Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Xueshan Jinluohan Kaplama Ajanının Ağrı Dileji ve Enflamatuar Etkileri ile Transdermal Mekanizması

231 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/70480

⸱

30 Nisan 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Qingdao Academy of Chinese Medicinal Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. Ltd, 4State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Laboratory of Epigenetics and Immunology, West China Institute of Women and Children's Health, NHC Key Laboratory of Chronobiology, Department of Obstetric and Pediatric, Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children of MOE, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Second University Hospital, Sichuan University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, Xueshan Jinluohan Ağrı Kesici Kaplama Ajanının analjezik ve anti-inflamatuar etkilerini değerlendirmek için entegre bir yaklaşım sunmaktadır. Etkiler alan ve zamana bağlıydı ve transdermal analiz, benzoylaconine'in difüzyon kontrollü salınıma sahip birincil geçirici bileşen olduğunu belirledi.

Özet

Topikal geleneksel Çin tıp (TCM) preparatları, yerel terapötik etkiler sağlarken sistemik yan reaksiyonları potansiyel olarak azalttığı için inflamatuar ve ağrı ile ilişkili durumların yönetiminde yaygın olarak kullanılır. Ancak, birçok klinik olarak uygulanan formülasyonun altında yatan farmakodinamik özellikler ve transdermal mekanizmalar hâlâ yeterince karakterize edilmemiştir. Xueshan Jinluohan Ağrı Kesici Kaplama Ajanı (XJCA), Tibet ildönümü formülasyonu olup, genellikle iltihap ağrı için reçete edilir, ancak uygulama alanı, etki süresi ve yerel ile sistemik etkilerin göreceli katkıları sistematik olarak değerlendirilmemiştir. Bu çalışma, bu parametreleri incelemek için entegre bir in vivo–in vitro metodolojik çerçeve oluşturur. Merkezi ve periferik analjezik aktivite ile akut inflamatuar yanıtları değerlendirmek için birden fazla tamamlayıcı hayvan modeli kullanıldı; böylece alan, zaman ve lokal-sistemik bağımlı etkilerin değerlendirilmesini mümkün kılmıştır. Paralel olarak, iki ana alkaloidin benzoylakonin ve akonitinin perkutan emilim kinetiklerini karakterize etmek için ultra-yüksek performanslı sıvı kromatografi–tandem kütle spektrometrisi (UPLC-MS/MS) ile birleşen bir Franz difüzyon hücre sistemi kullanıldı. XJCA, bölge ve zamana bağlı analjezik ve anti-enflamatuar etkiler göstermiş, daha büyük uygulama alanları ise analjezik etkililiğe daha fazla sistemik katkı sağlamıştır. Transdermal kinetik analiz, benzoylakoninin Higuchi modeline uygun olarak belirgin şekilde daha yüksek sabit durum akışı gösterdiğini ve difüzyon kontrollü salınım izlediğini ortaya koydu; akonitin ise daha düşük geçirgenlik ve daha karmaşık bir salgılama profili gösterdi. Bu bulgular, transdermal doğum davranışını gözlemlenen farmakodinamik sonuçlarla ilişkilendirir ve topikal TCM formülasyonlarının değerlendirilmesi ve optimize edilmesi için yapılandırılmış bir çerçeve sağlar.

Giriş

İltihaplanma ve ağrı, vücudun yaralanma ve enfeksiyona karşı savunmasında kilit rol oynayan birbirine bağlı fizyolojik ve patolojiktepkilerdir 1. Ancak, osteoartrit, romatoid artrit veya travma sonrası ağrı gibi kalıcı veya aşırı iltihaplanma ve ağrı, hastaların fiziksel işlevselliğini ve ruh sağlığını ciddi şekilde olumsuz etkileyebilecek doku hasarına yolaçabilir 2,3. Şu anda iltihap ve ağrı için klinik tedaviler ağırlıklı olarak steroid olmayan anti-enflamatuar ilaçlara (NSAID'ler) (örneğin, diklofenak, ibuprofen) ve opioidlere dayanmaktadır. NSAID'ler anti-inflamatuar ve ağrı aljezik etkileri için yaygın olarak kullanılırken, ağızdan uygulanan uygulama genellikle gastrointestinal tahriş, böbrek hasarı ve kardiyovasküler risklere yolaçar 4. Opioidler, güçlü ağrı aljezikleri olmalarına rağmen, bağımlılık, solunum depresyonu ve diğer ciddi yan etkilerleilişkilidir 5,6. Sonuç olarak, daha güvenli alternatiflere yönelik klinik bir ihtiyaç artmaktadır. İlaçları doğrudan etki bölgesine ulaştıran topikal preparatlar, bu sistematik yan etkileri azaltmak için stratejik bir çözümsunar 7. Ancak, etkileri ilacın cilt bariyerini aşma yeteneğine büyük ölçüde bağlıdır; bu da özellikle daha büyük moleküller veya zayıf lipofilliğe sahip olanlar için preklinik bulgularınçevrilebilirliğini sınırlayabilir 8,9. Bu nedenle, özellikle yerel etki ve minimum sistemik maruziyete sahip topikal preparatlar olmak üzere güvenli ve etkili alternatif tedaviler geliştirmek, farmakolojide araştırma odağı haline gelmiştir.

Topikal TCM preparatlarının iltihap ve ağrı tedavisinde uzun bir uygulama geçmişi vardır. Avantajları, lezyon bölgesine doğrudan etki, azalan sistemik yan etkiler ve uzun süreli ilaç salınımıdır(10,11). XJCA, birden fazla bitkisel bileşenden oluşan klinik olarak kullanılan bir TCM film oluşturan jeldir. Çin'de osteoartrit, yumuşak doku yaralanmaları ve nevralji kaynaklı ağrı ve iltihapları hafifletmek içinyaygın olarak kullanılır 12,13,14. Ancak, etkinliğine dair bilimsel kanıtlar sınırlıdır ve uygulama alanı ile etkinlik arasındaki ilişki, zaman akışı ve yerel ile sistemik etkiler arasındaki fark gibi temel farmakodinamik özellikler net değildir. Bu boşluklar, XJCA'nın mantıklı klinik uygulamasını engeller.

Transdermal emilim, topikal preparatların terapötik etkisini etkileyen kilit bir faktördür. Birincil bariyer olarak, cilt ilaçların sistemik dolaşıma veya yerel dokulara nüfuzunu kısıtlar. XJCA için, aktif bileşenlerinin transdermal emilim özelliklerini anlamak, farmakodinamik etkilerini netleştirmek ve dozaj formunu optimize etmek için çok önemlidir. TCM preparatları üzerine yapılan önceki çalışmalar, alkaloidlerin (örneğin, akonitin türevleri) anti-inflamatuar ve analjezik etkilere sahip önemli aktif bileşenler olduğunugöstermiştir 17,18. Benzoylakonin ve akonitin, XJCA 19,20'de iki ana alkaloiddir ve içerikleri ile transdermal davranışları XJCA'nın etkinliğini doğrudan etkileyebilir. Ancak, XJCA'da bu iki bileşenin transdermal emilimi ile kinetik özellikleri ve salgılama mekanizmaları hakkında bir rapor bulunmamaktadır.

Bu araştırma boşluğunu doldurmak için, bu çalışma XJCA'yı bir vaka çalışması olarak kullanarak topikal TCM formülasyonlarını değerlendirmek için sistematik bir metodolojik çerçeve geliştirmeyi ve doğrulamayı amaçlamaktadır. Amaç, aşağıdaki etkileri içeren entegre bir değerlendirme yaklaşımını göstermekti: (1) uygulama alanı, tedavi süresi ve lokal ile sistemik ilaç teslimatının etkililiği üzerindeki etkilerini disseksiye etmek için tasarlanmış in vivo farmakodinamik modelleri; ve (2) Franz difüzyon hücreleri ve UPLC-MS/MS kullanılarak önemli aktif alkaloidlerin perkutan emilimini ve salınımını ölçmek için in vitro transdermal kinetik değerlendirme. XJCA'nın in vivo etkinliğinin, özellikle alan ve zaman bağımlılığının, esas olarak ana bileşenlerinin transdermal kinetik tarafından yönlendirildiğini varsaydık. In vivo etkinlik parametrelerini ilgili in vitro kinetik verilerle bağlayarak, bu yaklaşım, transdermal teslimatın topikal TCM preparatlarının farmakodinamiğini nasıl etkilediğine dair mekanik bir anlayış sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Laboratuvar Hayvanlarının Refahı Etik İnceleme Kılavuzları (GB/T 35892-2018) ve Laboratuvar Hayvanlarının İnsancıl Muamelesi Rehberleri doğrultusunda yürütülmüştür. Tüm hayvan prosedürleri, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Deneysel Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. TCM-09-315).

Deneysel hayvanlar ve barınma
Spesifik patojensiz (SPF) Kunming fareleri (20~25 g, erkek/dişi = 1:1) ve SPF Sprague-Dawley (SD) fareleri (180~200 g) kullanıldı. Hayvanlar kontrollü koşullar altında tutuldu: 12 saat ışık/karanlık döngü, 23 ± 2 °C sıcaklık ve %60 ± %5 nem ile serbest yiyecek ve suya erişim. XJCA'nın analjezik ve anti-inflamatuar profilini kapsamlı şekilde değerlendirmek için, bir dizi in vivo fare modeli kullanıldı. Sıcak plaka testi, merkezi aracılı ağrı eşiğini değerlendirdi; formalin testi nörojenik (Faz I) ile inflamatuar ağrıyı (Faz II) ayırt ederdi; Ksilen kaynaklı kulak ödemi testi akut anti-enflamatuar aktiviteyi değerlendirdi; ve asetik asit kaynaklı kıvrılma testi visseral inflamatuar ağrıyı modelledi. XJCA'nın kullanıma hazır bir film oluşturan jel olduğunu unutmayın. Başvurudan önce ek hazırlık gerekmez.

Uygulama alanının analjezik ve anti-inflamatuar etkililiğe etkisi
SPF Kunming fareleri rastgele olarak 4 gruba ayrıldı (erkek/dişi = 1:1): normal kontrol grubu (NC), XJCA küçük alan (1×1 cm, 1 cm2) grubu (XJCASAAG), XJCA orta alanlı (1×2 cm, 2cm 2) grubu (XJCAMAAG) ve XJCA büyük alan (1,5×2 cm, 3 cm2) grubu (XJCALAAG). XJCA, 7 gün ardışık olarak 0.015 g/cm 2 (fare başına 0.15 mL) ile uygulandı. NC grubu da aynı şekilde normal salin aldı. Son uygulamadan 120 dakika sonra, sıcak plaka ve formalin testleriyle analjezik etkinliği değerlendirildi.

Sıcak plaka testi için fareler, 55 ± 0,5 °C sıcaklıklarında tutulan sabit sıcaklıklı bir sıcak plakaya yerleştirilerek önceden tarandı. Paw çekilme gecikmesi (PWL) kaydedildi ve yalnızca başlangıç PWL'si 5 ile 30 saniye arasında olan fareler seçildi (n = 40, erkek/dişi = 1:1). 7 günlük tedaviden sonra PWL 3 kez 30 dakika aralıklarla ölçüldü ve ortalama değer kaydedildi. Doku hasarını önlemek için 60 saniyelik bir kesme süresi uygulandı.

Formalin testinde (n = 40, erkek/kadın = 1:1), 7 günlük tedaviden sonra %1 formalin (1 mL/kg) sağ arka patiye deri altına enjekte edildi. Enjeksiyondan hemen sonra fareler bireysel gözlem odalarına yerleştirildi. Ağrıyla ilişkili davranışlar (yalama, kaldırma ve kaçma) Faz I (0–10 dakika, nörojenik ağrı) ve Faz II (15–30 dakika, inflamatuar ağrı) sırasında kaydedildi. Başarılı enjeksiyon, pençede belirgin şişlikle doğrulandı.

Zamana bağlı ağrı aljezik ve anti-enflamatuar etkinlik değerlendirmesi
Yüz yirmi SPF Kunming faresi rastgele üç gruba ayrıldı (n = 10 zaman noktası, erkek/kadın = 1:1): model kontrol (MC) grubu, XJCALAAG (1,5×2 cm, 3 cm2) grubu ve Diklofenak Dietilemin Emulgel (DDE) pozitif kontrol grubu. XJCA (0.015 g/cm 2, 0.15 mL/fare) ve DDE (0.016 g/cm 2, 0.15 mL/fare) 7 gün ardışık uygulanırken, MC grubu normal salin aldı. Son uygulamadan 2, 4, 6 ve 8 saat sonra hem ksilen kaynaklı kulak ödemi testi hem de asetik asit kaynaklı kıvranma testi yapıldı.

Ksilen kaynaklı kulak ödemi testinde, sağ kulağın her iki tarafına 30 μL ksilen uygulandı (MC grubu normal salin aldı) ve 60 dakika sonra fareler pentobarbital sodyum (30 mg/kg, i.p.) ile anestezi edilip feda edildi; Kulak diskleri (8 mm çapında) daha sonra delinip tartıldı. Kulak ödemi derecesi, sağ kulak diski ağırlığı çıkarılması sol kulak diski ağırlığı olarak hesaplandı ve ödem inhibisyon oranı [(MC grup ödem derecesi – tedavi grubu ödem derecesi) / MC grup ödem derecesi] olarak belirlendi. × %100. Sol ve sağ kulak kulaklarının aynı konumundan 8 mm çapında dairesel bir yumruk alındı ve kulak dokusu elektronik bir teraziyle tartıldı.

Asetik asit kaynaklı kıvrılma testinde, %0,6 asetik asit çözeltisi (0,1 mL /10 g) intraperitoneal enjekte edildi ve kıvrılma tepki süreleri (arka uzuv uzanması, karın kasılması ve gövde burulması) 20 dakika içinde kaydedildi. Asetik asit enjeksiyonundan hemen sonra, fareler bireysel gözlem kafeslerine yerleştirildi. Kıvrılma inhibisyon oranı şu formüle göre hesaplandı: [(MC grubunda kıvrılma süreleri – tedavi grubunda kıvrılma süreleri)/MC grubunda kıvrılma süreleri]×%100.

Lokal ve sistemik analjezik etkinliğin karşılaştırılması
Lokal olarak kısıtlanmış analjezi, transdermal emilim ve sistemik dağılımdan kaynaklanan etkilerden ayırmak için, net operasyonel tanımlara sahip iki uygulama rejimi tasarladık. Yerel etki, ilacın uygulama yerinin hemen altındaki veya bitişik dokulara lokal bir bölgede etkisini ifade eder ve dolaşımdaki ilacın çok az katkısı vardır. Sistemik etki ise, kan içine giren ve uygulama alanından uzakta merkezi veya çevresel bölgelerde etkili olan bir ilacın aracılık ettiği analjezi anlamına gelir. Uygulama alanını artırmanın, ilacın sistemik olarak daha fazla alımına yol açtığı ve dolayısıyla sadece lokal etkiden kaynaklanan analjezik etkilerden daha fazla yarattığı hipotezini doğrudan test ettik; çünkü doz birim alan başına sabit tutulurken toplam tedavi edilen alanı değiştirirken. Bu tasarım, uzansal maruziyet ölçeğinin sistemik biyoerişilebilirliği ve bunun sonucunda sistematik olarak aracılı etkilerin katkısını nasıl belirlediğinin nicelendirilmesini sağlar.

Otuz SPF Kunming faresi (sıcak plaka testinde PWL 5~30 saniye) rastgele olarak 3 gruba (n = 10 grup, erkek/dişi = 1:1) ayrıldı: NC grubu, topikal ilaç grubu (TMG) ve sistemik ilaç grubu (SMG). XJCA, 7 gün ardışık olarak 0,015 g/cm2 sabit dozda, 0,15 mL hacimle verildi.

TMG için formülasyon, arka uzuv cildinin lokal bir bölgesine uygulandı. SMG için, artan sistemik emilimi simüle etmek için, formülasyon hem arka uzuvları hem de sırt deriyi içeren birleşik bir alana uygulandı ve birim alan başına aynı doz (0.015 g/cm 2) korundu. Bu tasarım, SMG grubuna uygulanan toplam XJCA miktarının TMG grubununkinden orantılı olarak daha yüksek olmasını sağladı ve sistemik dolaşıma transdermal emilimin daha büyük potansiyelini sağladı. Son uygulamadan 120 dakika sonra, PWL sıcak plaka testiyle ölçüldü (3 kez, 30 dakika aralıklarla, ortalama değer kaydedildi). TMG (yerel etki baskın) ve SMG (yerel + sistemik etki) karşılaştırarak, sistemik ilaç dağılımının genel analjeziye katkısını inceleyebiliriz.

In vitro transdermal absorbsiyon çalışması
Çalışma, 1.76625cm2 etkili difüzyon alanına sahip Franz diffüzyon hücrelerini kullandı. Franz difüzyon hücresi, perkutan emilimi değerlendirmede altın standarttır. Sistem, test formülasyonunu içeren bir donör bölme, fizyolojik tampon ile doldurulmuş bir reseptör bölmesi ve aralarına monte edilmiş kesilmiş deriden oluşur. İlaç molekülleri deriden reseptör çözeltisine difüzyon olur ve zamanla örnekler toplanarak geçirimlilik kinetiği nicelendirilir. Pentobarbital sodyum (30 mg/kg, i.p.) ile anestezi edilen SD sıçanlardan alınan karın derisi, deri altı yağ çıkarılarak dikkatlice hazırlandı, normal salinle duruldu ve 24 saat normal salinle bekletildi. Tabaka korneumunun bütünlüğünün korunması hayati öneme sahiptir. Epidermis yüzeyini esnemeyin, katlamayın veya dokunmayın. Cildin geçirgenliği, nemlendirme durumundan büyük ölçüde etkilenir. Hidrasyon süresi tekrarlanabilir sonuçlar verir.

Hazırlanan deri, donör ve reseptör bölmeleri arasına monte edilmiş, tabaka korneum donör bölmesine bakıyordu. Donör taraf 200 μL XJCA (0,06 g ham ilaca eşdeğer) aldı, reseptör bölmesi ise 15 mL alıcı çözelti (%30 etanol:%70 PBS, sonikasyonla 15 dakika boyunca gazlandırıldı) ile dolduruldu ve sürekli manyetik karıştırma altında 350 r·min⁻1 sıcaklıkta 32 ±0,5 °C sıcaklıkta tutuldu. Alıcı çözelti kullanılmadan önce 15 dakika sonikasyonla gazdan temizlenmelidir; deney sırasında baloncuk oluşumunu önlemek için.

Reseptör bölmesinden 2, 4, 6, 8, 10, 12, 20 ve 24 saat sürelerde bir mL örnek alındı ve her seferinde eşit hacmde önceden ısıtılmış (32 °C) taze alıcı çözelti ile yenilendi.

Not: Difüzyon kinetiklerini etkileyebilecek sıcaklık dalgalanmalarını önlemek için yedek çözeltinin aynı sıcaklıkta olması gerekir. Toplanan örnekler 0,22 μm mikrogözenekli membranlardan filtrelendi ve ardından 24 saat içinde UPLC-MS/MS ile analiz edildi. Akonitinin dengesizliği nedeniyle, örnekler toplandıktan sonraki 24 saat içinde analiz edilmeli veya stabilizatörler eklenmelidir. Eğer hemen analiz mümkün değilse, örnekleri aliquot ile -80 °C'de saklayın, ancak bu koşullar altında stabilitelerini doğrulamadan önce doğrulayın.

UPLC-MS/MS koşulları
Kromatografik analiz, 40 °C'de tutulan Agilent ZORBAX SB-C18 kolonu (2.1 × 100 mm, 1.8 μm) kullanılarak gerçekleştirildi; akış hızı 0.3 mL/dakika ve enjeksiyon hacmi 2 μL idi. Mobil faz, 0,5 mL/L buzul asetik asit (B) içeren asetonitril (A) ve 0,1 mol/L amonyum asetat çözeltisi içeriyordu ve aşağıdaki gradyan programı kullanıldı: 0–5 dakika (%26–%45 A), 5–7 dakika (%45–%74 A), 7–10,1 dakika (%74–%90 A), 10,1–12 dakika (%90 A), 12–12,1 dakika (%90–%26 A), ve 12,1–15 dakika (%26 A) aralığında.

Kütle spektrometrik tespiti, pozitif iyon modunda elektrosprey iyonizasyon (ESI) kaynağıyla aşağıdaki ayarlarda gerçekleştirilmiştir: kurutma gaz sıcaklığı 500 °C, kurutma gaz akışı 5 L/dakika, nebulizör basıncı 50 psi, kılıf gaz sıcaklığı 500 °C, kılıf gaz akışı 11 L/d, kapiller gerilim 5500 V ve çoklu reaksiyon izleme (MRM) modunda veri toplama. MRM geçişleri ve parametreleri şu şekilde ayarlandı: akonitin (m/z 646.6→586.4, bekleme süresi 100 ms, DP 102.930 V, CE 49.810 V) ve benzoylakonin (m/z 604.4→105.1, bekleme süresi 100 ms, DP 105.120 V, CE 74.270 V).

Yöntem doğrulama ve veri analizi
Yöntem doğrulaması, özgüllük, doğrusallık, hassasiyet, kararlılık ve tekrarlanabilirlik değerlendirilerek gerçekleştirildi. Özgüllük, boş alıcı çözelti ve standart çözelti analiz ederek endogen maddelerden gelen parazit yokluğunu doğruladı. Doğrusal olmak için, standart eğriler en küçük kare regresyon yöntemiyle tepe alanının konsantrasyona karşı çizilmesiyle oluşturulmuştur. Hassasiyet, hem gün içi (6 tekrar) hem de gün içi (3 gün içinde 2 çoğaltma) testlerle, tepe alanlarının göreli standart sapması (RSD) olarak ifade edilen 50 ng/mL standart çözelti kullanılarak değerlendirildi. Kararlılık, örnek çözeltilerinin 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 18 ve 24 saat aralığında RSD zirve alanı belirlenerek değerlendirildi. Tekrarlanabilirlik, altı paralel örnek preparatından yapılan RSD zirve alanı ölçülmesiyle doğrulandı. Standart stok çözeltileri, benzoylakonin ve akonitinin her biri 2,5 mg doğru tartıldığı ve ardından izopropanol:diklorometan (1:1) karışımında çözülerek nihai konsantrasyon 25 μg/mL elde edilerek hazırlandı. Test çözeltisi için, uygun miktarda örnek bir santrifüj tüpüne aktarıldı ve 5 dakika boyunca 12.000 x g yüksek hızlı santrifüjle geçirildi, ardından süpernatant analiz için toplandı.

Her zaman noktasında kümülatif geçirimli miktar (Qn, ng/cm2) aşağıdaki formülle hesaplandı:

Qn = [(Cn × V + ΣCi × Vi) / A]

Burada:
Qn: n. örnekleme zamanında birikim geçirgenlik miktarı (ng/cm 2).
Cn: İlacın n-ci örnekleme zamanında (ng/mL) alıcı çözeltide konsantrasyonu.
Ci: İlacın i. örnekleme zamanında (ng/mL) alıcı çözelti içindeki konsantrasyonu.
V: Alıcı çözeltinin hacmi (15 mL).
Vi: Her zaman noktasında örnekleme hacmi (1 mL).
C: Franz difüzyon hücresinin etkin difüzyon alanı (1.76625cm2).

Kümülatif geçirimli miktar-zaman (Q-t) eğrisi, Qn ordinat olarak ve zaman (t, h) absissa olarak çizildi. Q-t eğrisinin doğrusal kısmı doğrusal regresyona tabi tutuldu ve regresyon denkleminin eğimi sabit durum transdermal akısı olarak alındı (Js, ng/cm 2/h).

Q-t eğrisi, sıfır dereceden modele (Q = kt + b), birinci dereceden modele (ln(Qmax - Q) = -kt +lnQ max) ve Higuchi modeline (Q =kt 1/2 + b) uygulanmıştır; burada Qmax maksimum kümülatif geçirgenlik miktarıdır, k hız sabitidir ve b kesişimdir. Uyum, korelasyon katsayısı (R2) kullanılarak değerlendirildi; daha yüksek R2 daha iyi bir uyumu gösterir.

İstatistiksel analiz
Tüm in vivo davranışsal testler için bireysel hayvan ham verileri ve in vitro geçirgenlik çalışması için ham UPLC-MS/MS kromatografik verileri sırasıyla Ek Dosya 1 ve 2 olarak sunulmaktadır. Tüm deneysel veriler ortalama ± standart sapma (x̄ ± SD) olarak sunuldu. İstatistiksel analiz GraphPad Prism 9.0 kullanılarak gerçekleştirildi. Grup farklarını karşılaştırmak için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Dunnett'in çoklu karşılaştırma testi kullanıldı. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Analjezik ve anti-inflamatuar etkinliğin uygulama alanına bağımlılığı
XJCA, fare modellerinde uygulama alanı ile ağrı aljezik/anti-inflamatuar etkinlik arasında pozitif bir korelasyon gösterdi; 7 gün ardışık uygulamadan sonra, sabit dozda 0.03 g/cm2 oldu. Sıcak plaka testinde, NC grubu en kısa ortalama PWL'yi gösterdi ve bu da en güçlü ağrı tepkisini gösterdi. Buna karşılık, XJCA ile tedavi edilen gruplar PWL'nin alana bağlı bir uzamasını gösterdi: XJCASAAG...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

İltihaplanma ve ağrı, birden fazla sinyal yolunu içeren karmaşık patolojik süreçlerdir. Topikal preparatlar, lezyonlara doğru etki edebildikleri ve sistemik yan reaksiyonları en aza indirebildikleri için giderek daha fazla tercih edilmektedir21,22. Bu çalışma, XJCA'yı gösteri örneği olarak kullanarak topikal TCM formülasyonlarını değerlendirmek için sistematik bir metodolojik çerçeve oluşturmuş ve doğrulamıştır. Stratejik olarak ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Shandong Eyaleti Taishan Bilim Programı (tsqn20250730), Sichuan Üniversitesi (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co., Ltd.) Enterprise tarafından desteklenmiştir. İşbirliği Projesi (24H0764, 24H1043) ve Shandong Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nin Bian Que Bilim Programı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.22 μ m mikrogözenekli membran filtreleriMilliporeSigma, Burlington, MA, ABDGSWP04700
Asetik asitCNW Technologies GmbHN3800060Kromatografi derecesi
AsetonitrilMerck KGaAI1241129242Kütle spektrometrisi derecesi
AconitineChengdu Lemeitian İlaç Teknolojisi Şirketi, Ltd.DSTDW00060220 mg, ≥ %98 saflık
Agilent ZORBAX SB-C18 kolonuÇevik2.1 & Times; 100 mm, 1.8 μ m
Amonyum asetatGENEL REAKTIFP1492146Analitik derecelendirme
BenzoylakoninChengdu Lemeitian İlaç Teknolojisi Şirketi, Ltd.DSTDB00550220 mg, ≥ %98 saflık
DiklorometanCINC Kimya Şirketi, Ltd.P3048495Analitik derecelendirme
Diklofenak Dietilemin Emülgel (DDE)Novartis Pharma Pekin Şirketi, Ltd.H20020176
Formalin çözeltisiSinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi, Ltd.10010061
Franz difüzyon hücreleriShenzhen Ruituo Analitik Aletler Şirketi, Ltd.RT806
GraphPad Prism 9.0 yazılımıGraphPad Yazılımı, Inc.Sürüm 9.0
İzopropanolGENEL REAKTIF0530240601DKromatografi derecesi
Normal salinSinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi, Ltd.SY15931
Pentobarbital sodyumSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDP3761
Arındırılmış suGuangzhou Watson's Gıda ve İçecek Şirketi, Ltd.Parti No. 20240717C
SPF Kunming fareleriChengdu Enswell Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.Lisans: SYXK (Sichuan) 2019-049
SPF Sprague-Dawley fareleriPekin Speifu Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.Lisans: SYXK (Pekin) 2024-0010
UPLC-MS/MS sistemiAgilent Technologies, Santa Clara, CA, ABDAgilent 1260 Infinity
Xueshan Jinluohan Ağrı Kesici Kaplama Ajanı (XJCA)Tibet İlaç Şirketi, Ltd.Z20010095
KsilenSinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi, Ltd.10023418

Kaynaklar

  1. Kang, S. Y., Ryu, Y. Editorial: Chronic inflammation and related diseases: From mechanisms to therapies. Int J Mol Sci. 24 (13), (2023).
  2. Liu, Y., et al. The analgesic effects of Yu-Xue-Bi tablet (YXB) on mice with inflammatory pain by regulating LXA4-FPR2-TRPA1 pathway. Chin Med. 19 (1), 104(2024).
  3. Lara, C. O., Burgos, C. F., Moraga-Cid, G., Carrasco, M. A., Yévenes, G. E. Pentameric ligand-gated ion channels as pharmacological targets against chronic pain. Front Pharmacol. 11, 167(2020).
  4. Yang, E. L., et al. Abietane-type diterpenoids from Nepeta bracteata Benth and their anti-inflammatory activity. Front Chem. 10, 944972(2022).
  5. Allen, H. N., Hestehave, S., Duran, P., Nelson, T. S., Khanna, R. Uncoupling the CRMP2-Ca(V)2.2 interaction reduces pain-like behavior in a preclinical osteoarthritis model. bioRxiv. , (2024).
  6. Ochandarena, N. E., Niehaus, J. K., Tassou, A., Scherrer, G. Cell-type specific molecular architecture for mu opioid receptor function in pain and addiction circuits. Neuropharmacology. 238, 109597(2023).
  7. Singh, S., Awasthi, R. Berberine HCl and diacerein loaded dual delivery transferosomes: Formulation and optimization using Box–Behnken design. ADMET DMPK. 12 (3), 553-580 (2024).
  8. Madawi, E. A., et al. Polymeric nanoparticles as tunable nanocarriers for targeted delivery of drugs to skin tissues for treatment of topical skin diseases. Pharmaceutics. 15 (2), (2023).
  9. Li, L., et al. Evaluation of physical and chemical modifications to drug reservoirs for stimuli-responsive microneedles. Drug Deliv Transl Res. 15 (7), 2390-2414 (2025).
  10. Wang, Q., et al. Naturally derived anti-inflammatory compounds from Chinese medicinal plants. J Ethnopharmacol. 146 (1), 9-39 (2013).
  11. Kheoane, P. S., et al. Anti-inflammatory effects of orally and topically administered nanoformulations of Malva parviflora root extracts, and Prunus persica and Cupressus sempervirens exudates. Pharmacol Res Mod Chin Med. 17, 100685(2025).
  12. Zhenping, W., Yanxiu, L., Kun, G., Lei, Z. Clinical observation of Xueshan Jinluohan plastic for relieving pain in the treatment of 66 patients with osteoarthritis. J Clin Med Pract. , (2013).
  13. Kui, S., Guiming, L. Xueshan Jinluohan odynolysis plastics for postherpetic neuralgia: Observation of clinical efficacy. China Pharm. , (2007).
  14. Hai-Yan, W., Lei, Z., Ya-Fang, Z., Xue, J. Clinical observation on Xueshan Jinluohan analgesic film in treating 66 patients with rheumatoid arthritis with syndrome of blood stasis and obstructive arthralgia. Tianjin J Tradit Chin Med. , (2014).
  15. Zhao, L., et al. Topical drug delivery strategies for enhancing drug effectiveness by skin barriers, drug delivery systems and individualized dosing. Front Pharmacol. 14, 1333986(2023).
  16. Kathe, K., Kathpalia, H. Film forming systems for topical and transdermal drug delivery. Asian J Pharm Sci. 12 (6), 487-497 (2017).
  17. Xue, M., et al. Illumination on chemical compounds from Qufeng Zhitong capsule and its potential pharmacological mechanism against rheumatoid arthritis based on UHPLC/Q-Orbitrap-MS combined with network pharmacology analysis. Int J Anal Chem. 2022, 7863435(2022).
  18. Zhao, P., et al. Aconitine and its derivatives: Bioactivities, structure-activity relationships and preliminary molecular mechanisms. Front Chem. 12, 1339364(2024).
  19. Ling-Li, L., Lan-Xia, W., Ling, N., Xi, Y. Determination of safflower glucoside I and gentiopicrin in Xueshan Jinluohan pain-relief liniment by HPLC. Chin Tradit Pat Med. 34 (3), 499-502 (2012).
  20. Xiang, G., Guo, S., Wu, C., Wang, S., Zhang, Y. Deciphering the mysteries of Aconitum pendulum: Unique identification of various processed products and characteristic chemical markers. Arab J Chem. 17 (2), 105585(2024).
  21. Yang, C., et al. Development and evaluation of a Chinese herbal gel for analgesic and anti-inflammatory effects. Pak J Pharm Sci. 36 (4 Suppl), 1261-1269 (2023).
  22. Zhang, W., et al. Nicotine in inflammatory diseases: Anti-inflammatory and pro-inflammatory effects. Front Immunol. 13, 826889(2022).
  23. Zhan, M. X., et al. Ulinastatin exhibits antinociception in rat models of acute somatic and visceral pain through inhibiting the local and central inflammation. J Pain Res. 14, 1201-1214 (2021).
  24. Liu, C., et al. Investigation of the permeation enhancer strategy on benzoylaconine transdermal patch: The relationship between transdermal enhancement strength and physicochemical properties of permeation enhancer. Eur J Pharm Sci. 138, 105009(2019).
  25. Jiang, Z., Liu, S., Li, Y., Yuan, S. Study on the absorption mechanism of glucocorticoids in the stratum corneum. Colloids Surf B Biointerfaces. 256 (Pt 1), 114984(2025).
  26. Fabbrocini, G., et al. Skin needling to enhance depigmenting serum penetration in the treatment of melasma. Plast Surg Int. 2011, 158241(2011).
  27. Costa, R., Costa Lima, S. A., Gameiro, P., Reis, S. On the development of a cutaneous flavonoid delivery system: Advances and limitations. Antioxidants (Basel). 10 (9), (2021).
  28. Li, Z., et al. Analgesic and neuroprotective effects of Baimai ointment on diabetic peripheral neuropathy. J Ethnopharmacol. 292, 115122(2022).
  29. Lei, Y., et al. Formulation and evaluation of a drug-in-adhesive patch for transdermal delivery of colchicine. Pharmaceutics. 14 (10), (2022).
  30. Sirisha Mulukuri, N. V. L., et al. Statistical modeling, optimization and characterization of andrographolide loaded emulgel for its therapeutic application on skin cancer through enhancing its skin permeability. Saudi Pharm J. 32 (6), 102068(2024).
  31. Cohen, E., Lee, Y. C. A mechanism-based approach to the management of osteoarthritis pain. Curr Osteoporos Rep. 13 (6), 399-406 (2015).
  32. Boehnke, K. F., Gagnier, J. J., Matallana, L., Williams, D. A. Cannabidiol product dosing and decision-making in a national survey of individuals with fibromyalgia. J Pain. 23 (1), 45-45 (2022).
  33. Pan, S. Y., et al. New perspectives on Chinese herbal medicine (Zhong-Yao) research and development. Evid Based Complement Alternat Med. 2011, 403709(2011).
  34. Sana, E., et al. Topical delivery of curcumin-loaded transfersomes gel ameliorated rheumatoid arthritis by inhibiting NF-κB pathway. Nanomedicine (Lond). 16 (10), 819-837 (2021).
  35. Ya-Nan, H., et al. New understanding of aconitine hydrolysis pathway: Isolation, identification and toxicity evaluation based on intermediate products. Arab J Chem. 15 (11), 104255(2022).
  36. Shakeel, F., et al. Investigating antiarthritic potential of nanostructured clove oil (Syzygium aromaticum) in FCA-induced arthritic rats: Pharmaceutical action and delivery strategies. Molecules. 26 (23), (2021).
  37. Zhou, C., et al. Benzoylaconine modulates LPS-induced responses through inhibition of toll-like receptor-mediated NF-κB and MAPK signaling in RAW264.7 cells. Inflammation. 44 (5), 2018-2032 (2021).
  38. Jin, X., et al. Aconitine – a promising candidate for treating cold and mechanical allodynia in cancer-induced bone pain. Biomed Pharmacother. 161, 114284(2023).
  39. Tao, H., et al. Pharmacokinetics and pharmacology of aminoalcohol-diterpenoid alkaloids from Aconitum species. J Ethnopharmacol. 301, 115726(2023).
  40. Teaima, M. H., et al. Enhanced transdermal delivery of bisoprolol hemifumarate via combined effect of iontophoresis and chemical enhancers: Ex vivo permeation/in vivo pharmacokinetic studies. Pharmaceutics. 13 (5), (2021).
  41. Liu, X., et al. The inhibition of PPARα protein degradation alleviates the cardiotoxicity of Tiebangchui by regulating fatty acid metabolism. J Ethnopharmacol. 348, 119838(2025).
  42. Abdella, S., Afinjuomo, F., Song, Y., Upton, R., Garg, S. Mucoadhesive buccal film of estradiol for hormonal replacement therapy: Development and in vivo performance prediction. Pharmaceutics. 14 (3), (2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Analjezik EtkilerTopikal Geleneksel in T bbPerk tan EmilimFranz Dif zyon H cresiUPLC MS MSBenzoilakoninAkonitin
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.