Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Erken Embriyoların Tek Hücrelerinde Zigotik Genom Aktivasyonunun Görselleştirilmesi

394 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70592

⸱

3 Nisan 2026

 , 
1Department of Biological Sciences, University of South Carolina

Bu makalede

Özet

Erken embriyogenezde tek hücrelerde zigotik genom aktivasyonu sırasında yeni başlayan transkripsiyonu görselleştirme yöntemlerini açıklıyoruz.

Özet

Erken embriyogenez, anneden zigotik genom aktivasyonu (ZGA) gerektiren anneden zigotik genom geçişini (MZT) gerektirir. ZGA sırasında yüzlerce ila binlerce gen transkribe edilir; bu, embriyon hayatta kalma sürecinin korunması, hücre kaderinin belirlenmesi ve germ tabaka oluşumu gibi erken embriyo gelişiminde çeşitli süreçler için gereklidir. ZGA'yı incelemedeki en büyük zorluklardan biri, erken embriyoların bireysel hücrelerinde ZGA'yı doğrudan görselleştirmek olmuştur. Burada, erken embriyoların tek hücrelerinde ZGA'yı doğrudan görselleştirme yöntemini açıklıyoruz; yeni başlayacak transkriptlerin metabolik etiketlenmesi 5-etinil uridin (5-EU) kullanılarak, yeni EU-RNA'ların floroforlarla klik kimyası ile konjugasyonu ve tüm embriyolarda konfokal mikroskopi ile görselleştirilmesi ve Xenopus laevis modeli kullanılarak oluşturulmasını sağlıyoruz. Bu yöntem, tam montajlı embriyolarda tek hücreli ZGA izlemeyi ve erken embriyogenezde ZGA'nın zaman ve mekânda heterojen başlangıcını ortaya çıkarmamızı sağladı. Diğer embriyonik sistemlerde veya dokularda tek hücre düzeyinde gen transkripsiyonu ve genom düzenlemesini incelemek için kullanılabilir.

Giriş

Erken gelişim sürecinde, embriyo anneden zigota geçiş (MZT) geçirir ve bu süreç gelişimsel kontrolü aşamalı olarak anne faktörlerinden zigotik genlere kaydırır. MZT, başlangıçta uykuda olan zigotik genomun aktivasyonunu gerektirir; bu süreç zigotik genom aktivasyonu (ZGA) olarak adlandırılır; ZGA sırasında ifade edilen genler, erken hücre kaderi belirlemesi, gastrulasyon ve eksenoluşumu 1,2 için gereklidir. Önemli olarak, ZGA tüm metazoanlarda korunur ve ZGA'nın zamanlaması sıkı kontrol altındadır, ancaktürler arasında değişiklik gösterir 3,4. ZGA'nın düzensizliği, gelişimsel kusurlardan düşük gibi embriyonik ölümlere kadar ciddi sonuçlara yol açabilir. Bu nedenle, ZGA'nın mekanizmalarını incelemek, gen düzenlemesinin temellerini anlamak için değil, aynı zamanda önemli klinik sonuçlar da taşır.

ZGA'yı incelemekte büyük zorluklardan biri, erken embriyolarda büyük ölçekli ZGA'yı doğrudan görselleştirmek ve mekanizmalarını tek hücre düzeyinde incelemek olmuştur. Bu zorluğu, ZGA sırasında yeni başlayan transkriptlerin metabolik etiketlenmesini 5-etinil üridin (5-EU) ile kullanan, ardından yeni başlayan EU-RNA'ların klima kimyası ile floroforlara konjugasyonu ve konfokal mikroskopi ile tüm embriyolarda görselleştirme yöntemi geliştirerek üstesinden geldik; bu yöntem Xenopus laevis model olarak kullanıldı. Büyük Xenopus embriyosu (~1,2 mm çapında) hücre boyutunda bir gradyan içerir ve büyük ölçekli ZGA orta blastula evrelerinde (7. aşama civarında başlangıç ve 9. evre civarında zirve) oluşur; bu da ZGA5 desenlerini incelemek için ideal bir model oluşturur. Erken Xenopus embriyolarında 5-EU etiketlemesi kullanarak, tüm montajlı erken embriyoların bireysel hücrelerinde büyük ölçekli ZGA'yı doğrudan görselleştirip niceliklerini ölçebildik; bu da bizi esas olarak hücreboyutu 5,6 ile düzenlenen yeni bir uzaylı-zamansal ZGA desenini keşfetmeye yönlendirdi.

Burada, bu yaklaşımın ayrıntılarını,optimizasyonlar 5,7 ile yapılan önceki çalışmalardan uyarlanmış olarak tanımlıyoruz; bunlar arasında yeni başlayan transkriptlerin metabolik etiketlenmesinden sonra embriyoların 5-EU ile sabitlenmesi, yeni yaranan EU-RNA'ların bir florofor ile bir tıklamareaksiyonu 8 ile konjuge edilmesi ve subhücresel belirteçler için immünboyama ile immünboyama yapılması yer alıyor. Bu yöntem, zebrafish 9,10 dahil olmak üzere diğer embriyonik sistemlere uygulanabilir veya yeni başlayantranskriptom 11'in profilini belirlemek için dizileme ile kullanılabilir; böylece çeşitli örnek ve analizlerde genel ve geniş uygulanmasını destekler. Genel olarak, bu yöntem tek hücrelerde genom düzenleyici mekanizmalarını incelemek için yeni ve önemli bir yöntem sunmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Burada açıklanan hayvan çalışmaları, Güney Carolina Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Protokole başlamadan önce hazırlık

NOT: Protokole başlamadan önce, RNase-içermeyen su kullanarak aşağıdaki çözümleri hazırlayın.

  1. 1× Tris-tamponlu tuzlu (TBS), pH 7.6: 50 mM Tris-HCl ve 150 mM NaCl hazırlayın. pH 7.6'ya ayarlayın. Oda sıcaklığında sakla. Buffer'ı iki ay içinde kullanın.
  2. 1× Tris-Buffered Salin ile Tween 20 (TBST), pH 7.6 hazırlayın: RNase içermeyen suyla hazırlanan 1× TBS (pH 7.6) ile son konsantrasyon 0,1 (vol/hacim) Triton X-100 ekleyin. Oda sıcaklığında sakla. Buffer'i bir ay içinde kullanın.
  3. %4 paraformaldehit (PFA)/1× MEM hazırlayın: 1 şişe (10 mL) %16 PFA stoku ve 4 mL 10× MEM (1000 mM 3- (N-morfolino)propansülfonik asit [MOPS] pH 7.4, 20 mM EGTA ve 10 mMMgSO 4) karıştırın. RNase içermeyen suyu 40 mL'ye ekleyin. Aliquot ve -20 °C'de sakla. Çözümü 6 ay içinde kullanın.
  4. 0.5× SSC'de %70, %50 ve %25 metanol hazırlayın: sırasıyla 3:1, 1:1 ve 1:3 oranlarında metanol ve 0,5× SSC karıştırın. Çözeltiyi altı ay içinde kullanın.
  5. Ağartma çözeltisi hazırlayın: RNase içermeyen suda %2 (vol/hacim) H, 2O2, %5 (hacim/hacim) formamid ve 0,5× SSC konsantrasyonuna ulaşmak için karıştırın. Bu çözeltiyi kullanmadan hemen önce taze hazırlayın.
  6. Bloklama çözeltisi hazırlayın: Son konsantrasyonda %10 (hacim/hacim) keçi serumu ve %0,2 (wt/vol) BSA 1× TBST ekleyin. -20 °C'de depolayın. Çözümü 6 ay içinde kullanın.
  7. BABB temizleme reaktifini hazırlayın: 1 parça benzil alkol (BA) ve 2 parça benzil benzoat (BB) karıştırın. Oda sıcaklığında sakla. Çözümü 6 ay içinde kullanın.

2. 5-EU-mikroenjeksiyonlu embriyoların sabitlenmesi

  1. 5-etinil-üridin (5-EU) 1-hücreli embriyolara mikroenjeksiyon yapmak için, daha önce belirtilen prosedürleritakip edin 11. Embriyoların, ZGA çoğu hücrede aktif olarak görülürken istenen ZGA evrelerine ulaşmasına izin verin.
  2. 5-EU mikroenjeksiyonlu embriyoları sabitlemek için önce yaklaşık 1,8 mL %4 PFA/1× MEM 2 mL scintillasyon cam şişesine ekleyin. Sonra plastik bir transfer pipeti kullanarak ~20 embriyoyu cam şişeye aktarın. Cam şişeye eklenen kültür ortamı miktarını en aza indirin.
  3. Cam şişesini en üst kısmına ek %4 PFA/1× MEM ile doldurun. Kapağıyla şişeyi kapatın; Hiçbir hava kabarcığı geride bırakmamalı.
  4. Cam şişesini bir rotatora yerleştirin ve embriyonu düşük hızda (örneğin, 10 rpm) oda sıcaklığında en az 2 saat döndürün.
  5. Fiksanti dikkatlice çıkarmak için pipet kullanın. Cam şişesini %100 metanol ile doldur. Cam şişesini rotatora koyup embriyoları düşük hızda 5 dakika boyunca döndürün.
  6. Metanolü dikkatlice çıkarın ve yeni metanol ekleyin. Rotasyon ve dehidrasyonu en az iki kez tekrarlayın, böylece embriyolar tamamen susuz kalsın.
  7. Embriyoları -20 °C sıcaklıkta metanol içinde sakla.
    NOT: Protokol burada duraklatılabilir. Embriyoların en az 2 gün metanolde kalmasına izin verin, ardından aşağıdaki adımlara geçin. Embriyolar 2 ay içinde kullanılabilir.

3. Çakmak reaksiyonu ile yeni başlayan RNA'ları florofor ile birleştirmek

  1. Embriyoları yeniden nemlendirmek için önce cam şişeden metanol alın, ardından 0,5× SSC ile %75 metanol 2 mL ekleyin ve şişeyi kapağıyla kapatın. Cam şişesini rotatora koyup embriyoları düşük hızda 5 dakika boyunca döndürün.
  2. Döndürdükten sonra cam şişedeki sıvıyı çıkarın. Yukarıdaki adımı sıralı olarak tekrarlayın; %50 metanol 0,5× SSC, %25 metanol 0,5× SSC ve 0,5× SSC kullanın. Embriyoları tamamen yeniden nemlendirmek için, son yıkamayı en az iki kez 0.5× SSC ile tekrarlayın.
  3. Cam şişeye 2 mL taze hazırlanmış ağartıcı çözeltisi (%2H, 2O2 ve %5 formamid, 0,5× SSC) ekleyin. Cam şişeni bir parça alüminyum folyonun üzerine koyun ve ardından örnekleri aşırı ısıtmayacak bir mesafede LED ışığın altına koyun.
  4. Embriyoları ışık altında ağartarak tüm pigmentler beyazlaşana kadar kullanın; bu genellikle 5–6 saat sürer. H2O2'nin O2'ye bölünmesi nedeniyle, embriyoları yüzdürebilecek küçük hava kabarcıkları oluşur. Embriyoları periyodik olarak kontrol edin (örneğin, her 30 dakikada bir) ve cam şişesini nazikçe döndürerek embriyoların ağartma çözeltisine yerleşmesini sağlayın.
  5. Ağartma tamponunu dikkatlice çıkarın. Embriyoları hızlıca durulamak için 2 ml 0.5× SSC ekleyin. Gerekirse hızlı durulamayı bir kez daha tekrarlayın.
  6. Cam şişeye 2 mL 1× TBST ekleyin. Cam şişesini rotatora yerleştirin ve embriyoları düşük hızda 1 saat döndürün. Döndürdükten sonra cam şişedeki sıvıyı çıkarın.
  7. Yukarıdaki adımı en az 5 kez tekrarlayın. Embriyoların kapsamlı yıkanmasının aşağıdaki adımlar için kritik olduğunu unutmayın.
  8. Cam şişeye 2 mL 1× TBS ekleyin. Cam şişesini rotatora koyup embriyoları düşük hızda 5 dakika boyunca döndürün. Döndürdükten sonra cam şişedeki sıvıyı çıkarın.
  9. Yukarıdaki adımı bir kez daha tekrarlayın.
  10. Karışımı, 1.5 mL mikrosantrifüj tüpünde tıklama reaksiyonu için hazırlamak için aşağıdaki reaktifleri ekleyerek 100 mM Tris-HCl (pH 8.5), 1 mM CuSO4, 25 μM tetrametilrodamin (TAMRA)-azid ve 100 mM askorbin asit nihai konsantrasyonlarına ulaşın. Reaksiyona en son askorbin asit ekleyin. İyi karıştırmak için pipet yukarı ve aşağı koyun.
  11. Cam şişedeki embriyolara 200 μL reaksiyon karışımı ekleyin. Reaksiyon karışımı hacminin tüm embriyoları şişeye batıracak kadar olduğundan emin olun. Oda sıcaklığında karanlıkta 12 saat kuluçka yapın.
  12. Tık reaksiyon karışımını dikkatlice çıkarın. Embriyolarda spesifik olmayan floresans görülebileceğine dikkat edin. Embriyoları 1× çay kaşığı ile iki kez hızlıca durulayın, ardından 1× TBST ile en az 5 kez yıkayın, yukarıda tarif edildiği gibi her 1 saatte bir çözeltiyi değiştirin.
  13. Embriyoları yıkamaya devam edin ve her 2 saatte 1× TBST değiştirin ve gece boyunca 4 °C sıcaklıkta rotatorda bırakın. Spesifik olmayan floresans neredeyse görünmediğinde yıkamayı bırakın. Tıklama reaksiyonundan kaynaklanan kalıntıların aşağı akış immünboyamaya zararlı olabileceğini unutmayın, embriyoların sonraki adımlara geçmeden önce 1–2 gün iyice yıkandığından emin olun.

4. Embriyoların subhücresel belirteçlerle immünbojenlenmesi (isteğe bağlı)

  1. Embriyoları bloklamak için, yukarıdaki son yıkama aşamasında cam şişeden 1× TBST'yi çıkarın ve 200 μL bloklayıcı çözelti ekleyin (%10 keçi serumu/%0,2 BSA/1× TBST). Embriyoları ışıktan korumak için cam şişesini bir parça alüminyum folyo ile sarın. Cam şişesini nutatora koyup embriyoları oda sıcaklığında (veya gece boyunca 4 °C'de) en az 1 saat nazikçe sallayın.
  2. Birincil antikoru (örneğin, anti-H3 antikor) %10 keçi serumu / 1× TBST'nin 200 μL'sinde 1:1.000 derecesinde seyreltin. Sulandırılmış antikoru cam şişeye ekleyin ve cam şişeyi bir parça alüminyum folyoyla sarın. Embriyoları gece boyunca 4 °C'de nutator ile düşük hızda kuluçka yapın.
  3. Antikoru cam şişeden dikkatlice çıkarın. Embriyoları iki kez hızlıca durulayın, cam şişeye 2 mL 1× TBST ekleyip çıkarın.
  4. Cam şişeye 2 mL 1× TBST ekleyin, ardından bir parça alüminyum folyoyla sarın. Cam şişesini rotatora yerleştirin ve embriyoları düşük hızda 1 saat döndürün. Döndürdükten sonra cam şişedeki sıvıyı çıkarın.
  5. Yukarıdaki adımı en az 5 kez tekrarlayın.
  6. İkincil antikoru (örneğin, tavşan Alex Fluor 488 antikoru) %10 keçi serumu / 1× TBST'nin 200 μL'sinde 1:1.000 ile seyreltin. DNA boyaması gerekirse, DNA boyasını (örneğin TO-PRO-3) ikincil antikor ile birlikte seyreltirin.
  7. Sulandırılmış antikoru cam şişeye ekleyin ve alüminyum folyoyla sarın. Embriyoları gece boyunca 4 °C'de nutator ile düşük hızda kuluçka yapın.
  8. Antikoru cam şişeden dikkatlice çıkarın. Embriyoları iki kez hızlıca durulayın, cam şişeye 2 mL 1× TBST ekleyip çıkarın.
  9. Cam şişeye 2 mL 1× TBST ekleyin, ardından bir parça alüminyum folyoyla sarın. Cam şişesini rotatora yerleştirin ve embriyoları düşük hızda 1 saat döndürün.
  10. Yukarıdaki adımı en az 5 kez tekrarlayın.

5. Konfokal görüntülemeden önce embriyoların temizlenmesi

  1. Embriyoları kurutmak için, son yıkamadan sonra cam şişedeki tamponu dikkatlice çıkarın ve 2 mL %100 metanol ekleyin. Cam şişesini alüminyum folyoya sar, bir rotatora yerleştir ve embriyoların düşük hızda 5 dakika dönmesine izin ver. Döndürdükten sonra cam şişedeki sıvıyı çıkarın.
  2. Yukarıdaki adımı en az 5 kez tekrarlayın.
  3. Embriyoları tamamen kurutmak için, yukarıdaki adımı en az 5 kez tekrarlayın ve 2 mL %100 susuz metanol kullanın.
  4. Cam şişeden mümkün olduğunca çok metanol dikkatlice çıkarın.
  5. Cam pipet kullanarak cam şişeye yavaşça 500 μL temizleyici BABB ekle. Embriyolar BABB'de yüzer ve tüm embriyoların cam şişenin dibine yerleşmesini 10 dakika bekler. Embriyoların neredeyse görünmez hale geleceğini ve BABB'yi dikkatlice çıkararak embriyolara zarar vermeyeceğini unutmayın.
  6. Yukarıdaki adımı en az 2 kez daha tekrarlayın ya da schlieren çizgileri görünmeyince tekrarlayın. Embriyoları tamamen temizlemek için, görüntülemeden önce onları BABB'de 1–2 gün boyunca tutun.
  7. VHB banttan ~1,1-1,2 mm kalınlığında (embriyo boyutuna benzer) ve ~10 mm × 10 mm boyutunda küçük bir kare (örneğin, ~5 mm × 5 mm) keserek görüntüleme odaları oluşturun, ardından bunu 24 mm × 40 mm örtü camına yapıştırın.
  8. Temizlenmiş embriyoları dikkatlice odaya aktarın, sonra başka bir örtü bardağı ile örtün. Embriyolar, her iki tarafın da görüntülenebileceği için örtülü gözlüklerin sandviçinde olacak.
  9. Konfokal mikroskop altında görüntüleme yapın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Xenopus laevis embriyoları 1-hücre evresinde 5-EU ile mikroenjeksiyon yaparken, embriyoda büyük ölçekli ZGA gerçekleştiğinde 9. evrede embriyolar sabitlendi. Embriyolar, yukarıda açıklanan protokole uygun şekilde işlendi. Embriyolardaki yeni başlayan RNA'lar tık reaksiyonuyla TAMRA-azide ile etiketlenmiş, histon H3 anti-histon H3 antikoru kullanılarak etiketlenmiş, DNA ise TO-PRO-3 ile etiketlenmiştir. Embriyolar, 10× objektif kullanılarak konfokal mikroskop altında görüntülendi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

ZGA, embriyo gelişiminin en erken aşamalarındaki en kritik geçişlerden birinitemsil eder 2,3. Burada, tam montajlı erken Xenopus embriyolarında ZGA doğrudan görselleştirilecek örneklerin hazırlanmasına yönelik ayrıntılı prosedürleri açıkladık; bunlar arasında 5-EU-mikroenjeksiyonlu embriyoların sabitlenmesi, yeni başlayan RNA'ların klik reaksiyonuyla floroforla konjuge edilmesi, tık reaksiyonundan sonra subhücre belirteç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazar, rekabet eden bir çıkar olmadığını belirtir.

Teşekkürler

Pennsylvania Üniversitesi'ndeki Matthew Good laboratuvarına eğitim için teşekkür ediyoruz. Bu çalışma, kısmen Eunice Kennedy Shriver Ulusal Çocuk Sağlığı ve İnsan Gelişimi Enstitüsü (R03HD105802) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%16 Paraformaldehit (PFA)EMS15710-SFiksatif çözümü yapmak için
20& kez; SSCMediatechMT46-020-CMAğartma çözümünü yapmak için
3D nutatasyon mikseriVWR76595-802Embriyoların nutasyonu için
9 mm Vidalı Vida Dişli Şişeler (2 mL)VWR46610-722Embriyoları işlemek için
Anti-Histon H3 antikoruAbcamAB1791İmmün boyama için
Askorbin asitSigma-AldrichA7506Tıklama tepkisini yaptığın için
Benzil alkolSigma-Aldrich305197Embriyoları temizlemek için
Benzil benzoatACROS Organics105860010Embriyoları temizlemek için
Sığır serum albümini (BSA)Sigma-AldrichA3059Engelleme çözümünü yapmak için
9 mm Vidalı Dişli Şişeler için kapaklar (2 mL)VWR46610-712Embriyoları işlemek için
Covercam (24 mm & 40 mm)VWR48393-060Görüntüleme odası yapmak için
CuSO4Sigma-Aldrich61230Tıklama tepkisini yaptığın için
Etilenebis (oksietilelenenitrilo)tetraasetik asit (EGTA)Thermo Fisher ScientificAC409915000Fiksatif çözümü yapmak için
Fiji ImageJNIHGörüntüleme işlemi için
FormamidThermo Fisher ScientificAC181090010Ağartma çözümünü yapmak için
Cam Pasteur pipetleriVWR14673-010BABB transferi için
Keçi anti-tavşan Alex Fluor 488 ikincil antikorThermo Fisher ScientificA27034İmmün boyama için
Keçi serumuAbcamAB7481Engelleme çözümünü yapmak için
Hidrojen peroksitSigma-AldrichH1009Ağartma çözümünü yapmak için
Magnezyum sülfat (MgSO4)Thermo Fisher ScientificM65-500Fiksatif çözümü yapmak için
MetanolThermo Fisher ScientificA4524Embriyoları kurutmak için
Metanol, susuzSigma-Aldrich322415Embriyoları kurutmak için
MOPSThermo Fisher ScientificAC172631000Fiksatif çözümü yapmak için
Çok modlu nutatör mikserVWR76595-812Embriyoların nutasyonu için
Plastik transfer pipetiThermo Fisher Scientific13-711-9AMEmbriyoların transferi için
Jilet bıçağıThermo Fisher Scientific18-100-970Kesme bantları için
RNase-içermeyen suThermo Fisher ScientificBP561-1Rnase-siz çözümler yapmak için
Roto-Mini PLUS (döner cihaz)VWR470313-912Embriyoları rotiflemek için
Tetrametilrodamin (TAMRA)-azidAbcamAB146486Tıklama tepkisini yaptığın için
TO-PRO-3Thermo Fisher ScientificT3605DNA boyama için
Triton X-100Sigma-Aldrich10789704001Yıkama tamponunu yapmak için
Trizma Üssü (Tris Üssü)Sigma-AldrichT1503Tris buffer'ı yapmak için
VHB 3M GPH-110GF Kasetler (45 mil.)VWR76524-608Görüntüleme odası yapmak için
Zeiss LSM 700 konfokal mikroskopZeissKonfokal görüntüleme için

Kaynaklar

  1. Kojima, M. L., Hoppe, C., Giraldez, A. J. The maternal-to-zygotic transition: Reprogramming of the cytoplasm and nucleus. Nat Rev Genet. 26 (4), 245-267 (2025).
  2. Vastenhouw, N. L., Cao, W. X., Lipshitz, H. D. The maternal-to-zygotic transition revisited. Development. 146 (11), dev161471(2019).
  3. Jukam, D., Shariati, S. A. M., Skotheim, J. M. Zygotic genome activation in vertebrates. Dev Cell. 42 (4), 316-332 (2017).
  4. Palfy, M., Joseph, S. R., Vastenhouw, N. L. The timing of zygotic genome activation. Curr Opin Genet Dev. 43, 53-60 (2017).
  5. Chen, H., Einstein, L. C., Little, S. C., Good, M. C. Spatiotemporal patterning of zygotic genome activation in a model vertebrate embryo. Dev Cell. 49 (6), 852-866.e7 (2019).
  6. Chen, H., Good, M. C. Nascent transcriptome reveals orchestration of zygotic genome activation in early embryogenesis. Curr Biol. 32 (19), 4314-4324.e7 (2022).
  7. Chen, H., Good, M. C. Imaging nascent transcription in whole-mount vertebrate embryos to characterize zygotic genome activation. Methods Enzymol. 638, 139-165 (2020).
  8. Jao, C. Y., Salic, A. Exploring RNA transcription and turnover in vivo by using click chemistry. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (41), 15779-15784 (2008).
  9. Chan, S. H., et al. Brd4 and P300 confer transcriptional competency during zygotic genome activation. Dev Cell. 49 (6), 867-881.e8 (2019).
  10. Adar-Levor, S., et al. Cytokinetic abscission is part of the midblastula transition in early zebrafish embryogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (15), e2021210118(2021).
  11. Chen, H. Quantifying nascent transcription in early embryogenesis. Methods Mol Biol. 2923, 143-162 (2025).
  12. Harland, R. M. In situ hybridization: An improved whole-mount method for Xenopus embryos. Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Tek Hücre AnaliziErken EmbriyogenezMaternal Zigotik GeçişYeni Oluşan Transkript Etiketleme5-Etinil ÜridinKlik KimyasıKonfokal MikroskopiXenopus Laevis EmbriyolarıGenom Regülasyonu
Erken Embriyoların Tek Hücrelerinde Zigotik Genom Aktivasyonunun Görselleştirilmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.