Yöntem makalesi

Pediyatrik Astım Sıçan Modeli İçin Standartlaştırılmış Bir Omurga Sıkıştırma Manipülasyon Protokolünün Oluşturulması

9 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70623

⸱

1 Ekim 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Massage, Nanjing University of Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

Bu makale, genç sıçan astım modelinde omurga sıkıştırma manipülasyonu (SP) için standartlaştırılmış bir protokol sunmaktadır. Bu protokol, OVA kaynaklı astım modelinde hava yolu inflamasyonunu, aşırı duyarlılığı ve yeniden şekillenmeyi azaltmıştır. Çalışma, mekanistik araştırmalar ve klinik uygulamalar için temel oluşturabilir.

Özet

Astım, çocuklarda en yaygın kronik inflamatuar havayolu hastalığıdır ve kronik havayolu inflamasyonu, havayolu hiperreaktivitesi (AHR) ve havayolu yeniden şekillenmesi ile karakterizedir. Geleneksel Çin tıbbında (TCM), omurga sıkıştırma manipülasyonu (SP), astım ve diğer çocukluk çağı hastalıklarının yönetiminde yaygın olarak kullanılan bir pediatrik masaj tekniğidir. 1.000 yılı aşkın bir klinik kullanım geçmişine rağmen, SP Çin dışında büyük ölçüde bilinmemektedir. Ayrıca, SP'nin altında yatan mekanizmalar yeterince tanımlanmamıştır. Bu makale, klinik uygulamalarda kullanılan temel prosedürleri tekrarlayan, SP için uygulanabilir ve standartlaştırılmış bir protokol açıklamaktadır. Protokolün uygulanması, juvenil bir astım sıçan modelinde havayolu inflamasyonunu, AHR'yi ve havayolu yeniden şekillenmesini iyileştirmiştir. Tekrarlanabilirliği artırmak için parmak basıncı, manipülasyon sıklığı, tekrarlama sayısı ve müdahale süresi dahil olmak üzere temel prosedürel parametreler standart hale getirilmiştir. Bu çalışmadaki standartlaştırılmış protokol, SP standartlaştırması ve deneysel pediatrik astımdaki temel mekanizmalar üzerine yapılacak daha ileri araştırmalar için bir referans görevi görebilir.

Giriş

Pediyatrik astım; kronik hava yolu inflamasyonu, hava yolu hiperreaktivitesi (AHR) ve hava yolu yeniden şekillenmesi ile karakterizedir1,2. Genellikle erken çocukluk döneminde başlar ve okul çağındaki çocuklar arasında en yaygın kronik hastalıktır. Güncel konvansiyonel tedaviler arasında inhale kortikosteroidler, β₂-reseptör agonistleri, lökotrien reseptör antagonistleri ve biyolojik tedaviler yer almaktadır3,4. Bununla birlikte, dünya genelinde astımlı çocukların yalnızca %44,1'i ve ergenlerin %55,4'ü yeterli hastalık kontrolü sağlayabilmektedir5. Ayrıca, sistemik veya inhale kortikosteroidlerin tekrarlayan uygulamaları, kontrolü kötü olan astımlı çocuklarda büyüme geriliğine katkıda bulunabilir6.

Geleneksel bir dış terapi olan masaj (Çin'de tuina olarak da bilinir) maliyet etkin, iyi tolere edilen ve çocuklar için genellikle güvenli kabul edilen bir yöntemdir. Masaj, hem Çin'de hem de Batılı ülkelerde pediatrik astımın önlenmesi ve tedavisi için uzun süredir kullanılmaktadır7. Sistematik incelemeler ve meta-analizler, pediatrik astım yönetiminde masaj terapisinin olumlu sonuçlarını bildirmiştir7,8. Omurga sıkıştırma manipülasyonu (SP), geleneksel Çin pediatrik masajında klasik ve yaygın olarak uygulanan bir tekniktir. Geleneksel Çin tıbbı (TCM) teorisine göre, sırt boyunca Governor Vessel (GV) ve Bladder (BL) meridyenlerinin uyarılması Zang-Fu organ fonksiyonlarını modüle ederek sistemik homeostazı korur ve hastalığı önler veya tedavi eder9,10,11. Önceki çalışmalar, SP'nin çocuklardaki atopik semptom ve belirtileri iyileştirmekle kalmayıp, genç bir sıçan astım modelinde kronik havayolu inflamasyonunu da azalttığını göstermiştir12,13,14. Klinik kullanımının yanı sıra SP, yaygın olarak ev tabanlı bir sağlık hizmeti müdahalesi olarak uygulanmaktadır11,15. Bin yılı aşan klinik geçmişine rağmen, SP Çin dışında nispeten bilinmemektedir ve temel mekanizmaları kapsamlı bir şekilde araştırılmamıştır. Bu nedenle, SP'nin mekanizmalarını aydınlatmak ve daha geniş bilimsel değerlendirme ve uygulanmasını desteklemek için standartlaştırılmış hayvan modelleri gereklidir.

Çeşitli çalışmalar, hayvan araştırmaları için standardize edilmiş masaj protokolleri belirlemiştir. Önceki bir çalışma, kardiyovasküler eksitatuar yanıtları inhibe etmek için yaklaşık 20 cm/s hızda ve 100 mm H₂O basınçta standardize edilmiş bir sırt veya karın sıvazlama protokolü geliştirmiştir16. Daha yakın zamanda, mekanik bir stimülatör kullanılarak GV boyunca tekrarlayan tek yönlü spinal taktil stimülasyonun, otizmin ergen fare modelinin medial prefrontal korteksinde sinaptik yeniden şekillenmeyi teşvik ettiği gösterilmiştir. Bu protokolde, rahatsızlık veya yaralanmaya neden olmadan yaklaşık 15,3 cm/s hızla yaklaşık 30–50 g değerinde orta düzeyde bir basınç uygulanmıştır. Stimülasyon, 21 günlük bir süre boyunca günde iki kez 10 dk boyunca kaudal bölgeden enseye (oksipital bölge) tek yönlü bir şekilde uygulanmıştır17. Ancak, manuel manipülasyon mekanik stimülasyondan temelden farklıdır ve şu anki hiçbir mekanik cihaz SP'nin karakteristik hareketlerini yeniden üretememektedir. Ayrıca, birkaç çalışma astım ve diğer pediatrik bozuklukların sıçan modellerinde SP mekanizmalarını araştırmış olsa da18, hayvan çalışmalarında SP için gerekli olan stimülasyon kuvvetini ve hızını tanımlayan standardize bir protokol oluşturulmamıştır. Bu nedenle, tekrarlanabilirliği artırmak ve mekanistik araştırmaları kolaylaştırmak için standardize bir SP protokolünün geliştirilmesi esastır.

Alerjik astım, pediatrik astımın en yaygın fenotipidir19. Buna bağlı olarak, ovalbumin (OVA) duyarlılığı ve tetiklemesi, pediatrik astımın deneysel bir modelini oluşturmak için en yaygın kullanılan yöntemlerdir20. Sıçanlar, daha büyük vücut boyutlarının manuel manipülasyonu kolaylaştırması nedeniyle masaj temelli müdahalelerin araştırılması için özellikle uygundur. Ayrıca sıçan modelleri; Th2 ağırlıklı inflamasyon, AHR ve havayolu yeniden yapılanması dahil olmak üzere alerjik astımın temel patolojik özelliklerini güvenilir bir şekilde yeniden üretir21.

Önceki çalışmalar, SP'nin OVA sensitizasyonu ve challenge sonrası genç sıçanlarda hava yolu inflamasyonunu hafiflettiğini göstermiştir11,14. Bu nedenle, mevcut çalışma, SP'nin altında yatan mekanizmalara yönelik gelecekteki araştırmaları kolaylaştırmak amacıyla pediatrik astım genç sıçan modeli için standart bir SP protokolü oluşturmayı hedeflemiştir. Bu standartlaştırılmış protokol, pediatrik astım hayvan modellerinde SP üzerine yapılacak mekanistik çalışmalar ve gelecekteki translasyonel araştırmalar için tekrarlanabilir bir deneysel çerçeve sunmaktadır.

Protokol

Bu çalışma, Nanjing Çin Tıbbı Üniversitesi'nin Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (No. 202306A032). Tüm prosedürler, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzlarına ve ARRIVE 2.0 kılavuzlarına uygun olarak yürütülmüştür.

45–55 g ağırlığında, 3 haftalık otuz erkek spesifik patojenle arındırılmış (SPF) Sprague-Dawley (SD) sıçan kullanıldı. Sıçanlar, standart yem ve suya serbest erişimle, 22 ± 2 °C sıcaklıkta ve %30–40 bağıl nemde, 12 saatlik ışık/karanlık döngüsü altında bir SPF bariyer tesisinde (her kafeste üç adet olacak şekilde) barındırıldı. Örneklem büyüklüğü, genç sıçan astım modellerini kullanan önceki çalışmalara11,14 dayanarak, 3R ilkesinin azaltma (reduction) prensibi uyarınca hayvan kullanımını minimize etmek için belirlendi. 7 günlük bir alıştırma döneminin ardından başlangıç vücut ağırlığı kaydedildi ve her sıçana benzersiz bir tanımlama numarası verildi. Sıçanlar başlangıç vücut ağırlıklarına göre tabakalandı ve ardından her tabaka içinde bir rastgele sayı tablosu kullanılarak 1:1:1:1:1 tahsis oranıyla (grup başına n = 6) beş gruptan birine atandı: kontrol (CN), astım (AS), astım + SP (AS+SP), astım + metilprednizolon (AS+MP) ve astım + SP + metilprednizolon (AS+SP+MP). Randomizasyon dizisi ve grup tahsisi, sonraki müdahalelerde veya sonuç değerlendirmelerinde yer almayan bir araştırmacı tarafından oluşturuldu.

Dahil edilme kriterleri; 3 haftalık, başlangıç ağırlığı 45–55 g olan, normal solunum paterni sergileyen ve düzenli fiziksel aktivite gösteren sağlıklı erkek SPF SD sıçanlardır. Hastalık belirtileri gösteren veya vücut ağırlığında sapma olan sıçanlar çalışma dışı bırakılmıştır. >aklimatizasyon sırasında kohort ortalamasından %20 sapma göstermeleri veya müdahale aşaması tamamlanmadan ölmeleri durumunda [çıkarıldılar]. Prosedür boyunca laboratuvar önlüğü, tek kullanımlık maske ve eldiven dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipman kullanılmıştır. Hayvan karkasları ve dokuları çift katmanlı biyotehlike torbalarına yerleştirilmiş ve − derecede saklanmıştır.20 °C imhadan önce. Kontamine olmuş altlıklar biyo-tehlikeli katı atık olarak imha edilmiş ve kesici-delici aletler onaylı, delinmeye dayanıklı kesici-delici alet konteynerlerine atılmıştır. Terminal doku toplama işlemi için %20 üretan (5 mL/kg, i.p.) uygulanmış ve derin anestezi, pedal çekilme ve kornea reflekslerinin yokluğu ile doğrulanmıştır.

1. Genç sıçan astım modelinin oluşturulması

NOT: Genç sıçan astım modelini oluşturmak için aşağıdaki prosedür uygulanmıştır12.

  1. OVA/Al(OH)₃ süspansiyonunu her enjeksiyondan hemen önce hazırlayın. 2 mg Grade V OVA'yı doğrudan 1 mL %4 Al(OH)₃ jel içinde çözün ve homojen bir süspansiyon elde edilene kadar vorteksleyin.
    NOT: Enjeksiyondan önce süspansiyonun homojen olduğundan emin olun. Çökelme meydana gelirse, karışımı yeniden süspande etmek için kısa süreli vorteksleyin. Süspansiyonu buz üzerinde saklayın ve hazırladıktan sonra 2 saat içinde kullanın.
  2. Deneysel 1., 8. ve 15. günlerde 1 mL OVA/Al(OH)₃ süspansiyonunu intraperitoneal olarak enjekte edin. CN grubundaki sıçanlara aynı takvime göre 1 mL steril normal salin (%0,9 NaCl) enjekte edin.
  3. Deneysel 21. günden 42. güne kadar ultrasonik nebulizatör kullanarak sıçanlara %2'lik Grade II OVA çözeltisi ile challenge uygulayın. Sensitizasyon sonrası alevlenmeyi indüklemek için son iki ardışık challenge'ı %3 OVA ile gerçekleştirin.
  4. 3 haftalık bir süre boyunca gün aşırı 30 dakika nebulizasyon uygulayın. Her bir sıçanı, ultrasonik nebulizatöre bağlı sızdırmaz bir maruziyet odasına tek tek yerleştirin (ultrasonik frekans: 1,7 MHz ± %10; nebulizasyon hızı: ≥3 mL/dak; partikül çapı: <5 µm).
    NOT: Hapşırma, solunum sırasında baş sallama, ağız açık nefes alma, abdominal kas kontraksiyonu ve hırıltı gözlemlerinde bulunarak astım modelinin başarıyla kurulduğunu doğrulayın.

2. Finger TPS sistem yazılımının çalıştırılması ve uygulanması

  1. Sensör fişini devre kartı arayüzüne dikey olarak yerleştirin. Yeterli çalışma esnekliği sağlamak için devre kartını yaklaşık 40 cm uzunluğunda bir USB-C kablosuyla bilgisayara bağlayın.
  2. Elleri ve parmak koruyucuları dezenfekte edin. Operatörün sağ başparmağını ve işaret parmağını sensör donanımlı parmak kılıflarına yerleştirin. Esnek sensörleri parmak uçlarının merkezine konumlandırın ve ciltle sıkı, kırışıksız bir temas sağladığından emin olun.
  3. Kuvvet ölçümü için sistem kalibrasyonunu ve kalite kontrolünü gerçekleştirin
    1. Her operatör eğitim oturumundan önce sensörleri ve bağlantı kablolarını inceleyin ve cihazın düzgün bağlandığını doğrulayın.
    2. Ölçüm birimi olarak “N” seçeneğini belirleyin ve ölçüm aralığını −3.5 ile 32 N olarak ayarlayın.
    3. Sensörlere herhangi bir dış kuvvet uygulanmadığından emin olun. Sistemi sıfırlamak için “Tare” fonksiyonunu çalıştırın.
    4. Yüksüz temel hattı 30 s boyunca kaydedin. Kuvvet ölçümüne yalnızca temel hat varyasyonu 0.02 N altında kaldığında başlayın.
    5. Sensör konumu veya kılıf sıkılığı her ayarlandığında veya temel hat sapması gözlemlendiğinde sıfırlama prosedürünü tekrarlayın.
    6. Operatör eğitimi sırasında uygulanan kuvveti izlemek için Finger TPS sistemini kullanın. Belirlenen hız ve frekansı koruyarak, geri sıvazlama (back stroking) sırasında 5 ± 0.6 N ve SP sırasında 12 ± 2 N kuvvet sağlayın.
    7. Kuvvet eğrisini yalnızca temel hat stabil kaldığında, sinyal kesintisi veya doygunluk oluşmadığında ve uygulanan kuvvet belirtilen hedef aralıklar içinde kaldığında kabul edin.
  4. Dinamik kuvvet eğrisini izleyerek geri sıvazlama manipülasyonunu ve SP'yi gerçekleştirin. Stabil bir kuvvet eğrisi elde edilene kadar parmak kılıflarının sıkılığını gerektiği gibi ayarlayın.
  5. Gerçek zamanlı kuvvet eğrisini izleyerek manipülasyonları pratik edin. Geri sıvazlama sırasında 5 ± 0.6 N hedef kuvvet ve yaklaşık 5 cm/s hız; SP sırasında ise 6–8 tekrar/dak frekansta 12 ± 2 N hedef kuvvet sağlayın. Operatörü, ancak ardışık beş uygulama denemesi manipülasyon tekniği, parmak kuvveti ve SP frekansı kriterlerini karşıladıktan sonra yetkin sayın.
    NOT: Operatörü ancak hedef kuvvet ve hareket parametreleri tutarlı bir şekilde sağlandıktan sonra kalifiye sayın. Sıçanların ek taktil stimülasyonuna maruz kalmasını önlemek için resmi SP prosedürünü gerçekleştirmeden önce parmak koruyucuları çıkarın. Bununla birlikte, bu protokol SP çalışması için referans olarak benimsenirken, bu çalışmadaki operatörler arası tekrarlanabilirlik testlerinin hiçbiri dikkate alınmamalıdır.

3. Omurga sıkıştırma manipülasyonunun ayrıntılı prosedürü

  1. Sıçanı bir avuç içinde nazikçe yüzüstü pozisyonda tutun. Başparmak ve işaret parmağıyla ön koltuk altlarını nazikçe çevreleyerek ön üyeleri destekleyin ve ön üyelerin doğal bir şekilde sarkmasına izin verin. Sıçanın sakin kaldığından ve solunumunun düzenli olduğundan emin olun. Ses çıkarma, çırpınma veya dışkılama meydana gelirse, sıçanı bırakın ve yeniden konumlandırmadan önce 2–3 dk boyunca alışmasına izin verin (Şekil 1).
  2. Sağ işaret, orta ve yüzük parmaklarını kullanarak, omuz bölgesinden kuyruk köküne kadar Governor Vessel (GV) boyunca sırtı iki kez okşayın. SP öncesinde sıçanı sakinleştirmek için yaklaşık 5 N kuvvet uygulayın.
  3. Sağ başparmağı posteriora, işaret ve orta parmakları ise anteriore konumlandırarak kuyruk kökündeki deriyi sıkıştırın. Deriyi nazikçe kaldırın, ardından parmakları bükerek omurga boyunca kraniale, Dazhui (GV14) noktasına doğru ilerletin. Belirgin rahatsızlık belirtilerine neden olmaktan kaçının. Yaklaşık 12 N parmak basıncıyla manipülasyonu 6–8 tekrar/dk frekansında gerçekleştirin. Deneyin 1. gününden 21. gününe kadar 15 tekrar ve 22. günden 44. güne kadar 25 tekrar yapın.
  4. Tedavi oturumunu sonlandırmak ve sıçanı sakinleştirmek için Adım 3.2'de açıklanan sırt okşama prosedürünü tekrarlayın.
    NOT: Geleneksel Çin tıbbı (TCM) teorisine göre, GV ve BL meridyenlerini uyarmak için SP omurga boyunca uygulanır (Şekil 2). GV, kuyruk kökünden Dazhui (GV14) noktasına kadar dorsal orta hat boyunca uzanırken, BL meridyeni vücut boyutuna bağlı olarak orta hattın yaklaşık 3–6 mm lateralinde yer alır22. Dazhui (GV14), yedinci servikal vertebra ile birinci torakal vertebra arasındaki orta noktada bulunur. Klinik tedavi rejimini taklit etmek için yaşla birlikte SP tekrar sayısını artırın. Sırt okşama sırasında sıçanın rahat olduğundan, sakin nefes aldığından ve savunma davranışı göstermediğinden emin olun. SP sırasında, stres kaynaklı idrar yapma, dışkılama, şiddetli çırpınma, ses çıkarma veya kaçma girişimleri olmaksızın, hafif sırt kamburluğu ve bıyıkların açılmasını bekleyin.

4. Müdahale protokolleri

  1. CN grubundaki sıçanların herhangi bir hastalığa özgü müdahale almayacak şekilde atanmasını sağlayın. Elle tutma etkilerini kontrol etmek için sıçanları AS+SP grubuyla aynı süre boyunca nazikçe tutun. Metilprednizolon enjeksiyonları için kullanılan takvimin aynısıyla intraperitonal normal salin (1 mL/kg) uygulayın.
  2. AS grubundaki sıçanlara OVA sensitizasyonu ve challenge uygulayın. CN grubu için kullanılan aynı elle tutma ve salin enjeksiyon kontrol prosedürlerini uygulayın.
  3. AS+SP grubundaki sıçanlara OVA sensitizasyonu ve challenge uygulayın. Model indüksiyonundan önce günde bir kez SP protokolünü uygulayın.
  4. AS+MP grubundaki sıçanlara OVA sensitizasyonu ve challenge uygulayın. Her OVA challenge'ından 30 dk önce intraperitonal enjeksiyon yoluyla metilprednizolon (10 mg/kg; salin içinde hazırlanmış 2 mg/mL) uygulayın.
  5. AS+SP+MP grubundaki sıçanlara AS+MP grubu için kullanılan prosedürlerin aynısını uygulayın. Metilprednizolon enjeksiyonundan önce günde bir kez SP protokolünü uygulayın.
    NOT: AS+SP ve AS+SP+MP grupları hariç, spesifik olmayan elle tutma etkilerini kontrol etmek için diğer tüm gruplara aynı elle tutma prosedürlerini uygulayın. Tüm enjeksiyonlar için steril tek kullanımlık şırıngalar kullanın ve iğneleri delinmeye dayanıklı tıbbi atık konteynerlerine atın. Viseral yaralanma riskini minimize etmek için intraperitonal enjeksiyon iğnesini abdominal orta hattın yan tarafına yerleştirin. SP uygulanmayan gruplarda taktil stimülasyonu kontrol etmek için, her gün SP grubuyla aynı müdahale sırasında sıçanları dört kez okşayın. SP grupları için kullanılan sırt okşama prosedürünün aynısını uygulayın.

Sonuçlar

Vücut ağırlığı, genç sıçanlarda büyümenin önemli bir göstergesidir. Deneysel tedavi öncesinde beş grup arasında vücut ağırlığı açısından anlamlı bir fark gözlemlenmemiştir. Astım modeli indüksiyonunu takiben, AS grubu CN grubuna göre anlamlı derecede daha düşük vücut ağırlığı sergilemiştir (P = 0.000; Şekil 3A). AS grubu ile karşılaştırıldığında, AS+SP grubu anlamlı derecede daha yüksek bir vücut ağırlığı gösterirken (P = 0.008; Şekil 3A), AS+MP grubu anlamlı bir fark göstermemiştir (P = 0.975; Şekil 3A). Benzer şekilde, AS+SP+MP grubu AS grubuna kıyasla vücut ağırlığında anlamlı bir artış göstermemiştir (P = 0.925; Şekil 3A). Sonuçlar, SP'nin genç sıçanlarda pediatrik astım modellemesi ve metilprednizolon (MP) tedavisi sırasında kilo alımını desteklediğini göstermektedir.

OVA challenge sonrasında, CN grubundaki sıçanlarda nefes darlığı, hapşırma, baş sallama, ağızdan nefes alma, abdominal kas kasılması veya hırıltı dahil olmak üzere herhangi bir solunum sıkıntısı belirtisi gözlenmemiştir. Buna karşılık, AS grubundaki sıçanlar; nefes darlığı, hapşırma, baş sallama ve ağızdan nefes alma dahil olmak üzere pediatrik astımanın tipik belirtilerini göstermiştir. Bu klinik belirtiler, SP, MP veya bunların kombine uygulamasıyla yapılan tedavi sonrası belirgin şekilde hafiflemiştir.

Deneysel astımlı genç sıçanlarda SP'nin anti-inflamatuar etkilerini değerlendirmek için, daha önce açıklanan prosedürlere12 uygun olarak %20 üretan (5 mL/kg, i.p.) ile derin anestezi uygulandıktan sonra akciğer dokuları toplandı. Kronik havayolu inflamasyonunu değerlendirmek için hematoksilin ve eosin (HE) boyaması ve pro-inflamatuar gen ekspresyonu analizi gerçekleştirildi; havayolu yeniden şekillenmesini (remodeling) değerlendirmek için ise Masson boyaması kullanıldı. Havayolu aşırı duyarlılığı (AHR), geliştirilmiş duraklama (Penh) ölçülerek tüm vücut pletismografisi (WBP) ile değerlendirildi.

Rutin HE ve Masson boyama prosedürlerinin ardından23, akciğer kesitleri hematoksilin ve eosine boyandı ve modifiye edilmiş bir 0–4 ölçeği kullanılarak peribronşiyoler inflamasyon açısından skorlandı24. Astım model grubu, CN grubuna göre anlamlı derecede daha yüksek inflamasyon skorları sergiledi (P = 0.000). AS grubu ile karşılaştırıldığında; AS+SP, AS+MP ve AS+SP+MP gruplarının tamamında inflamasyon skorlarında anlamlı derecede azalma görüldü (P = 0.005, P = 0.006 ve P = 0.000, sırasıyla) ve üç tedavi grubu arasında anlamlı bir fark saptanmadı (Şekil 4A, Tablo 1).

Hava yolu yeniden şekillenmesi, Masson boyaması kullanılarak bronşiyoller etrafındaki kolajen birikiminin miktarının belirlenmesiyle değerlendirilmiştir. Kolajen birikimi, bazal membran çevresine normalize edilmiş kolajen-pozitif alan olarak ifade edilmiştir (µm2/µm). AS grubunda, CN grubuna göre anlamlı derecede daha yüksek kolajen birikimi görülmüştür (P = 0.000). CN grubu ile karşılaştırıldığında, AS+SP ve AS+MP grupları orta derecede daha yüksek kolajen birikimi göstermiş (P = 0.050 ve P = 0.051, sırasıyla), ancak AS grubuna göre anlamlı derecede daha düşük kolajen birikimi sergilemiştir (her iki karşılaştırma için P = 0.001). AS+SP+MP grubu, CN grubundan anlamlı bir fark göstermemiş (P = 0.105), ancak AS grubuna kıyasla anlamlı derecede azalmış kolajen birikimi sergilemiştir (P = 0.001). Üç müdahale grubu arasında anlamlı bir fark gözlenmemiştir (Şekil 4B, Tablo 1).

Finger TPS sistemi kullanılarak elde edilen temsilci kuvvet eğrileri Şekil 5'te gösterilmiştir. Operatör eğitimi sırasında, geri sürtme (back stroking) sırasında kaydedilen kuvvet eğrisi yaklaşık 5 N düzeyinde sabit kalırken (Şekil 5A), SP sırasında kaydedilen kuvvet eğrisi, uygulanan kuvvetin önceden tanımlanmış hedef aralıkta tutulmasıyla birlikte, kıstırma manipülasyonuna karşılık gelen tekrarlayan kuvvet pikleri göstermiştir (Şekil 5B). Bu kuvvet profilleri, operatör eğitimi sırasında kullanılan standartlaştırılmış kuvvet özelliklerini ortaya koymaktadır.

Genel deneysel zaman çizelgesi Şekil 6'da özetlenmiştir. 7 günlük aklimatizasyon süresini takiben, belirtilen takvime göre OVA sensitizasyonu gerçekleştirilmiş ve ardından tekrarlayan OVA challenge'ları uygulanmıştır. Belirlenen müdahale süresi boyunca AS+SP ve AS+SP+MP gruplarına SP uygulanırken, ilgili tedavi gruplarında OVA challenge'ından önce metilprednizolon uygulanmıştır. WBP değerlendirmesi ve doku toplama işlemleri son challenge'dan sonra gerçekleştirilmiştir (Şekil 6).

Tüm vücut pletismografisi, ciddi bir yaralanmaya veya strese neden olmadan, uyanık ve serbest durumdaki kemirgenlerde Penh değerlerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır25. Penh, solunum zamanlaması ve çevresel faktörlerden etkilenen dolaylı bir gösterge olsa da, hava yolu direncinin doğrudan ölçümü anestezi ve trakeostomi gerektirir ve bu işlemler hava yolu fizyolojisini değiştirebilir26. Buna rağmen, Penh'in akciğer direncinin invaziv ölçümleriyle korelasyon gösterdiği bildirilmiştir27. Son OVA uyarısından yirmi dört saat sonra sıçanlar serbest odacıklara yerleştirilmiş ve sırasıyla aerosolize PBS'ye, ardından 3,125, 6,25, 12,5, 25 ve 50 mg/mL konsantrasyonlarda asetilkoline (Ach) maruz bırakılmıştır. Her bir aerosol uyarısı 2 dk sürmüş ve ardından 5 dakikalık bir kayıt süresi uygulanmıştır28. AS grubu, CN grubuna göre anlamlı derecede daha yüksek Penh değerleri sergilemiş, buna karşın SP, MP ile tedavi veya bunların kombine uygulaması Penh değerlerini anlamlı derecede düşürmüştür (P = 0,005; Şekil 3B). Bu sonuç, SP'nin astımlı sıçanlarda solunum fonksiyonunu iyileştirdiğini göstermiştir; bu bulgunun, doğrudan hava yolu direnci (Raw) ölçümleriyle birlikte daha fazla doğrulanması gerekmektedir.

İnterlökin-4 (IL-4) Th2 aracılı eozinofilik inflamasyonu başlatırken, tümör nekroz faktörü-α (TNF-α) AHR ve hava yolu yeniden şekillenmesine katkıda bulunur; her ikisi de pediatrik astım patogenezinde merkezi roller oynar29. Hava yolu inflamasyonunu daha ayrıntılı değerlendirmek için, akciğer dokularındaki IL-4 ve TNF-α ekspresyon seviyeleri kantitatif ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR) ile belirlenmiştir. CN grubu ile karşılaştırıldığında, AS grubunda IL-4 ve TNF-α ekspresyonu anlamlı derecede artış göstermiştir (P = 0,000 ve P = 0,000, sırasıyla; Şekil 3C,D). Her iki sitokinin ekspresyonu SP veya MP tedavisi sonrası anlamlı derecede azalmış ve SP ile MP kombinasyonu en büyük azalmayı sağlamıştır (P = 0,001 ve P = 0,000, sırasıyla; Şekil 3C,D).

figure-results-1
Şekil 1: Sıçanlarda omurga sıkıştırma manipülasyonunun (SP) ayrıntılı prosedürü. (A) Sıçanı operatörün avucunda yüzüstü pozisyonda tutun. (B) Kuyruk kökündeki deriyi sıkıştırın. (C) Sıkıştırılan deriyi kaldırın. (D) Parmakları çevirerek omurga boyunca kranial yönde Dazhui (GV14) noktasına doğru ilerletin. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Sıçanlarda Governor Vessel (GV), Bladder (BL) meridyeninin ve Dazhui (GV14) noktasının şematik gösterimi. Diyagram; omurga sıkıştırma manipülasyonu için hedef bölgeler olan GV, BL meridyeni ve Dazhui (GV14) noktalarının anatomik konumlarını göstermektedir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-3
Şekil 3Omurga sıkıştırma manipülasyonunun genç sıçanlarda vücut ağırlığı, hava yolu aşırı duyarlılığı ve pulmoner enflamatuar faktörler üzerindeki etkileri. (A) Deneysel gruplar arasında vücut ağırlığının karşılaştırılması. (B) Geliştirilmiş duraklama (Penh) değerlerinin karşılaştırılması. (C) Akciğer dokusunda interlökin-4'ün (IL-4) göreli gen ekspresyonu. (D) Tümör nekroz faktörünün göreceli gen ekspresyonu-α (TNF-α) akciğer dokusunda. Veriler ortalama olarak sunulmuştur ± SD. *P < 0,05 ve **P < 0.01 CN grubu ile karşılaştırıldığında; #P < 0,05 ve ##P < AS grubuna kıyasla 0,01. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-4
Şekil 4: Akciğer dokusundaki temsili histopatolojik değişiklikler. (A) Peribronşiyolar inflamasyonu gösteren hematoksilin ve eozin (HE) boyaması. (B) Kollajen birikimini ve havayolu yeniden şekillenmesini gösteren Masson trikrom boyaması. Görüntüler 200× büyütmede elde edilmiştir. Ölçek çubukları = 100 µm. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-5
Şekil 5: Finger TPS sistemi kullanılarak gerçekleştirilen omurga sıkıştırma manipülasyonu sırasında kaydedilen temsili kuvvet eğrileri. (A) Geriye doğru sıvazlama manipülasyonu sırasında kaydedilen kuvvet eğrisi. (B) Omurga sıkıştırma (SP) manipülasyonu sırasında kaydedilen kuvvet eğrisi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-6
Şekil 6: Deneysel zaman çizelgesi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

GrupHE İnflamasyon SkoruKolajen Alanı/Bazal Membran Çevresi (μm²/μm)
Siyanür (CN)1.10 ± 0.252.50 ± 0.43
AS2.32 ± 0.50**4.23 ± 0.53**
AS+SP1.66 ± 0.27##3.12 ± 0.56*##
AS+MP1.67 ± 0.31##3.12 ± 0.50*##
AS+SP+MP1.34 ± 0.27##3.01 ± 0.33##

Tablo 1: Akciğer histopatoloji skorları. Peribronşiyolar inflamasyon HE boyama kullanılarak değerlendirildi ve hava yolu yeniden şekillenmesi, bazal membran çevresine normalize edilmiş kolajen pozitif alanı (µm2/µm) olarak nicelendirildi. Veriler ortalama ± SD (n = grup başına 5) olarak sunulmuştur. *P < 0.05 ve **P < 0.01 CN grubuna göre; #P < 0.05 ve ##P < 0.01 AS grubuna göre.

Tartışma

Ovalbumin (OVA) sensitizasyonu ve maruziyeti, pediatrik astımı incelemek için en yaygın kullanılan deneysel modellerden biridir30,31. Mevcut çalışma, standartlaştırılmış spine-pinching manipülasyon (SP) protokolünün kronik havayolu inflamasyonunu, havayolu hiperreaktivitesini (AHR) ve havayolu yeniden şekillenmesini hafiflettiğini göstermiştir. Önceki klinik çalışmalar, SP dahil olmak üzere geleneksel pediatrik masajın, çocuklardaki astım ve diğer alerjik hastalıkları iyileştirdiğini göstermiştir11,13,32. Ayrıca, önceki hayvan çalışmaları, SP'nin bağırsak mikrobiyotasını modüle ederek genç sıçan astım modellerinde havayolu inflamasyonunu azalttığını ortaya koymuştur12,15. Mevcut çalışma, standartlaştırılmış bir SP protokolü uygulamasının genç sıçan astım modelinde kronik havayolu inflamasyonunu, AHR'yi ve havayolu yeniden şekillenmesini iyileştirdiğini daha detaylı bir şekilde göstermiştir. Dahası, SP, metilprednizolonun (MP) büyüme geciktirici yan etkilerini azaltırken terapötik etkilerini artırmıştır.

SP, Çin'de 1.000 yılı aşkın süredir uygulanmaktadır ve astım ile diğer çocukluk çağı hastalıklarının önlenmesi ve tedavisinde en yaygın kullanılan pediatrik masaj tekniklerinden biri olmaya devam etmektedir12,15,33,34,35. Uzun süreli klinik uygulama geçmişine rağmen, SP Çin dışında nispeten az bilinmektedir. Geleneksel Çin tıbbı teorisine göre, GV ve BL meridyenleri omurga boyunca veya omurgaya komşu olarak uzanır ve iç organlarla iletişim kurar. Sonuç olarak, GV ve BL meridyenlerinin uyarılmasının viseral fonksiyonları düzenlediğine, immün aktiviteyi modüle ettiğine ve hastalık direncini artırdığına inanılmaktadır. SP; cildin omurga boyunca sıkıştırılması, kaldırılması, döndürülmesi ve ilerletilmesinden oluşur ve böylece hem GV hem de BL meridyenlerini uyarır. Bu manipülasyon, cilt ve altındaki fasyaya eş zamanlı olarak kompresyon ve tensiyon kuvvetleri uygulayarak orta düzeyde mekanik stimülasyon sağlar. Klinik uygulamada, stimülasyonu azaltmak ve hasta konforunu artırmak için SP öncesinde ve sonrasında rutin olarak nazik sırt sıvazlama manipülasyonu uygulanır. Sırt sıvazlama, sırt boyunca aşağıya doğru nazik vuruşlardan oluşur ve pediatrik masajda yaygın olarak kullanılır. Bu nedenle; klinik uygunluk, fizibilite, basitlik ve tekrarlanabilirlik ilkelerine dayanarak, standartlaştırılmış protokol hem SP hem de sırt sıvazlama manipülasyonunu içermektedir.

Önceki çalışmalar, SP'nin immünomodülatör mekanizmalar aracılığıyla hem akciğerlerdeki hem de hipokampüsteki inflamasyonu azalttığını göstermiştir12,36. Pediyatrik astım, immün disregülasyonla yakından ilişkili olan Th2-ağırlıklı inflamasyon ile karakterize edilir37. Daha önceki deneysel çalışmalar, 100–150 mmH₂O (7–11 mmHg) basınçta ve yaklaşık 3 cm/s hızda uygulandığında el veya fırça ile okşamanın farelerde immün yanıtları düzenlediğini bildirmiştir38. Ek olarak, klinik bir çalışma, yaklaşık 1–10 cm/s hızla gerçekleştirilen okşamanın daha keyifli algılandığını bildirmiştir39. Bu bulgulara dayanarak, standartlaştırılmış protokol, uygun bir yatıştırıcı etki elde etmek için 5 ± 0.6 N sırt okşama kuvveti ve 5 cm/s hız benimsemiştir. SP tekrarlarının basıncı, frekansı ve sayısı, önceki çalışmalara12,15 ve diğer araştırma gruplarının ilgili incelemelerine40,41 göre belirlenmiştir. Önceki çalışmalar, kemirgenlerde kardiyovasküler inhibisyon sağlamak veya sinaptik yeniden şekillenmeyi teşvik etmek için ya manuel sırt okşamayı (20 cm/s; yaklaşık 100 mmH₂O) ya da mekanik GV stimülasyonunu (30–50 g; yaklaşık 15.3 cm/s) standartlaştırmış olsa da, manuel SP, taktil ve propriyoseptif geri bildirime dayanan farklı bir biyomekanik müdahaledir ve bu nedenle mevcut mekanik cihazlarla tamamen kopyalanamaz. Bu ayrım, alerjik astım için taktil müdahalelere yönelik gelecekteki translasyonel araştırmalar için uygulayıcı tarafından standartlaştırılmış protokollerin önemini vurgulamaktadır.

Çince yayınlanmış çok sayıda çalışma, SP'nin immün fonksiyonu modüle ettiğini ve inflamasyonu baskıladığını göstermiştir42,43,44. Ancak, mevcut bilgilerinye göre, yazarın araştırma grubu dışındaki hiçbir çalışma, pediatrik astım hayvan modellerinde belirli bir hastalığı araştırmak için SP'nin basıncını ve hızını standardize etmemiştir. Önceki çalışmalar, genç sıçan astım modellerinde bağırsak mikrobiyotasının modülasyonu, kısa zincirli yağ asitlerinin artan üretimi, solunum kası fonksiyonlarının (örneğin diyafram gücü) iyileştirilmesi ve hava yolu inflamasyonu ile pulmoner disfonksiyonun hafifletilmesi dahil olmak üzere SP'nin altında yatan mekanizmaları incelemiştir11. Mevail çalışma, etki mekanizmalarını kapsamlı bir şekilde açıklamanın ziyade, öncelikle standardize bir protokol oluşturmaya odaklanmıştır. Hem sırt sıvazlama hem de SP sırasında uygulanan kuvveti standardize etmek için yüksek hassasiyetli bir taktil basınç ölçüm ve kayıt sistemi kullanılmış; manipülasyonların hızı ve frekansı ise önceki çalışmalara göre standardize edilmiştir. Sıçanlar, vücut boyutlarının stabil tutuşu ve SP'nin manuel uygulamasını kolaylaştırmasının yanı sıra klinik prosedüre yakın olması nedeniyle seçilmiştir. Sırt sıvazlama, pediatrik klinik uygulamada olduğu gibi tek elin parmakları kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Sıçanların daha küçük vücut boyutları nedeniyle, klinik tekniğin temel biyomekanik özellikleri korunarak SP, her iki el yerine tek elin üç parmağıyla uygulanmıştır. Bu modifikasyon, sıçan modelinde GV ve BL meridyenlerinin stimülasyonunu yakından yeniden üretmektedir. Taktil basınç ölçüm sistemleri arasında ölçüm parametreleri farklılık gösterebileceğinden, manuel manipülasyonun sırt sıvazlama ve SP sırasında sıçanların davranışsal tepkilerine dayanarak standardize edilmesi, yalnızca cihaza özgü kuvvet ölçümlerine güvenmekten daha yüksek reprodüksiyobilite sağlayabilir. Önceki çalışmalar ayrıca, SP önemli ölçüde daha büyük terapötik etkiler üretse de, sırt sıvazlamanın CUMS ile indüklenmiş genç sıçanlarda antidepresan etkiler gösterdiğini kanıtlamıştır9. Sonuç olarak, mevcut çalışmada gözlemlenen faydalı etkiler, SP'nin birincil etkilerine ek olarak sırt sıvazlama manipülasyonunun katkısını kısmen yansıtıyor olabilir.

Bazı kısıtlamaların kabul edilmesi gerekmektedir. İlk olarak, örneklem büyüklüğü nispeten küçüktü, bu da bulguların sağlamlığını ve genellenebilirliğini sınırlayabilir. İkinci olarak, mevcut çalışma öncelikle standart bir SP protokolünün oluşturulmasına ve doğrulanmasına odaklanmıştır; bu nedenle, temel biyolojik mekanizmaları kapsamlı bir şekilde betimlemek yerine yalnızca sınırlı sayıda mekanistik sonucu incelemiştir. Buna bağlı olarak, BALF inflamatuar hücre sayımları, OVA-spesifik IgE seviyeleri, Th2 sitokin profillemesi (örneğin IL-5, IL-13) ve hücre içi sinyal yolu analizini içeren mekanistik doğrulama yapılmamıştır. Bu sonuç, SP'nin astımlı sıçanlarda solunum fonksiyonunu artırdığını göstermiştir; ancak bu bulgu, doğrudan hava yolu direnci (Raw) ölçümleriyle birlikte daha fazla doğrulanmaya ihtiyaç duymaktadır. Üçüncü olarak, tüm işlemler tek bir eğitimli operatör tarafından gerçekleştirilmiş ve farklı eğitimli operatörler arasındaki tekrarlanabilirlik değerlendirilmemiştir. Son olarak, sırt okşamanın bağımsız etkilerini SP'nin etkilerinden ayırt etmek için sadece sırt okşama yapılan bir müdahale grubu dahil edilmemiştir. Gelecekteki çalışmalar daha büyük örneklemler içermeli, operatörler arası tekrarlanabilirliği değerlendirmeli, ek kontrol grupları eklemeli ve SP'nin terapötik etkilerinin altında yatan moleküler mekanizmaları daha ayrıntılı araştırmalıdır.

Açıklamalar

Yazarlar, beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması olmadığını bildirmişlerdir. Taslak hazırlama sürecinde, bu makalenin hazırlanmasında hiçbir yapay zeka aracı kullanılmamıştır. Yazarlar, nihai makalenin eksiksizliğinin ve doğruluğunun tüm sorumluluğunu üstlenmektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğal Bilimler Vakfı (proje yürütücüsü Xiong Ying, No.81973970, Nanjing Çin Tıbbı Üniversitesi aracılığıyla) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar; mekan, enstrüman ve ekipman sağladıkları için Pediatri Enstitüsü'ne, Jiangsu Çocuk Sağlığı ve Çin Tıbbı Anahtar Laboratuvarı'na ve Eğitim Bakanlığı Akupunktur ve Tıp Araştırmaları Anahtar Laboratuvarı'na teşekkür ederler.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
4%Al(OH)3 jelShanxi ZHHC Biomedical Technology Co., LTD, ChinaBS010YOK
Ach(asetilkolin)Sigma, USAA2251YOK
Adhezyon mikroskop lamlarıCitotest, Jiangsu, ChinaREF.188105
P/N.80312-3161		YOK
Biyotehlike atık torbalarıNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.HJ421-2008YOK
Biyolojik doku kurutma makinesiKedee, Zhejiang, ChinaKD-HIIYOK
Biyolojik doku gömme makinesiKedee, Zhejiang, ChinaKD-BMYOK
Biyolojik doku yayma makinesiKedee, Zhejiang, ChinaKD-PIYOK
Buxco Araştırma SistemleriDSI Buxco,Wilmington, NC,USAPFTYOK
Ayarlanabilir karıştırıcı(MX-S)DLAB, Beijing, China8031102000YOK
Mikroplaka santrifüjüScilogex, USASCI-CF2800M E050S11B000798YOK
Temiz tezgah Sanfa, Shanghai, ChinaSF-CJ-1AYOK
Konvansiyonel santrifüjDLAB, Beijing, ChinaD100BE: 9031001011YOK
Tek kullanımlık steril eldivenlerShanghai Kebang Medical Latex Equipment Co., Ltd.22010739https://www.sh-kebang.com/products_detail/6.html
Elektronik teraziJinghai, ShanghaiYP3001NYOK
Elektronik teraziJinghai,  Shanghai, ChinaYP3001NYOK
Parmak TPS sistemiPressure Profile System, Inc, USAKullanılabilir yazılım versiyonu: Chameleon 2018https://pressureprofile.com/body-pressure-mapping/finger-tps
 Floresan optik mikroskopOlympus, Tokyo, JapanDP70YOK
Yüksek basınçlı buhar sterilizatörüTomy, JapanSX-500YOK
Yüksek hızlı dondurucu santrifüjEppendorf5418RYOK
Masson trikrom boyama kitiSolarbio, Shanghai, ChinaG1340YOK
Mikropipetler ve steril uçlareppendorfJ48931Lhttps://www.eppendorf.com/hk-en/Products/Liquid-Handling/All-Pipettes-Dispensers-Automated-Liquid-Handlers/Eppendorf-Reference2-p-PF-222171
MikrotomlarLeica, GermanRM2145YOK
MP(metilprednizolon sodyum süksinat)Shyndec, Shanghai, ChinaH20070007YOK
NanoDrop Lite spektrofotometreThermo Fisher Scientific, USAnd-ndl-pr-2yrw-cccYOK
 Nebülizasyon kontrolörüEmka, FranceVENT4:14554YOK
Opak mühürlü zarflarNanjing Kongdu printing Co., Ltd201701YOK
OVA (Grade II)Sigma, USAA5253YOK
OVA (Grade V)Sigma, USAA5503YOK
PCR kitiYeasen, Shanghai, China11201ES08YOK
Delinmeye dayanıklı kesici-delici alet konteyneriNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.KMT-15YYOK
Ters transkripsiyon kitiBio.vazyme, Nanjing, ChinaR323YOK
Küçük SantrifüjlerHettich, GermanMIKRO 220R D-78532YOK
Steril kuru pamuk toplarıZHENDE, Zhejiang, China202203121Bhttps://www.zhende.com/index.php?g=product&m=index&a=info&id=13
TrizolBio.vazyme, Nanjing, ChinaR771YOK
Ultra soğuk depolama dondurucusuThermo Fisher Scientific, USA950GP-ULTSYOK
Ultrasonik NebülizatörJiangsu Yuwell Medical Instruments Co., Ltd., China402AIYOK
ViiATM7 Real-Time PCR SistemiLife TechnologiesTM , Singapore278882021YOK
Tüm vücut pletismografıScrieq, Canada1185162,1184031,1185898FV-FXM1-01,FX1 ekspiratuar kartuş :FV-FXM1 ET,FX1 inspiratuar kartuş :FV-FXM1-IA

Kaynaklar

  1. Bateman ED, et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 2008;31(1):143-178.
  2. Lizano-Barrantes C, et al. Impact of treatment adherence and inhalation technique on asthma outcomes of pediatric patients: A longitudinal study. Front Pharmacol. 2024;15:1340255.
  3. Vähätalo I, et al. Long-term adherence to inhaled corticosteroids and asthma control in adult-onset asthma. ERJ Open Res. 2021;7(1).
  4. Yılmaz İ, et al. Biological therapy management from the initial selection of biologics to switching between biologics in severe asthma. Tuberk Toraks. 2023;71(1):75-93.
  5. García-Marcos L, et al. Asthma management and control in children, adolescents, and adults in 25 countries: A Global Asthma Network phase I cross-sectional study. Lancet Glob Health. 2023;11(2):e218-e228.
  6. Kelly HW, et al. Effect of inhaled glucocorticoids in childhood on adult height. N Engl J Med. 2012;367(10):904-912.
  7. Wu J, Yang XW, Zhang M. Massage therapy in children with asthma: A systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2017:5620568.
  8. Yue QJ, et al. Effect of pediatric massage in the treatment of chronic persistent asthma in children: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. J Hainan Med Univ. 2019;25:1260-1266.
  9. Wu R, et al. Traditional pediatric massage enhanced hippocampal GR, BDNF, and IGF-1 expressions and exerted an antidepressant effect in an adolescent rat model of CUMS-induced depression. Neuroscience. 2024;542:47-58.
  10. Lin L, Yu L, Zhang S, Liu J. The positive effect of mother-performed infant massage on infantile eczema and maternal mental state: A randomized controlled trial. Front Public Health. 2022;10:1068043.
  11. Lin L, et al. Traditional pediatric massage enhanced skeletal muscle mass in OVA-exposed adolescent rats via regulating the SCFAs-FFAR2-IGF-1/AKT pathway. Front Microbiol. 2024;15:1492783.
  12. Xiong Y, Noraas AU, Yang X. The effect of chiropractic manipulation on atopic symptoms and gut microbiota in children with atopy. J Li Shizhen Tradit Chin Med. 2017;28:2440-2442.
  13. Liu Y, Gu Y, Xiong Y. Wrist-ankle acupuncture combined with spine-pinching manipulation for allergic rhinitis in children: A randomized controlled trial. World J Acupunct Moxibustion. 2019;29:259-263.
  14. Zhu Y, et al. Chiropractic therapy modulated gut microbiota and attenuated allergic airway inflammation in an immature rat model. Med Sci Monit. 2020;26:e926039.
  15. Lu W, Fang M, Yang X. Observation on the influence of parent-child massage on children's psychological and behavioral problems. Chin Med Mod Distance Educ China. 2025;23(4):75-78.
  16. Lund I, Lundeberg T, Kurosawa M, Uvnäs-Moberg K. Sensory stimulation (massage) reduces blood pressure in unanesthetized rats. J Auton Nerv Syst. 1999;78(1):30-37.
  17. Chen YN, et al. Repetitive unidirectional spinal tactile stimulation engages microglial BMAL1 pathways to promote synaptic remodeling in the medial prefrontal cortex of adolescent VPA-exposed mice. J Neuroinflammation. 2025;23(1):23.
  18. Gorrell LM, et al. Spinal manipulation characteristics: A scoping literature review of force-time characteristics. Chiropr Man Therap. 2023;31(1):36.
  19. Papadopoulos NG, Miligkos M, Xepapadaki P. A current perspective of allergic asthma: From mechanisms to management. Handb Exp Pharmacol. 2022;268:69-93.
  20. Nials AT, Uddin S. Mouse models of allergic asthma: Acute and chronic allergen challenge. Dis Model Mech. 2008;1(4-5):213-220.
  21. Martin JG, Tamaoka M. Rat models of asthma and chronic obstructive lung disease. Pulm Pharmacol Ther. 2006;19(6):377-385.
  22. QDV, et al. Construction of an acupoint atlas for experimental rats. Acupunct Res. 2025;50(11):1339-1351.
  23. Dong L, et al. Hypoxic hUCMSC-derived extracellular vesicles attenuate allergic airway inflammation and airway remodeling in chronic asthma mice. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):4.
  24. Muhamad SA, et al. Intranasal administration of Lignosus rhinocerotis (Cooke) Ryvarden (Tiger Milk Mushroom) extract attenuates airway inflammation in a murine model of allergic asthma. Exp Ther Med. 2019;17(5):3867-3876.
  25. Vaickus LJ, Bouchard J, Kim J, Natarajan S. Assessing pulmonary pathology by detailed examination of respiratory function. Am J Pathol. 2010;177(4):1861-1869.
  26. Glaab T, Taube C, Braun A, Mitzner W. Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice. Respir Res. 2007;8(1):63.
  27. Lomask M. Further exploration of the Penh parameter. Exp Toxicol Pathol. 2006;57(Suppl 2):13-20.
  28. Leung SY, et al. Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine (SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling. J Pharmacol Exp Ther. 2006;319(2):586-594.
  29. Ogulur I, et al. Type 2 immunity in allergic diseases. Cell Mol Immunol. 2025;22(3):211-242.
  30. Lee JH, Son SH, Kim NJ, Im DS. NJK14047 suppression of the p38 MAPK pathway ameliorates OVA-induced allergic asthma during sensitization and challenge periods. Biomol Ther (Seoul). 2023;31(2):183-192.
  31. Li J, et al. Establishment of a juvenile mouse asthma model induced by postnatal hyperoxia exposure combined with early OVA sensitization. Heliyon. 2024;10(1):e23291.
  32. Wei J, Yang X. Efficacy of pediatric tuina on spleen deficiency syndrome and allergic constitution in children with bronchial asthma during the remission period: A study of 29 cases. J Pediatr Tradit Chin Med. 2023;19(3):86-89.
  33. Gao J, He J. Fifty-eight cases of allergic rhinitis treated with spine-pinching manipulation and acupuncture in Switzerland. World J Acupunct Moxibustion. 2010;20(3).
  34. Hu Y, et al. Clinical study of Yupingfeng Powder combined with spine-pinching manipulation for cough variant asthma in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2024;53(2):369-371.
  35. Yao D, Zhang Y, Deng L. Effect of spine-pinching manipulation on asthma control in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2020;49(2):157-158.
  36. Zhang X, et al. Traditional pediatric massage exerted an antidepressant effect and activated the IGF-1/NRF2 pathway in CUMS-exposed adolescent rats. J Neuroimmunol. 2025;400:578554.
  37. Lan J, McCray A, Brown E, Eddens T. Early-life viral infections and asthma: New cells and ideas. Curr Opin Pediatr. 2025;37(6):597-605.
  38. Major B, et al. Massage-like stroking boosts the immune system in mice. Sci Rep. 2015;5:10913.
  39. Ackerley R, Carlsson I, Wester H, Olausson H, Backlund Wasling H. Touch perceptions across skin sites: Differences between sensitivity, direction discrimination, and pleasantness. Front Behav Neurosci. 2014;8:54.
  40. Li Q, et al. Experimental study on the effects of different durations of spine-pinching manipulation on immune function in rats with Wei Qi deficiency. Jiangsu J Tradit Chin Med. 2017;49(9):75-77.
  41. Tang Q, Shen L, Lin L. Effects of spine-pinching manipulation with different stimulation intensities on hippocampal inflammation-related factors and behavioral disorders in autistic rats. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(7):1264-1270.
  42. Li Z, et al. Effects of spine-pinching therapy on thoracic duct lymph flow and mesenteric lymphatic microcirculation in rats with spleen deficiency. China J Tradit Chin Med Pharm. 2025;40(8):4246-4250.
  43. Ma W, et al. Effects of spine-pinching intervention on anorexia in young rats based on the 2-AG/CB1/AMPK1 pathway. Shaanxi J Tradit Chin Med. 2025;46(2):159-164.
  44. Tang Q, et al. Effects of spine-pinching manipulation on BDNF and CREB protein expression in different brain regions of rats with autism spectrum disorder. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(2):259-266.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Sıçan Astım ModeliHavayolu İnflamasyonuHavayolu HiperreaktivitesiHavayolu Yeniden ŞekillenmesiPediyatrik MasajGeleneksel Çin TıbbıProtokol StandardizasyonuDeneysel Astım

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.