Bu protokol, sare servikal kalp nakli için basitleştirilmiş ve uçtan yana dikiş anastomozu tekniği sunarak nakil immünolojisini incelemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir model sunar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Bu protokol, sare servikal kalp nakli için basitleştirilmiş ve uçtan yana dikiş anastomozu tekniği sunarak nakil immünolojisini incelemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir model sunar.
Molin heterotopik kalp nakli, nakil araştırmalarında kritik bir preklinik modeldir. Farelerde servikal heterotopik kalp nakli, greftin canlı ve algısal izlenmesi, cerrahi travmanın azalması ve ameliyat sonrası iyileşmenin daha hızlı gerçekleşmesi gibi belirgin avantajlar sunar. Bu nedenle, genetik modifikasyon veya ilaç indüksiyonu nedeniyle kötü fizyolojik koşullara sahip hayvanlar için özellikle değerli olan nakil immünolojisi çalışmaları için giderek daha değerli bir platform haline gelmiştir ve ikincil veya birleşik organ nakli gerektiren deneyler için servikal bölge genellikle tek uygulanabilir alan haline gelir. Geleneksel servikal nakil teknikleri, uçtan uca dikiş veya manşet tabanlı yöntemler kullansa da, alıcının ortak karotis arteri ve dış juguler venin kalıcı bağlanmasını gerektirir; bu da beyin perfüzyonu tehlikeye atabilir ve yabancı maddeler veya hemodinamik bozukluklar getirebilir. Bu sınırlamaları gidermek için, bu makale uçtan yana vasküler anastomoz kullanarak geliştirilmiş bir servikal kalp nakli tekniğini detaylandırmaktadır. Bu yöntem, alıcının ortak karotis arteri ve dış juguler venini korur, normal beyin perfüzyonu korur ve kalıcı damar ligasyonuyla ilişkili komplikasyonları önler. Bu protokol, donör kalp hasadından alıcı anastomozuna ve ameliyat sonrası bakıma kadar olan adımları detaylandırır. Temsilci sonuçlar, yüksek cerrahi başarı oranı (%96,7) ve modelin allogreft reddini incelemedeki etkinliğini göstermektedir. Bu teknik, nakil immünolojisi araştırmacıları için fizyolojik olarak ilgili ve teknik olarak erişilebilir bir model sunar.
Son yarım yüzyıl boyunca, nakil immünolojisi immünologlar ve nakil uzmanları için merkezi bir odak olmaya devam etti. Günümüzde, katı organ nakli yaygın olarak uygulanmakta olup, son evre organ hastalıkları için en etkili tedavidir. Ancak, greft reddi temelde çözülmemiştir ve hâlâ nakildeki en büyük engellerden biri ve greft kaybının başlıcanedenlerinden biridir 1. Sonuç olarak, sistemik immünosupresiyanı azaltmak veya önlerken reddedilmeyi aşmak veya hafifletmek alanda önemli bir zorluk ve temel araştırma hedefi olmaya devam etmektedir.
Damarlanmış hayvan organ nakli modelleri, özellikle fare modelleri, nakil immünolojisinin ilerlemesinde kritik rol oynamış ve klinik translasyon için temel bilimsel bir temelsağlamıştır 2. Örneğin, bugün klinik olarak kullanılan birçok immünosupresif ajan—örneğin siklosporin, takrolimus ve rapamisin—ilk kez fare naklimodellerinde başarıyla doğrulandı 3,4.
Fare heterotopik kalp nakli (HT) modeli, mevcut genetik suşların ve araştırma reaktiflerinin bolluğu, nispeten basit prosedürü ve kolay ameliyat sonrası izlemesi nedeniyle en yaygın kullanılan preklinik modellerden biridir. Bu nedenle, akut reddetme mekanizmalarının incelenmesi, bağışıklık toleransını teşvik edilmesi ve yeni immünosupresanların invivo 5,6 değerlendirilmesi için önemli bir platform olarak hizmet vermektedir.
İlk fare heterotopik HT modeli, Corry ve ark.7 tarafından 1973 yılında kurulmuştur. Bu modelde, donör kalp alıcının karın boşluğuna yerleştirilir; greft aortu ve akciğer arteri (PA) sırasıyla alıcının abdominal aortası ve alt vena kava (IVC) ile uç-yana anastomoz edilir. Bu yöntem, karın HT için onlarca yıl standart teknik olarak kaldı. Tolerans çalışmalarında üçüncü taraf allogreftlerin kabul edilmesi ihtiyacı nedeniyle, HT için ikinci bir alan araştırıldı. Bu durum, farelerde servikal HT modellerinin geliştirilmesine yol açtı; bu modeller, greft canlılığının doğrudan görsel değerlendirmesi, daha az cerrahi travma ve ameliyat sonrası enfeksiyon riskini azaltması gibi avantajlar da sunar 5,8,9. 1991 yılında, Chen ve ark.8, farelerde ilk kez servikal heterotopik HT modelini tanımladı; bu model, alıcının ortak karotis arteri (CCA) ve dış juguler ven (EJV) için donör aort ve PA'nın uçtan uca manuel dikiş anastomozunu içeriyordu. Ancak, bu model, donör aort ile alıcı CCA arasındaki ciddi uyumsuzluğun oluşturduğu ve vasküler anastomozu son derece zorlaştıran ciddi teknik zorluk nedeniyle yaygın olarak benimsenmedi.
Aynı yıl 1991'de Matsuura ve ark.9, servikal HT modelinde vasküler anastomoz için dikiş dışı manşet tekniği tanıttı. Bu yöntem, teknik olarak zorlu manuel damar dikişini ortadan kaldırarak prosedürü basitleştirir ve ustalaşmayı kolaylaştırır. Daha sonra, manşet tekniğinde birçok teknik iyileştirmebildirilmiştir 10,11. Şu anda, manşet yöntemi, özellikle mikrovasküler dikiş konusunda önceden deneyimi olmayan araştırmaçılar tarafından servikal HT'de yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak, manşet tekniği, yerel iltihaplanmaya yol açan ve immünolojik değerlendirmeleri engelleyebilen yapay malzemeler getirirken, aynı zamanda küçük kalibreli damarlarda teknik zorluklar dayaratır. 5,6. Son zamanlarda, Liao ve ark.12, servikal HS'de bağışçı ve alıcı damarların doğrudan kol yöntemiyle anastomoz edildiği manşetsiz bir kol tekniği önermiştir. Yapay malzemelerden kaçınarak ve küçük damarlara uyum sağlayarak, bu yaklaşım ikincil kalp nakli için fizyolojik ve tekrarlanabilir bir platform sunar.
Buna rağmen, hem uçtan uca dikiş hem de dikiş dışı manşet teknikleri, alıcının tek taraflı CCA ve EJV'nin kalıcı bağlanmasını gerektirir. Bu durum, merkezi sinir sistemine tek taraflı beyin kan akışını zayıflatır ve bu da yön bozukluğu ve hemipleji gibi nörolojik komplikasyonlara yolaçabilir 13,14,15. Ayrıca, bu uçtan uca yaklaşımlar yüksek hızlı arter jetleri gibi hemodinamiklerin değişmesine yol açabilir ve uzun vadeli greft hayatta kalma için zararlı olan tromboz ve stenoz riskini artırabilir. Ayrıca, manşet tekniği manşetin varlığı nedeniyle tromboz riski de taşır.
Bu sınırlamaları gidermek için, donörün yükselen aortu ve PA'sının sırasıyla alıcının CCA ve EJV'sine anastomoz edildiği gelişmiş uçtan yana manuel dikiş tekniği benimsedik. Bu yöntem, alıcının ana servikal damarlarının bütünlüğünü ve sürekliliğini korur, böylece normal beyin perfüzyonu korur ve hayvan araştırmalarının 3R (Değişim, Azaltma ve Rafinasyon) ilkesine bağlı kalır. Bu teknikle yaklaşık %96,7 (%29/30, sadece bir kanama nedeniyle ölüm oranı var) cerrahi başarı oranı elde ettik. Ameliyat sonrası hiçbir alıcı farede serebral iskemiye bağlı komplikasyon gözlemlenmedi. Bu yöntem, standart karın modellerine çok benzer ve özellikle vasküler dikiş deneyimi olan cerrahlar için servikal HST modelleri oluşturmak için uygundur.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Hayvan bakımı uluslararası yönergelere uygun olup, tüm işlemler Çin'deki Huazhong Bilim ve Teknoloji Üniversitesi, Tongji Tıp Fakültesi, Tongji Hastanesi, Organ Nakli Enstitüsü'nde gerçekleştirildi. Çalışmanın etik onayı Tongji Hastanesi Hayvan Etik Komitesi'nden alınmıştır (Onay numarası: TJH-202310010). Çalışma için kullanılan uygun aletler Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.
1. Ameliyat Öncesi Hazırlık
2. Donör kalp hasadı
3. Alıcı operasyonu
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu değiştirilmiş model kullanılarak otuz vaka gerçekleştirildi; operasyon başarı oranı %96,7 (29/30) idi. Ameliyat sırasında yapılan kanamadan sadece bir ölüm vakası gerçekleşti. Kalan 29 vaka ise ameliyat süreleri ve greft sonuçları analizi için dahil edildi. Ameliyat sonrası hiçbir alıcıda beyin iskemiyle ilgili komplikasyon gözlemlenmedi. Donör kalp hasadı 6,4 ± 0,7 dakikada, alıcı operasyonu ise 28,7 ± 1,2 dakikada tamamlandı. Özellikle, damar hazırlığı, arterial anastomoz ve venöz a...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Uçtan yana anastomoz tekniğini kullanan servikal HT modeli birçok avantaj sunar. Uçtan uca dikiş veya manşet yöntemiyle karşılaştırıldığında, bu yaklaşım CCA ve EJV'nin sürekliliğini tamamen korur, böylece normal beyin hemodinamiğini korur ve beyin iskemiyle ilişkili komplikasyonları etkili bir şekilde önler. Uçtan yana anastomoz, donör ve alıcı damarların çaplarındaki uyumsuzluktan kaynaklanan teknik zorlukları da önler. Karın HT'ye kıyasla bu yöntem farelere daha az travma verir ve ame...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81700571) tarafından desteklendi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1mL Şırınga | Becton Dickinson Medical Devices Co., Ltd | B309628 | |
| İğnelerle 11-0 sütürler | Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | H1101 | Vasküler anastomoz için |
| 3mL Şırınga | Becton Dickinson Medical Devices Co., Ltd | B309657 | |
| İğnelerle 5-0 sütürler | Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | CR537 | Deri kapatma için |
| 6-0 ipek sütür | Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 2650182 | |
| Kanamayı Durdurma Kauter | Ningbo Shunye Medical Co., Ltd. | BDD-YE-DT-1 | |
| Buprenorfin | Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd | H12020275 | Ağrı kesici |
| Pamuk çubuklar | Fuqing Health & Integral Medical | 20230R | |
| Eğik mikro forseps | RWD life Science Co. | F11031-11 | Cerrahi alet |
| Eğik mikro makas | 66 Vision Tech Co., Ltd. | 54108B | Cerrahi alet |
| Gazlı bez çubukları | Yubei Medical Materials Co., LTD | 21080274 | |
| Heparin sodyum enjeksiyonu | North China Pharmaceutical Co., LTD | 2101131-2 | |
| Mikro iğne tutucu | World Precision Instruments Co., Ltd. | 555408NT | Cerrahi alet |
| Mikro damar klibi | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5481T | |
| Mikro damar klibi aplikatörü | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5480 | |
| İğne tutucu | RWD life Science Co. | F31025-13 | Karın kapatma |
| Salin | Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co.,Ltd | 716092103 | |
| Düz mikro forseps | RWD life Science Co. | F11029-11 | Cerrahi alet |
| Cerrahi mikroskobu | Leica | M650 | |
| Cerrahi platform | Özel, manyetik | ||
| Dokular için forseps | RWD life Science Co. | F12002-12 | Cerrahi alet |
| Dokular için makas | RWD life Science Co. | S12003-09 | Cerrahi alet |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.