Yöntem makalesi

Nörogelişim üzerindeki prenatal iltihabı değerlendirmek için erken gebeliksel anne immün aktivasyon fare modelinin oluşturulması

DOI:

10.3791/70352

⸱

24 Mart 2026

 ,  ,  , 
1Department of Cell Biology, College of Medicine, University of Oklahoma, 2Graduate Program in Neuroscience, College of Medicine, University of Oklahoma

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Makale, erken gebeliksel iltihabın nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemek için kapsamlı bir protokol sunar; bu model, güvenilirlik ve tekrarlanabilirliği sağlamak için temel metrikleri içerir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nörogelişimsel bozukluklar (NDD), genetik ve çevresel risk faktörleri arasındaki karmaşık etkileşimlerden kaynaklanır; bunlar arasında prenatal bağışıklık aktivasyonu da bulunur. Farelerde anne bağışıklık aktivasyonu (MIA), NDD'lere çevresel katkıları incelemek için yaygın olarak kullanılan bir modeldir; deneysel sonuçlardaki değişkenlik tekrarlanabilirliği sınırlar. Burada, farelerde embriyonik gün 9.5'te erken gebelikte MIA indüksiyonu için standartlaştırılmış bir protokol sunuyoruz; bu protokol, bağışıklık yanıtını değerlendirmek ve gebelik sonuçlarını tahmin etmek için çoklu kalite kontrol metriklerini içeriyor. Poliinosinik:polisitidilik asit (poli(I:C)) uygulandıktan sonra, anne serum sitokinleri sağlam bağışıklık aktivasyonunu doğrulamak için nicelendirilir ve düşük yanıt verenler için dışlama metriği sağlanır. E0.5'ten E12.5'e kadar olan anne ağırlık yörüngeleri, yavru yaşama olasılığını öngörmektedir; yavru üreten damalar, yavru kaybeden damlardan farklı karakteristik kilo alım kalıpları sergiler. Ayrıca, hayvan satıcısının anne bağışıklık yanıtını ve yavru canlılığını önemli ölçüde etkilediğini, ancak poli(I:C) formülasyonunun anlamlı bir faktör olmadığını gözlemledik. Genel olarak, protokol erken gebeliksel MIA modelinin tekrarlanabilirliğini ve yavrunun yaşayabilirliğini artırmak için anne bağışıklık yanıtı ve kilo değişimlerini izleyerek hayvan satıcılarını kontrol ederek nihayetinde prenatal bağışıklık aktivasyonunun nörogelişim üzerindeki etkisini incelemek için stratejiler sunmaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mevcut genom çapında ilişki çalışmaları, nörogelişimsel bozukluk (NDD) hassasiyetine katkıda bulunan yüzlerce risk alleli, kromozom yeniden düzenlemesi ve kopya sayı varyantını tespit etmiştir (1,2,3,4,5). Ancak, genetik değişiklikler sadece az miktarda artan risk sağlar ve daha güçlü hastalık ilişkilerine sahip büyük sayıda varyantlar vakaların yalnızca küçük bir yüzdesinietkiler 6. Ayrıca, insan epidemiyolojik çalışmaları, doğum öncesi iltihap gibi erken yaşam stres faktörlerininNDD 7,8,9 ile teşhis riskini artırdığını ortaya koymaktadır. Bu nedenle, çevresel faktörlerin NDD'lerin etiyolojisinde genetik risk faktörleriyle uyumlu davrandığı iyi şekilde kabul edilmiştir ve fare modelleri, genetik ve çevresel risk faktörlerinin beyin gelişimi ve hastalık riskindeki katkılarını çözmek için önemli bir araçtır. NDD'ler için genetik risk faktörlerini değerlendiren hayvan modelleri, sağlam ve tekrarlanabilir sonuçları nedeniyle yaygın olarak kabul görse de, çevresel riskleri değerlendiren modeller, MIA yavrularındaki davranışsal veya nöroanatomik farklılıklar gibi fenotiplerde tutarlı standartlaşma ve değişkenlikle mücadeleeder 10,11,12,13,14,15,16,17. Örneğin, bağışıklık mücadelesinin gebelik zamanlaması, bağışıklık uyarıcısının tip ve doz değişkenliği, anne sitokin yanıtları ve dayanıklı ve hassas yavrular gibi yavru değişkenliği gibi temel deneysel parametreler deneysel sonuçları önemli ölçüde etkiler ancak metodolojik açıklamalarda her zaman ele alınmaz. Burada, farelerde erken gebeliksel anne bağışıklık aktivasyonu (MIA) üretmek için standartlaştırılmış bir protokol sunulmaktadır; erken yaşam bağışıklık stresinin nörogelişim ve sağlık sonuçlarını nasıl etkilediğini incelerken titizlik ve tekrarlanabilirlik sağlamak için çoklu kalite kontrol kontrollerini içerir.

Amaçlarımız, 1) MIA modelinin güvenilirliğini artırmak ve 2) deneysel heterojenliğe katkıda bulunabilecek değişkenleri karakterize etmek için bir protokol sunmaktır. Kemirgenlerde, MIA genellikle poliinosinik:polisitidilik asit (poli(I:C)) gibi bağışıklık uyarıcılarının sistematik olarak uygulanmasıyla indüklenir; örneğin viral bir mimetik olan poliinosinik:polisitidilik asit (poli(I:C)) veya bakteriyel bir mimetik olan lipopolisakkarit (LPS) gibi bağışıklık uyarıcıları, embriyonik gün 9.5 (E9.5), E12.5, E15.5, E17.5 ve daha fazlası gibi embriyonik gün 9.5 (E9.5), E12.5, E15.5, E17.5 ve daha fazlası gibi sistemsel olarak verilmelidir. Bu manipülasyonlar, fetal nörogelişimi değiştiren veNDD'ler 20,21,22,23'e özgü davranışsal ve moleküler fenotiplere yol açan güçlü bir anne sitokin yanıtı oluşturur. Ancak, birçok çalışma anne bağışıklık yanıtını rutin olarak değerlendirmez, bu da12,14,24 deneylerinde MIA indüksiyonunun gücünü veya tutarlılığını doğrulamayı zorlaştırır. Bunu ele almak için, çoklu kalite kontrol ölçümleri belirledik ve poli(I:C) immün uyarısı sonrası anne serumunda ölçülen sitokin seviyelerine dayanarak E9.5 MIA anne yanıtı için bir eşik belirledik. Yaklaşımımız, bağışıklık uyarıcının daha hassas dozlanmasına ve düşük veya tepki vermeyen kişilerin tespit edilip dışlanmasına olanak tanır; bu da nihayetinde modelin güvenilirliğini ve dayanıklılığını artırır. Sahada nadiren tartışılsa da, düşük kum canlılığı MIA modelinin bilinen bir sınırlamasıdır; özellikle E9.5 indüksiyonunda. Gebelik ortasında (E12.5) indüksiyon kum canlılığını artırabilirken, erken gebeliksel MIA indüksiyonu sırasında kum canlılığını tahmin etmeye yardımcı olabilecek ve ayrıca üreme başarısını artıran değişkenleri belirleyebilecek kontrol noktaları oluşturmayı hedefliyoruz.

MIA, hücreleri çevrelerinden izole eden in vitro modellerin aksine, yavruların nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemek için değerli bir model olduğundan, MIA evren ortamını kullanarak yavruların nörogelişimi üzerindeki etkilerini inceler. MIA genellikle NDD'leri modellemek için tek başına kullanılsa da, genetik modeller veya ek erken yaşam stres faktörleriyle de birleştirilebilir; genler ile çevre arasındaki karmaşık etkileşim veya tekrarlanan çevresel stresörler hakkında içgörü sunar. Çalışmalar, DISC1, CNTNAP2 ve SHANK3 gibi genetik NDD risk varyantlarına sahip kemirgenlerle MIA'yı birleştirerek çevre ile genetik arasındaki sinerjik etkileşimigöstermiştir 25,26,27,28,29. Ayrıca, çevresel stresin "iki vuruşlu" modeli, yok olmayı psikolojik stres veya ergen ilaç maruziyeti gibi ikinci bir erken yaşam stres faktörü ile birleştirerek doğum sonrası fenotipler 30,31,32'nin başlamasına veya kötüleşmesine yol açtı. Bu yaklaşımlar birlikte, MIA modelinin çok yönlülüğünü vurgular; bu modelin tek başına veya diğer çevresel veya genetik risk faktörleriyle birlikte kullanılabileceğini ortaya koyuyor.

Bu makale, farelerde MIA indüksiyonu için adım adım yöntemler sunarak prenatal iltihabın nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemektedir. Tekrarlanabilirliği artırmak için kontrol noktalarını ve MIA verimliliğini etkileyen çeşitli faktörlere dair içgörülü içerir (Şekil 1).

figure-introduction-1
Şekil 1: Kayıp Oluşun Zaman Çizelgesi. Zamanlanmış hamile doğum siktirlerine E9.5 seviyesinde poli(I:C) veya tuzlu su uygulanır, ardından 3 saat sonra kan alınır. Anne ağırlıkları E0.5, E9.5, E10.5, E11.5 ve E12.5 seviyelerinde toplanarak enjeksiyon sonrası gebelik ilerlemesini izlemektedir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri, Oklahoma Üniversitesi'nde etik yönergelere uygun olarak yapıldı ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı. Hayvanlar, 1/8 inçlik selüloz yatak üzerinde bireysel olarak havalandırılan kafeslerde, yiyecek ve suya imkansız erişimle ve yuva ile kulübe dahil kafes zenginleştirmeleri sağlanıyordu. Hayvan yetiştirme tesisi, Jackson Laboratuvarı'na uygun olarak, fare üreme sezonunun en yoğun olduğu geç ilkbaharın fotoperiyodunu yansıtmak için 14 saatlik açık ve 10 saatlik açık ışık döngüsünde işletilmektedir.

Protokol boyunca toplanacak belirli veri alanları için Tablo 1'e bakınız. Detaylı istatistiksel analizler için ek istatistikler tablosuna (Ek Tablo 1) ve GitHub'a (https://hayes-lab.github.io/2026_Camfield_JoVE/) bakınız.

Tablo 1: Örnek veri toplama sayfası. MIA modeli oluşturulurken toplanacak önemli verilerin şablonu. Bu tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.

1. Zamanlı gebeliklerin nesli

  1. Öğleden sonra veya akşam geç saatlerde iki 8-10 haftalık C57BL/6 dişi fareyi C57BL/6 yetiştirici erkeklerle birlikte yerleştirin. Üreme öncesi izole edilen 2-10 aylık deneyimli erkeklerin kullanılması, daha hızlı ve güvenilir gebelikler sağlar.
  2. Ertesi sabah kadınlarda vajinal tıkamayı değerlendirin ve tıkama gerçekleşene kadar günde bir kez kontrol etmeye devam edin. Önemli olarak, tıplar geçici ve sabah kontrol edilmezse öğleden sonra düşebilir.
    NOT: Plug kontrolü için ayrıntılı bir protokol için Behringer ve diğerlerine bakınız. (2016)33.
  3. Vajinal tıkaç doğrulandıktan sonra, dişinin tartılması ve hamilelik durumunu gebelik boyunca kilo artışıyla izlemek için kilo kaydedeceğiniz bir miktar kaydedilir.
  4. Takılı dişileri bireysel kafeslere ayırın ve standart barınma koşulları altında yiyecek ve suya imkansız erişimle korunun. Tıkanmış dişileri embriyonik gün 0.5 (E0.5) olarak belirtin. Gebelik yaşının doğru takibi için fiş tarihini kaydedin.

2. Poliinosinik:polisitidilik asit (poli(I:C)) hazırlanması

  1. Liyofilize poli(I:C) yüksek konsantrasyonlu bir stok çözeltiye (10-20 mg/mL) dönüştürülür; üreticinin talimatlarına göre steril tuzlu veya steril suda çözünür, böylece berrak bir çözelti elde edilir. Plak satıcısı, katalog numarası ve poli (I:C) parti numarası.
    NOT: Poli(I:C) kimyasal bir tehlikedir; Kurumsal biyogüvenlik yönergelerine uygun şekilde işlemeyi ve maruziyeti en aza indirmek için uygun biyolojik tehlike atık kaplarına uygun PPE ile bertaraf etmelidir.
  2. Vortex ve daha sonra salunda düşük konsantrasyonlu bir stok çözeltisi (4 mg/mL) olarak seyreltir. Tekrarlanan donma-erime döngülerini önlemek için, düşük konsantrasyonlu (~125 μL) tek kullanımlık hacimleri 1,5 mL tüplere alikot yapın ve -20 °C veya -80 °C'de saklanın. Yeniden oluşturulmuş poli(I:C)'yi hazırlık ve işlem sırasında buz üzerinde tutarak bozulmayı en aza indirin.
    NOT: Poli(I:C) değişkenliği üzerine kapsamlı bir inceleme için Mueller ve ark. (2019)14'e bakınız.
  3. E9.5 enjeksiyonundan hemen önce, düşük konsantrasyonlu poli(I:C) stokunu (4 mg/mL) istenen çalışma konsantrasyonuna (2 mg/mL) steril salunda seyreltin.
    NOT: Fareler için tipik poli(I:C) enjeksiyon dozları ~5-20 mg/kg arasında değişir, ancak optimal doz her araştırmacı tarafından ampirik olarak belirlenmelidir.
  4. Çift zincirli RNA yapısının doğru şekilde yeniden tavlanmasını sağlamak için 65 °C'de 10 dakika boyunca ısılı çalışma stoku (2 mg/mL) ile yapıldı.
  5. Enjeksiyondan önce çözeltinin homojen olduğundan emin olmak için vortexleme veya pipetleme ile karıştırın.

3. Poli (I:C) enjekte edilmesi

  1. E9.5 sabahı, hamileliği doğrulamak için damı tartın ve MIA için poli(I:C) enjeksiyon hacmini ve kontrol (CON) için %0,9 salin enjeksiyon hacmini hesaplamak için bu ağırlığı kullanın. Açıklanan sonuçlarda, hayvanın vücut ağırlığının %5× kadar enjeksiyon hacmi kullanılarak 10 mg/kg doz elde edilmiştir. Hayvanın ağırlığının 10 katından fazla enjeksiyonlardan kaçınılmalıdır.
    E9.5 vücut ağırlığı * 5 = μL poli(I:C) (2 mg/mL) veya %0.9 salin
    NOT: E0.5 ile E9.5 arasında tipik olarak 2-3 gram kilo alımı bekleniyor ve bu da geçerli bir gebelik olduğunu gösteriyor.
  2. Uygun miktarda hazırlanmış poli(I:C) çalışma çözeltisi (2 mg/mL) veya salin hacmini steril, 27 veya daha küçük bir şırıngaya çekin.
  3. Barajı en az ağrı ve sıkıntı sağlamak için doğru şekilde sabitleyin. Poli(I:C) veya tuzlu sonu kalça seviyesinin hemen üstünde sol veya sağ alt kuyruğuna veya ikinci meme setine intraperitoneal (IP) enjekte edin. Şırıngaları belirlenmiş bir biyogüvenlik keskin kapta doğru şekilde at. Grup genelinde tutarlılığı korumak için enjeksiyon tarafını kaydedin.
  4. Barajı hemen kendi kafesine geri götürün ve sıkıntı belirtileri için izleyin. Enjeksiyondan sonra en az 24 saat boyunca hidrojel takviyesi yapın, hastalık davranışlarından kaynaklanan susuzluğu önlemek için.
  5. Kapsamlı dokümantasyon sağlamak için, poli(I:C) dozunu, enjekte edilen poli(I:C) μL'sini, enjeksiyon tarihi/saatini, gebelik yaşını ve kullanılan poli(I:C) parti sayısını kaydedin (Tablo 1).

4. Kan alımı

  1. Enjeksiyondan üç saat sonra, fareler 1 dakika boyunca tek tek gözlemlendi. Aşağıdaki davranışların herhangi birinin varlığı, örneğin azalan aktivite, kambur duruş, yüz yüzünün yüzünü buruşturma veya sulu dışkı gibi, üç noktalı bir ölçekte kaydedildi (fenotip yok, hafif, belirgin) ve bir veya daha fazla davranış gösteren fareler akut hastalık davranışları olarak sınıflandırıldı.
    NOT: CON damlarında hastalık davranışları gözlemlenmemelidir.
  2. Ayrıca, kuyruk kanası gibi minimal invaziv bir yöntemle enjekte edilen damjalardan dikkatlice anne kanı toplayın ve ev kafesine geri gönderin. İltihap sitokinlerin nicelenmesi için yaklaşık 50 μL kan toplamayı hedeflemek.
    NOT: Kanla temas eden tüm materyaller biyolojik zararlı olarak değerlendirilmeli ve uygun PPE kullanılarak ve kurumsal biyogüvenlik yönergelerine uygun olarak bertaraf edilmelidir.
  3. Kanın oda sıcaklığında (20-25 °C) 30 dakika boyunca pıhtılaşmasına izin verin. Serumu pıhtı ile ayırmak için oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 2.000 x g santrifüj yapın. Üstteki şeffaf tabaka serumu temsil ederken, alttaki koyu tabaka pıhtı içerir. Serumu dikkatlice toplayın, pıhtının hiçbir kısmını rahatsız etmeden veya aspire etmeden. Serum, aşağı akış sitokin analizine hazır olana kadar -20 °C'de saklanabilir.

5. Enjeksiyonlu barajların izlenmesi

  1. Enjeksiyondan sonraki üç gün boyunca (E10.5, E11.5 ve E12.5) damjaları günlük tartarak poli(I:C)'ye yanıtlarını izleyin. Poli(I:C) enjeksiyonundan sonraki gün (E10.5) 1 g'a kadar kilo kaybı gözlemlenmek ve ardından kademeli bir iyileşme yaşanır; ağırlık genellikle E9.5 tabanını E12.5 ile aşmaktadır.
    NOT: 1 gramı aşan kilo kaybı veya E12.5'e kadar kilo kazanamamak genellikle kaybedilmiş bir kum kaybının işaretidir.
  2. Gebelik döneminin geri kalanında barajların sürekli yiyecek, su ve yuva malzemelerine erişimi olmasını sağlayın. Ayrıca, hayvanların taşınmasını veya kafeslerin taşınmasını sınırlamak gerekir; bu ek strese yol açabilir ve kum yavrularının yaşama kapasitesinin azalmasına katkıda bulunabilir.
  3. Beklenen doğum günü (E19.5), yavru büyüklüğü, yavru canlılığı veya yavru olmaması gibi kayıt yavruları sonuçları başarısız gebelik göstermektedir. Ölen yavruları derhal çıkarın ve kurumsal biyogüvenlik ile IACUC onaylı hayvan karkası imha yönergelerine uygun olarak bertaraf edin.
    NOT: MIA daha küçük yavru büyüklüklerine sahip olabilir ve teslimat komplikasyonları yaşayabilir, bu da E20.5'te geç doğuma yol açabilir.

6. Bağışıklık yanıtının doğrulanması

  1. MIA ve CON enjeksiyonlarından sonra toplanan anne serumu kullanılarak, üreticinin talimatlarına göre enzimle bağlantılı immünosorbent testler (ELISA) veya multipleks testlerle IL-6 veya TNF-α gibi inflamatuar sitokinleri niceliklerini ölçebilirsiniz. Tipik serum seyreltmeleri MIA serumu için 1:100, CON serumu için ise 1:25'tir.
  2. Nicel hesaplamadan sonra, sonuçları kullanarak MIA yanıtı için temsil edici bir eşik belirler. MIA eşiği, 1.000 pg/mL'den yüksek olan bir anne serumu IL-6 yanıtı olarak tanımlanır (MIA grubunun ortalama yanıtından yaklaşık %25 daha düşük) ve bu eşik altında yanıtı olan MIA damları veri setinden düşük veya yanıt vermeyen olarak hariç tutulur.
    NOT: CON damlarının çok düşük veya tespit edilemez sitokin seviyeleri olmalıdır; sitokin seviyesi CON grubu ortalamasının %25'inin üzerinde olan (yani 250 pg/mL eşiği) herhangi bir CON damı hariç tutulmalıdır.

7. İstatistiksel analiz

  1. Tüm istatistiksel analizleri R istatistiksel yazılımı kullanarak gerçekleştirin. Tüm analizlerde barajı biyolojik birim olarak düşünün. İstatistiksel anlamlılığı p < 0.05 olarak tanımlayın. Veriler, medyan ve çeyreklerarası aralığı (IQR; 25.-75. pertuallar) temsil eden kutu grafikleri olarak sunuluyor, bıyıklar 1,5 × IQR'ye kadar uzanıyor ve noktalar bireysel dam noktalarını temsil ediyor.
  2. Parametrik veya parametrik olmayan analizlerin seçimini yönlendirmek için Shapiro-Wilk testini kullanarak normalliği değerlendirin. Uygun olduğunda eşleşmemiş, iki taraflı t-testleri (normal) veya Wilcoxon sıralama toplamı testleri (normal olmayan) kullanarak iki bağımsız grup arasında karşılaştırmalar yapın. Aynı hayvanlar içindeki eşleştirilmiş ölçümleri (yani ağırlıkları) eşleştirilmiş t-testleri (normal) veya Wilcoxon imzalı sıralama testleri (normal olmayan) kullanarak analiz edin. Embriyonik günler arasında göreceli kilo artışını değerlendirirken sıfır ortalamaya karşı tek örneklem testleri yapın.
  3. Anne serumu IL-6 ile TNF-α seviyeleri arasındaki ilişkiyi Spearman'ın sıralama korelasyonunu kullanarak değerlendirin. Fisher'ın tam testini kullanarak başarılı yavruların tedarikçiler ve poli(I:C) formülasyonları arasındaki oranını karşılaştırın. GitHub (https://hayes-lab.github.io/2026_Camfield_JoVE/) üzerindeki Ek Tablo 1'de sunulan ayrıntılı istatistiksel özete ve analiz koduna bakabilirsiniz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

E9.5 seviyesinde poli(I:C) veya salin uygulandıktan sonra, anne serum sitokinleri MIA indüksiyonunun etkinliği ve dayanıklılığı değerlendirilerek değerlendirildi (Şekil 2). MIA barajları, CON barajlarına göre anlamlı şekilde artan interleukin-6 (IL-6) seviyeleri göstermiştir (Şekil 2A). Ayrıca, IL-6 seviyelerinin değerlendirilmesi, önceden belirlenmiş 1.000 pg/mL eşiğini karşılamayan MIA barajlarının hariç tutulmasına izin verdi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolde, erken gebeliksel anne bağışıklık aktivasyonu (MIA) modelinin verimliliğini, dayanıklılığını ve tekrarlanabilirliğini artırmak için kontrol noktaları oluşturduk; bu modelde anne sitokin yanıtları, kilo yörüngeleri ve gebelik sonuçlarını etkileyen deneysel değişkenler üzerinde yoğunlaştık. Sonuçlarımız MIA'nın değişken anne bağışıklık yanıtları tetiklediğini ve IL-6'nın optimal olmayan bağışıklık aktivasyonuna sahip damları tanımlamak için güvenilir bir biyobelirteç olarak h...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklamak zorunda kalacak bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırma, NIH'den (K01AG087810) K01, Burroughs Wellcome Fund Next Gen gebelik girişimi hibesi (1266845) ve COBRE pilot ödülü (P20GM134973) tarafından cömertçe finanse edildi. Şekil 1 BioRender.com ile oluşturulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Animal weighing scaleKent ScientificSCL-4000Farele ağırlığını tartmak için
BD Lo-Dose U-100 Insulin syringes - 28GFisher Scientific14-826-79PIC, intraperitoneal enjeksiyon için
C57BL/6J dişi farelerThe Jackson Laboratory00066410-12 haftalık, bakire dişiler
C57BL/6J erkek fareler The Jackson Laboratory000664Üreme erkekleri
C57BL/6NCrl dişi farelerCharles River Laboratories02710-12 haftalık, bakire dişiler
Santrifüj (24 yerli laboratuvar standardı)Eppendorf5425 RSerum toplamak için kanı döndür
Veri belgeleme platformu Airtable, Microsoft Excel, vb.Ağırlıklar, enjeksiyon zamanı gibi önemli verilerin kayıtlarını tutun, vb. (Tablo 1)
Dijital kuru banyo - Tek blokMedicus Health5277M1Enjeksiyondan önce PIC'yi ısıtmak için kullanın
Eppendorf tüpleri - 1.5 mLEppendorf30123611PIC'yi stok ve çalışma konsantrasyonlarına seyreltirken kullanın
Fisherbrand gazlı süngerFisher ScientificMSD-1400250Kan alma sonrası kuyruk kanamasını durdurmak için kullanın
Fisherbrand küçük sonda 6 inç.Fisher Scientific13-820-026Kontrol etmek için kullanan
HydroGelClear H2070-01-5022Enjeksiyonlardan sonra takviye
Mouse IL-6 uncoated ELISA kitThermo Fisher Scientific88-7064-88Maternal serumdaki IL-6 seviyelerini nicelleştirin
Nalgene polipropilen Griffin düşük formlu plastik bardaklarThermo Fisher Scientific1201-1000PKFarelerin tartım sırasında bardağa konulması
Poly(I:C) (LMW)Invivogentlrl-picwMIA enjeksiyonu için PIC (LMW)
Poliinozinik–polisitilidilik asit sodyum tuzuSigmaP9582MIA enjeksiyonu için PIC (Sigma)
Scalpel bıçakları, #22, 10'lu paketHome Science ToolsDE-SC22BLDKan alma için kuyruğun ucunun kesilmesi için kullanın
Sodyum klorür %0,9 (Normal salin), USP, Steril sınıf, Cytiva HycloneCytivaZ1376Kontrol farelerinin üretimi için enjekte edin
Kuyruk kırpma platformuBraintree Scientific, Inc.IL-200Kuyruk kanaması sırasında fareleri uygun şekilde sabitler
Vortex-Genie 2Scientific Industries, Inc.SI-0236PIC'yi seyrelttikten sonra Vortex yapın

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Taylor, M. J., et al. Association of Genetic Risk Factors for Psychiatric Disorders and Traits of These Disorders in a Swedish Population Twin Sample. JAMA Psychiatry. 76, 280-289 (2019).
  2. Azidane, S., et al. Identification of novel driver risk genes in CNV loci associated with neurodevelopmental disorders. Hum. Genet. Genomics Adv. 5, (2024).
  3. Price, K. M., et al. Hypothesis-driven genome-wide association studies provide novel insights into genetics of reading disabilities. Transl. Psychiatry. 12, 495(2022).
  4. Ripke, S., et al. Genome-wide association analysis identifies 13 new risk loci for schizophrenia. Nat. Genet. 45, 1150-1159 (2013).
  5. Talkowski, M. E., et al. Sequencing chromosomal abnormalities reveals neurodevelopmental loci that confer risk across diagnostic boundaries. Cell. 149, 525-537 (2012).
  6. Sanders, S. J., et al. Insights into Autism Spectrum Disorder Genomic Architecture and Biology from 71 Risk Loci. Neuron. 87, 1215-1233 (2015).
  7. Han, V. X., et al. Maternal acute and chronic inflammation in pregnancy is associated with common neurodevelopmental disorders: a systematic review. Transl. Psychiatry. 11, 71(2021).
  8. Barr, C. E., Mednick, S. A., Munk-Jorgensen, P. Exposure to influenza epidemics during gestation and adult schizophrenia. A 40-year study. Arch. Gen. Psychiatry. 47, 869-874 (1990).
  9. Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev. Neurobiol. 72, 1272-1276 (2012).
  10. Meyer, U. Sources and Translational Relevance of Heterogeneity in Maternal Immune Activation Models. Curr. Top. Behav. Neurosci. 61, 71-91 (2023).
  11. Mueller, F. S., Polesel, M., Richetto, J., Meyer, U., Weber-Stadlbauer, U. Mouse models of maternal immune activation: Mind your caging system. Brain. Behav. Immun. 73, 643-660 (2018).
  12. Kentner, A. C., et al. Maternal immune activation: reporting guidelines to improve the rigor, reproducibility, and transparency of the model. Neuropsychopharmacology. 44, 245-258 (2019).
  13. Schaer, R., Mueller, F. S., Notter, T., Weber-Stadlbauer, U., Meyer, U. Intrauterine position effects in a mouse model of maternal immune activation. Brain. Behav. Immun. 120, 391-402 (2024).
  14. Mueller, F. S., et al. Influence of poly(I:C) variability on thermoregulation, immune responses and pregnancy outcomes in mouse models of maternal immune activation. Brain. Behav. Immun. 80, 406-418 (2019).
  15. Carloni, E., Ramos, A., Hayes, L. N. Developmental Stressors Induce Innate Immune Memory in Microglia and Contribute to Disease Risk. Int. J. Mol. Sci. 22, 13035(2021).
  16. Smolders, S., Notter, T., Smolders, S. M. T., Rigo, J. -M., Brône, B. Controversies and prospects about microglia in maternal immune activation models for neurodevelopmental disorders. Brain. Behav. Immun. 73, 51-65 (2018).
  17. Mueller, F. S., et al. neuroanatomical, and molecular correlates of resilience and susceptibility to maternal immune activation. Mol. Psychiatry. 26, 396-410 (2021).
  18. Meyer, U. Prenatal poly(i:C) exposure and other developmental immune activation models in rodent systems. Biol. Psychiatry. 75, 307-315 (2014).
  19. Guma, E., et al. Differential effects of early or late exposure to prenatal maternal immune activation on mouse embryonic neurodevelopment. Proc. Natl. Acad. Sci. 119, e2114545119(2022).
  20. Guma, E., et al. Early or Late Gestational Exposure to Maternal Immune Activation Alters Neurodevelopmental Trajectories in Mice: An Integrated Neuroimaging, Behavioral, and Transcriptional Study. Biol. Psychiatry. 90, 328-341 (2021).
  21. Smith, S. E. P., Li, J., Garbett, K., Mirnics, K., Patterson, P. H. Maternal Immune Activation Alters Fetal Brain Development through Interleukin-6. J. Neurosci. 27, 10695-10702 (2007).
  22. Haddad, F. L., Patel, S. V., Schmid, S. Maternal Immune Activation by Poly I:C as a preclinical Model for Neurodevelopmental Disorders: A focus on Autism and Schizophrenia. Neurosci. Biobehav. Rev. 113, 546-567 (2020).
  23. Gzielo, K., et al. The Effect of Maternal Immune Activation on Social Play-Induced Ultrasonic Vocalization in Rats. Brain Sci. 11, 344(2021).
  24. Tillmann, K. E., et al. Differential effects of purified low molecular weight Poly(I:C) in the maternal immune activation model depend on the laboratory environment. Transl. Psychiatry. 14, 300(2024).
  25. Lipina, T. V., Zai, C., Hlousek, D., Roder, J. C., Wong, A. H. C. Maternal immune activation during gestation interacts with Disc1 point mutation to exacerbate schizophrenia-related behaviors in mice. J. Neurosci. Off. J. Soc. Neurosci. 33, 7654-7666 (2013).
  26. Haddad, F. L., De Oliveira, C., Schmid, S. Investigating behavioral phenotypes related to autism spectrum disorder in a gene-environment interaction model of Cntnap2 deficiency and Poly I:C maternal immune activation. Front. Neurosci. 17, 1160243(2023).
  27. Möhrle, D., et al. Characterizing maternal isolation-induced ultrasonic vocalizations in a gene-environment interaction rat model for autism. Genes Brain Behav. 22, e12841(2023).
  28. Atanasova, E., et al. Immune activation during pregnancy exacerbates ASD-related alterations in Shank3-deficient mice. Mol. Autism. 14, 1(2023).
  29. Abazyan, B., et al. Prenatal Interaction of Mutant DISC1 and Immune Activation Produces Adult Psychopathology. Biol. Psychiatry. 68, 1172-1181 (2010).
  30. Capellán, R., et al. Interaction between maternal immune activation and peripubertal stress in rats: impact on cocaine addiction-like behaviour, morphofunctional brain parameters and striatal transcriptome. Transl. Psychiatry. 13, 84(2023).
  31. Zhao, Q., et al. Microglia-mediated neurogenesis is linked to cognitive deficits in a two-hit model of maternal immune activation and juvenile stress. Brain. Behav. Immun. 129, 649-661 (2025).
  32. Guma, E., et al. Investigating the "two-hit hypothesis": Effects of prenatal maternal immune activation and adolescent cannabis use on neurodevelopment in mice. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 120, 110642(2023).
  33. Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. Selecting Female Mice in Estrus and Checking Plugs. 2016, Cold Spring Harb. Protoc. (2016).
  34. Urakubo, A., Jarskog, L. F., Lieberman, J. A., Gilmore, J. H. Prenatal exposure to maternal infection alters cytokine expression in the placenta, amniotic fluid, and fetal brain. Schizophr. Res. 47, 27-36 (2001).
  35. Solek, C. M., Farooqi, N., Verly, M., Lim, T. K., Ruthazer, E. S. Maternal immune activation in neurodevelopmental disorders. Dev. Dyn. Off. Publ. Am. Assoc. Anat. 247, 588-619 (2018).
  36. Ozaki, K., et al. Maternal immune activation induces sustained changes in fetal microglia motility. Sci. Rep. 10, 21378(2020).
  37. Kim, S., et al. Maternal gut bacteria promote neurodevelopmental abnormalities in mouse offspring. Nature. 549, 528-532 (2017).
  38. Sal-Sarria, S., Conejo, N. M., González-Pardo, H. Maternal immune activation and its multifaceted effects on learning and memory in rodent offspring: A systematic review. Neurosci. Biobehav. Rev. 164, 105844(2024).
  39. Martín-Guerrero, S. M., et al. Maternal immune activation imprints translational dysregulation and differential MAP2 phosphorylation in descendant neural stem cells. Mol. Psychiatry. 30, 2994-3007 (2025).
  40. Yu, D., et al. Microglial GPR56 is the molecular target of maternal immune activation-induced parvalbumin-positive interneuron deficits. Sci. Adv. 8, eabm2545(2022).
  41. Hayes, L. N., et al. Prenatal immune stress blunts microglia reactivity, impairing neurocircuitry. Nature. 610, 327-334 (2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

N rogeli imsel BozukluklarErken GebelikPoly I CSerum SitokinleriYavru Ya ayabilirli imm n Yan tA rl k Trajektoryalar

İlgili makaleler