Method Article

Akış Sitometrisinde Farklı Kapı Stratejileri Kullanılarak Sperm DNA Analizi Sonuçlarının Karşılaştırılması

DOI:

10.3791/70417

⸱

July 10th, 2026

 ,  ,  , 
1Department of Reproductive Center, The Affiliated Huai'an No. 1 People's Hospital of Nanjing Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Poligonal geçiş (PGG) ve çarmıh şeklinde geçiş (CFG), sperm DNA bütünlüğünü tespit etmek için akış sitometri yöntemleridir. PGG, DNA parçalanma indeksini (DFI) ve yüksek DNA boyama indeksini (HDS) ölçer. CFG, şiddetli DFI, hafif DFI ve genel DFI'yı rapor eder. Bu çalışma, bu yöntemler arasındaki sonuçları ve korelasyonları karşılaştırmayı amaçlamaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sperm DNA bütünlüğü, başarılı döllenmeyi, embriyo gelişimini ve süregiden gebeliği sağlamada önemli bir faktördür. DNA denatürasyonu ve akridin turuncusu boyama ardından akış sitometrisi kullanılarak yapılan sperm kromatin yapısı değerlendirmesi (SCSA), sperm DNA'yı değerlendirmek için altın standart yöntem olarak kabul edilir. Literatürde sperm DNA fragmantasyon indeksi (DFI) için akış sitometrisi–tabanlı değerlendirme için iki ağ geçidi stratejisi bildirilmiştir: çokgen ağ geçidi (PGG) ve haç şeklinde ağ geçidi (CFG). Bu çalışmanın amacı, PGG ve CFG arasındaki test sonuçlarının ilişkilerini karşılaştırmak ve temel semen analizi parametreleri ile korelasyonlarını analiz etmekti. İki yöntemle bağımsız olarak elde edilen veriler istatistiksel analiz kullanılarak karşılaştırıldı, buna Bland-Altman çizimleri ve regresyon analizi de dahildir. Hastanemiz üreme merkezinde doğurganlık değerlendirmesi için muayene olan toplam 121 erkek hasta, tamamen rastgele bir örnekleme yöntemiyle seçildi. Sperm DFI ve ilgili göstergeler, sırasıyla PGG ve CFG kullanarak akış sitometrisi ile tespit edildi. Sonuçlar, iki yöntemle elde edilen DFI değerlerinin iyi bir uyum gösterdiğini ortaya koydu. PGG yöntemiyle DFIp ile CFG yöntemiyle DFIm, DFIs ve DFIc arasındaki korelasyon katsayıları sırasıyla 0.6497, 0.9404 ve 0.9667'dir (Tüm p < 0.01). Yüksek DNA boyama indeksi (HDS), DFIs ile hafif bir negatif korelasyon gösterdi (r = -0.3042, p < 0.05). İlerleyici hareketli sperm yüzdesi, DFIp, DFIs ve DFIc ile negatif korelasyon gösterdi (r = -0.3824, -0.3794, -0.3574, tümü p < 0.05). HDS ile semen hacmi, sperm konsantrasyonu, toplam sperm sayımı veya PR (%) arasında önemli bir korelasyon gözlenmedi. Bu bulgular, DFIs'in erkek doğurganlığı ile daha yakından ilişkili olduğunu gösterir ve bu parametreyi sağlayan CFG yönteminin, sperm DNA hasarının klinik değerlendirmesi için daha uygun olabileceğini düşündürür.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sperm DNA bütünlüğü, sperm çekirdeğindeki DNA moleküler yapının bütünlüğünü ve fonksiyonel stabilitesini ifade eder. Spesifik olarak, normal kromatin konformasyonu, kırılma veya oksidatif hasar olmaksızın bütün baz dizileri ve genetik bilgiyi yavrularına doğru bir şekilde iletme kapasitesi ile karakterize edilir. Spermatojenez sırasında, oksidatif stres arttığında1, kromatin yeniden modellenmesi anormal2 olduğunda veya sperm çevresel toksinlerden etkilendiğinde3, sperm DNA'sının bütünlüğü hasar görebilir ve bunun sonucunda baz eşleşmesi, kaybı, modifikasyonu, DNA ilavesi ve çapraz bağlanması, tek zincirli ve çift zincirli kırılmalar vb. meydana gelir. Ayrıca, hasar görmüş sperm DNA'sı erkek doğurganlığına zarar verebilir ve yardımcı üreme teknolojisi (ART)4'deki gebelik sonuçlarını olumsuz yönde etkileyebilir, ayrıca tekrarlayan gebelik kaybı riskini de artırabilir5. 2021 yılında, Avrupa Üroloji Derneği (EAU), erkek doğurganlık değerlendirme sistemine DFI testini dahil etmenin önerildiğini belirtmiştir6.

Şu anda, sperm DNA'sının bütünlüğü esas olarak sperm DNA fragmantasyon indeksi (DFI) tespit edilerek değerlendirilmektedir. Akış sitometrisi ile sperm kromatin yapı analizi (SCSA), DFI'yi değerlendirmek için temel yöntemdir7. Literatürde sperm DFI tespiti için iki akış sitometrisi sınırlandırma yöntemi rapor edilmiştir. Birincisi, eşzamanlı olarak sperm DFI ve HDS8 gibi iki anahtar göstergeyi raporlayabilen çokgen sınırlandırma yöntemi (PGG)'dir. PGG, daha küçük bir tespit değişkenliği katsayısı ve üstün tekrarlanabilirlik ile karakterize edilen klasik bir SCSA yaklaşımıdır9. Ancak, DNA hasarının ciddiyetini ayırt edemez. Diğer tip ise haç biçimli sınırlandırma yöntemi (CFG) olup, sperm DNA'sının şiddetli hasar belirteci (DFIs), hafif hasar belirteci (DFIm) ve haç biçimli sınırlandırma yönteminin toplam DFI'sini (DFIc) raporlayabilir. DFIc, DFIs ve DFIm'in toplamına eşittir. Mevcut sperm DNA bütünlüğünü değerlendirme teknolojilerine kıyasla, CFG yöntemi sperm DNA hasarının ciddiyetini yansıtabilir10.

Sperm kalitesini değerlendirmek için hangi yöntemin daha uygun olduğunu belirlemek amacıyla, bu çalışmada hem PGG yöntemi hem de CFG yöntemi kullanılarak spermde DFI ve ilgili parametreler ölçülmüştür. Bu iki yöntemin sonuçları ile geleneksel semen analizi parametreleri arasındaki korelasyon karşılaştırılmıştır. Elimizdeki en iyi bilgilere göre, bu çalışma PGG ve CFG yöntemleri arasındaki tespit sonuçlarının korelasyonunu analiz eden ilk çalışmadır.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Nanjing Tıp Üniversitesi'ne Bağlı Huai'an İlk Halk Hastanesi Tıp Etiği Komitesi tarafından onaylanmıştır (Onay numarası: KY-2024-181-01). Bu çalışmada kullanılan örneklerin alındığı hastalardan bilgilendirilmiş onay alınmıştır. Sunulan iş akışının genel şematik diyagramı Şekil 1'dedir. Kullanılan reaktifler ve ekipmanın ayrıntıları Malzemeler Tablosunda belirtilmiştir.

Akış sitometrisi için CFG ayarları
Asite maruz kaldıktan sonra, hasar görmüş DNA'ya sahip spermlerin nükleer kromatini tek çizili DNA gösterirken, hasar görmemiş DNA'ya sahip spermlerin nükleer kromatini bütün çift çizili yapısını korur. Floresan boya akridiin turuncu (AO), tek çizili DNA'ya bağlanır ve 488 nm lazer ile uyarıldığnda kırmızı floresan ışık yayar. Çift çizili DNA'ya bağlandığında, 488 nm lazer ile uyarıldığnda yeşil floresan ışık yayar. Akış sitometrisi tarafından yakalanan kırmızı ve yeşil floresan sinyallerinin sayısına dayanarak, kırmızı floresansın toplam kırmızı ve yeşil floresansa oranı hesaplanır ve bu sperm DFI'sini temsil eder.

CFG ayarları, Yang ve ark. tarafından sağlanan genel bakışa göre uygulanmıştır.10 Akış sitometrisi, AO boyası ile boyanmış normal spermde ölçülen en düşük yeşil floresans ve en yüksek kırmızı floresansı sınır referansları olarak kullanarak yapılandırılmalıdır (Şekil 2). Aşağıda, CFG'deki her bir kadranın hücresel özelliklerinin bir listesi bulunmaktadır:
Q1 kadranı normal spermi göstermektedir. Sperm DNA'sının bütün olduğu ve AO'nun bağlanma miktarının minimum olduğu ve bu nedenle yeşil floresan ışık verdiğini gözlemledik.
Q2 kadranındaki spermler kısmen parçalanmış DNA'ya sahiptir ve floresan mikroskobunda turuncu görünür. Bu tür DNA tamir edilebilir olabilir, bu spermler hafif DNA parçalanması (DFIm)10 olanlar olarak sınıflandırılır.
Q3 kadranı, çıkarılan özel olmayan floresansı temsil eder.
Q4 kadranındaki spermler parçalanmış DNA'ya sahiptir ve floresan mikroskobunda kırmızı görünür, bu ciddi DNA parçalanmasını (DFIs) gösterir.

Q2 ve Q4 kadranlarındaki spermlerin her ikisinin de parçalanmış DNA içerdiği ve toplamlarının DFIc olarak tanımlandığı önerilmektedir.

Akış sitometrisi için PGG ayarları
Akış sitometrik analiz için poligonel geçit, Evenson ve ark. tarafından tanımlanan yöntemi izleyerek kurulmuştur.8 Şekil 3'te gösterildiği gibi, her geçişle ilişkili hücresel özellikler aşağıdaki gibidir:
P3, denature DNA içeren hücrelerin yüzdesini göstermektedir.
P4, yüksek DNA boyanabilirliğine (HDS) sahip spermleri temsil eder. Bu sperm grubu normal histon-protamin değişimini göstermektedir.
P3 ve P4 geçitlerinin dışında bulunan baskın hücre popülasyonları normal spermatozoaları içerir, kırmızı floresansı azalmış ve çoğunlukla yeşil floresans ışığı yayar.

Meni örnek toplama ve analizi
Tüm 121 meni örneği, Nanjing Tıp Üniversitesi'ne Bağlı Huai'an İlk Hastanesi Üreme Merkezi'ni ziyaret eden erkeklerden alınmıştır. Meni örnekleri, 2-7 günlik bir uzaklık süresinden sonra mastürbasyon yoluyla toplanmıştır. Rutin meni analizi, WHO İnsan Meni Muayene ve İşleme Laboratuvarı El Kitabı'nın11,12 gerekliliklerine sıkı sıkıya uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Sperm konsantrasyonu ve hareketliliği analizleri, bilgisayar destekli bir sperm analiz sistemi (CASA) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Her örnek iki kez analiz edilmiştir. Sonuçlar, iki sonuç arasındaki fark 95% güven aralığında olduğunda yalnızca ortalamadan rapor edilmiştir; aksi takdirde yeniden örnekleme ve analiz yapılmıştır.

DFI analizi
Akış sitometri kitinden A reaktifinde spermin nihai konsantrasyonunun 2-3 x 106/mL olması için meni örnek için gereken örnek hacmini hesaplayın. Hesaplama yöntemi: Orijinal meni örneğindeki sperm konsantrasyonunun M x 106/mL olduğunu varsayarsak, gereken meni hacmi (µL) = 150/M. Hesaplanan meni hacmini bir akış sitometri tüpüne ekleyin, ardından 50 µL A reaktifi ekleyin ve hafifçe karıştırın. 100 µL B reaktifi ekleyin, hafifçe karıştırın ve oda sıcaklığında 30 s boyunca inkübe edin. Hemen 300 µL C reaktifi ekleyin ve hafifçe karıştırın. Örneği akış sitometri üzerinde CFG ve PGG ile tespit edin ve en az 5000 spermatozoayı analiz edin.

İstatistiksel analiz
Veriler, GraphPad Prism 6.0 kullanılarak istatistiksel analizlere tabi tutulmuştur. PGG ve CFG arasındaki uyum düzeyini değerlendirmek için Bland-Altman çizimleri, ortalama ve

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

121 çalışma katılımcısı (ortalama yaş: 32,5 ± 4,9 yıl; aralığı: 26–44 yıl) arasında, 28'i asthenozoospermi ve 4'ü oligozoospermi ile teşhis edilmiştir. Temel demografik özellikler ve sperm analizi parametreleri Tablo 1'de özetlenmiştir.

Şekil 4’te gösterildiği gibi, Bland-Altman grafiği, PGG ve CFG yöntemleri ile elde edilen sperm DFI sonuçlarının mükemmel tutarlılık gösterdiğini ortaya koymuştur (r = 0.9667, p = 0.0000). Sadece iki numune +10%’den daha büyük sapmalar göstermiştir ve üç numune -10%’den daha düşük sapmalar göstermiştir, oranlar sırasıyla %1.7 ve %2.5 olmuştur.

Tablo 2, PGG’den elde edilen DFIp ile her üç CFG türetilmiş parametresi -DFIm, DFIs ve DFIc- arasında güçlü bir pozitif korelasyon gösterir. Korelasyon katsayıları sırasıyla 0.6497, 0.9404 ve 0.9667 olmuştur ve p değerleri tümü 0.05’ten küçüktür. PGG yöntemi ile tespit edilen HDS sonuçlarının, CFG yöntemi ile tespit edilen DFIs ve DFIc ile anlamlı bir negatif korelasyonu olduğu görülmüştür. Korelasyon katsayıları sırasıyla -0.3042 ve -0.2120 olmuştur ve p değerleri tümü 0.05’ten küçüktür. Araştırma, HDS ile DFIm arasında korelasyon olmadığını göstermiştir (p değeri 0.05’ten büyüktür).

Tablo 3’te görüldüğü gibi, ilerici hareketli sperm yüzdesi, DFIp, DFIm, DFIs ve DFIc ile önemli ölçüde negatif korelasyon göstermiştir (tüm p değerleri 0.05’ten küçüktür), ancak HDS ile ilişkili değildir (p değeri 0.05’ten büyüktür). Sperm hacmi, DFIp, DFIs ve DFIc ile önemli ölçüde pozitif korelasyon göstermiştir (tüm p değerleri 0.05’ten küçüktür), ancak HDS ile ilişkili değildir (p değeri 0.05’ten büyüktür). Sperm konsantrasyonu ve toplam sperm sayımı, PGG ve CFG analiz sonuçları ile ilişkili değildir (p-değer 0.05’ten büyüktür).

CFG yöntemi, DFI değerlendirmesi için PGG ile mükemmel tutarlılık göstermektedir. CFG, DNA hasarının derecesini ayırt etmeyi sağlar ve onun DFI parametreleri sperm hareketliliği ile önemli ölçüde ilişkilidir. Klinik rutin pratikte yaygın kullanım için daha uygun olan ciddi sperm DNA hasarı göstergeleri, DFIs olarak bilinir.

Veri mevcudiyeti:
Bu araştırma boyunca üretilen ve/veya analiz edilen veri setleri, hasta düzeyindeki klinik verileri içerir ve kurumsal gizlilik ve etik düşünceler nedeniyle kamuoyuna açıklanmamıştır. Nanjing Tıp Üniversitesi'ne bağlı Huai'an No. 1 Halk Hastanesi Etik Kurulu'ndan makul bir talep ve onay aldıktan sonra, ilgili yazarın, anonim veri ve analitik sonuçları sağlama yetkisi vardır. Bu çalışma herhangi bir özel kod geliştirmeyi içermemektedir.

Şekil 1
Şekil 1: Genel iş akışı şeması. Lütfen buraya tıklayarak bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntüleyin.

Şekil 2
Şekil 2: DFI tespiti için akış sitometrisinin haç biçimli geçişi (CFG). Q1 - Normal sperm. Q2 - Hafif DNA parçalanması (DFIm). Q3 - Çıkarılan spesifik olmayan floresan. Q4 - Şiddetli DNA parçalanması (DFIs). DNA hasarı olan spermler hem Q2 hem de Q4’e düşer. Toplamları, toplam DNA‑parçalanmış sperm popülasyonunu temsil eder (DFIc). Lütfen buraya tıklayarak bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntüleyin.

Şekil 3
Şekil 3: DFI tespiti için akış sitometrisinin poligonal geçişi (PGG). P3: denature DNA’lı spermler. P4: Yüksek DNA boyanabilirliği (HDS) Lütfen buraya tıklayarak bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntüleyin.

Şekil 4
Şekil 4: PGG ve CFG ölçümlerinin DFI son

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

WHO Laboratuvar El Kitabı'nın İnsan Menisi İnceleme ve İşleme Rehberi'nin12 6. baskısı, sperm DNA bütünlüğünü değerlendirmek için dört yöntem önermektedir: terminal deoksinükleotidiil transferaz (dUTP) uç etiketleme (TUNEL), tek hücreli jel elektroforezi (Comet) analizleri, SCSA ve sperm kromatin dağılımı (SCD) testi. Bunlar arasında, SCSA, analiz için akış sitometrisi kullanması nedeniyle androloji laboratuvarlarında yaygın olarak benimsenmiştir; bu, yüksek verimlilik, verimlilik ve nesnellik sunar ve DFI ve HDS7 gibi parametreleri aynı anda raporlama yeteneğini de sağlar. Küresel bir ankete göre7, dünya çapındaki üreme klinisyenlerinin neredeyse dörtte biri (%24,1) sperm DNA bütünlüğünü değerlendirmek için SCSA'yı seçmiştir.

SCSA prosedürünün en kritik adımı, uygun akış sitometrik kapının belirlenmesidir. Geleneksel PGG yöntemi, DNA zincirlerinin kırık fragmanlarını (DFI) ve anormal yüksek DNA boyamalı (HDS) spermleri tespit edebilir ve bu spermler, normal histon ve protamin değişiminin eksikliği ile karakterize edilir13. Ancak, sperm DNA'sındaki tek ve çift sarmal kırıkları ayırt edemez. Son yıllarda, Yang ve ark.10 akış sitometri kullanarak sperm DFI'ını analiz etmek için bir CFG yöntemi kurmuşlardır; bu yöntem, sperm DNA hasarının ciddiyetini ayırt edebilir. Bu yöntemin kilit adımı, akış sitometri için bir haç şeklinde kapı kurmaktır. CFG yöntemi mükemmel tekrarlanabilirlik (değişim katsayısı %5'ten az) ve DFI tespiti için 8,93%'den 53,90%'a kadar doğrusal bir aralık sergiler. Bu yöntem üç gösterge—DFIm, DFIs ve DFIc—raporlar ancak HDS sonuçlarını sunmaz10.

Bu çalışma, CFG yöntemi (DFIc) toplam DFI'ının PGG yöntemi (DFIp) ile iyi bir uyum içinde olduğunu bulmuştur. Korelasyon analizi, DFIs ve DFIp'nin korelasyon katsayılarının DFIm'inkinden önemli ölçüde yüksek olduğunu ortaya koymuştur. Ne sperm konsantrasyonu ne de toplam sperm sayısı, CFG veya PGG yöntem sonuçları ile ilişkili değildir. PR (%) ve dört tür DFI (DFIm, DFIs, DFIc, DFIp) hepsi önemli ölçüde negatif korelasyon göstermiştir. PR (%), dört tür DFI (DFIm, DFIs, DFIc, DFIp) ile önemli ölçüde negatif korelasyon göstermiştir. DFIm (r = -0,1975) ile korelasyon, DFIs, DFIc ve DFIp (r = -0,3794, -0,3574, -0,3824, sırasıyla) ile olan korelasyondan önemli ölçüde daha zayıftır. Bu bulgular, Yang ve ark.10 tarafından bildirilenlerle tutarlıdır. Ayrıca, DFIs ve DFIc, meni hacmi ile iyi korelasyon gösterirken, DFIm bunu yapmamıştır. Temel meni parametrelerine yakından uygun bir göstergenin klinik yararlılığı sınırlı olsa da, bu bulgu, şiddetli sperm DNA hasar indeksinin (DFIs) spermatogenesinin farklı patolojik yönlerini yansıtabileceğini önermektedir. Dahası, korelasyon analizimizde gösterildiği gibi, DFIs, DFIm'e kıyasla ilerleyici hareketli sperm yüzdesi ile önemli ölçüde daha güçlü bir ilişki göstermiştir; bu da, geleneksel meni analizi ötesinde erkek doğurganlık değerlendirmelerinde tamamlayıcı bir gösterge olarak potansiyelinin daha da desteklenmesidir.

HDS, normal histon ve protamin değişimi eksikliği olan olgunlaşmamış spermlerin oranını temsil eder. HDS spermlerindeki protamin 1 öncüsü, tipik olarak bölünmüş terminal amino asitleri korur8, bu da uygun kromatin yoğunlaşmasını engelleyerek dsDNA'nın akridin turuncusu boyanmasında artışa neden olabilir. Önceki çalışmalar, spermlerde kromatin kusurlarını tanımlamada HDS'in önemini vurgulamıştır. Lin ve ark.14 ve Virro ve ark.15 tarafından yapılan araştırmalar, HDS > %15 olan erkeklerde in vitro fertilizasyon (IVF) düşüklük oranının önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstermiştir. Ancak, son bulgular, HDS'in CMA3, AB ve TB boyama sonuçlarıyla zayıf korelasyonu nedeniyle nükleer olgunluğu güvenilir bir şekilde göstermediğini öne sürmektedir16. Bu nedenle, HDS erkek doğurganlık göstergesi olarak uygun olmayabilir17. Bu çalışma ayrıca, HDS ile temel meni parametreleri arasında, meni hacmi, sperm konsantrasyonu ve hareketlilik dahil olmak üzere önemli bir korelasyon olmadığını göstermiştir. Bu nedenle, HDS sperm DNA bütünlüğü için bir gösterge olarak önerilmemektedir18.

DFI tespit süreci boyunca, floresan sınırlarında tutarsızlıklar ortaya çıkabilir. Bu fenomen esas olarak farklı örnekler arasında sperm konsantrasyonu ve hareketliliğindeki önemli varyasyonlara bağlanır. Bu sorunu çözmek için, ölü sperm, enkaz ve diğer spesifik olmayan sinyalleri dışlamak için uygun kapılar

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yoktur.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Computer-assisted sperm analysis systemBeijing Suijia Software Co., LtdSA-II 
Flow cytometer Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., LtdCyto E6
Flow cytometry kitShenzhen BRED Biotechnology Co., LTD
Makler counting chamberSefi Medical Instruments
Sperm nucleus DNA integrity KitShenzhen BRED Biotechnology Co., LTD-

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vaughan, D. A., Tirado, E., Garcia, D., Datta, V., Sakkas, D. DNA fragmentation of sperm: a radical examination of the contribution of oxidative stress and age in 16 945 semen samples. Hum Reprod. 35 (10), 2188-2196 (2020).
  2. Štiavnická, M., et al. H3K4me2 accompanies chromatin immaturity in human spermatozoa: an epigenetic marker for sperm quality assessment. Syst Biol Reprod Med. 66 (1), 3-11 (2020).
  3. Jeng, H. A., et al. Mixture analysis on associations between semen quality and sperm DNA integrity and occupational exposure to polycyclic aromatic hydrocarbons. Arch Environ Occup H. 78 (1), 14-27 (2023).
  4. Li, F., Duan, X., Li, M., Ma, X. Sperm DNA fragmentation index affect pregnancy outcomes and offspring safety in assisted reproductive technology. Sci Rep. 14 (1), 356(2024).
  5. Zhu, X. B., et al. Sperm DNA fragmentation in Chinese couples with unexplained recurrent pregnancy loss. Asian J Androl. 22 (3), 296-301 (2020).
  6. Minhas, S., et al. European Association of Urology Guidelines on Male Sexual and Reproductive Health: 2021 Update on Male Infertility. Eur Urol. 80 (5), 603-620 (2021).
  7. Agarwal, A., et al. Technical Aspects and Clinical Limitations of Sperm DNA Fragmentation Testing in Male Infertility: A Global Survey, Current Guidelines, and Expert Recommendations. World J Mens Health. 42 (1), 202-215 (2023).
  8. Evenson, D., Jost, L. Sperm chromatin structure assay is useful for fertility assessment. Meth Cell Sci. 22 (2-3), 169-189 (2000).
  9. B, V. L., et al. Sperm chromatin structure assay versus sperm chromatin dispersion kits: Technical repeatability and choice of assisted reproductive technology procedure. Clin Exp Reprod Med. 47 (4), 277-283 (2020).
  10. Yang, F., et al. Establishment and evaluation of a flow cytometry technique reflecting the severity of human sperm DNA damage. Zhonghua Nan Ke Xue. 26 (11), 989-995 (2020).
  11. World Health Organization. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. , 5th ed., World Health Organization. Geneva. (2010).
  12. World Health Organization. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. , 6th ed., World Health Organization. Geneva. (2021).
  13. Evenson, D. P. The Sperm Chromatin Structure Assay(SCSA) and other sperm DNA fragmentation tests for evaluation of sperm nuclear DNA integrity as related to fertility. Anim Reprod Sci. 169 (6), 56-75 (2016).
  14. Lin, M. H., et al. Sperm chromatin structure assay parameters are not related to fertilization rates, embryo quality, and pregnancy rates in in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection, but might be related to spontaneous abortion rates. Fertil Steril. 90 (2), 352-359 (2007).
  15. Virro, M. R., Larson-Cook, K. L., Evenson, D. P. Sperm chromatin structure assay (SCSA) parameters are related to fertilization, blastocyst development, and ongoing pregnancy in in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection cycles. Fertil Steril. 81 (5), 1289-1295 (2004).
  16. Mohammadi, Z., Tavalaee, M., Gharagozloo, P., Drevet, J. R., Nasr-Esfahani, M. H. Could high DNA stainability (HDS) be a valuable indicator of sperm nuclear integrity. Basic Clin Androl. 30, 12(2020).
  17. Shen, L., et al. High sperm DNA stainability might not be an accurate predictive indicator of male fertility and assisted reproductive technology outcomes. Front Endocrinol (Lausanne). 16, 1510114(2025).
  18. Lu, J. C. High DNA stainability (HDS) should not be recommended as a marker for the detection of sperm DNA damage. Andrologia. 54 (7), e14442(2022).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Medicine

Related Articles