Fare Kaudal Bedenler Arası Füzyon Modelinin Geliştirilmesi: Pilot Fizibilite Çalışması

Özet

Bu çalışma, arka kafes ve plaka fiksasyonu kullanarak pilot bir sıçan kaudal beden birleşimi modelinin teknik fizibilitesini göstermiştir. 12. haftada yapılan histomorfometrik analiz, sürekli kemik köprülenmesini ve belirgin kafes içi kemik olgunlaşma desenlerini doğruladı. Bu teknik model, gelecekteki büyük ölçekli çalışmalar için ön temel olarak hizmet vermektedir.

Özet

Fare kaudal omurları, kemik greft malzemeleri ve implantların test edilmesi için kemik rejenerasyonu ve omurga füzyon araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Önceki fare kuyruğu füzyon modelleri, disk çıkarımı ve kemik greğli ile veya harici fiksasyon cihazlarıyla omurgalar arası füzyon sağlamıştır. Buna rağmen, klinik olarak kullanılan gibi bir füzyon kafesi kullanan küçük hayvan modeli geliştirilmemiştir. Sıçan kaudal omurlarında klinik prosedürleri taklit eden posterior kafes yerleştirme ve plaka fiksasyonu ile desteklenerek nörolojik komplikasyonlar olmadan değerli bir kemik füzyon ortamının oluşturulabileceği varsayımlandı. Bu ön pilot çalışma (n = 1) teknik fizibiliteyi değerlendirmek için tasarlandı. Cerrahi bir yaklaşım, bitişik kaudal omurlar arasındaki rezeksiyon disk boşluğuna küçültülmüş bir titanyum kafesin tam olarak yerleştirildiği ve insan cerrahi prosedürünü yakından yansıtan bir cerrahi yaklaşım geliştirildi. Kafes için titanyum, yaygın klinik kullanımı ve biyouyumluluk nedeniyle seçilmiştir. İlk sonuçlar bu yaklaşımın teknik uygulanabilirliğini gösterdi. Implante edilen kafes, disk yüksekliğini ve omurga hizasını korudu. Kafes boyunca ilerleyici kemik büyümesi gözlemlendi ve ameliyattan 12 hafta sonra omurgalar arası boşlukta kemik köprülenmesinin kesintisiz olarak doğrulanmasıyla sonuçlandı. Sürekli trabeküler yapının varlığı ve aradaki lifli dokunun olmaması radyolojik ve histolojik olarak doğrulandı. Genel olarak, bu kafes tabanlı fare kuyruğu füzyon modeli, yeni biyomateryallerin değerlendirilmesi ve omurgalar arası kemik füzyon mekanizmalarının araştırılması için umut verici bir platform sunmaktadır. Ancak, tek konunun tasarımı nedeniyle kontrol grubu ve istatistiksel analizin olmaması, bu bulguların genellenebilirliğini sınırlar ve daha fazla doğrulama gerektirir.

Giriş

Bedenlerarası füzyon, istikrarsızlık, spondilolistezi ve dejeneratif hastalıklar dahil olmak üzere çeşitli omurga bozuklukları için köklü bir cerrahi tedavidir; Özellikle, yaklaşık 70 yıl boyunca standart bir prosedür ^1,2 olarak evrilmiştir. İşlem, omurlar arası diskin çıkarılmasını ve bitişik^{omurlar 3,4} arasında katı birleşmeyi teşvik etmek için bir kafes veya kemik grefti yerleştirilmesini içerir. Ayrıca, kafeslerle arka enstrümantasyon eklenmesi pseudarthrosis oranlarını azaltır ve klinik belirtilerini^{genişletir 5}. Buna rağmen, pseudarthrosis ve kafes çökmesi gibi komplikasyonlar önemli klinik zorluklar olarak kalmaktadır ve yeni malzemeleri ve füzyon teşvik edici faktörleri değerlendirmek için güvenilir preklinik model geliştirilmesini^{gerektirir 6,7}.

Fareler, ekonomik fizibiliteleri, hızlı üremeleri, hızlı iyileşmeleri ve kullanımı ^8,9 nedeniyle omurga füzyon araştırmalarında yaygın olarak kullanılmıştır^. Buna rağmen, mevcut fare interbody füzyon modelleri önemli sınırlamalar sergilemektedir. Özellikle, farelerde ön bel beden füzyonu (ALIF) yaklaşımı büyük karın damar ve organ manipülasyonu gerektirir; bu da yüksek cerrahi invazivlik ve ciddi komplikasyon risklerine yol^{açar 10,11}. Arka bel bedenlerarası füzyon (PLIF) yaklaşımı, son derece küçük omurilik kanalları ve sinir elementleri nedeniyle kaçınılmaz bir nörolojik hasar riski içerir ve bu da sinirsel reksiyonu neredeyse imkansız^{kılar 12}. Sonuç olarak, çoğu fare çalışması posterolateral füzyon (PLF) ile sınırlıdır; bu çalışma, kafes içindeki kemik füzyon mekanizmalarını yapısal olarak incelemekte başarısız olur; bu da klinik ortamlarda kritik^{bir özelliktir.} Ayrıca, kaudal modeller mevcut olsa da, klinik benzeri bir beden arası kafesi posterior plaka fiksasyonu ile bütünleştiren bir değerlendirme sisteminden yoksunlar.

Farelerin kuyruk omurgası benzersiz bedenler arası füzyon araştırma avantajları sunar. Kaudal diskler, insan bel disklerine güçlü geometrik, bileşimsel ve mekanik benzerlikler gösterir ve bu da onları disk araştırmalarında giderek daha popüler hale^{getirir 14,15}. Ayrıca, kaudal omurga cerrahisi, bel yaklaşımlarına kıyasla cerrahi erişimi kolaylaştırmak, maliyet etkinliği ve ameliyat sonrası hızlı iyileşme sağlar¹⁶. Ancak bugüne kadar, kafes içinde ve çevresinde kemik oluşumunun ayrıntılı histolojik değerlendirmesiyle başarılı bir arka kafes yerleştirilmesini bildiren herhangi bir çalışma bulunmamıştır.

Histolojik değerlendirme, özellikle dekalsifiye edilmemiş kemik histomorfometrisi, osseointegrasyon ve kemik füzyonu değerlendirmesinde altın standart olmaya^{devam etmektedir 17,18}. Özellikle, kemik hacmi/doku hacmi (BV/TV), trabeküler sayı ve trabeküler kalınlık gibi kritik kemik oluşum parametrelerinin nicel analizini sağlarken, dokuma ve lameller kemik^19,20 ayırt ederek kemik olgunluğu niteliksel değerlendirmesine olanak tanır. Böylesine ayrıntılı bir histomorfometrik değerlendirme, kafes içindeki ve kafes-omur arayüzlerindeki mekansal ve zamansal osteoiletken^{desenlerini ortaya çıkarabilir 21,22}. Buna rağmen, fare modellerinde kafes osteoconductionunun kapsamlı bir histomorfometrik değerlendirmesi eksiktir.

Bu çalışma, teknik fiziliyetini göstermek için posterior kafes yerleştirme ve ek plaka fiksasyonu kullanarak pilot bir sıçan kaudal gövde arası füzyon modeli geliştirmeyi amaçladı. Bu çalışma, kafes içinde ve omurga uç plakası arayüzlerinde kemik oluşumunun ayrıntılı bir cerrahi tekniği ve kapsamlı histolojik değerlendirmesini sunmaktadır. Sıçan kaudal omurlarında klinik prosedürleri taklit eden posterior kafes yerleştirme ve plaka fiksasyonu ile desteklenerek nörolojik komplikasyonlar olmadan değerli bir kemik füzyon ortamının oluşturulabileceği varsayımlandı. Bu model, fare arası füzyon materyallerinin değerlendirilmesi için verimli bir platform sağlar ve mevcut literatürde, bir fare modelinde histomorfometrik osteoconduction değerlendirmesi kullanılarak başarılı arka kafes yerleşiminin ilk teknik keşfini temsil eder.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Jikei Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan protokollere (onay numarası 2023–034C1) uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Bu çalışma, pilot bir fizibilite çalışması olarak tasarlandı. Bu son derece hassas ve yenilikçi arka kafes yerleştirmenin büyük ölçekli doğrulamadan önce sıçan kuyruk omurgasına teknik uygulanabilirliğini değerlendirmek için, ilk teknik değerlendirmede hayvan kullanımını en aza indirmek için etik yönergeler doğrultusunda tek bir hayvan (n = 1) kullanıldı. Erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanları, omurga füzyon araştırmaları için standart suş olarak seçildi. Dahil etme kriterleri, omurgalar arası disk yüksekliğinin (1,8–2,2 mm) 2 mm kafesle uyumlu olmasını sağlamak için 8–10 haftalık sağlıklı erkeklerdi, ağırlığı 200–250 g arasında. Alışma döneminde %10 kilo kaybı, azalan aktivite veya görünür kuyruk bozuklukları gösteren hayvanlar > hariç tutuldu. Bu çalışmada, erkek bir Sprague–Dawley sıçanı (8 haftalık, 221,8 g ağırlığında; Japonya SLC, Shizuoka, Japonya) kullanıldı. Hayvan, 25°C ve %50 bağıl nem (izin verilen aralık %30–70) sıcaklıkta, 12 saat ışık/karanlık döngüyle kontrollü bir ortamda tutuldu ve imkansız olarak suya erişim ve standart kemirgen diyeti sağlandı. Fareler, çevre zenginleştirme için yuva malzemeleri ve çiğneme çubuklarıyla donatılmış sağlam tabanlı kafeslerde tutulurdu. Cerrahi işlemden önce 3 günlük bir aklimatizasyon dönemi uygulandı. Kafes eşlerinin kuyruk implantlarını kemirmesini önlemek için, sıçan çalışma boyunca tek konut koşullarında tutuldu ve bu deneysel tasarımda kritik bir faktördü.

Vida ve plakaların hazırlanması

Cerrahi işlemden önce iç fiksasyon malzemeleri hazırlandı. Ticari olarak mevcut paslanmaz çelik vidalar (orijinal çap: 1,2 mm, uzunluk: 14 mm) tel kesici kullanılarak kesici olarak kesilmiş hassas 6 mm uzunluğunda kesilmiş (Şekil 1A). Bu vidalar, standart buharlı otoklavlama ile 121 °C'de 20 dakika sterilize edildi. Polioksimetilen (POM) iç fiksasyon plakasında (18 mm uzunluk, 3 mm genişlik, 1 mm kalınlık), 1,2 mm çapında vida delikleri manuel matkap kullanılarak 12 mm aralıklarla açılmıştır (Şekil 1B–D). Daha sonra, POM plakalarının köşeleri, çevredeki yumuşak dokuya tahriş edilmesini en aza indirmek için tel kesici kullanılarak yuvarlanmıştır (Şekil 1E). Plakalar, polimerin termal hassasiyeti göz önüne alındığında etilen oksit (EtO) gazı veya hidrojen peroksit gaz plazması kullanılarak sterilize edildi. Titanyum kafes, 300–500 μm çapında boylamasına kanallara sahip birbirine bağlı bir kafes yapısına sahiptir. Yüzeyi, doğrudan kemik büyümesini sağlayan 3–5 μm mikro yüzey pürüzlülüğü elde etmek için Lamellar 3D Titanyum Teknolojisi kullanılarak hazırlanmıştır.

Anestezi ve cerrahi işlem

Gereksiz metabolik stresi önlemek için ameliyat öncesi oruç yapılmadı. Anestezi, medetomidin (0,15 mg/kg), midazolam (2 mg/kg) ve butorfanol (2,5 mg/kg) içeren üçlü anestezik karışımıyla indüklendi; bu karışım, 25 gauge iğne²³ ile dorsuma deri altı enjeksiyon yoluyla uygulandı. Her 15 dakikada bir pedal çekilme refleksinin kaybı (ayak sıkıştırması) doğrulanarak, pembe mukoza zarlarının korunması ve solunum hızının (70–110 nefes alma/dakika) izlenmesi yoluyla her 15 dakikada bir yeterli cerrahi anestezi düzlemi değerlendirildi. Daha sonra kaudal omurların vücut arası füzyonu için cerrahi işlem gerçekleştirildi. Hayvan yatağa pozisyona getirildi (Şekil 2A) ve tüm kuyruğu, steril bir alan sağlamak için üç turluk dönüşümlü bir peeling protokolü (%70 etanol, povidon-iyot ve %70 etanol) ile dezenfekte edildi. Hedef omurları tanımlamak için, sakrumdan distal olarak manuel palpasyon yapıldı. İlk hareketli eklem sakrum-CO1 birleşimi olarak tanımlandı ve hemen distal segment Co2 olarak adlandırılarak CO2–Co3 hedef noktasını belirledi. Dorsal tarafta yaklaşık 2 cm uzunluğunda bir kesi yapıldı; bu kesik ikinci kuyruk omurundan üçüncü omurlara kadar uzanır (Co2–Co3) (Şekil 2B), her bir omurun arka yüzeyi ortaya çıkardı. Maruziyet sırasında dorsal kaudal venin tespit edilmesi ve hasarın önlenmesi dikkat edildi; küçük kanamaları yönetmek için küt diseksiyon ve bipolar elektrokoterlik kullanıldı. Birleşme bölgesini hazırlamak için, CO2 ve Co3 omurları arasındaki halka fibrosus bir skalpel kullanılarak oyuldu (Şekil 2C). Annulus fibrosus ve nucleus pulposus, daha sonra curette ve küçük forseps kullanılarak küretaj ile titizlikle çıkarıldı (Şekil 2D). Bu adım yüksek güçlü cerrahi büyütme (≥3,5x) altında gerçekleştirildi. Çıkarmanın tamamlanması, noktalı kanamanın ("kanlı uç plaka" işareti) görsel doğrulaması ve kalıntı yumuşak dokunun tamamen yokluğuyla nesnel olarak tanımlandı. Kabul edilemez uç plaka hasarı, toplam alanın %25'> derin aşınmalar veya 0,5 mm uzunluğundaki soslu kemiğe penetrasyon olarak tanımlandı> Daha sonra titanyum kafes (2 × 2 mm kesit, 2 mm yükseklik) (Şekil 2E) derinlemesine omurgalar arası boşluğa yerleştirildi, fiziksel bir durma sağlanana ve her iki uç plakayla tam yüzey teması görsel olarak doğrulanana kadar sağlam bir parazit uyumu oluşturuldu (Şekil 2F, 2G).

Fiksasyon ve yara kapanması

Plaka fiksasyonunu kolaylaştırmak için, CO2 ve Co3 omurlarındaki belirlenen delik noktalarının çevresindeki kemik yüzeyi, 7.800 RPM'de çalışan elektrikli el frezesi ile düzleştirildi ve 2.0 mm küresel file tipi burr ile donatıldı (Şekil 2H). Kemik delikleri, plastik iç fiksasyon plakasının vida deliklerine karşılık gelen aralıklarla bireysel olarak 1,2 mm çapında bir matkap ucuyla donatılmış bir el matkapla kullanılarak açılmıştır (Şekil 2I). Daha sonra deliklere iki adet 6 mm paslanmaz çelik vida önceden yüklendi. plastik plakanın (Şekil 2J) için. Vidalar, 90° açıda, standart 5 mm derinlikle ve 12 mm merkezden merkeze aralıkla yerleştiriliyordu (Şekil 2K). Son olarak, cilt kesisi 4-0 naylon dikişlerle kapatıldı ve kuyruk tekrar %70 etanol ile dezenfekte edildi, böylece işlem tamamlandı.

Ameliyat sonrası yönetim ve ötenazi

Hemen iyileşme aşamasında (0. Gün) hayvan her 15 dakikada bir izlendi ve tam sternal yatma ve amaçlı yürüyüşe ulaşana kadar rektal sıcaklık desteklendi. Uzun vadeli değerlendirme için (1–12. haftalar), Vücut Durumu Puanı (BCS), bakım durumu ve genel aktiviteye dayalı günlük puanlama sistemi uygulandı; ayrıca enfeksiyon veya dehisence için günlük cerrahi alan izlemesi yapıldı. İlk 48 saat boyunca kafes zemininde nemli yemek sağlandı. Vücut ağırlığı haftalık olarak ölçülürdü. Erken ötenazi için insani son noktalar kesin olarak şu şekilde tanımlandı: kilo kaybı ≥%20, BCS ≤2.0, 12 saat > yiyecek/suya ulaşamayanın kalıcı yiyecek/nefes natili belirtileri veya şiddetli cerrahi bölge komplikasyonları (örneğin nekroz). Bu kriterleri karşılayan hayvanlar 24 saat içinde insancıl bir şekilde ötenazi edildi. Ameliyat sonrası bakım, enfeksiyonu önlemek için ameliyattan hemen sonra ve ameliyat sonrası 24 saat içinde kas içi cefalexin (15 mg/kg) verilmesini içeriyordu. Analjezi için, karprofen (2 mg/kg) ameliyattan hemen sonra ve ameliyattan sonra 12, 24 ve 48 saat içinde deri altı olarak verildi; toplamda dört doz oldu. İmplantasyondan 12. hafta sonra, sıçan izofluran aşırı dozuyla ötenazi edildi. İkinci ile üçüncü kaudal omurdan oluşan segment daha sonra toplu olarak toplanıp %70 etanole sabitlendi.

Eğitim önerileri, sorun giderme ve örneklem büyüklüğü. Bu zorlu protokolün başarılı bir şekilde benimsenmesini kolaylaştırmak için, yeni operatörler fare kadavraları üzerinde 3–5 uygulama işlemi yapmak zorundadır; böylece ardışık üç yerleştirmede radyografik yanlış pozisyon göstermediğinde yeterlilik sağlanır. Yaygın sorun gidermeleri, kafes boyutu seçimini optimize etmek için röntgen ile disk yüksekliğinin önceden ölçülmesini ve kafes göçünü önlemek için sırt kemiğinin düzlüğünün yeniden doğrulanmasını içerir. Vida satın alma yeterli değilse, daha düşük matkap hızlarının kullanılması önerilir. Gelecekteki doğrulama çalışmaları için, yeterli istatistiksel güç elde etmek için en az n = 6 ila 10 (kayıp için ek %10–20) bir deneme büyüklüğü önerilir. Ayrıca, gelecekteki çalışmalarda biyomateryalin performansını doğrulamak için kontrol grupları (örneğin, boş kafes veya otograft) dahil edilmelidir.

Radyografik ve histolojik analiz

Mikro-bilgisayarlı tomografi (BT) taraması ve dijital radyografi, 80 kV tüp voltajı ve 0,1 mA akım olan mikro-BT tarama sistemi kullanılarak gerçekleştirildi. Edinim sırasında titanyum implantının neden olduğu ışın sertleştirme artefaktlarını en aza indirmek için 1,0 mm kalınlığında bir alüminyum filtre kullanıldı. Boylamasına değerlendirme için, ameliyattan sonra 1 ve 4. hafta sonra, 120 μm voxel boyutuyla in vivo görüntüleme yapıldı. Ex vivo görüntüleme, ameliyattan 12. hafta sonra, 24 μm voxel boyutuna sahip 24 mm örnek tutucu kullanılarak gerçekleştirildi. BT verileri ve radyografik görüntüler, standart bir filtrelenmiş geri projeksiyon algoritması kullanılarak yeniden oluşturuldu ve DICOM görüntüleyici kullanılarak analiz edildi. Kemik birleşmesini değerlendirmek için nicel kriterler tanımlandı. Radyolojik olarak başarılı füzyon, mikro-CT'de en az üç ardışık dilim boyunca kraniyal ve kaudal omurga uç plakalarını birleştiren sürekli trabeküler yapı gözlemlendiğinde doğrulandı. Görüntü segmentasyonu sırasında 700 Hounsfield Birimi (HU) küresel eşik uygulandı. Histomorfometrik olarak, kafes içinde %70 veya daha yüksek bir BV/TV oranı fiziksel mekansal tatmin ve birleşme eşiği olarak kabul edilmiştir. Histolojik olarak, kemik birleşmesi, fibröz dokunun interpozisyonu olmadan kraniyal ve kaudal taraflardan tam kemik köprüsiyle tanımlanmıştır. Histolojik analiz için, ötenazi öncesinde deri altı kalsein (8 mg/kg) enjeksiyonu ile ardışık florokrom etiketlemesi yapıldı ve terminal 12 haftalık zaman noktasında aktif mineralizasyonun mekânsal dağılımı belirlendi. Kesilmiş kaudal omurlar 7 gün boyunca %70 etanol ile sabitlendi ve Villanueva kemik lekesi ile en bloc boyandı. Örnekler, metil metakrilat reçinesine gömülü etanol kalıntılarıyla susuz bırakıldı ve kafesin hassas geometrik merkezinde, elmas testere mikrotomu kullanılarak önceden kesitlendirilen mikro-CT rehberliğiyle belirlendiği şekilde, orta-sagittal olarak kesitlendi. Kireçsizleştirilmemiş zemin örnekleri (5 μm kalınlığında) Ito Kemik Histomorfometri Enstitüsü'nde (Niigata, Japonya) hazırlanmıştır. Görüntüler, floresans birleştirme için parlak alan mikroskobu ve konfokal lazer taramalı mikroskobu kullanılarak alındı. Daha fazla inceleme polarize ışık mikroskobu altında yapıldı ve bilgisayarlı görüntü analizörü kullanılarak histomorfometrik analiz yapıldı. İlgi Bölgesi (ROI), metal destekler hariç olarak kafesin toplam iç hacmi olarak tanımlanmış ve Kranial ve Kaudal Intrakafes ROI'lerine ayrılmıştır. Kemik dokusu, Villanueva boyama altında mor/magenta rengiyle tanımlanmıştır. Lameller kemik (Lm.V), polarize ışık altında oldukça düzenli, paralel lameller yapısıyla tanımlanırken, dokuma kemik (Wo.V) düzensiz lif desenleri gösterirdi.

Sonuçlar

Vücut Ağırlığı (Tablo 1)

Vücut ağırlığı ameliyattan 12 haftaya kadar ölçüldü ve sürekli bir artış (221,8 g'dan 346,8 g'a) gösterildi; bu da fizyolojik homeostazı gösteriyor ve dolaylı olarak şiddetli kronik sıkıntının yokluğunu destekledi. Bu, normal aktivite ve komplikasyonsuz yara iyileşmesini doğrulayan günlük multimodal değerlendirmelerle doğrulandı.

Yara (Şekil 3)

Tartışma

Burada, sıçan kuyruk omurgasının yeni bir bedenler arası füzyon modeli oluşturuldu. Bu model, titanyum kafesinin posterior yaklaşımla ve plaka ve vida fiksasyonu ile desteklenmesini içerir. Daha sonra, kafes içi kemik oluşumu ayrıntılı histomorfometrik analizlerle değerlendirildi. Bu modelin ayırt edici özellikleri üç unsurdan oluşur: 1) klinik posterior lumber interbody füzyon veya transforaminal lomber interbody füzyon prosedürlerini yakın şekilde taklit eder; böylece bir interbody kaf...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
4-0 nylon sütürler	Natsume	ER-25-30N2
Parlak alan mikroskobu	Keyence. (Osaka, Japonya)	BZ-X800
Butorfanol	FUJIFILM	021-19001
Kalsein	FUJIFILM	76082
Karprofen	FUJIFILM	037-19761
Sefalexin	FUJIFILM	036-11051
Bilgisayarlı görüntü analizörü	System Supply Co. (Nagano, Japonya)	Histometry RT CSS-840
Floresan birleşimi için konfokal lazer taramalı mikroskopu	Carl Zeiss. (Jena, Almanya)	LSM 980
Küret	Natsume	E-8-00
Elmas testere mikroton	Leica. (Wetzlar, Almanya)	SP1600
Elektrikli matkap	TAMIYA	N/A	https://www.amazon.co.jp /%E3%82%BF%E3%83% 9F%E3%83%A4-%E3% 82%AC%E3%83%A9% E3%83%95%E3%83% 88%E3%83%84%E3% 83%BC%E3%83%A3% E3%82%B7%E3%83% AA%E3%83%BC%E3% 82%BA-No-42-%E9%9B %BB%E5%8B%95%E3% 83%8F%E3%83%B3%E3 %83%87%E3%82%A3% E3%83%AA%E3%83%A5 %E3%83%BC%E3%82% BF%E3%83%BC-%E3% 83%97%E3%83%A9%E3 %83%A2%E3%83%87%E3 %83%AB%E7%94%A5%E5 %B7%A5%E5%85%B7/dp/B 01LZ05WWY/ref=sr_1_2?ad grpid=54785347873&dib=eyJ 2IjoiMSJ9.f61YHQv80N0nxws VOdlrIFtTsQoJICvSb4t4rVt97 FEBWkOo4ilX5O2lZH-5vADU HT9CRXO308QpVFqdBNli0C osd4iBSfSzEcKxP9HMX4DhiI S-Qko5ix33W7FjPQqpgTWbj3 CV_vBytnvfqvSyoGN9IB8445o 5Kc0pjeKPG-SRR3Ixpqr2-FT_ ZgUyWstoyQVFTcv_Rq_K4-E OWnuT41BBYtBh757EOAoBe z2lkCd6Psz99wZxfUuvzRUAH Ecq9QV6EmiT9LAY8dYYq08k aLt7Klqx2k-MdV8XbWRxgKk. 7TWzXBGA1PeNmB4me_Cz4 mMFAKBAv5H3YXAw_HPuLd E&dib_tag=se&hvadid=651687 588880&hvdev=c&hvexpln=0& hvlocphy=1009309&hvnetw=g& hvocijid=5538300633798619650 --&hvqmt=e&hvrand=55383006 33798619650&hvtargid=kwd-33 4267191534&hydadcr=4289_13 319726&jp-ad-ap=0&keywords= %E3%82%AF%E3%83%9F%E3 %83%A4+%E9%9B%BB%E5% 8B%95%E3%83%8F%E3%83% B3%E3%83%87%E3%82%A3% E3%83%89%E3%83% B3%E3%83%87%E3%82%A3%E3% 83%89%E3%83%AB&mcid=6b8ff8c984ba3d45 be477b407ef2d1ba&qid=1767395 580&sr=8-2
El matkabı	VEAGIA	N/A	https://www.amazon.co.jp/dp/B0D2 9B4W18/ref=sspa_dk_detail_5?pd _rd_i=B0D29B4W18&pd_rd_w=xe kNz&content-id=amzn1.sym.f293b e60-50b7-49bc-95e8-931faf86ed1e &pf_rd_p=f293be60-50b7-49bc-95e8 -931faf86ed1e&pf_rd_r=HPW6B367R QC0VPB7WTTS&pd_rd_wg=E8mAS &pd_rd_r=dbeb0aa7-1bea-4f40-99dd -38bcb05c8234&sp_csd=d2lkZ2V0T mFtZT1zcF9kZXRhaWw&th=1
Medetomidin	FUJIFILM	135-17473
Midazolam	FUJIFILM	135-13791
Pin matkabı	ANEX	N/A	https://www.amazon.co.jp/%E3%82% A2%E3%83%8D%E3%83%83%E3% 82%AF