Bu protokol, indocyanine green (ICG) yakın kızılötesi görüntüleme ile ultrason birleştirerek fırlanan sonrası lenfatik drenajı, farelerde plantar ICG clearansı ve popliteal lenf düğümü büyümesini nicelikle ölçer.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
ICG yakın kızılötesi görüntüleme ve kırma sonrası ultrason kullanılarak lenfatik drenajın değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Travmatik kırıklar genellikle lenfatik drenaj fonksiyonunun bozulmasıyla birlikte gelir. Kırılma sonrası lenfatik drenajın azalması ve lenf düğümü büyümesi, akut inflamatuar yanıt ve bağışıklık hücresi alımının devam eden, dinamik süreçlerini gösterir. Bu makale, sahte veya tibial kırığı ameliyatı yapılan farelerin plantar bölgesine 6 μL 0,2 mg/mL indocyanine green'in intradermal enjekte edilmesini anlatmaktadır. Yakın kızılötesi floresan görüntüleme, 0 saat ve 24 saat plantar ICG sinyalini nicelikle ölçerek 24 saat boşluk oranını fare lenfatik drenajının bir okuması olarak hesapladı. Ultrason aynı anda popliteal lenf düğümlerini (PLN) 3D rekonstrüksiyon etmek, hacimlerini karşılaştırmak ve kırık kaynaklı büyümeyi değerlendirmek için kullanıldı. Sonuçlar, kırık sonrası lenfatik boşalma oranının önemli ölçüde azaldığını, plantar bölgedeki ICG'nin floresans yoğunluğunun belirgin şekilde daha yüksek olduğunu ve PLN'lerin hacminin anlamlı şekilde arttığını gösterdi. Histopatolojik kesitler veya lenfosintigrafi gibi önceki lenfatik sistem ölçüm yöntemleriyle karşılaştırıldığında, bu yöntem genellikle in vivo, dinamik ve sürekli gözlem sağlamayan yöntemlerle, yüksek kararlılık ve tekrarlanabilirlik gösterir. Özellikle, lenfatik drenaj fonksiyonunun dinamik in vivo izlenmesini mümkün kılarak kırık modellerinde lenfatik reflüdeki değişikliklerin araştırılması için sağlam teknik destek sağlar.
Giriş
Travmatik kırıklar genellikle ciddi doku hasarı ve şişliğe yol açar, enfeksiyon, nekroz ve kemik birleşmemesi gibi komplikasyon riskiniartırır 1,2. Grzegorz Szczesny ve ark. doku ödemine yol açan lenfatik drenaj disfonksiyonunun gecikmeli iyileşme ile bağlantılıolduğunu göstermiştir 3. Çalışmalar, kırık iyileşme sürecinde, kemik dokusunun onarımının yanı sıra, kırığın bulunduğu bölgedeki lenfatik sistemin de önemli bir rol oynadığını göstermektedir. Lenfatik damarlar sadece interstisiyel sıvıyı boşaltmak ve şişliği önlemekle kalmaz,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan deneyleri, Şanghay Model Organizmalar Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. NMB-SMP-IACUC-01-0002-R02-03). Bu çalışmada kırılma modeli olan C57 erkek fareler (6–8 haftalık) kullanıldı. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
1. Ameliyat öncesi bakım
- Fareleri en az 1 hafta boyunca besin ve suya erişim ile adapte edin. Hayvanları bilgisayar tarafından oluşturulmuş rastgele bir listeyle kırık veya sahte gruba rastgele atanır.
- Fareleri hayvan ısıtma pedine yerleştirin ve sabit sıcaklık ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kırık modelinin kurulmasından sonraki 1., 7. ve 14. günlerde, kırık grubundaki 24 saatlik plantar ICG floresans yoğunluğu (FI24h) sahte cerrahi grubundan tutarlı olarak daha yüksekti (Şekil 3). Toplanan plantar görüntülerden ICG floresans yoğunluğunun göreli nicel analizi, kırık grubundaki lenfatik ICG boşalma oranının sahte cerrahi grubuna göre anlamlı şekilde daha düşük olduğunu gösterdi (p < 0.05) (Şekil 4.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Protokol, kolayca gözden kaçan birkaç detay içeriyor. Örneğin, pozlama süresi sabit değildir ve belirli floresans yoğunluğuna göre belirlenmelidir. Ancak, aynı fare grubunun 0 saat ve 24 saat içinde maruz kalma süresi tutarlı kalmalıdır; aksi takdirde, sonuçlar güvenilir olmayabilir. Ultrason gözlem için kullanılırken, farenin alt uzuvlarını tamamen bağlantı maddesiyle kaplamak şarttır; çünkü açıkta kalan alanlar prob bu bölgeleri taradığında ortaya çıkan görüntülerde bozulmaya yol açar........
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (YJZ'ye 82174407), Şanghay Pudong Yeni Bölge Sağlık Komisyonu Disiplin Lideri Eğitim Programı (PWRd2020-05), Pudong Yeni Bölge Sağlık Komitesi Disiplin Lideri Projesi (PWRq2020-56) ve Shenzhen'in Sanming Tıp Projesi (No. SZZYSM202311006).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 10 Mikrolitre Mikroşırınga | Hamilton Company | 80330/00 | Hamilton 80330/00 mikroşırınga, 10 L kapasiteli, 26s ebat iğne, 51mm uzunluk ve stil 2 nokta özellikli hassas bir enstrümandır. Kromatografi, numune enjeksiyonu ve analitik kimya uygulamalarında küçük hacimlerin doğru bir şekilde verilmesi için tasarlanmıştır. |
| 3D Ultrason Vevo 3100 Görüntüleme Sistemi | Vevo 2100 | Vevo 2100, küçük hayvanların gerçek zamanlı 3D görselleştirmesini sağlayan preklinik araştırmalar için yüksek frekanslı bir ultrason görüntüleme sistemidir. Kardiyovasküler, onkoloji ve gelişimsel biyoloji çalışmaları için üstün çözünürlük sunar ve Vevo LAB yazılımı ile veri analizi için entegre edilmiştir. | |
| %75 Etanol | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | G73537O | %75 etanol, laboratuvarlarda yüzey sterilizasyonu, ekipman temizliği ve antiseptik için yaygın olarak kullanılan bir dezenfektan solüsyondur. Protein denatüre ederek bakteri, virüs ve mantarları etkili bir şekilde öldürür ve biyolojik ve klinik ortamlarda yaygın olarak uygulanır. |
| Pamuk Tüyü | Hebei Kangji Medical Equipment Co., Ltd. | 20250303 | Pamuk tüyleri, medikal, tanı ve laboratuvar prosedürlerinde kesin numune toplama, çözelti uygulama veya temizleme için kullanılan steril, emici aplikatörlerdir. Hijyenik kullanım için ahşap veya plastik saplara sahip pamuk uçlu özelliklere sahiptir. |
| Bağlama Maddesi | Tianjin Jinya Technology Development Co., Ltd. | 20241029 | Bağlama maddesi, yaygın olarak ultrason jeli olarak bilinen, ultrason dönüştürücü ile cilt arasındaki akustik iletimi artırmak için kullanılan su bazlı bir ortamdır. Temiz görüntüleme için hava cebini ortadan kaldırır, tahriş edici değildir ve tıbbi ve teşhis kullanımı için 250mL'lik bir kapta tedarik edilir. |
| Graphpad Prism | GraphPad Software | Prism 10 | Veri analizi, görselleştirme ve sunumu için kullanılan bilimsel grafik ve istatistiksel analiz yazılımı. |
| Image J | National Institutes of Health | ImageJ 1.54d | Biyolojik ve tıbbi görüntü analizi için yaygın olarak kullanılan, kamuya açık, Java tabanlı bir görüntü işleme ve analiz programı. |
| indosiyanin yeşili | Dandong Yichuang Pharmaceutical Co., Ltd. | 8305128 | İndosiyanin yeşili, kardiyak çıkış, hepatik fonksiyon, karaciğer kan akımı ve oftalmik anjiyografiyi belirlemek için tıbbi teşhislerde kullanılan suda çözünür anyonik bir boyadır. İntravenöz uygulama için 25mg'lık flakonlarda tedarik edilir ve görüntüleme amaçları için yakın kızılötesi spektrumda floresan gösterir. |
| izofluran | RWD | R650-IE | İzofluran, solunan genel bir anesteziktir. Küçük bir kan/gaz bölünmesi katsayısına sahiptir. Hayvan anestezisinde kullanıldığında, anesteziyi yumuşak, hızlı ve rahat bir şekilde indüke edebilir, hızlı bir iyileşme sağlar, iyi kas gevşemesi ve sempatik sinir sistemi üzerinde heyecan verici etkisi yoktur. İzofluranın karaciğerdeki metabolik hızı düşüktür, bu nedenle karaciğer toksisitesi düşüktür ve tekrarlanan kullanımda bile belirgin yan etkiler yoktur. Anestetik atık gazının çevreye ve laboratuvar personeli üzerindeki olumsuz etkilerini önlemek için bir gaz geri kazanım sistemi ile birlikte kullanılması tavsiye edilir. |
| Mikrodenge | Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd. | FA1004B | FA1004B mikrodenge, küçük numunelerin doğru şekilde tartılması için tasarlanmış yüksek hassasiyetli bir analitik enstrümandır, 0.0001g'ye kadar okunabilirlik sunar ve araştırma ve kalite kontrolünde kesin ölçümler gerektiren laboratuvar uygulamaları için uygundur. |
| Yakın Kızılötesi Görüntüleme Sistemi | Olympus | MVX10 | Olympus MVX10, yakın kızılötesi görüntüleme için optimize edilmiş bir makro zoom floresan mikroskobu sistemidir. Geniş yakınlaştırma aralığı ile büyük numunelerin yüksek çözünürlüklü görselleştirmesini, derin doku penetrasyonu için gelişmiş optikleri ve biyolojik ve malzeme araştırmalarında floresan teknikleriyle uyumluluğu sunar. |
| Vevo lab | \ | Vevo LAB | Vevo görüntüleme verilerini analiz etmek için kullanılan bir görüntüleme analiz yazılım paketi, ölçüm, hesaplama ve rapor oluşturma içerir. |
Kaynaklar
- Zhang, S., Sheng, H., Xu, B., Lao, Y. Acute external iliac artery thrombosis following pelvic fractures: Two case reports. Medicine (Baltimore). 100 (6), e24710(2021).
- Szczesny, G., Olszewski, W. L., Gewartowska, M., Zaleska, M., Gorecki, A. The heali....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
