Bu çalışma, İstanbul, Türkiye'deki Marmara Üniversitesi Diş Hekimliği Fakültesi Restoratif Diş Hekimliği Bölümü'nde yapılmıştır. İnsan veya hayvan denek dahil değildi; bu nedenle kurumsal etik onay gerekmiyordu. Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir. Şekil 1 , bu çalışmada kullanılan deneysel iş akışını göstermektedir. Numune hazırlama işlemi ilk olarak disk şeklindeki kompozit örnekler (8 mm × 2 mm) üretmek için gerçekleştirildi. Boyamadan önce temel renk ölçümleri alındı. Tüm örnekler daha sonra renk değişikliği için 12 gün boyunca bir kahve çözeltisine daldırıldı ve ardından lekeleme sonrası renk ölçümleri yapıldı. Boyandıktan sonra, örnekler deneysel gruplara ayrıldı ve beş farklı çözelti (kontrol olarak damıtılmış su [DW] dahil) ya oral irrigator kullanılarak ya da doğrudan daldırma ile uygulandı; eşdeğer bir simüle edilmiş klinik süre için. Son olarak, tedavi sonrası genel renk değişimini değerlendirmek için renk ölçümleri yapıldı.

Şekil 1: Renk kararlılığı değerlendirmesi için deneysel iş akışı. Deneysel prosedürü gösteren akış diyagramı; örnek hazırlama, temel renk ölçümü (T0), kahve boyama (12 gün), boyama sonrası renk ölçümü (T1) ve statik daldırma veya oral irrigator destekli teslimatla ağız gargarası uygulaması dahildir. Renk değişikliklerini hesaplamak için nihai renk ölçümleri (T2) alındı (ΔE₁, ΔE₂ ve ΔE₃). Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Örnek Hazırlığı
Bu çalışmada iki nanohibrit, tek tonlu reçine kompozit kullanıldı: Charisma Diamond One (DO) ve Vittra APS Unique (VU). Malzeme özellikleri Tablo 1'de sunulmaktadır.
| Reçine Kompozit | Üretici | Tip | Reçine Matrisi | Dolgu Bileşimi / Boyutu | Dolgu İçeriği (wt% / hacim) | Parsel Numarası |
| Karizma Elmas Bir (DO) | Kulzer, Almanya | Nanohibrit | UDMA; TCD-DI-HEA; TEGDMA | B₂O₃–F–Al₂O₃–SiO₂; silika; TiO₂; floresan ve metalik oksitler; organik pigmentler (5–20 μm) | 81 / 64 | N010209 |
| Vittra APS Unique (VU) | FGM, Brezilya | Nanohibrit | UDMA; TEGDMA | Zirkonyum ve silika dolgu maddeleri (200 nm) | 82 / 72 | 230921 |
Tablo 1: Bu çalışmada kullanılan reçine kompozitlerin bileşimi ve özellikleri. Değerlendirilen tek tonlu nanohibrit reçine kompozitlerin malzeme türü, üreticisi, reçine matrisi bileşimi, dolgu içeriği (hacim %/hacim) ve parti numaraları. Kısaltmalar: UDMA = üretan dimetakrilat; TEGDMA = trietilen glikol dimetakrilat; TCD-DI-HEA = trisiklodekan dimetanol diakrilat; TiO₂ = titanyum dioksit; YbF₃ = itterbium triflorür; B₂O₃–F–Al₂O₃–SiO₂ = boro-floro-alüminosilikat.
Disk şeklindeki örnekler (çapı 8 mm ve kalınlığı 2 mm) standart prefabrik silikon kalıplar kullanılarak üretildi. Reçine kompozit, düz uçlu plastik dolgu aleti kullanılarak kalıbın içine tek bir adımla yerleştirildi ve kalıp duvarlarına uyarlanarak tam doldurulmasını ve boşluk oluşumunu en aza indirdi. Şeffaf polyester şeritler hem üst hem alt yüzeylere yerleştirildi ve malzeme, cam plakalar (çimento cam) arasına sıkıştırıldı; böylece düz ve düzgün yüzeyler elde edildi ve standart kalınlık sağlandı. Her numunenin nihai kalınlığı dijital kaliper kullanılarak ölçülüp (doğruluk: ±0,01 mm) ve hedef kalınlığından sapan örnekler (2,00 ± 0,05 mm) atıldı ve yeniden yapıldı. Örnekler, standart aydınlatma koşullarında 20× büyütme ile stereomikroskop altında incelendi. Her örneğin üst yüzeyinin tamamı, hava boşlukları, gözeneklilikler veya düzensizlikler dahil olmak üzere yüzey kusurları açısından sistematik olarak tarandı. Bu büyütmede tespit edilebilir bir kusur gösteren örnekler dışlanıp değiştirildi.
Polimerizasyon, 1000 mW/cm 2 hızında çalışan ve 385–515 nm dalga boyu aralığında bir ışık kürleme ünitesi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Cihazın çıkış yoğunluğu, numune hazırlığından önce bir radyometre kullanılarak doğrulandı. Işık kürleme ünitesi, kürleme ucu polyester şeritle doğrudan temas halinde ve numune yüzeyine dik (90°) olarak tutulacak bir destek sistemi kullanılarak konumlandırıldı; böylece kürlenme süreci boyunca tutarlı konumlandırıldı. Her örnek, üst yüzeyden 20 saniye ışıkla kürlenmiş, ardından aynı koşullarda alt yüzeyden hemen 20 saniye sonra kürlenmiştir.
Polimerizasyondan sonra, numune yüzeyleri diş ünitesi su spreyi kullanılarak 10 saniye boyunca DW altında durulandı. Sprey, örnek yüzeyine dik bir açıda (90°) uygulandı; destek tabanlı bir konumlandırma düzeni kullanıldı; bu düzende örnek ile sprey ucu hizalandı. Sprey ucu ile örnek yüzeyi arasındaki mesafe 5 cm'ye ayarlandı ve bir ölçüm aracı kullanılarak kontrol edildi. Örnekler, DW içeren kapalı cam kaplarda 23°C ± 1°C'de 24 saat boyunca 24 saat boyunca saklandı. Buharlaşmayı önlemek için kapalı tutuldu ve ışığı en aza indirmek için bir dolaba yerleştirildi. Her numunenin her iki yüzeyinde de bitiş ve parlatma, alüminyum oksit aşındırıcı diskler (kaba, orta, ince ve süper ince) kullanılarak sıralı sırayla gerçekleştirildi ve düşük hızlı bir el parçası 10.000 rpm'de çalıştı. Her disk, 20 saniye boyunca tüm yüzey boyunca tutarlı bir dönme hareketi kullanılarak uygulanarak eşit bir işlem sağlandı. Tüm bitirme ve parlatma işlemleri, operatörle ilgili değişkenliği en aza indirmek için aynı operatör tarafından gerçekleştirildi. Son parlatma, aynı çalışma koşullarında (10.000 rpm) bir elmas parlatma sistemi kullanılarak her adım başına 20 saniye ve aynı hareket desenini takip ederek gerçekleştirildi. Tüm örnekler, DW'de 23°C ± 1°C arasında ek 24 saat saklandı ve böylece reaksiya vermeyen bileşenlerin difüzyonu ve standart koşullarda denge sağlanması için boyama yapıldı.
Örneklem büyüklüğü, G*Power ile yapılan güç analiziyle belirlendi; daha önce yayımlananverilere dayanarak anlamlılık seviyesi (α), %95 kuvvet ve etki boyutu (f) 0.401 oldu. Minimum gerekli toplam örneklem büyüklüğü 160 örnek olarak hesaplandı; bu da alt grup başına 8 örnek anlamına geliyordu. Aşırı değerlerin bir oranını hariç tutarak etkili örneklem büyüklüğünü azaltan, kesilmiş ortalamaları içeren sağlam istatistiksel yöntemlerin kullanılmasını ve hazırlık ile analiz sırasında potansiyel örnek kaybını telafi etmek için, alt grup başına örneklem büyüklüğü 10'a çıkarıldı ve toplamda 200 örnek elde edildi.
Kahve Boyama Prosedürü
Kahve boyama çözeltisi, 3 g hazır kahve tozunun 50 mL DW içinde çözülerek 100°C'ye ısıtılması sağlandı. Çözelti 30 saniye karıştırıldı ve konsantrasyon bütünlüğü sağlanana kadar tam çözünürlüğü sağlandı. Daha sonra çözelti kapalı bir kaba aktarılır, kontrollü bir oda ortamına (23°C ± 1°C) yerleştirilir ve kullanımdan önce hedef sıcaklığa kadar soğumasına izin verilirdi. Her örnek, tutarlı numune-çözelti oranı ve tam daldırma sağlamak için kapalı silindirik cam şişelerde (iç çap: yaklaşık 15 mm; yükseklik: yaklaşık 40 mm) 5 mL kahve çözeltisine batırıldı. Numune başına 5 mL hacm, maruz kalma koşullarını standartlaştırmak ve tüm örneklerin kap duvarlarıyla temas etmeden boyama çözeltisi ile tamamen kaplanmış olmasını sağlamak için seçildi. Tüm örnekler, 12 günlük daldırma süresi boyunca sıcaklık kontrollü bir odada 23°C ± 1°C arasında saklandı. Şişeler, buharlaşmayı önlemek için sıkıca kapalı tutuluyor ve ışık maruziyeti ile dış kirlenmeyi en aza indirmek için kapalı bir dolaba yerleştiriliyordu. Bu daldırma protokolü yaygın olarak kullanılmakta olup, 12 günlük daldırma süresinin in vitro koşullar altında yaklaşık bir yıl klinik boyama ileeşleştiği bildirilmiştir 3. Tutarlı boyama koşullarını korumak ve mikrobiyal büyümeyi en aza indirmek için, kahve çözeltisi sabit 24 saat aralıklarla yenilendi. Her gün aynı saatte, örnekler temiz cımbızla şişelerden çıkarıldı, 5 saniye boyunca DW ile nazikçe duruldu ve 5 mL çözelti içeren yeni, temiz şişelerde taze hazırlanmış kahve çözeltisine aktarıldı. Kablar işlem boyunca kapalı tutuldu ve tüm adımlar tüm örnekler için tutarlı laboratuvar koşullarında gerçekleştirildi.
Ağız Durulama Uygulaması
Tüm örnekler, ölçümlerin izini mümkün kılmak için kahve boyamadan önce benzersiz kimlik numaralarıyla etiketlendi. Boyama prosedürünün ardından, örnekler Microsoft Excel'te oluşturulan bilgisayar tarafından oluşturulan bir rastgele dizisi kullanılarak deneysel gruplara rastgele dağıtıldı; bu sırada örnekler rastgele sıralandı ve gruplar arasında eşit şekilde dağıtıldı. Her örnek, uygulama prosedürleri sırasında ayrı ayrı işlendi. Çalışmaya ticari olarak sunulan dört ağız çalkalama çözümü dahil edildi: Colgate Plax Whitening + Charcoal (CP), Crest 3D White (CW), Listerine Fresh Burst (LF) ve Sensodyne Pronamel (SP), ayrıca kontrol çözümü olarak DW. Bunlar sırasıyla CP, CW, LF, SP ve DW olarak kısaltıldı. Ağız çalgulama çözeltilerinin bileşimi ve aktif bileşenleri Tablo 2'de sunulmaktadır.
| Ağız Durulması Tipi | Kısaltma | Üretici | Aktif Maddeler |
| Alkol içeren ağız çalkalama | LF | Johnson & Johnson, Birleşik Krallık | Alkol, mentol, okaliptol, timol, metil salisilat, benzoik asit, poloksamer 407, sodyum benzoat, sorbitol çözeltisi, su, aroma |
| Kömür içeren ağız çalkalanması | CP | Colgate-Palmolive, ABD | Su, sorbitol, propilen glikol, PEG-40 hidrojenlenmiş hint yağı, aroma, sodyum sakarin, mentol, öjenol, sodyum florür, kömür tozu |
| Hidrojen peroksit bazlı ağız çalgarası | CW | Procter & Gamble, ABD | Su, gliserin, hidrojen peroksit, propilen glikol, sodyum heksamefosfat, poloksamer 407, sodyum sitrat, aroma, sodyum sakkarin, sitrik asit |
| Florür içeren ağız çalkalama | SP | GSK, Birleşik Krallık | Su, sorbitol, propilen glikol, potasyum nitrat, PEG-60 hidrojenlenmiş hint yağı, poloksamer 407, aroma, sodyum florür, sitrik asit, sodyum sakarin |
| Distım su (kontrol) | DW | Yok | Yok |
Tablo 2: Çalışmada kullanılan ağız çalkalama çözeltileri bileşimi. Ağız çalkalama türleri, kısaltmaları, üreticileri ve değerlendirilen çözümlerin başlıca etkin bileşenleri. Kontrol koşulu olarak damıtılmış su hizmet verdi. Kısaltmalar: LF = alkol içeren ağız alakası; CP = kömür içeren ağız alakası; CW = hidrojen peroksit bazlı ağız garulası; SP = florür içeren ağız alakası; DW = damıtılmış su.
Deneysel tasarım üç bağımsız değişken içeriyordu: kompozit tip (DO ve VU), ağız gargaralaması tipi (CP, CW, LF, SP ve DW) ve uygulama yöntemi (doğrudan daldırma ve irrigatör destekli uygulama). "-D" eki doğrudan daldırmayı, "-I" ise sulatıcı destekli uygulamayı gösterir. Buna göre, her alt grup çözüm türü ve uygulama yönteminin (örneğin, CP-D ve CP-I) birleşimiyle tanımlanmıştır. Deneysel grupların dağılımı Tablo 3'te özetlenmiştir.
| Bileşik Tip | Grup No. | Irrigator Grubu | Doğrudan Daldırma Grubu |
| YAP | 1 | CP-I | CP-D |
| 2 | CW-I | CW-D |
| 3 | SP-I | SP-D |
| 4 | LF-I | LF-D |
| 5 | DW-I | DW-D |
| VU | 6 | CP-I | CP-D |
| 7 | CW-I | CW-D |
| 8 | SP-I | SP-D |
| 9 | LF-I | LF-D |
| 10 | DW-I | DW-D |
Tablo 3: Örneklerin kompozit tipi, ağız durulanası ve uygulama yöntemine göre gruplanması. Deneysel gruplar, kompozit tip (DO ve VU), ağız durulama tipi ve uygulama yöntemi (oral irrigator veya doğrudan daldırma) temelinde tanımlandı. Kısaltmalar: DO = bileşik materyal DO; VU = bileşik malzeme VU; CP = kömür içeren ağız alakası; CW = hidrojen peroksit bazlı ağız garulası; SP = florür içeren ağız alakası; LF = alkol içeren ağız alakası; DW = damıtılmış su; I = oral irrigator uygulaması; D = doğrudan daldırma.
Statik daldırma yöntemi için, her örnek standart maruz kalma koşullarını sağlamak için tutarlı boyutta kapalı silindirik cam şişelerde atanan 5 mL ağız gargaralanı çözeltisine bireysel olarak batırıldı. Seçilen hacim, her örneğin kap duvarlarıyla temas etmeden tamamen dalmasını sağlıyordu. Tüm örnekler, 23°C ± 1°C sıcaklıkta, sıcaklık kontrollü bir odada toplam 12 saat boyunca depolandı. Bu süre, rutin ağız garalaması kullanımının kümülatif etkisini temsil etmek üzere seçilmiştir; bu, her uygulamada günde iki kez ağız garalamasına maruz kalmaya karşılık gelir ve in vitro koşullarda yaklaşık bir yıllık klinik kullanım anlamına gelmektedir17. Bu yöntem pasif daldırma içerdiğinden, herhangi bir akış hızı veya cihaz tarafından tanımlanan çıkış ayarı uygulanmıyordu; Standartlaştırma, tüm örnekler için aynı çözelti hacmi (5 mL), kap boyutları ve maruz kalma koşulları korunarak sağlandı. Tüm örnekler, gruplar arası değişkenliği en aza indirmek için aynı laboratuvar koşulları ve zaman çizelgesi altında işlendi. Ağız irrigatörü uygulaması için, örnek konumlandırma ve sulama parametrelerini standartlaştırmak için özel destek sistemine monte edilmiş ağız irrigatörü kullanıldı. Ağız irrigatör cihazı, numune yüzeyine dik bir yönelim sağlamak için kurulum içinde sabitlenmiştir. Her örnek, sulama sırasında hareketi önlemek için tasarlanmış bir tutucuya yerleştirilmiş ve stabilize edilmiştir. Bu kurulum, her uygulama boyunca irrigatör ucu ile örnek arasında sabit bir mekansal ilişki sağlamak için kullanıldı. İrigator ucu, her uygulama boyunca örnek yüzeyine göre sabit ve sabit bir konumda tutulurdu, yanal veya süpürme hareketi olmadan. Numune tutucu ile irrigator ucu paralel eksenler üzerinde hizalanmış, irrigatör ucu ile numune yüzeyi arasındaki mesafe dijital bir kaliper kullanılarak 2 mm'ye ayarlanmıştır. Bu konfigürasyon, tüm örnekler için tutarlı konumlandırma, yön ve mesafe sağladı. İriyatör, cihazda yaklaşık 55–65 psi olarak üretici tanımladığı basınç aralığı sağlayan 3 seviyeye karşılık gelen orta basınç ayarında çalıştırılırdı. Her kullanımdan önce, cihaz ayarları bu seviyede tutarlı çalışmayı sağlamak için kontrol edildi. Cihaz doğrudan nicel bir akış hızı değeri sağlamadığından, çıktı aynı cihaz ayarı, sabit uç mesafesi (2 mm), dik yön ve tüm işlemler boyunca tutarlı çalışma koşulları korunarak standartlaştırıldı. Çözüm akışı, rezervuar test çözeltisiyle dolu tutularak işlem boyunca sabit bir seviyede tutulurdu. Sulama sırasında, rezervuar düzenli aralıklarla denediler ve sürekli ve kesintisiz akışı sürdürmek için gerektiğinde yeniden doldurulur, böylece tüm örnekler için tutarlı maruz kalma koşulları sağlanır.
Her örnek, 7 günlük sabit aralıklarla 10 dakika boyunca süresiz, haftada bir kez, toplamda 4 hafta boyunca irrigatora maruz bırakıldı. Tüm uygulamalar tutarlılığı sağlamak için günün aynı saatinde gerçekleştirildi. Bu maruziyet protokolü, rutin oral irrigator kullanımını temsil etmek üzere tasarlandı; bu, her yüzey başına yaklaşık 3 saniye süren günde iki kez uygulanmaya karşılık geldi ve in vitro koşullarda yaklaşık bir yıllık klinik kullanım anlamına geldiğibildirildi 18. Her uygulamadan sonra, örnekler 10 saniye boyunca diş ünitesi hava-su spreyi kullanılarak DW ile durulandı. Sprey, numune yüzeyine dik bir açıyla (90°) uygulandı; destek tabanlı bir düzenle, püskürtme ucu ile numune paralel eksenler üzerinde hizalandı. Sprey ucu ile örnek yüzeyi arasındaki mesafe 5 cm'ye ayarlandı ve bir ölçüm aracı kullanılarak kontrol edildi. Uygulama seansları arasında, örnekler 23°C ± 1°C arasında DW ile doldurulmuş kapalı cam kaplarda tek tek depolandı. Buharlaşmayı önlemek için kapalı tutuldu ve ışığı en aza indirmek için bir dolaba yerleştirildi. Depolama çözümü, her gün aynı saatte sabit 24 saat aralıklarla yenileniyordu.
Renk Ölçümü
Ölçümler, 5 mm çapında bir kontakt tipi prob ve dahili LED ışık kaynağı ile donatılmış bir spektrofotometre kullanılarak elde edildi. Cihaz, üreticinin talimatlarına göre onarıcı modda çalıştırıldı ve tutarlı, tekrarlanabilir ölçümler sağlandı. Her ölçüm seansından önce üreticinin standart beyaz kalibrasyon bloğuyla kalibre edildi. Kalibrasyon prosedürü, prob ucunun kalibrasyon bloğuyla doğrudan temas halinde olması ve cihaz arayüzü üzerinden kalibrasyon modunun başlatılması ile gerçekleştirildi. Kalibrasyon, örnek ölçümü öncesi geçerli bir ölçüm alınana kadar tekrarlandı.
Tüm renk ölçümleri, arka plan ışığı parazitini en aza indirmek için mat ve yansıtıcı olmayan bir kalibrasyon kartından oluşan standartlaştırılmış nötr gri bir arka plan (Munsell N5) üzerinde yapıldı. Arka plan CIE Lab* değerlerine yaklaşık olarak L* = 50.0, a* = 0.0 ve b* = 0.0 olarak karşılık geliyordu ve bu değerler akromatik orta-gri referansı temsil ediyordu. Standart ve tekrarlanabilir prob konumlandırmasını sağlamak için, hem örneği hem de spektrofotometre probunu stabilize etmek için özel yapılmış bir konumlandırma jig kullanıldı. Bu düzenleme, prob ucunun numune yüzeyine göre sabit dik bir konumda (90°) tutulmasını ve tüm ölçümler boyunca tutarlı temas basıncıyla tutulmasını sağladı. Ölçüm yeri, numune hazırlığı sırasında dijital bir kaliper kullanılarak her numunenin tam merkezi işaretlenerek standartlaştırıldı. Tüm ölçümler, konumsal değişkenliği ortadan kaldırmak için önceden tanımlanmış bu merkezi referans noktasından alındı. Tekrarlayan ölçümler için, prob her ölçüm arasında tamamen yeniden konumlandırıldı. Özellikle, sonda yüzeyden tamamen kaldırıldı ve her ölçümden önce konumlandırma jig kullanılarak potansiyel yerleşim değişkenliğini hesaba katmak için yeniden hizalandı. Aynı önceden tanımlanmış merkezi noktadan aynı koşullar altında ardışık üç ölçüm alındı ve analiz için ortalamaları alındı.
Ortalama L*, a* ve b* değerleri, CIEDE2000 (ΔE00) formülü kullanılarak renk değişimini hesaplamak için kullanıldı. ΔE00 değerleri, CIELAB renk uzayı koordinatlarına (Denklem 1) dayalı olarak Microsoft Excel'deki CIEDE2000 algoritmasının özel bir uygulaması kullanılarak hesaplandı (Denklem 1):
(1)
Burada, ΔL′, ΔC′ ve ΔH′ sırasıyla hafiflik, renk ve ton farklarını temsil eder; SL, SC ve SH karşılık gelen ağırlık fonksiyonlarıdır; kL, kC ve kH parametrik düzeltme faktörleridir (bu çalışmada 1 olarak ayarlanmıştır); RT , kroma ve ton farkları arasındaki etkileşimi hesaba katan bir rotasyon terimidir. Renk değişimi, her ölçüm zaman noktasında elde edilen L*, a* ve b* koordinatlarına dayanarak CIEDE2000 (ΔE00) formülü kullanılarak hesaplandı. Özellikle, ΔE1 , başlangıç (T0) ve kahve boyama sonrası (T1) ölçülen renk koordinatları kullanılarak hesaplandı; ΔE₂ T1'de elde edilen ve ağız gargarası uygulamasından sonra (T2) elde edilen koordinatlarla, ΔE₃ ise T0 veT 2'de ölçülen koordinatlarla hesaplandı. Böylece, her ΔE değeri, karşılık gelen ölçüm zamannoktaları 9 arasında L*, a* ve b* değerlerinin çift karşılaştırmasını temsil eder.
Yüzey Morfolojisi Analizi
Temsil eden örnekler (n = 16), önceden tanımlanmış, tekrarlanabilir bir seçim protokolü kullanılarak yüzey morfolojisi değerlendirmesi için seçildi; bu protokol seçim yanlılığını en aza indirdi. Örnek seçimi, her deneysel aşamada mevcut havuzdan bilgisayar tarafından oluşturulan bir rastgeleleştirme prosedürü kullanılarak gerçekleştirildi. Toplamda 16 örnek analiz edildi ve bunlar şu şekilde dağıtıldı: T0 (n = 4), T1 (n = 4) ve T2 (n = 8). T0 ve T1 için, örnekler ağız garalaması uygulama aşamasından önce deneysel bir gruplama olmadığından, alt grup farklılaştırması olmadan rastgele seçildi. T2 için, farklı deneysel koşulları temsil etmek üzere örnekler rastgele seçilerek her çözüm türünden ve uygulama yönteminden örneklerin dahil edilmesini sağladı.
Görüntülemeden önce, tüm örnekler kontrollü vakum koşullarında (~0,05 mbar) altın–paladyum tabakası ile sputter kaplanarak yüzey iletkenliğini sağladı. Kaplama kalınlığı, yüzey topografyasını koruyarak yeterli iletkenlik sağlamak için 10 nm olarak tutuldu. Yüzey analizleri, 110 Pa oda basıncında ve 10,0 kV hızlandırıcı voltajda düşük vakum modunda çalışan çevresel taramalı elektron mikroskobu (SEM) kullanılarak gerçekleştirildi. Düşük vakum koşulları, şarj etkilerini en aza indirmek ve reçine bazlı malzemelerin ek iletken artefaktlar olmadan kararlı görüntülenmesini sağlamak için seçildi. Örnekler, iki taraflı iletken karbon bant kullanılarak alüminyum kıvrımlara monte edilmiş ve numune yüzeyi elektron ışınına dik konumlanmış şekilde konumlandırılmıştır. Tüm örnekler, tutarlı görüntüleme geometrisi sağlamak için standart bir protokol kullanılarak monte edilmiştir. Görüntüleme koşulları, hızlandırıcı voltaj (10.0 kV) ve çalışma mesafesi (tüm ölçümler boyunca sabit tutuldu) ile tanımlandı, spot boyutu ayarı (3.0, cihaza özgü) ise çalışma boyunca sabit tutuldu.
Mikrograflar, her örneğin standart merkezi bölgesinden alındı. Görüntüleme konumu, örnek yüzeyinin geometrik merkezi olarak tanımlandı; örnek hazırlama sırasında dijital bir kaliper kullanılarak belirlendi ve tüm ölçümlerde tutarlı şekilde kullanıldı. SEM ışını, tüm görüntü alımları için bu önceden tanımlanmış referans noktasıyla hizalanmıştı. Görüntüler, kahve boyama ve ağız garalaması uygulamasıyla ilişkili yüzey morfolojik değişikliklerini değerlendirmek için her büyütmede bir görüntü alınarak ×2500, ×5000 ve ×10000 büyütmelerle alındı.
İstatistiksel Analiz
Tüm istatistiksel analizler WRS2 paketiyle birlikte R yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi. Veri dağılımı Shapiro–Wilk testi kullanılarak değerlendirildi. Birçok değişken normal dağılıma uymadığı için, sağlam istatistiksel yöntemler uygulandı. Genel analiz için, yüzey pürüzlülüğü ve renk değerleri, bileşik tip, grup ve dönemin etkilerini değerlendirmek amacıyla üç yönlü sağlam bir ANOVA kullanılarak değerlendirildi. Renk değişimi sonuçları için ΔE1,ΔE 2 veΔE 3 değerleri ayrı ayrı üç yönlü sağlam ANOVA kullanılarak analiz edildi; bileşik tipi, ağız durulama ve uygulama yöntemi bağımsız faktörler olarak kullanıldı. Anlamlı etkiler tespit edildiğinde, Bonferroni ayarlaması kullanılarak sonradan çoklu karşılaştırmalar yapıldı. Sonuçlar, WRS2 paketinde uygulanan sağlam kesim-ortalama çerçevesi içinde tahmin edilen standart hatalar ± standart hata olarak ifade edilir. Önem seviyesi p < 0.05 olarak belirlendi.