edildi. Eşik döngüsü (Ct) değerleri enstrüman yazılımı tarafından otomatik olarak belirlendi. mRNA seviyelerinin katlanma değişimleri 2−ΔΔCt yöntemiyle belirlendi. β-aktin iç kontrol olarak hizmet verdi. Tüm örnekler üç adet olarak alındı.
10. Western blotting
Toplam protein, LAA dokularından radyoimmünoprecipitasyon testi (RIPA) liz tamponu kullanılarak (50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, %1 NP-40, %0.5 sodyum deoksikolat, %0.1 SDS, proteaz ve fosfataz inhibitörü kokteyli ile takviye edilmiş) kullanılarak alındı; bkz. Malzeme Tablosu). Dokular buz üzerinde homojenleştirilip 12.000 × g sıcaklıkta 4 °C'de 15 dakika boyunca santrifüj edildi ve süpernatant toplandı. Protein konsantrasyonu, BCA Protein Analiz Kiti kullanılarak nicel olarak belirlendi. Daha sonra, eşit miktarda protein (şerit başına 30 μg) %12 SDS-PAGE'ye maruz bırakılarak 80 V'da 30 dakika (üst üste gel) ayrıldı, ardından yaklaşık 60 dakika boyunca 120 V (çözüm jeli) ve ardından transfer tamponunda 90 dakika boyunca 300 mA'da poliviniliden florür (PVDF) zarlarına aktarıldı (25 mM Tris, 192 mM glisin, %20 metanol). Zarlar, TBST'de (%0,1 Tween-20 ile Tris tamponlu tuzlu suyum) çözündürülmüş %5 yağsız sütle oda sıcaklığında 2 saat boyunca tıkanmış, ardından 4 °C'de birincil antikorlarla (bkz. Antikor kaynakları, katalog numaraları ve seyreltmeler için Malzeme Tablosu) incelenmiştir. Ertesi gün, zarlar TBST ile üç kez (her biri 10 dakika) yıkanmış ve ilgili HRP ile konjuge edilmiş ikincil antikor ( bkz. Malzeme Tablosu) ile oda sıcaklığında 2 saat kuluçka altına alınmıştır. Üç ek TBST yıkamasından (her biri 10 dakika) sonra, lekeler kemilyüminsans görüntüleme sistemi kullanılarak geliştirilmiş kemilyüminsans (ECL) kiti ile görselleştirildi. Gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) iç kontrol görevi olarak kullanıldı. Densitometrik analiz ImageJ yazılımı kullanılarak yapıldı ve göreli protein ekspresyon seviyeleri GAPDH'ye normalize edildi. Tespit edilen proteinlerin yaklaşık moleküler ağırlıkları şu şekildedir: vWF (~260 kDa), TM (~60 kDa), endotel nitrik oksit sentaz (eNOS, ~130 kDa), indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS, ~130 kDa), PAI-1 (~45 kDa), t-PA (~70 kDa) ve GAPDH (~36 kDa). Tam uzunlukta, kırpılmamış Western blot görüntüleri Ek Şekil 1 ve Ek Şekil 2'de sağlanmıştır.
11. İstatistiksel analiz
Tüm değerler istatistiksel ve grafik yazılımı kullanılarak analiz edilmiş ve ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulmuştur. Veri dağılımının normalliği, parametrik analizden önce Shapiro-Wilk testi kullanılarak değerlendirildi. Varyansın homojenliği Levene testi kullanılarak değerlendirildi. Normallik ve varyans homojenliği varsayımlarını karşılayan veriler için, tek yönlü ANOVA kullanılarak fark karşılaştırması yapıldı ve ardından kontrol grubuna karşı çoklu karşılaştırmalar için Dunnett'in sonradan yaptığı test yapıldı. Normallik varsayımını karşılamayan veriler için, parametrik olmayan Kruskal-Wallis testi ve ardından Dunn'un sonradan yaptığı test uygulandı. Bu çalışmada, tüm değişkenler normallik ve eşit varyans varsayımlarını karşıladı; bu nedenle, tüm süreçte parametrik analizler uygulandı. Analiz yazılımında veriler gruplanmış veri tablolarına girildi, tek yönlü ANOVA Sütun Analizleri menüsünden seçildi, Dunnett testi sonradan karşılaştırmalar için seçildi ve anlamlılık eşiği p < 0.05 olarak belirlendi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Kronik orta dereceli RI ve AF hayvan modeli
Deneysel tasarım ve zaman çizelgesinin şematik bir özeti Şekil 1'de sunulmaktadır. Şekil 2A,B'de gösterilen transkateter embolizasyonundan önce ve sonra sol böbrek arter anjiyografisinin temsilci görüntüleri, transkateter embolizasyonundan sonra küçük böbrek dallarının başarıyla tıkandığını ve tekrarlayan anjiyografide dista...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Mevcut çalışma, orta dereceli RI ile AF kombinasyonu olan in vivo hayvan modeli oluşturmuş ve bu patolojik koşullar altında sol atriyal endotel disfonksiyonunun patogenezini incelemiştir. Bu çalışmanın ana bulguları şunlardır: öncelikle, beagle'larda sol ana böbrek arterinin 3 ay boyunca embolizasyonu başarıyla orta dereceli RI'yi indüklemiştir. İkinci olarak, beagle'larda bir AF modeli etkili bir şekilde kuruldu. Üçüncü olarak, hem RI hem de AF olan hayvanlarda sol atriyal endo...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar rekabet eden çıkarlar belirtmemektedir.
Bu çalışma, bulaşıcı olmayan Kronik Hastalıklar-Ulusal Bilim ve Teknoloji Ana Projesi (No. 2024ZD052500, No. 2024ZD0521504), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 81700293 ve No. 81970272) ve Pekin Anzhen Hastanesi Yüksek Düzey Araştırma Fonu (Funding Project No. 2025AZB5005) tarafından desteklendi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 6-0 Polipropilen sütür | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | Femoral arter onarımı için |
| 5F Çok amaçlı kateter | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | Renal arter kanülasyonu ve embolizasyonu için |
| 6F Kuadripolar elektrot kateteri | St. Jude Medical | 401443 | Sağ atriyal pasing için |
| 6F Vasküler tanıtıcı kınıf | Terumo | RS*A60K10SQ | Femoral arter erişimi için |
| ABI 7500 Gerçek Zamanlı PCR Sistemi | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | QRT-PCR termal döngü ve floresan algılama için |
| Emilibilir jelatin sünger granülleri (50 mg çap) | Jinling Pharmaceutical | — | Transkateter renal arter embolizasyonu için; kontrast madde ve salin (1:1) ile püre halinde hazırlanmış |
| ADMA ELISA Kiti (köpek) | Cusabio | CSB-E09297c | Plasma asimetrik dimetilarginin ölçümü için |
| Aldosteron ELISA Kiti (köpek) | Cusabio | CSB-E08014c | Plasma aldosteron ölçümü için |
| BCA Protein Assay Kiti | Thermo Fisher Scientific | 23225 | Protein konsantrasyon kantifikasyonu için |
| Beagles (erkek, 4–5 yaş, 10–12 kg) | Shanghai Jiao Tong University Agricultural Experimental Animal Farm Co., Ltd. | — | Sağlıklı erkek beagles; standart koşullar altında bireysel olarak konaklanmış |
| C-arm Floroskopi Sistemi | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | Kateterizasyon ve anjiyografi sırasında floroskopik rehberlik için |
| Kimilüminesans Görüntüleme Sistemi | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | Western blot band görselleştirme için |
| Kreatinin ELISA Kiti (köpek) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C011-2-1 | Plasma kreatinin ölçümü için |
| Küflü endotrakeal tüp (ID 7.0–8.0 mm) | Covidien (Medtronic) | 86449 | Endotrakeal entübasyon ve mekanik ventilasyon için |
| DF-5A Kardiyak Stimülatör | Suzhou Dongfang Electronic Technology Research Institute | DF-5A | Hızlı atriyal pasing için; ayarlar: BCL 60 ms, darbe genişliği 2 ms, voltaj 4× eşik |
| ECL Western Blotting Substratı | Thermo Fisher Scientific | 32106 | Blot görselleştirme için gelişmiş kimilüminesans kiti |
| EDTA Antikoagülan Tüpler | BD Vacutainer | 367835 | Kan alma (plazma ayırma) için |
| eNOS Primer Antikor (tavşan) | Cell Signaling Technology | 32027 | Western blotting için seyreltme 1:1000; (~130 kDa) |
| Eosin Y Çözeltisi (sulu) | Solarbio | G1100 | H&E karşı boyama için (2 dak) |
| Foley Üriner Kateter (8 Fr) | C.R. Bard | 0165SI08 | CCr tayini sırasında zamanlanmış idrar toplama için |
| GAPDH Primer Antikor (tavşan) | Cell Signaling Technology | 5174 | Western blotting için seyreltme 1:1000; iç kontrol (~36 kDa) |
| GraphPad Prism (versiyon 8.0) | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com; istatistiksel analiz için (tek yönlü ANOVA, Dunnett's testi) |
| Hematoksilin Çözeltisi (Harris) | Solarbio | G1140 | H&E nükleer boyama için (5 dk) |
| Heparin Sodyum Enjeksiyonu (fraksiyonelleştirilmemiş) | Changzhou Qianhong Biopharma | H32022088 | Kateterizasyon sırasında antikoagülasyon için 10 mL normal salin içinde seyreltilmiş 4000 IU |
| HRP-konjuge Keçi Anti-Mouse IgG İkincil Antikor | Cell Signaling Technology | 7076 | Western blotting için seyreltme 1:5000 |
| HRP-konjuge Keçi Anti-Tavşan IgG İkincil Antikor | Cell Signaling Technology | 7074 | Western blotting için seyreltme 1:5000 |
| hs-CRP ELISA Kiti (köpek) | Cusabio | CSB-E08557c | Plasma yüksek hassasiyetli C-reaktif protein ölçümü için |
| IL-6 ELISA Kiti (köpek) | R&D Systems | CA6000 | Plasma interlökin-6 ölçümü için |
| ImageJ Yazılımı (versiyon 1.53) | National Institutes of Health | — | https://imagej.nih.gov/ij/; Western blot densitometrik analiz için |
| iNOS Primer Antikor (tavşan) | Abcam | ab178945 | Western blotting için seyreltme 1:1000; (~130 kDa) |
| Lakte edilmiş Ringer'ın Çözeltisi | Baxter | 2B2324 | Prosedürler sırasında 5–10 mL/kg/h hızında infüze edilen intravenöz sıvı |
| Hafif Mikroskop | Olympus | BX53 | HE boyanmış böbrek kesitlerinin histolojik incelenmesi için |
| Mekanik Ventilatör (veteriner) | Midmark | Matrx Model 3000 | Tidal volüm 15 mL/kg; solunum hızı 12–15 nefes/dk |
| Mikroplate Okuyucu | BioTek | Synergy HTX | 450 nm'de ELISA absorbans ölçümü için |
| Nötr Tamponlu Paraformaldehit (%10) | Solarbio | P1110 | Böbrek dokusu fiksasyonu için (24 saat) |
| NO ELISA Kiti (köpek) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A012-1-2 | Plasma nitrik oksit ölçümü için |
| İyonize Olmayan Kontrast Madde (İoheksolü) | GE Healthcare | Omnipaque 350 | Renal arter anjiyografisi için enjeksiyon başına 3 mL/s hızında 3 mL/s için 5–8 mL |
| PAI-1 ELISA Kiti (köpek) | Cusabio | CSB-E13043c | Plazminojenik aktivatör inhibitör-1 ölç |